文心蘭原球莖增殖培養(yǎng)的研究*

尤海波

(黑龍江省農(nóng)科院)

文心蘭原球莖增殖培養(yǎng)的研究*

尤海波

(黑龍江省農(nóng)科院)

在MS、1/2MS、KC和VW 4種基本培養(yǎng)基中分別添加0.5～5 mg/L BA和1 mg/L NAA的對(duì)研究不同培養(yǎng)基對(duì)文心蘭(Oncidium)原球莖增殖的影響.結(jié)果表明，KC的效果最好，VW的效果次之，MS的效果最差.在KC基本培養(yǎng)基中，以KC為培養(yǎng)基，添加3 mg/L BA、0.3 mg/L NAA最適合文心蘭原球莖的增殖.在添加3 mg/L BA和0.3 mg/LNAA的KC培養(yǎng)基中，添加有機(jī)物促進(jìn)原球莖增殖，添加椰汁和番茄汁，原球莖增殖差異不顯著.

文心蘭(Oncidium);原球莖;增殖培養(yǎng)

0 引言

文心蘭屬蘭科文心蘭屬(Oncidium)，花形奇特似舞女，又名跳舞蘭、金粉蝶蘭、瘤瓣蘭，屬?gòu)?fù)莖類(lèi)洋蘭，附生或地生［1］，原產(chǎn)墨西哥、西印度群島、巴西等地［1－7］.可作為盆花和切花，同蝴蝶蘭及大花蕙蘭一樣，作為主要的栽培品種，市場(chǎng)需求量越來(lái)越大［2－5］.文心蘭傳統(tǒng)的繁殖方式為分株繁殖，繁殖系數(shù)較低，容易受到病毒感染，造成品質(zhì)退化，應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行快繁利于保持種苗特性，有效控制病害，因此，探索文心蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方式具有重要意義.

文心蘭組織培養(yǎng)過(guò)程中一般以原球莖的方式來(lái)增殖，在原球莖增殖培養(yǎng)過(guò)程中通常會(huì)同時(shí)形成原球莖和幼苗，影響了原球莖的增殖速度，同時(shí)也增加了在轉(zhuǎn)移繼代接種過(guò)程中的芽苗分級(jí)和原球莖分離的工作量，降低了接種生產(chǎn)效率，不利于工廠(chǎng)化、大規(guī)模生產(chǎn)的成本控制，為此有必要探索既可以提高原球莖增殖率，又可以將原球莖分化成苗的數(shù)量控制到最低的繼代培養(yǎng)方式.筆者對(duì)適合文心蘭原球莖增殖的基本培養(yǎng)基、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度及培養(yǎng)基中有機(jī)物的添加進(jìn)行了試驗(yàn)，以期為文心蘭的快速繁殖提供參考.

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

從母株上切取葉片尚未展開(kāi)的幼苗，除去外層葉片，暴露側(cè)芽，用自來(lái)水沖洗20 min，剝?nèi)プ钔饷娴囊粚尤~鞘，在75%酒精中蘸2～3 s后立即置0.1%的升汞溶液中浸泡15 min，取出后剝?nèi)ザ嘤嗟慕M織，再置10%次氯酸鈉溶液中浸10 min.取出后用無(wú)菌水沖洗3次，用無(wú)菌吸水紙吸干水分后，剝?nèi)?cè)芽或頂芽作為外植體，切取0.5～1.0 mm的莖尖，置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成原球莖.

1.2 方法

在MS、1/2 MS、KC和VW 4種基本培養(yǎng)基中，添加5 mg/L的 BA，0.5 mg/L的 NAA，另加蔗糖20 g/L，調(diào)pH至5.6.在培養(yǎng)基上接種文心蘭原球莖，培養(yǎng)溫度25±2℃，1 500 lx光照10～12 h，每處理10次重復(fù).培養(yǎng)30 d后，觀察原球莖生長(zhǎng)狀況，篩選出最佳基本培養(yǎng)基.在最佳基本培養(yǎng)基中添加不同濃度的BA和NAA，篩選適合原球莖增殖的最佳激素配比.基本培養(yǎng)基使用KC+蔗糖20 g/L，分別添加椰子汁、番茄汁和香蕉作為不同處理.添加量為:椰子汁200 mL/L，番茄200 g/L，香蕉200 g/L.將番茄、香蕉稱(chēng)重后，切成小碎塊煮爛用紗布過(guò)濾后使用.1個(gè)月后調(diào)查，每處理10次重復(fù).

2 結(jié)果與分析

2.1 不同基本培養(yǎng)基和BA濃度對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖的影響

文心蘭原球莖外觀象瘤狀愈傷組織，表面球狀物不明顯，在增殖過(guò)程中可見(jiàn)表面突起個(gè)個(gè)圓球，類(lèi)似小米粒.將原球莖置于不同基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)以KC處理組原球莖的增殖速度最快，增殖倍數(shù)為8.50;VW處理增殖速度次之，為7.97;1/2MS處理組增殖倍數(shù)為4.50.原球莖生長(zhǎng)勢(shì)以KC組最為強(qiáng)壯，VW處理組次之，MS處理組最差，且有黃化現(xiàn)象(表1).試驗(yàn)結(jié)果表明，低無(wú)機(jī)鹽濃度比較適合文心蘭原球莖的增殖培養(yǎng).

表1 不同基本培養(yǎng)基和BA對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖的影響

2.2 不同濃度的激素配比對(duì)文心蘭原球莖增殖的影響

表2 不同濃度激素配比對(duì)文心蘭原球莖增殖的影響(50 d)

從表2可以看出，以KC為基本培養(yǎng)基，當(dāng)BA在2～3時(shí)，隨著B(niǎo)A濃度升高，原球莖/芽比值增加，原球莖增殖倍數(shù)也提高.當(dāng)BA濃度繼續(xù)升高時(shí)，原球莖/芽比值和原球莖增殖倍數(shù)有下降的趨勢(shì).以KC為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加3 mg/L BA原球莖增殖倍數(shù)最高，原球莖生長(zhǎng)勢(shì)也比較健壯.結(jié)果表明，以KC為基本培養(yǎng)基，當(dāng)BA濃度一定時(shí)，NAA濃度在0.1～0.5 mg/L之間對(duì)文心蘭原球莖的增殖都有作用，隨著NAA濃度升高，原球莖/芽比值和原球莖增殖倍數(shù)有升高的趨勢(shì).從原球莖的生長(zhǎng)勢(shì)來(lái)看，BA的濃度升高，原球莖的致密程度增加，但無(wú)論是疏松還是過(guò)于緊密，都不利于小苗的分化，綜合看來(lái)，以 KC為培養(yǎng)基，添加3 mg/L BA、0.3 mg/L NAA最適合文心蘭原球莖的增殖.

2.2 不同有機(jī)添加物對(duì)PLB分化苗的影響

有機(jī)添加物對(duì)PLB分化苗有不同的影響(見(jiàn)表3).椰子汁、番茄和香蕉3種處理原球莖增殖倍數(shù)高于對(duì)照，添加椰汁和番茄汁處理間差異不明顯，但考慮到成本，生產(chǎn)上可采用添加番茄汁.

表3 不同有機(jī)物對(duì)文心蘭PLB增殖的影響

3 討論

適宜蘭花組織培養(yǎng)中使用的基本培養(yǎng)基有多種，其中以MS基本培養(yǎng)基最為常用，在文心蘭組織培養(yǎng)中，基本培養(yǎng)基的種類(lèi)也較多，如MS、1/2 MS、KC或改良KC、VW配方等.本試驗(yàn)表明，以KC為基本培養(yǎng)基，文心蘭的原球莖增殖及生長(zhǎng)勢(shì)最好，其次是VW，而以MS為基本培養(yǎng)基文心蘭原球莖增殖最差，因此文心蘭原球莖增殖培養(yǎng)應(yīng)以較低的無(wú)機(jī)鹽濃度為好，在培養(yǎng)基中添加椰汁或番茄汁，都有助于原球莖的增殖，這與何松林等［3］的研究結(jié)果相似.

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在原球莖增殖中，如切塊小于1.5 cm2時(shí)，原球莖生長(zhǎng)較慢;而在切塊大于1.5 cm2時(shí)，原球莖生長(zhǎng)十分旺盛，表現(xiàn)出一定的群體效應(yīng)，這與彭立新［4］、馬子駿［5］等在蝴蝶蘭原球莖增殖培養(yǎng)中的研究結(jié)果一致.

試驗(yàn)表明，可以采用接入原球莖后在相同培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)芽/原球莖(體積比)的比值作為調(diào)配培養(yǎng)基的指標(biāo).

［1］陳興貽.文心蘭組織培養(yǎng)［J］.植物生理學(xué)通訊，1989(2):49.

［2］陳菁英，藍(lán)賀勝，陳雄鷹.蘭花組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)［M］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004.107－115.

［3］何松林，等.不同基本培養(yǎng)基及培養(yǎng)方式對(duì)文心蘭原球莖增殖的影響.華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2001(1):88－91.

［4］彭立新，王姝，孟廣云.蝴蝶蘭組織培養(yǎng)快繁研究［J］.天津農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，1999，5(2):27 －29.

［5］馬子駿，王魯彤，盧宇廣，等.蝴蝶蘭工廠(chǎng)化生產(chǎn)技術(shù)研究［J］.浙江林學(xué)院學(xué)報(bào)，1998，15(2):192－196.

The Study on Enrichment Culture of Protocorm in Oncidium

You Haibo
(Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences)

The influence of four minimal medium on enrichment of protocorm is studied.The four minimal medium is MS，1/2MS，KC and VW with 0.5 ～ 5.0 mg/L BA and 1 mg/L NAA add separately.The results show that the effect of KC is best，minor VW，the worst MS.The best medium fit for enrichment of protocorm is KC with 3 mg/L BA，0.3 mg/L NAA added.It is marked about protocorm enrichment when added organics in the best medium above;but not marked when added coconut juice and tomato juice to it.

Oncidium;PLB;Enrichment culture

2011－06－14

*黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助(C2007－21)

(責(zé)任編輯:李佳云)