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    人生長(zhǎng)激素對(duì)人胃、結(jié)腸癌細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響

    2010-12-01 06:16:56黃世華陳嘉勇曾德妙
    中國實(shí)用醫(yī)藥 2010年20期
    關(guān)鍵詞:結(jié)腸癌胃癌實(shí)驗(yàn)

    黃世華 陳嘉勇 曾德妙

    重組人生長(zhǎng)激素(rhGH)對(duì)消化道惡性腫瘤患者術(shù)后進(jìn)行代謝調(diào)理治療,明顯促進(jìn)了腫瘤患者的康復(fù),已經(jīng)在外科領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。但人生長(zhǎng)激素(hGH)作為一種生長(zhǎng)因子,腫瘤患者術(shù)后能否使用rhGH存在爭(zhēng)議。本研究從細(xì)胞周期角度探討rhGH對(duì)人胃、結(jié)腸癌細(xì)胞株MKN45和Colo320增殖的影響,為臨床胃、結(jié)腸癌術(shù)后患者能否應(yīng)用rhGH提供一定的實(shí)驗(yàn)參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 主要試劑及儀器 人胃癌細(xì)胞株MKN45、人結(jié)腸癌細(xì)胞株Colo320(中科院上海細(xì)胞生物所細(xì)胞庫);重組人生長(zhǎng)激素(SAIZEN,瑞士Sernono公司);奧沙利鉑(L-OHP,江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司);RPMI1640(美國GIBCO公司)。小牛血清(浙江省杭州四季青生物工程材料有限公司);流式細(xì)胞儀(美國COULTER公司,EPICXU型)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)分組 對(duì)照組(RPMI1640)、抗腫瘤藥物組(LOHP)、rhGH組及L-OHP+rhGH組,后兩組又分為4個(gè)亞組,表1。

    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及樣品制備 MKN45、Colo320細(xì)胞在含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液中、37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶消化,4 g/L臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)算細(xì)胞活率(Via=99%),并細(xì)胞計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞懸液密度為1×105/ml備用。將細(xì)胞懸液接種于6孔板中,2 ml/孔,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,4 h細(xì)胞完全貼壁后加入藥物。培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞,PBS液洗滌,70%乙醇固定,4℃保存24 h。加入熒光素(碘化丙啶)染色,激發(fā)波長(zhǎng)488nm進(jìn)行細(xì)胞周期分析。

    表1 實(shí)驗(yàn)分組及藥物濃度

    2 結(jié)果

    2.1 細(xì)胞周期 L-OHP組和L-OHP+rhGH組細(xì)胞周期發(fā)生明顯變化。G0~G1期:L-OHP組和L-OHP+rhGH組比對(duì)照組或rhGH組顯著增加,且L-OHP+rhGH與對(duì)應(yīng)的rhGH組配對(duì)比較也顯著增加(P<0.01),其他各組間沒有顯著差異(P>0.05)。S期:L-OHP組和L-OHP+rhGH組比對(duì)照組和rhGH組降低(P<0.01),且L-OHP+rhGH與對(duì)應(yīng)的rhGH組比較S期細(xì)胞減少(P<0.01);同時(shí),L-OHP+rhGH組間隨著rhGH劑量的增加沒有明顯的變化規(guī)律。rhGH組和對(duì)照組比較雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但有升高趨勢(shì)。G2~M期:LOHP組和L-OHP+rhGH組比對(duì)照組和rhGH組降低(P<0.05),rhGH組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);同時(shí),L-OHP+rhGH組與對(duì)應(yīng)的rhGH組及對(duì)照組比較,G2~M 期細(xì)胞也減少(P<0.05),但胃癌細(xì)胞無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表2。

    表2 藥物作用后MKN45和Colo320細(xì)胞株各組的增殖周期百分?jǐn)?shù)(±s)

    表2 藥物作用后MKN45和Colo320細(xì)胞株各組的增殖周期百分?jǐn)?shù)(±s)

    注:與對(duì)照組和rhGH各亞組比較,*P<0.01

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    2.2 細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)

    L-OHP組和L-OHP+rhGH組的PI較對(duì)照組明顯降低(P<0.01),L-OHP+rhGH組與對(duì)應(yīng)的rhGH組配對(duì)比較其PI顯著降低(P<0.01);同時(shí),rhGH組與對(duì)照組、L-OHP+rhGH組與L-OHP組比較PI均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表3。

    表3 藥物作用后MKN45和Colo320細(xì)胞株各組細(xì)胞增殖指數(shù)(x±s)

    3 討論

    hGH用于腫瘤患者術(shù)后代謝調(diào)理至今存在爭(zhēng)論,因?yàn)橛胁簧賹W(xué)者認(rèn)為hGH存在潛在影響腫瘤生長(zhǎng)的促有絲分裂效應(yīng)。本研究結(jié)果提示用hGH單獨(dú)處理兩株細(xì)胞,細(xì)胞周期、PI及DNA抑制率均未發(fā)生明顯改變。此結(jié)果與Harrison等人發(fā)現(xiàn)給皮下接種了胰腺癌細(xì)胞的Athymic小鼠體內(nèi)注射hGH的實(shí)驗(yàn)相符,15 d后檢測(cè)發(fā)現(xiàn),hGH體內(nèi)應(yīng)用僅提高了血漿IGF-1水平和肝內(nèi)蛋白合成速率,沒有促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng),也未改變細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)和腫瘤組織的蛋白合成速率[1]。

    大量文獻(xiàn)報(bào)道,hGH能調(diào)節(jié)免疫功能,改善患者細(xì)胞和體液性的全身宿主防御,尤其是雙向調(diào)控NK細(xì)胞,促進(jìn)創(chuàng)傷患者的正氮平衡、加速傷口愈合、減少并發(fā)癥有重要意義。有學(xué)者經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí),hGH和IGF-1能增強(qiáng)TPN應(yīng)用過程中的免疫反應(yīng),促進(jìn)TPN的蛋白合成作用,改善瘦體組織群,提高宿主的免疫功能,減少感染風(fēng)險(xiǎn),但并不促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。有文獻(xiàn)報(bào)道rhGH用于術(shù)后惡性腫瘤患者的代謝調(diào)理[2,3],對(duì)促進(jìn)患者正氮平衡起到了積極的作用。有的學(xué)者認(rèn)為rhGH不會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖分裂,吳力群等[4]研究表明hGH對(duì)大鼠移植性肝腫瘤的生長(zhǎng)無促進(jìn)作用,與生長(zhǎng)抑素合用可抑制肝腫瘤的生長(zhǎng)。Harrison等[1]報(bào)道在他們治療的一組消化道腫瘤患者術(shù)后應(yīng)用rhGH的隨訪病例中未發(fā)現(xiàn)其對(duì)腫瘤的復(fù)發(fā),轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用;Jurgen等[5]對(duì)75例胃腸道腫瘤患者術(shù)后短期應(yīng)用rhGH發(fā)現(xiàn)rhGH不會(huì)促進(jìn)腫瘤的復(fù)發(fā)。Fiebig等[6]在體外用7種不同的人腫瘤細(xì)胞(結(jié)腸癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌和前列腺癌)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中證實(shí)rhGH不會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。

    就體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果分析,MKN45和Colo320細(xì)胞都是惡性程度高的細(xì)胞株,本研究結(jié)果提示rhGH在體外總的趨勢(shì)是對(duì)人胃、結(jié)腸癌細(xì)胞增殖分裂無明顯促進(jìn)作用。rhGH組與對(duì)照組、L-OHP+rhGH組與L-OHP組比較在細(xì)胞周期中各期細(xì)胞數(shù)量和PI均無顯著差異(P>0.05),表明rhGH對(duì)體外培養(yǎng)的胃、結(jié)腸癌細(xì)胞無促進(jìn)增殖的作用。在rhGH與LOHP合用與對(duì)照組和rhGH組比較,S期及G2~M期的細(xì)胞及PI明顯減少(P<0.01;胃癌細(xì)胞G2~M期P>0.05)。為臨床胃腸道腫瘤患者術(shù)后應(yīng)用rhGH進(jìn)行代謝調(diào)理提供一定參考。由于本實(shí)驗(yàn)未對(duì)細(xì)胞進(jìn)行同步化處理,所以不能對(duì)胃、結(jié)腸癌細(xì)胞兩株細(xì)胞株進(jìn)行比較。

    綜上所述,本實(shí)驗(yàn)提示rhGH在體外不促進(jìn)人胃、結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖分裂,與以往文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相似[7-9]。

    [1]Harrison LE,Blumberg D,Berman R,et al.Effect of human growth hormone on human pancreatic carcinoma growth,protein and cell cycle kinetic.J Surg Res,1996,61(2):317-22.

    [2]陳嘉勇,張捷,譚晶,等.胃、結(jié)癌患者術(shù)后生長(zhǎng)激素應(yīng)用的價(jià)值評(píng)估.中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志,1999,6(6):365-367.

    [3]Vara-Thorbeck TR,Ruiz-Requena E,Guerrero JA.Effects of human growth hormone on the catabolic state after surgical trauma.Horm Res,1994,45(6):55-60.

    [4]吳力群,楊猛,盧云,等.生長(zhǎng)抑素及生長(zhǎng)激素瘤內(nèi)注射治療大鼠移植性肝腫瘤的研究.中華臨床醫(yī)藥雜志,2003,4(6):22-24.

    [5]Juergen Tacke,Ulrich Bolder,Armin Herrmann,et al.Long-term risk of gastrointestinal tumor recurrence after postoperative treatment with recombinant human growth hormone.JPEN,2000,24(3):140-144.

    [6]Fiebig HH,Dengler W,Hendriks HR.No evidence of tumor growth stimulation in human tumors in vitro following treatment with recombinant human growth hormone.Anticancer Drugs,2000,11(8):659-664.

    [7]郭愛平,李蘇宜.重組人生長(zhǎng)激素在體外對(duì)人胃癌細(xì)胞作用的研究.東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2007,26(3):206-209.

    [8]Jiayong Chen,Daoming Liang,Ping Gan,et al.In vitro effects of recombinant human growth hormone on growth of human gastric cancer cell line BGC823 cells.World Journal of Gastroenterology,2004,10(8);1132-1136.

    [9]魏壽江,王崇樹,王嚴(yán)慶,等.重組人生長(zhǎng)激素對(duì)體外人結(jié)腸癌COLO-320細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2003,10(6):572-575.

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