高效液相色譜法測定丁桂兒臍貼中丁香酚和桂皮醛含量

王 也，裘國麗，黃 華

(1.浙江省衢州市食品藥品檢驗所，浙江 衢州 324002; 2.杭州民生藥業(yè)集團(tuán)公司，浙江 杭州 310011)

高效液相色譜法測定丁桂兒臍貼中丁香酚和桂皮醛含量

王 也1，裘國麗2，黃 華1

(1.浙江省衢州市食品藥品檢驗所，浙江 衢州 324002; 2.杭州民生藥業(yè)集團(tuán)公司，浙江 杭州 310011)

目的建立測定丁桂兒臍貼的丁香酚和桂皮醛含量的高效液相色譜法。方法采用Eclipse XDB－C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇－水(65∶35)為流動相，檢測波長280 nm，流速1.0 mL/min。結(jié)果丁香酚進(jìn)樣量在0.172 9～2.074 2 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為 96.98%，RSD 為1.85%(n=6);桂皮醛進(jìn)樣量在0.003 4 ～0.273 2 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好 (r=0.999 9)，平均回收率為97.90%，RSD為1.55%(n=6)。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、可靠、精密度高，可用于丁桂兒臍貼的質(zhì)量控制。

丁桂兒臍貼;高效液相色譜法;丁香酚;桂皮醛;含量測定

丁桂兒臍貼是由丁香、肉桂、蓽茇經(jīng)加工制成，具有健脾溫中、散寒止瀉功效，用于小兒泄瀉、腹痛的輔助治療。為提高其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，筆者采用高效液相色譜法同時測定丁香和肉桂中有效成分丁香酚和桂皮醛含量，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫);UV－2450型紫外分光光度計(日本島津);Mettler AE240型電子天平;KQ－250型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有效公司)。甲醇(色譜純)，無水乙醇(分析純)，水(超純水);丁香酚對照品(批號為725－200209)，桂皮醛對照品(批號為710－9710)，均由中國藥品生物制品檢定所提供;丁桂兒臍貼(批號為091038，091229，090745，山西亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司);其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Eclipse XDB －C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －水(65 ∶35);檢測波長:280 nm;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

取本品3貼，剪碎，混勻，立即取約0.4 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加無水乙醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，取出，放至室溫，再稱定質(zhì)量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上層溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。精密稱取桂皮醛對照品8.537 5 mg，置250 mL量瓶中，用無水乙醇溶解并稀至刻度，搖勻，作為對照品貯備液A;精密稱取丁香酚對照品17.285 mg，置100 mL量瓶中，用無水乙醇溶解并稀至刻度，搖勻，作為對照品貯備液B。取除丁香和肉桂以外的其他藥材，按樣品制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:精密吸取供試品溶液、陰性對照品溶液、對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖(見圖1)。結(jié)果陰性對照品溶液色譜中，在與丁香酚和桂皮醛對照品溶液色譜峰相應(yīng)位置處未檢出色譜峰，表明處方中其他藥物對含量測定無干擾，該方法有較好的專屬性。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對照品貯備液A 10 mL，置100 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋成3.415 μg/mL的溶液，搖勻，分別取1，2，5 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積;另取對照品貯備液 A 1，2，4，6，8 μL，注入液相色譜儀中測定峰面積，以峰面積對對照品質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 Y=8 492.277 X－4.023 2，r=0.999 9，桂皮醛進(jìn)樣量在 0.003 4 ～0.273 2 μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。取對照品貯備液 B 1，2，4，6，8，10，12 μL，注入液相色譜儀中，測定峰面積，以峰面積對對照品質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 Y=921.592 7 X －1.464 5，r=0.999 9，丁香酚進(jìn)樣量在0.172 9～2.074 2 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

檢測限試驗:將對照品溶液稀釋后進(jìn)樣，以基線噪音2倍計算，桂皮醛和丁香酚的最低檢出量分別為 0.002 μg 和 0.01 μg。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定對照品峰面積。結(jié)果丁香酚峰面積的 RSD為0.30%(n=6)，桂皮醛的 RSD 為 0.45%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取供試品溶液 10 μL，于 0，2，4，6，8，12，24 h時進(jìn)樣測定峰面積。結(jié)果丁香酚的 RSD為0.47%，桂皮醛的RSD為1.0%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗:取同批(批號為091229)樣品6份，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果丁香酚和桂皮醛的 RSD分別為0.61% 和 0.94%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性好。

加樣回收試驗:精密稱取己知含量的樣品9份，每份約0.2 g，按低、中、高3個劑量分別加入約3，6，8 mg的丁香酚對照品和10，15，20 mL的桂皮醛對照品貯備液A，每個劑量平行操作2份。按供試品溶液制備方法制備溶液，測定含量并計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

依法測定了3批樣品中的丁香酚及桂皮醛含量。結(jié)果見表2。

3 討論

紫外掃描結(jié)果表明，桂皮醛的最強(qiáng)吸收在290 nm波長處、次強(qiáng)吸收在280 nm，丁香酚的最強(qiáng)吸收在230 nm、次強(qiáng)吸收在280 nm，因丁桂兒臍貼的桂皮醛含量較低，故選桂皮醛吸收較強(qiáng)的280 nm波長為檢測波長。

表1 丁香酚加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

表2 樣品測定結(jié)果

[1]，分別以甲醇、無水乙醇、乙腈為溶劑，考察超聲30 min、60 min，水浴回流30 min、60 min以及硅藻土吸附的提取效果，結(jié)果硅藻土吸附回收率最低，超聲提取優(yōu)于回流提取，不同溶劑提取的丁香酚和桂皮醛含量無明顯差異?？紤]到環(huán)保和降低試劑毒性，選擇無水乙醇超聲提取。

參考文獻(xiàn):

[1]袁紅宇，歐 寧，葛巧香.RP－HPLC法測定小兒腹瀉外敷散中丁香酚的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2008，19(1):50－51.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄 172.

Determination of Eugenol and Cinnamaldehyde in Dingguier Umbilical Paste by HPLC

Wang Ye1， Qiu Guoli2， Huang Hua1
(1.Quzhou Institute for Drug Control，Quzhou，Zhejiang，China 324002;
2.Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Hangzhou，Zhejiang，China 310011)

ObjectiveTo establish a method for the determination of eugenol and cinnamaldehyde in Dingguier Umbilical Paste.Methods The Eclipse XDB － C18column(150 mm × 4.6 mm，5 μm)was used with the mobile phase of methanol－ water(65 ∶35).The detection wavelength was 280 nm and the flow rate was 1.0 mL/min.Results Eugenol had the good linearity in the range of 0.172 9 － 2.074 2 μg(r=0.999 9).The average recovery rate was 96.98% ，RSD 1.85%(n=6).Cinnamaldehyde had the good linearity(r=0.999 9)in the range of 0.003 4 － 0.273 2 μg.The average recovery rate was 97.90% ， RSD 1.55%(n=6).Conclusion The method is proved to be simple，accurate and reliable，which can be used to control the quality of Dingguier Umbilical Paste.

Dingguier Umbilical Paste;HPLC;eugenol;cinnamaldehyde;content determination

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2011)10－0043－02

王也，主管藥師，從事藥物分析及質(zhì)量研究工作，(電話)0570－8281037(電子信箱)w －ye1979@163.com。

2010－10－14;

2011－01－11)