豬繁殖與呼吸綜合征病毒侵入細(xì)胞過(guò)程研究進(jìn)展

田德斌，袁世山

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241)

豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是豬的一種重要病原，主要引起感染豬的呼吸系統(tǒng)疾病和繁殖障礙。該病最早于1987年在美國(guó)出現(xiàn)，緊接著于1989年在歐洲爆發(fā)，并從此逐漸向世界其它地區(qū)擴(kuò)散[1,2]。中國(guó)1996年開始分離到PRRSV毒株，但其在豬群內(nèi)的流行和危害并未引起人們廣泛重視。直到2006年P(guān)RRSV被認(rèn)為是中國(guó)南方一些省份爆發(fā)的“豬高熱病”的主要病原后，國(guó)內(nèi)對(duì)該病原的研究才提到了前所未有的高度[3-5]。

作為動(dòng)脈炎病毒科(Arteriviridae)成員之一的PRRSV為單股正鏈RNA病毒， 其基因組結(jié)構(gòu)從5'端開始依次為：5'末端非編碼區(qū)(5'-UTR)、非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)(ORF1a、ORF1b)、結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)(ORF2-ORF7)、3'末端非編碼區(qū)(3'-UTR)以及多聚腺苷酸尾(polyA)[6,7]。在已知的7個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白中，GP2a (由 ORF2a編碼 )、E (ORF2b)、GP3（ORF3）和GP4（ORF4）被認(rèn)為形成多聚復(fù)合體鑲嵌于病毒粒子表面并稱之為少量囊膜蛋白（minor envelope proteins）；GP5 （ORF5）則是病毒表面的主要糖基化囊膜蛋白，能誘導(dǎo)產(chǎn)生一定中和性抗體；M（ORF6）蛋白與GP5形成二聚體對(duì)病毒顆粒包裝及其感染性起關(guān)鍵作用；N（ORF7）為核衣殼蛋白，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生大量非中和性抗體[8-10]。最近，研究者又發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的結(jié)構(gòu)蛋白GP5a（ORF5a編碼），其在病毒復(fù)制過(guò)程中的功能還未知[11,12]。

PRRSV在體內(nèi)主要感染豬肺泡巨噬細(xì)胞（porcine alveolar macrophages，PAM）, 也能感染外周血單核細(xì)胞和精子細(xì)胞[13]。在體外，目前發(fā)現(xiàn)只能感染非洲綠猴腎細(xì)胞系MA-104及其衍生細(xì)胞系MARC-145[14]。病毒侵入細(xì)胞是病毒復(fù)制的第一步，剖析該過(guò)程有助于深入了解病毒與宿主細(xì)胞的相互作用，對(duì)于優(yōu)化疫苗設(shè)計(jì)有重要理論指導(dǎo)意義[15]。近幾年國(guó)內(nèi)外對(duì)這方面研究報(bào)道比較多，在細(xì)胞受體（cellular receptor）和病毒結(jié)合蛋白（viral attachment protein）成分歸屬上爭(zhēng)論不休。本文擬就對(duì)現(xiàn)有報(bào)道進(jìn)行概括總結(jié)，旨在展示對(duì)PRRSV侵入細(xì)胞過(guò)程的研究動(dòng)態(tài)。

1 病毒侵入細(xì)胞是受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞過(guò)程

PRRSV為囊膜病毒，具有嚴(yán)格細(xì)胞嗜性范圍。體外實(shí)驗(yàn)證明PRRSV雖然不能直接進(jìn)入非易感細(xì)胞（non-permissive cells）如倉(cāng)鼠腎細(xì)胞系（BHK-21），但將PRRSV基因組人為導(dǎo)入BHK-21細(xì)胞中卻能產(chǎn)生完整的具有感染性的子病毒，這暗示PRRSV進(jìn)入細(xì)胞需要特異受體[16]。Kreutz 等[17]利用氯喹（Chloroquine）、巴弗洛霉素（bafilomycin A1）等能阻斷細(xì)胞內(nèi)吞體（endosome）酸化、網(wǎng)格蛋白（clathrin）轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物對(duì)PRRSV進(jìn)入細(xì)胞機(jī)制進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，在感染前或感染早期用藥物處理MARC-145或PAM細(xì)胞能明顯降低病毒的產(chǎn)量，但同樣處理細(xì)胞后再用偏酸性的培養(yǎng)基培養(yǎng)，病毒的產(chǎn)量則不會(huì)受到明顯影響，這說(shuō)明PRRSV進(jìn)入細(xì)胞需要細(xì)胞網(wǎng)格蛋白的參與和酸性環(huán)境。更直接的證據(jù)來(lái)自于Nauwynck等的試驗(yàn)結(jié)果[18]。他們將病毒粒子用生物素-熒光素進(jìn)行標(biāo)記，然后在共聚焦顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞定位觀察發(fā)現(xiàn)病毒顆粒結(jié)合到細(xì)胞表面后由細(xì)胞網(wǎng)格蛋白形成內(nèi)吞體并逐漸向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)移動(dòng)，然后脫殼釋放出核酸。如果人為降低酸性環(huán)境，則病毒粒子被局限于內(nèi)吞體中，感染性病毒核酸不能釋放出來(lái)。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PRRSV進(jìn)入細(xì)胞不是簡(jiǎn)單的與細(xì)胞非特異性結(jié)合，而是一個(gè)受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞過(guò)程（receptor-mediated endocytosis），病毒粒子在細(xì)胞內(nèi)的脫殼和基因組釋放需要H+介導(dǎo)，這與絕大多數(shù)囊膜病毒的侵入過(guò)程相似。

2 PRRSV細(xì)胞受體研究

既然PRRSV進(jìn)入細(xì)胞是受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，那它的細(xì)胞受體是什么？在這個(gè)問(wèn)題上人們進(jìn)行了大量的研究，不同的研究得到了不同的結(jié)論。

2.1 硫酸類肝素 硫酸類肝素(heparan sulphate)是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的PRRSV潛在細(xì)胞受體分子。Jusa等[19]發(fā)現(xiàn)用肝素處理過(guò)的病毒對(duì)MARC-145的感染能力顯著降低，但在病毒感染細(xì)胞30 min后再用肝素處理細(xì)胞卻不能明顯降低子病毒產(chǎn)量。同時(shí)，用降解肝素分子的肝素酶處理MARC-145細(xì)胞也能使病毒產(chǎn)量顯著下降，這就提示細(xì)胞表面一種類似肝素的物質(zhì)可能是病毒的細(xì)胞受體。Delputte等[20]受到肝素的啟發(fā)，在前人研究基礎(chǔ)上更進(jìn)一步詳細(xì)地研究了肝素類分子在病毒感染中的作用。他們首先在PAM上重復(fù)出了類似的結(jié)果，然后為排除病毒粒子可能是與細(xì)胞表面類似肝素的帶負(fù)電荷分子非特異性結(jié)合的可能性，同時(shí)測(cè)試了3種不同的葡糖氨基聚糖類分子，發(fā)現(xiàn)只有硫酸類肝素具有競(jìng)爭(zhēng)性抑制病毒感染細(xì)胞的能力，這一結(jié)果表明病毒與硫酸類肝素的結(jié)合是特異性的而不是靜電引力的結(jié)果。

但是，以上2個(gè)研究結(jié)果都發(fā)現(xiàn)當(dāng)肝素加到一定量時(shí)病毒對(duì)肝素不再敏感，即始終不能達(dá)到完全阻止病毒感染的程度。這表明硫酸類肝素不是PRRSV細(xì)胞受體的唯一決定性因素，提示可能存在其它分子作為細(xì)胞受體。

2.2 唾液酸粘附素 唾液酸粘附素（sialoadhesin）是第二個(gè)被發(fā)現(xiàn)的潛在細(xì)胞受體。1998年，比利時(shí)根特大學(xué)的一個(gè)研究小組先后用外周血單核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC )和PAM免疫小鼠，獲得了2株能阻止PRRSV感染PAM的單克隆抗體41D3、41D5。用共聚焦顯微鏡結(jié)合熒光染色發(fā)現(xiàn)41D3與PAM結(jié)合的部位正是PRRSV與PAM的結(jié)合部位，且41D3能與所有感染PRRSV的組織細(xì)胞結(jié)合，提示41D3結(jié)合的可能是細(xì)胞受體分子[21,22]。后來(lái)，該研究小組對(duì)與41D3結(jié)合的蛋白進(jìn)行變性凝膠電泳分離，得到一個(gè)大小為210 kDa的未知蛋白。通過(guò)質(zhì)譜和同源比對(duì)分析鑒定出該未知蛋白為豬唾液酸粘附素（pSn）。他們將pSn的基因構(gòu)建成真核表達(dá)質(zhì)粒，導(dǎo)入PRRSV不能感染的豬腎細(xì)胞系(PK-15)，得到能表達(dá)pSn的rPK-15細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)PRRSV能進(jìn)入rPK-15，這就有力地證明了pSn具有細(xì)胞受體的功能[23]。對(duì)pSn的進(jìn)一步研究表明，細(xì)胞表面的唾液酸粘附素與病毒糖蛋白上唾液酸的結(jié)合是病毒感染的必備條件，且pSn與病毒結(jié)合的區(qū)域位于蛋白質(zhì)N端150個(gè)氨基酸中[24,25]。

至此，2個(gè)細(xì)胞表面分子肝素和唾液酸粘附素都被發(fā)現(xiàn)具有PRRSV細(xì)胞受體功能，但到底是哪一個(gè)分子起作用或起主要作用呢？該實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步研究比較了二者的功能[26]。通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)他們得出二者的關(guān)系，并在此基礎(chǔ)上提出PRRSV進(jìn)入細(xì)胞的模型：首先病毒與細(xì)胞表面的硫酸類肝素葡萄糖胺聚糖（heparan sulphate glycosaminoglycans）結(jié)合，這種結(jié)合不穩(wěn)定但富集了病毒，然后pSn與病毒結(jié)合并使病毒發(fā)生細(xì)胞內(nèi)化，由細(xì)胞網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。

pSn是PRRSV細(xì)胞受體得到了很多國(guó)內(nèi)外學(xué)者的認(rèn)同，但卻不能很好解釋以下3個(gè)現(xiàn)象：Duan等[22]研究發(fā)現(xiàn)，2株單抗41D3、41D5雖然能阻止PRRSV對(duì)PAM的感染卻不能完全阻止病毒對(duì)細(xì)胞的結(jié)合（attachment）；pSn雖然能介導(dǎo)病毒內(nèi)吞進(jìn)入rPK-15，但內(nèi)吞的病毒不能脫殼，不能產(chǎn)生子病毒；作為體外能很好增殖PRRSV的MARC-145細(xì)胞本身卻并不表達(dá)pSn。

2.3 CD163 2007年Calvert等[27]報(bào)道了一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞分子CD163 參與病毒進(jìn)入細(xì)胞過(guò)程。CD163分子是清道夫受體蛋白家族（scavenger receptor protein superfamily）中的一員，它位于細(xì)胞表面，能與眾多配體分子結(jié)合[28]。該研究小組構(gòu)建了PAM的cDNA 文庫(kù)，然后轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞篩選克隆庫(kù)。最后發(fā)現(xiàn)一個(gè)包含豬CD163分子的克隆庫(kù)能完全為BHK-21提供易感性。將CD163分子克隆后構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒再轉(zhuǎn)染非易感細(xì)胞BHK-21、PK、貓腎細(xì)胞（NLFK）等發(fā)現(xiàn)均能為這些細(xì)胞提供PRRSV易感性。同時(shí)發(fā)現(xiàn)CD163分子存在于MARC-145中，用抗人CD163分子的單克隆抗體處理MARC-145細(xì)胞能有效阻止PRRSV感染[27]。以上試驗(yàn)結(jié)果表明CD163分子可能是PPRSV的細(xì)胞受體。這一發(fā)現(xiàn)能很好解決如上提到的pSn所不能回答的3個(gè)問(wèn)題。但是試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，一些犬、人、鼠源和Vero細(xì)胞系的CD163分子也能為非易感細(xì)胞提供易感性，而這些細(xì)胞系本身卻不能繁殖PRRSV。對(duì)于這一現(xiàn)象作者解釋為病毒能進(jìn)入這些細(xì)胞系但侵入的后續(xù)環(huán)節(jié)被阻斷，導(dǎo)致無(wú)感染性子病毒產(chǎn)生[27]。Patton等[29]對(duì)CD163做進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表面的CD163表達(dá)水平與PRRSV復(fù)制效率呈正相關(guān)，即表達(dá)CD163水平越高的細(xì)胞產(chǎn)生子病毒的滴度越高。他們還發(fā)現(xiàn)十四烷酰佛波醋酸酯-13（TPA）、脂多糖（LPS）能下調(diào)CD163表達(dá)從而降低病毒復(fù)制水平；相反，白細(xì)胞介素10（IL-10）能上調(diào)血液?jiǎn)魏思?xì)胞CD163的表達(dá)并調(diào)高病毒復(fù)制水平。該研究更進(jìn)一步證明CD163分子在PRRSV感染細(xì)胞中的作用。CD163分子發(fā)現(xiàn)后，關(guān)于PRRSV細(xì)胞受體到底是pSn還是CD163引發(fā)了爭(zhēng)論。發(fā)現(xiàn)pSn的研究小組將二者做了一個(gè)比較研究[30]，他們發(fā)現(xiàn)單獨(dú)用pSn或CD163分子的抗體處理PAM都不能完全阻止病毒感染，而2種抗體一起使用則可以完全阻止。并且，僅表達(dá)pSn的重組BHK-21、PK等細(xì)胞能觀察到病毒的內(nèi)吞但內(nèi)吞的病毒不能脫殼，而僅表達(dá)CD163的重組非易感細(xì)胞系雖然能產(chǎn)生子病毒但觀察不到病毒的內(nèi)吞，同時(shí)表達(dá)二者的細(xì)胞能大大提高病毒的增殖效率。由此他們認(rèn)為：pSn是病毒結(jié)合并進(jìn)入細(xì)胞的受體分子，而CD163分子則可能是參與病毒的脫殼過(guò)程，二者在病毒進(jìn)入細(xì)胞過(guò)程中聯(lián)合起作用。

2.4 CD151 2007年，一個(gè)研究小組報(bào)道了CD151可能作為PRRSV細(xì)胞受體分子[31]。他們構(gòu)建了MARC-145細(xì)胞的cDNA文庫(kù)，然后用North-Western雜交的方法篩選到了一個(gè)能與PRRSV 3′UTR結(jié)合的克隆。對(duì)該克隆進(jìn)行鑒定發(fā)現(xiàn)與人源、鼠源、豬源等的CD151分子最為接近，同源性達(dá)90%左右。同時(shí)他們發(fā)現(xiàn)CD151分子不但能與PRRSV 基因組的3'UTR結(jié)合，還參與病毒進(jìn)入細(xì)胞過(guò)程。將表達(dá)CD151分子的克隆轉(zhuǎn)入BHK-21細(xì)胞能為BHK-21提供易感性。如果用RNA干擾方法將MARC-145細(xì)胞中的CD151基因滅活，或者用抗CD151分子的抗體封閉MARC-145細(xì)胞，則MARC-145不再感染PRRSV。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果為CD151分子可能是細(xì)胞受體分子提供了證據(jù)。但是，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)用RT-PCR方法也能從豬睪丸細(xì)胞系（ST），非洲綠猴腎細(xì)胞衍生細(xì)胞系Vero和COS-7中檢測(cè)到CD151基因，而這些細(xì)胞又是PRRSV非易感細(xì)胞。同時(shí)免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)CD151分子不能與PRRSV任何結(jié)構(gòu)蛋白相互作用。這些實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象還沒(méi)能獲得很好的解釋。

2.5 波形蛋白 波形蛋白（vimentin）是一種細(xì)胞骨架蛋白，它作為可能介導(dǎo)PRRSV進(jìn)入細(xì)胞的受體分子最早是在2006年被報(bào)道的[32]。Kim等[32]采用North-western的方法找到能與PRRSV核酸結(jié)合的細(xì)胞蛋白，然后用這些蛋白免疫動(dòng)物并得到了一株單克隆抗體7G10。通過(guò)二維電泳分離能與7G10結(jié)合的細(xì)胞蛋白，發(fā)現(xiàn)其中的波形蛋白能結(jié)合病毒核衣殼蛋白。進(jìn)一步對(duì)波形蛋白進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)猴源波形蛋白能使BHK-21和貓腎細(xì)胞（CRFK）變?yōu)橐赘屑?xì)胞，且抗波形蛋白的單克隆抗體能阻斷PRRSV對(duì)MARC-145的感染。另外在其它病毒如人免疫缺陷病毒、非洲豬瘟病毒中，波形蛋白發(fā)現(xiàn)在病毒吸附、侵入細(xì)胞以及病毒核酸在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

2.6 CD209 CD209能與多種病原體結(jié)合包括病毒、細(xì)菌、真菌等[33]。最近有研究發(fā)現(xiàn)將CD209的基因?qū)隑HK-21細(xì)胞后能使BHK-21細(xì)胞中產(chǎn)生的子病毒對(duì)MARC-145的感染能力增強(qiáng)，但CD209似乎并不直接參與病毒進(jìn)入細(xì)胞過(guò)程[34]。

3 病毒結(jié)合蛋白

與細(xì)胞受體相對(duì)應(yīng)的是病毒結(jié)合蛋白。PRRSV多達(dá)8個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白，準(zhǔn)確定位病毒結(jié)合蛋白一直是PRRSV研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。

3.1 M蛋白 Delputte等[20]在研究硫酸類肝素作為潛在細(xì)胞受體的報(bào)道中，同時(shí)也報(bào)道了他們對(duì)病毒結(jié)合蛋白的研究成果。他們用肝素分子與凝膠磁珠交聯(lián)后填充過(guò)濾柱，將PRRSV粒子裂解液過(guò)柱后洗脫，然后用洗脫液進(jìn)行凝膠電泳和Western blot 鑒定，發(fā)現(xiàn)M和N蛋白能與肝素分子緊密結(jié)合?？紤]到N蛋白是病毒粒子內(nèi)部結(jié)構(gòu)蛋白，作為病毒結(jié)合蛋白的可能性不大，于是他們推測(cè)M蛋白以及與M形成二聚體的GP5可能是病毒結(jié)合蛋白。但是，后來(lái)的研究基本將硫酸類肝素排除在PRRSV特異細(xì)胞受體范圍之外，所以依據(jù)能否與肝素結(jié)合來(lái)判定結(jié)合蛋白不能獲得廣泛的認(rèn)可。

3.2 M/GP5復(fù)合體 2004年，發(fā)現(xiàn)唾液酸粘附素為細(xì)胞受體的研究小組報(bào)道了PRRSV表面的唾液酸是與細(xì)胞受體結(jié)合的分子[35]。因?yàn)樵趪X動(dòng)物和人類中早已證明唾液酸粘附素是巨噬細(xì)胞上特有的蛋白，能與唾液酸(sialic acid)結(jié)合。于是該研究小組研究pSn是否也具有這樣的功能與特征。在研究中他們用神經(jīng)氨酸酶或糖苷酶F處理PRRSV以破壞病毒表面的唾液酸分子，發(fā)現(xiàn)處理后的病毒對(duì)PAM的感染能力明顯下降甚至喪失，他們由此認(rèn)為病毒表面的唾液酸是與細(xì)胞受體結(jié)合的分子[35]。

唾液酸只是結(jié)合在病毒某個(gè)蛋白上的糖鏈分子，為查明這個(gè)病毒蛋白該研究小組繼續(xù)深入研究。在最近一篇報(bào)道中他們得出M/GP5復(fù)合體是病毒結(jié)合蛋白的結(jié)論[36]。Breedam等將pSn以一種可溶性融合蛋白的形式進(jìn)行真核表達(dá)，得到的融合蛋白pSn-Fc被證明具有完整pSn的基本功能。用該pSn-Fc對(duì)PRRSV病毒粒子裂解液進(jìn)行免疫共沉淀，再用PRRSV的各個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白特異性抗體進(jìn)行鑒定發(fā)現(xiàn)：GP5與M形成的二聚體(GP5/M)能與pSn-Fc緊密結(jié)合，而其它糖蛋白如GP3、GP4不能與之結(jié)合。這就表明PRRSV的GP5/M是與受體結(jié)合的配體蛋白。但是，他們得出這一結(jié)論的前提是認(rèn)定pSn是PRRSV細(xì)胞受體，而如上所述pSn是否是細(xì)胞受體還沒(méi)有得到確切的證明。另外，該試驗(yàn)主要依賴于體外表達(dá)蛋白的生化試驗(yàn)，而體內(nèi)是否與體外情況相同還是未知。

3.3 少量囊膜蛋白 PRRSV有4個(gè)少量囊膜蛋白(GP2a、E、GP3、GP4)。以前人們對(duì)該類蛋白關(guān)注較少，但是隨著對(duì)PRRSV認(rèn)識(shí)的深入，少量囊膜蛋白在病毒復(fù)制過(guò)程中的作用逐漸被重視。

Dobbe 等[37]的試驗(yàn)工作首先提示少量囊膜蛋白可能是同為動(dòng)脈炎病毒科中的馬動(dòng)脈炎病毒(Equine areritis virus，EAV)的病毒結(jié)合蛋白。Dobbe 等在馬動(dòng)脈炎病毒全長(zhǎng)感染性克隆的基礎(chǔ)上，將其GP5的胞外區(qū)替換為其它動(dòng)脈炎病毒的相應(yīng)區(qū)域。結(jié)果發(fā)現(xiàn)含有PRRSV和乳酸脫氫酶增高病毒 (Lactate dehydrogenase elevating virus，LDV)GP5胞外區(qū)的嵌合克隆能拯救出感染性子病毒，并且拯救出的這2個(gè)嵌合病毒仍然能感染BHK-21和兔腎細(xì)胞系(RK-13)。這表明GP5胞外區(qū)不太可能是病毒結(jié)合蛋白的功能區(qū)域，否則2個(gè)嵌合病毒將不能感染BHK-21和RK-13細(xì)胞。既然胞外區(qū)不是病毒結(jié)合區(qū)，那GP5本身就不大可能是病毒的結(jié)合蛋白。另外，該研究小組用類似的方法獲得了另一個(gè)結(jié)果：M蛋白的胞外區(qū)也不能決定PRRSV細(xì)胞嗜性[38]。以上2個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本排除了GP5/M作為病毒結(jié)合蛋白的可能性，但不能完全排除，因?yàn)椋篏P5或M胞外區(qū)只是一種預(yù)測(cè)，并沒(méi)有直接證據(jù)表明它們的準(zhǔn)確位置；嵌合進(jìn)外源序列后雖然得到了感染性的子病毒，但同時(shí)也可能干擾了嵌合序列的高級(jí)結(jié)構(gòu)或其它未知因素使之不能行使其準(zhǔn)確功能。

后來(lái)Wissink等在研究中發(fā)現(xiàn)，缺失少量囊膜蛋白不會(huì)影響子病毒的包裝但會(huì)使子病毒喪失感染細(xì)胞的能力，這就進(jìn)一步暗示少量囊膜蛋白發(fā)揮作用是在病毒侵入細(xì)胞等早期階段[9]。另外 Lee等[39]又發(fā)現(xiàn)E蛋白具有粒子通道的功能，可能參與病毒粒子脫殼過(guò)程。最近，Das等[40]以CD163分子為PRRSV細(xì)胞受體為前提，通過(guò)體外表達(dá)各結(jié)構(gòu)蛋白，然后通過(guò)免疫共沉淀方法體外研究它們與CD163分子的相互作用，發(fā)現(xiàn)GP2a與GP4能與CD163分子緊密結(jié)合。于是他們認(rèn)為GP2a/ GP4復(fù)合體很可能是病毒結(jié)合蛋白。但是，他們的研究仍然不能避免上面Breedam等發(fā)現(xiàn)GP5/M時(shí)的問(wèn)題：CD163分子為受體的前提條件沒(méi)有被確證；體外生化試驗(yàn)不能準(zhǔn)確反映體內(nèi)真實(shí)情況。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，PRRSV進(jìn)入細(xì)胞是一個(gè)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞過(guò)程以及需要H+促進(jìn)脫殼已經(jīng)被人們接受。但主導(dǎo)這一過(guò)程的主角：細(xì)胞受體和病毒結(jié)合蛋白卻撲朔迷離和備受爭(zhēng)議。目前，關(guān)于細(xì)胞受體方面主要是pSn與CD163之爭(zhēng)，病毒結(jié)合蛋白主要是GP5/M與少量囊膜蛋白之爭(zhēng)，而pSn和GP5/M占優(yōu)。鑒于PRRSV在病毒學(xué)上的特殊地位和在實(shí)際生產(chǎn)上給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)的重大損失，明確病毒入侵過(guò)程將極有利于病毒學(xué)基礎(chǔ)研究和新型疫苗研發(fā)。在這方面目前主要是國(guó)外實(shí)驗(yàn)室的研究成果，國(guó)內(nèi)相對(duì)還比較薄弱和滯后。我國(guó)以后應(yīng)加強(qiáng)這方面的研究以搶占防治PRRSV的最上游。

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