秦香止瀉方對(duì)小鼠小腸推進(jìn)功能及鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制研究

朱 克 ，彭芝配 ，張金慧 ，李文龍 ，肖瑞飛 ，田志剛 ，江壯嵐 ，滕久祥

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)2008級(jí)碩士研究生班，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007；3.韶關(guān)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系藥學(xué)教研室，廣東 韶關(guān) 512026；4.湖南中醫(yī)藥大學(xué)2008級(jí)博士研究生班，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

秦香止瀉方對(duì)小鼠小腸推進(jìn)功能及鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制研究

朱 克1，彭芝配2*，張金慧3，李文龍4，肖瑞飛2，田志剛3，江壯嵐1，滕久祥2*

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)2008級(jí)碩士研究生班，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007；3.韶關(guān)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系藥學(xué)教研室，廣東 韶關(guān) 512026；4.湖南中醫(yī)藥大學(xué)2008級(jí)博士研究生班，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

目的 探討秦香止瀉方對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)功能及冰醋酸致痛的鎮(zhèn)痛作用。方法（1）將40只SPF級(jí)昆明小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、秦香止瀉方低、中、高劑量組，分別給藥后灌服碳末，處死動(dòng)物觀察小腸碳末推進(jìn)率：（2）將50只SPF級(jí)昆明小鼠分組給藥方法同（1），給藥后腹腔注射2 mL冰醋酸，觀察第1次扭體時(shí)間和30 min內(nèi)各組小鼠扭體次數(shù)。結(jié)果（1）秦香止瀉方低、中、高劑量組與空白對(duì)照組組比較，小腸推進(jìn)率基本相同，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；（2）秦香止瀉方低、中、高劑量組、腸康片組與空白對(duì)照組比較，疼痛潛伏時(shí)間均較空白對(duì)照組延長(zhǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；扭體次數(shù)相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；秦香止瀉方中、高劑量組與腸康片組比較,疼痛潛伏時(shí)間延長(zhǎng)，扭體次數(shù)亦減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 秦香止瀉方對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)功能無(wú)明顯抑制及推進(jìn)作用;秦香止瀉方低、中、高劑量組與腸康片組比較,扭體次數(shù)明顯減少，提示秦香止瀉方具有較好的鎮(zhèn)痛作用。

秦香止瀉方；小腸碳末推進(jìn)；抗炎鎮(zhèn)痛;小鼠；秦皮；木香

秦香止瀉方是湖南中醫(yī)藥大學(xué)滕久祥教授在臨床運(yùn)用多年的經(jīng)驗(yàn)方，擬用此方治療濕熱腹瀉取得較好的臨床療效。該方由秦皮、木香、白頭翁等藥物組成，具有清熱燥濕、澀腸止瀉、理氣止痛之功，本文對(duì)該方進(jìn)行小腸碳末推進(jìn)及冰醋酸所致扭體鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)，探討其作用機(jī)制，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 90只SPF級(jí)昆明小鼠，體質(zhì)量（18±2）g，雌雄各半。動(dòng)物由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供（許可證編號(hào)：SCXK(滬)2008-0002）。

1.1.2 藥物 秦香止瀉方藥材購(gòu)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院；腸康片由張家界元爾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20100802，規(guī)格 0.05 g/片×24 片。

1.1.3 儀器 電子稱：ESP－3001型，長(zhǎng)沙湘平科技發(fā)展有限公司；TF－1000型電子天平，湘儀天平儀器廠；軟尺、柳葉刀等。

1.1.4 試劑 冰醋酸：AR級(jí)，汕頭市西隴化工廠生產(chǎn)，批號(hào)：090414-2。 生理鹽水：500 mL/瓶，上海德勝科技集團(tuán) （安慶）制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：09103201。

1.1.5 藥物制備 秦香止瀉方（秦皮、木香、白頭翁等藥）藥材購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，取生藥材120 g，水煎煮2次，合并濾液，濃縮至120 mL，即每毫升水煎液含1 g生藥，置4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 ①小腸碳末推進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：將 40 只 SPF 級(jí)昆明小鼠，體質(zhì)量（18±2）g，雌雄各半,按性別分層后編號(hào)，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組，即：空白對(duì)照組，秦香止瀉方低、中、高劑量組，每組小鼠10只，觀察其碳末推進(jìn)率。②扭體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：將 50 只 SPF 級(jí)昆明小鼠，體質(zhì)量（18±2）g，雌雄各半,按性別分層后編號(hào)，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5組，即：空白對(duì)照組，秦香止瀉方低、中、高劑量組及腸康片組，每組小鼠10只，觀察記錄扭體次數(shù)。

1.2.2 小腸碳末推進(jìn)實(shí)驗(yàn) ①小鼠給藥：實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水24 h，秦香止瀉方低、中、高劑量組分別給予臨床等效劑量1、3、9倍濃度（濃度分別為1.6、4.8、14.4 g/kg）灌胃，對(duì)照藥物組腸康片組，以臨床等效劑量3倍濃度給藥（濃度為：0.94 g/kg）,給藥劑量均按照60 kg成人體表面積換算。②觀察方法：各藥物組均灌胃相應(yīng)藥物劑量2次，給藥間隔20 min，空白對(duì)照組灌胃同體積生理鹽水，第2次給藥后15 min，各組小鼠均灌胃10%碳末生理鹽水，體積均為0.1 mL/10 g，20 min后處死動(dòng)物，解剖，測(cè)量小腸長(zhǎng)度及墨汁前端至幽門距離。③檢測(cè)指標(biāo)：測(cè)量小腸長(zhǎng)度及碳末汁前端至幽門距離，P=小腸炭末推進(jìn)長(zhǎng)度(cm)/小腸全長(zhǎng)(cm)×100%。百分率數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，以百分率的平方根的反正弦數(shù)值(Arcsin)為統(tǒng)計(jì)指標(biāo)。

1.2.3 冰醋酸扭體實(shí)驗(yàn) ①小鼠給藥：各組給藥劑量同小腸碳末推進(jìn)實(shí)驗(yàn)，均灌胃給藥1次，模型組給予等量蒸餾水，20 min后各組小鼠均腹腔注射0.6%冰醋酸0.2 mL/只。②觀察記錄：小鼠注射冰醋酸溶液后30 min內(nèi)扭體反應(yīng)（腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行）的次數(shù)和時(shí)間。③檢測(cè)指標(biāo)：扭體次數(shù)和疼痛潛伏時(shí)間；鎮(zhèn)痛率（%）=空白對(duì)照組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù)/空白對(duì)照組平均扭體次數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料用“”表示。兩組間用t檢驗(yàn)，多組間用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 秦香止瀉方對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)功能影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，秦香止瀉方低、中、高劑量組與空白對(duì)照組比較，小腸推進(jìn)率基本接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表 1。

表1 秦香止瀉方對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)功能影響（n=10，）

表1 秦香止瀉方對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)功能影響（n=10，）

組 別空白對(duì)照組秦香止瀉方低劑量組秦香止瀉方中劑量組秦香止瀉方高劑量組藥物劑量(g/kg)-1.6 4.8 14.4小腸推進(jìn)率（P）74.49±6.16 73.63±5.47 73.79±2.62 74.56±5.16 Arcsin（P1/2）1.00±0.07 1.00±0.06 1.00±0.07 1.01±0.05

2.2 秦香止瀉方對(duì)冰醋酸所致小鼠扭體疼痛的影響

秦香止瀉方低、中、高劑量組、腸康片組與空白對(duì)照組比較，疼痛潛伏時(shí)間均較空白組延長(zhǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與空白組比扭體次數(shù)明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；秦香止瀉方中、高劑量組與腸康片組比較,疼痛潛伏時(shí)間延長(zhǎng)，扭體次數(shù)亦減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。秦香止瀉方低、中、高劑量組及腸康片組鎮(zhèn)痛率均大于50%，提示具有較好的鎮(zhèn)痛作用，見表2。

表2 秦香止瀉方對(duì)冰醋酸所致小鼠扭體疼痛的影響（n=10，）

表2 秦香止瀉方對(duì)冰醋酸所致小鼠扭體疼痛的影響（n=10，）

注：與空白對(duì)照組比較﹡P﹤0.05，**P﹤0.01；與腸康片組比較▲P﹤0.05。

組 別空白對(duì)照組腸康片組秦香止瀉方低劑量組秦香止瀉方中劑量組秦香止瀉方高劑量組疼痛潛伏時(shí)間（min）4.38±0.96 7.49±2.01*7.69±2.00*10.68±3.12**▲10.59±2.45**▲扭體次數(shù)（次）56.3±7.12 29.0±5.85**29.0±6.24**21.7±5.18**▲19.9±5.11**▲鎮(zhèn)痛率（%）-57.54 52.92 60.00 61.22

3 討論

腹瀉是指原來(lái)的大便習(xí)慣發(fā)生變化，每日排便量達(dá)200 g以上，次數(shù)超過3次，糞便稀薄，水分超過糞便總量的85%，或含脂肪，或帶有不消化食物，有時(shí)帶有黏液或膿血，可伴腹痛、里急、肛周不適、失禁等癥狀。重者可引起消瘦、電解質(zhì)紊亂[1]。急性腹瀉屬中醫(yī)學(xué)“泄瀉”之“暴瀉”范疇。目前西醫(yī)對(duì)急性腹瀉的治療藥物主要有抗生素類，用慶大霉素、氟哌酸、氟嗪酸等藥物，其容易產(chǎn)生耐藥性，對(duì)肝、腎等器官的毒副作用較大并價(jià)格昂貴，在臨床上不利于廣泛應(yīng)用。

秦香止瀉方是導(dǎo)師在治療濕熱腹瀉多年臨床研究的經(jīng)驗(yàn)方，且價(jià)格低廉、安全、毒副作用小、有利于推廣。方中以秦皮清熱燥濕、解毒止瀉為君?，F(xiàn)代藥理研究表明秦皮主要成分為香豆素類(秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素)[2]。秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷均有明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用[3]。體外實(shí)驗(yàn)秦皮對(duì)金黃色葡萄球菌、福氏痢疾桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌有顯著的抑制作用，對(duì)傷寒桿菌，副傷寒桿菌也有一定程度的敏感性，體外實(shí)驗(yàn)顯示秦皮可降低由傷寒桿菌引起的小鼠急性腹膜感染的死亡率[4]。秦皮還有一定的抑制病毒作用,如抗流感病毒、皰疹病毒等。木香能調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)，抗消化性潰瘍，抗腹瀉和抗炎作用[5]。白頭翁醇提物對(duì)TNBS誘導(dǎo)大鼠結(jié)腸炎腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的調(diào)控，起到對(duì)腸黏膜屏障的保護(hù)作用[6]。且白頭翁的抗菌有效成分有原白頭翁素、白頭翁素，二者對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、結(jié)核桿菌、白喉?xiàng)U菌、鏈球菌等均有強(qiáng)烈活性，其在MIC 8x10—2x10之間，并與鏈霉素有協(xié)同作用[7]。全方諸藥合用，相輔相承，配伍得當(dāng)，主次分明，共奏清熱燥濕、澀腸止瀉、行氣止痛之功。

正常小鼠的小腸碳末推進(jìn)作為藥效學(xué)重要的實(shí)驗(yàn)部分，而實(shí)驗(yàn)表明秦香止瀉方對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)功能無(wú)推動(dòng)及抑制作用，即可能是秦香止瀉方對(duì)病態(tài)小鼠的腸蠕動(dòng)有抑制作用或者是直接作用于腸道炎癥部位而產(chǎn)生止瀉效果。扭體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明秦香止瀉方能明顯減少冰醋酸所致小鼠腹痛的扭體次數(shù)，說(shuō)明此方具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

[1]陳其奎，何興祥，朱兆華，等.消化疾病診斷學(xué)［M］北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：389.

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[4]楊天鳴，葛 欣，王曉妮.秦皮抗菌作用研究[J].西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2O03，24(5)：387-388.

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[6]張文遠(yuǎn),姜偉煒.白頭翁醇提物對(duì)大鼠結(jié)腸炎腸黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的保護(hù)作用[J].世界華人消化雜志，2009,17(30):3 134-3 139.

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（本文編輯 彭芝配）

Mechanism study of Qinxiang Zhixie decoction on promoting small intestine and analgesic effect in mice

ZHU Ke,PENG Zhi-pei,LI Wen-long,XIAO Rui-fei,TIAN Zhi-gang,JIANG Zhuang-lan,TENG Jiu-xiang
(TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410007,China)

Objective To investigate the effect of Qinxiang Zhixie decoction on promoting small intestine and analgesic effect in mice.Methods(1)40 SPF mice were randomly divided into control groups,and low,medium and high dose of QinXiang Zhixie groups,after feeding medicine and then carbon powder respectively,the mice were killed to observe its propelling of small intestine.(2)50 SPF miceweregrouped and feed like(1),and then injecting 2 mL glacial acetic acid into abdominal cavity,the first writhing time and times of writhing within 30 min.Results(1)compared with the control group,the propelling rates in low,medium and high dose groups were nearly same(P>0.05).(2)Compared with control group and intestine tablet group,the pain latency time in all low,medium and high dose groups was longer(P<0.05),the differencesofthe writhing timeswere significant(P<0.01);compared with the intestine tablet group,the pain latency prolonged and the writhing reduced in medium and high dose group(P<0.05).Conclusion QinXiang Zhixie decoction is not suppressed and is effective to remove pain.

QinXiang Zhixie decoction;carbon propelling in small intestine;anti-inflammatory analgesic;mice;Fraxinus rhynchophylla Hance;Aucklandia lappa Decne

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2011.05.007.023.03

2011-02-11

長(zhǎng)沙市科技局課題（K1009002-31）。

朱 克(1985-),男，河北邯鄲人，在讀碩士研究生，主要從事中老年病及消化系統(tǒng)疾病臨床及實(shí)驗(yàn)研究。

*彭芝配，女，研究員，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：pengzhipei805@126.com；*滕久祥，男，教授，博士研究生導(dǎo)師，國(guó)家食品藥品評(píng)審專家。