HPLC法測(cè)定復(fù)方益腎膠囊中淫羊藿苷的含量

肖佳尚

廣州市黃埔區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，廣東廣州 510700

復(fù)方益腎膠囊由淫羊藿、五味子、地骨皮、熟地黃、黃芪等多味中藥為原料制成的中藥復(fù)方制劑。具有補(bǔ)虛損，益房勞，防早衰作用。用于房勞、陽(yáng)痿、性欲低下、早泄。淫羊藿是復(fù)方益腎膠囊的君藥，其藥用有效成分主要是淫羊藿苷（I-cariin）。本品為復(fù)方中藥制劑，為了有效地控制和提高本制劑的質(zhì)量，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中以其主要成分淫羊藿苷作為含測(cè)指標(biāo)，采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定[1-6]。本文建立的高效液相色譜法分離測(cè)定了復(fù)方益腎膠囊中淫羊藿苷成分的含量，獲得很好效果，為中藥復(fù)方益腎膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀：Waters 2695 separation module，Waters 2424 ELS detector；Waters Empower 2色譜工作站（美國(guó)沃特斯儀器有限公司）；XS205（十萬(wàn)分之一）天平（瑞士梅特勒-托利多衡具有限公司）；Millipore超純水系統(tǒng)（美國(guó)密理博儀器有限公司）。

1.2 試藥

淫羊藿苷（中檢所提供，含測(cè)用，批號(hào)：0737-200111）；乙腈（色譜純，Tedia Company，USA）；復(fù)方益腎膠囊規(guī)格：0.4 g/粒。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色譜柱（迪馬公司產(chǎn)），乙腈-0.1%磷酸（25∶75）為流動(dòng)相，柱溫 35℃，流速0.9 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm。在此色譜條件下，淫羊藿苷與樣品中其他組分分離良好，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)＞3 000。 見(jiàn)圖 1、2。

2.2 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物0.5 g，精密稱定，置于100 ml具塞錐形瓶中，精密加甲醇40 ml，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.3 對(duì)照品溶液的制備及線性關(guān)系考察

精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品9.99 mg，置于25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度[7]，搖勻，精密吸取1 ml，置于10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各 5、10、15、20、30 μl，分別注入液相色譜儀，照上述色譜條件測(cè)定淫羊藿苷峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量 X（g）為橫座標(biāo)、峰面積值 Y（mV·s）為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=1 923 806X-24 140（r=0.999 6）；線性范圍為 0.203 6～1.221 6 μg。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定淫羊藿苷峰面積值，求得淫羊藿苷峰面積值平均值為745 950，RSD為0.7%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取本品0.5 g，照上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，照上述條件，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣，測(cè)定淫羊藿苷峰面積值，求得淫羊藿苷峰面積值平均值為1 253 261，RSD為2.5%，測(cè)定結(jié)果表明樣品在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取本品5份，每份0.5 g，照上述供試品溶液制備方法制備，精密吸取供試品溶液10 μl，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算含量，求得淫羊藿苷含量平均值為2.06 mg/粒，RSD為2.2%。結(jié)果表明本法測(cè)定的重復(fù)性較好，見(jiàn)表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

采用加樣回收法，取已知含量樣品（淫羊藿苷含量為：2.06 mg/粒）6份，精密稱取各0.25 g，分別精密加入淫羊藿苷對(duì)照品，照供試品溶液制備方法制備，按正文色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算，求得淫羊藿苷平均回收率為98.7%，RSD為1.9%。結(jié)果說(shuō)明本法回收良好，見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 陰性對(duì)照溶液的制備及試驗(yàn)

取缺淫羊藿的群藥按處方比例，混合均勻并研細(xì)，精密稱取1.0 g精密稱定，置于200 ml具塞錐形瓶中，精密加甲醇80 ml，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為不含淫羊藿的陰性對(duì)照溶液。照樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，結(jié)果表明在淫羊藿苷對(duì)照品吸收峰位置處無(wú)干擾。見(jiàn)圖3。

2.9 樣品的測(cè)定

照上述方法，對(duì)本制劑三批樣品進(jìn)行淫羊藿苷的含量測(cè)定。見(jiàn)表3。

表3 含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 供試品溶液的制備

由于淫羊藿苷類成分在甲醇中的溶解度比較大，所以筆者在提取時(shí)選用甲醇為溶劑進(jìn)行超聲提取，經(jīng)回收試驗(yàn)證明此方法可行。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

對(duì)樣品與對(duì)照品的淫羊藿苷的進(jìn)行UV掃描和HPLC檢測(cè)[8]，淫羊藿苷在270 nm處有最大吸收，在該波長(zhǎng)處測(cè)定，各組分分離良好，其他雜質(zhì)的干擾很少，幾乎無(wú)干擾，滿足含量測(cè)定要求。

3.3 流動(dòng)相的選擇

HPLC測(cè)定選擇了乙腈-0.2%磷酸（20∶80），乙腈-0.2%磷酸（25∶75），乙腈-0.1%磷酸（40∶60）,乙腈-0.1%磷酸（25∶75）等幾種流動(dòng)相體系，通過(guò)比較分離情況，確定了乙腈-0.1%磷酸（25∶75）為最佳流動(dòng)相，再加上制劑成分復(fù)雜，為獲得滿意分析時(shí)間的要求，故采用酸性洗脫劑，使各成分得到了良好的分離效果，符合含量測(cè)定要求。

本研究建立的HPLC法，可以測(cè)定復(fù)方益腎膠囊中主要成分淫羊藿苷的含量。本研究采用的HPLC法，具有操作方法簡(jiǎn)單便捷，分析條件容易準(zhǔn)確控制，使待測(cè)成分易于分離等優(yōu)點(diǎn)，此方法精密度高，分離度良好，重現(xiàn)性和回收率好，為復(fù)方益腎膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了科學(xué)依據(jù)。

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