先天性肥厚性幽門狹窄組織蛋白酶 D的免疫組化研究

劉春義 李玉樓

先天性肥厚性幽門狹窄組織蛋白酶 D的免疫組化研究

劉春義 李玉樓

肥厚性幽門狹窄,先天性；組織蛋白酶 D；免疫組化

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院 2003至 2009年 42例 CHPS患兒為CHPS組均為足月產(chǎn)兒,男 38例,女 4例；年齡 16～121 d,平均年齡 29.5 d。均于幽門環(huán)肌切開術(shù)中幽門肌層 1條,包括漿膜、縱行肌、肌間及環(huán)形肌。對照組標(biāo)本 10例,男 9例,女 1例；新生兒 7例,嬰幼兒 3例,均為幽門部正常的術(shù)中標(biāo)本,取材方法同CHPS組,新鮮標(biāo)本立即固定在 10%甲醛溶液中,組織經(jīng)過酒精梯度脫水,石蠟包埋成蠟塊。

1.2 免疫組織化學(xué)染色 標(biāo)本經(jīng) 10%甲醛固定、石蠟包埋,連續(xù)切片,切片厚 4μm,行 CAD免疫組化染色。染色步驟采用非生物素兩步法,用已知陽性的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤作為陽性對照片,用 PBS代替一抗作為陰性對照片,DAB顯色。一抗、二抗及DAB顯色劑均購自上海越研生物科技有限公司。

1.3 免疫組化染色結(jié)果分析 采用盲法,半定量分析方法分析。

2 結(jié)果

2.1 2組幽門部肌層及肌間 CAD陽性細(xì)胞比較 見表 1。

表1 2組幽門部肌層及肌間 CAD陽性細(xì)胞比較

2.2 正常幽門肌病理表現(xiàn) (1)對照組新生兒與嬰兒標(biāo)本相比較,CAD陽性細(xì)胞數(shù)量分布無明顯差異,且無嚴(yán)重不成熟細(xì)胞。(2)肌間神經(jīng)從可見大量 CAD陽性節(jié)細(xì)胞,染色較深。

2.3 CHPS患兒的幽門肌病理表現(xiàn) (1)環(huán)形肌與肌間均可見CAD抗體陽性細(xì)胞,與對照組比較,有明顯減少,著色較淺的不成熟細(xì)胞,無明顯差異。(2)縱行肌內(nèi)CAD陽性細(xì)胞與對照組比較數(shù)量差異較小。

3 討論

CHPS是嬰兒器質(zhì)性嘔吐的最常見原因,是一種預(yù)后較好的先天性消化道畸形。其病因也有眾多學(xué)說,如遺傳因素、體液控制異常、幽門神經(jīng)分布異常、生長因子異常等。但它的病因至今并不十分清楚。近年來有人提出神經(jīng)節(jié)細(xì)胞細(xì)胞異常與 CHPS的形成有一定關(guān)系。CAD是一種天冬氨酸酶,屬于溶酶體酸性蛋白酶家族,其在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的分解代謝中起著關(guān)鍵作用,可催化許多神經(jīng)肽的降解,如P物質(zhì)、生長抑素、B脂蛋白和血管緊張素原。CAD是腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞特異性較高的標(biāo)志物,對不同成熟程度的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度不同,不僅可以特異性標(biāo)記神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,而且可以判斷神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的成熟程度。

本組 42例CHPS患兒幽門部環(huán)肌層、肌間及縱肌層各層間均有CAD陽性細(xì)胞,但較對照組明顯減少,尤其以環(huán)肌層及肌間神經(jīng)節(jié)細(xì)胞減少顯著。而且未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重變性或明顯不成熟神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。該病病理是幽門壁各層組織均肥厚增大,以環(huán)肌層為主。這是由肌纖維增粗和肌束間結(jié)締組織增生所致。單位面積內(nèi)肌纖維數(shù)目明顯減少。本組觀察結(jié)果提示,該病幽門部腫塊大小與年齡、病程長短有關(guān),病史越長,腫塊越大。這種病理改變是可逆的,經(jīng)過一定時間,腫塊可逐漸消失而痊愈[1]。

主要從事幽門腸肌層神經(jīng)叢的研究者發(fā)現(xiàn),神經(jīng)節(jié)細(xì)胞直至生后 2～4周才發(fā)育成熟,因此,許多學(xué)者認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育不良是引起幽門肌肉肥厚的機(jī)制,而否定過去幽門神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變性導(dǎo)致病變的學(xué)說,運用組織化學(xué)分析法測定幽門神經(jīng)節(jié)細(xì)胞內(nèi)酶的活性；但也有持不同意見者,觀察到幽門狹窄的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞與胎兒并無相同之處,如神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)育不良是原因,則早產(chǎn)兒發(fā)病應(yīng)多于足月兒,然而二者并無差異。近年研究認(rèn)為肽能神經(jīng)的結(jié)構(gòu)改變和功能不全可能是主要病因之一,通過免疫熒光技術(shù)觀察到環(huán)肌中含腦啡肽和血管活性腸肽神經(jīng)纖維數(shù)量明顯減少,應(yīng)用放射免疫法測定組織中 P物質(zhì)含量減少,由此推測這些肽類神經(jīng)的變化與發(fā)病有關(guān)[2]。

本組觀察到,幽門部神經(jīng)節(jié)細(xì)胞在不同部位,單位面積內(nèi)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)均減少,差異顯著,尤以環(huán)肌層變化更顯著。未發(fā)現(xiàn)有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分離、空化,等退行性改變。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有維持節(jié)律等作用,數(shù)量明顯減少,而且幽門部神經(jīng)纖維明顯減少,神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)有不同程度異常。有報道卡哈爾間質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)遞質(zhì)、突觸也有減少[3]。這些因素可能引起幽門部動力失衡。其具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。該病患兒幽門部神經(jīng)節(jié)細(xì)胞明顯減少,所以各種影響幽門部神經(jīng)組織發(fā)育或?qū)е律窠?jīng)節(jié)細(xì)胞減少的因素可能是構(gòu)成肥厚性幽門狹窄的因素之一。

1 王練英,劉永煜,李正.先天性肥厚性幽門狹窄病理組織學(xué)觀察.中華小兒外科雜志,2000,21:122.

2 Shen ZX,She YX,WangWC,et al.Immunohistochemical study ofpeptidergic nerves in infantile hypertrophic ptloric stenosis.Pediar Surg Int,1900,5:111-113.

3 張海蘭,王練英.先天性肥厚性幽門狹窄卡哈爾間質(zhì)細(xì)胞和突觸的免疫組織化學(xué)研究.中華小兒外科雜志,2003,24:200-222.

R 573.6

A

1002-7386(2011)01-0100-02

10.3969/j.issn.1002-7386.2011.01.058

050031 石家莊市,河北省兒童醫(yī)院

先天性肥厚性幽門狹窄(CHPS)是嬰兒嘔吐的常見原因,占新生兒消化道畸形的第三位,對于它的病因研究迄今已有100余年,但至今仍不十分清楚,關(guān)于肌間神經(jīng)叢的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的研究有矛盾的形態(tài)學(xué)發(fā)現(xiàn),組織蛋白酶 D(CAD)是腸壁神經(jīng)節(jié)特異性標(biāo)記物,幽門的正常功能有賴于幽門部神經(jīng)節(jié)功能的完整,通過對幽門部 CAD的研究,進(jìn)一步探討 CHPS的發(fā)病機(jī)制。

2010-08-05)