阿司匹林對(duì)胃癌細(xì)胞株的作用研究

南京醫(yī)科大學(xué)附屬江寧醫(yī)院（211100） 張有成

南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 （210029） 丁永斌 夏建國(guó)

如何在早期預(yù)防胃癌、延遲早期胃癌向進(jìn)展期發(fā)展成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。其中，化學(xué)預(yù)防成為熱點(diǎn)之一。化學(xué)預(yù)防是指用一些天然或合成的化學(xué)藥物干預(yù)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。阿司匹林作為非甾體類(lèi)藥物（nonsteroidalantiinflammatorydrug，NSAID）的代表藥物，幾十年來(lái)在臨床上廣泛用于各類(lèi)風(fēng)濕和類(lèi)風(fēng)濕、心血管疾病。近年的研究表明，其尚有抗腫瘤增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，長(zhǎng)期服用阿司匹林可以顯著降低結(jié)腸癌的死亡率（40%～50%）[1]。本研究采用MTT法觀察阿司匹林對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，并建立裸鼠移植瘤模型，觀察阿司匹林對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響，并討論其作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料 人胃癌細(xì)胞株SGC7901由江蘇省人民醫(yī)院普外科實(shí)驗(yàn)室提供。BALB/c nu/nu裸小鼠，雄性，鼠齡3周，體重18.2±0.6g，購(gòu)自上海動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) SGC7901胃癌細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10%滅活的新生小牛血清、100U/ml、100U/ml鏈霉素的RPMII640培養(yǎng)液中，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 MTT比色實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SGC7901細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，按每孔3.5×104個(gè)細(xì)胞種進(jìn)96孔板中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)24小時(shí)后，分別加入終濃度為0.1、1.0、8.0mmol/L的阿司匹林，每一濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，以不含阿司匹林培養(yǎng)基的細(xì)胞作為陰性對(duì)照，以空白孔調(diào)零。繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72小時(shí)，每孔加MTT20μl，4小時(shí)后棄去上清液，每孔加DMS0150μl，振蕩10分鐘，570nm處測(cè)定光吸收值（A值）。按照下列公式計(jì)算抑制率：抑制率（%）=（1-試驗(yàn)組平均A值/對(duì)照組平均A值）×100%。

1.2.3 人胃癌裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn) 人胃癌細(xì)胞SGC7901按2×106個(gè)細(xì)胞接種于裸鼠前腋下，12只裸鼠隨即分成兩組，治療組于接種次日開(kāi)始腹腔灌注阿司匹林10mg/kg，對(duì)照組腹腔注射生理鹽水。第30天處死裸鼠。測(cè)量?jī)山M胃癌種植瘤的長(zhǎng)徑、短徑及瘤種。按下列腫瘤體積及腫瘤生長(zhǎng)抑制率：腫瘤體積=1/2長(zhǎng)徑×短徑，腫瘤生長(zhǎng)抑制率=（對(duì)照組腫瘤體積-治療組腫瘤體積）/對(duì)照組腫瘤體積×100%。

2 結(jié)果

2.1 阿司匹林對(duì)SGC7901增殖的影響 隨著阿司匹林的濃度升高和作用時(shí)間延長(zhǎng)，SGC7901的生長(zhǎng)明顯呈抑制作用：阿司匹林作用后細(xì)胞的吸光變化隨著濃度的升高，吸光度逐漸的降低（附表1）。阿司匹林對(duì)SGC7901的抑制率，隨濃度升高和時(shí)間的延長(zhǎng)（附表2），抑制率逐漸升高，各組之間有顯著性差異（P＜0.05）。

2.2 阿司匹林對(duì)移植瘤的影響 兩組裸鼠均有胃癌原位移植瘤的生長(zhǎng)，其組織經(jīng)病理切片檢查證實(shí)為胃腺癌，阿司匹林組腫瘤的體積為0.874±0.058cm3，瘤重為0.975±0.067g，對(duì)照組腫瘤的體積為1.579±0.115cm3，瘤重為1.674±0.094g，兩者比較有顯著差異（P＜0.05），抑制率達(dá)44.6%。（見(jiàn)附圖）

附圖 阿司匹林對(duì)移植瘤的影響

附表1 阿司匹林作用后的吸光度

附表2 阿司匹林對(duì)SGC7901的抑制率

3 討論

阿司匹林是世界范圍內(nèi)使用最廣泛的藥物之一。最近的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及流行病學(xué)調(diào)查顯示，常規(guī)服用NSAID可使結(jié)腸癌的發(fā)病危險(xiǎn)性減少50%，可降低食管癌及胃癌發(fā)病率，即NSAID對(duì)胃腸道腫瘤可能具有防治作用[2]。

本實(shí)驗(yàn)使用MTT法測(cè)定阿司匹林對(duì)胃癌細(xì)胞的作用，結(jié)果顯示，阿司匹林濃度越高，胃癌細(xì)胞受到的抑制作用越明顯，且其抑制作用隨著時(shí)間的延長(zhǎng)更加明顯。

體外移植瘤實(shí)驗(yàn)中，使用阿司匹林腹腔灌注組的移植瘤明顯小于對(duì)照組腫瘤，并且裸鼠的一般情況也是干預(yù)組好于對(duì)照組，通過(guò)解剖裸鼠尸體，干預(yù)組并沒(méi)有出現(xiàn)明顯的消化道出血、潰瘍等病變，提示了小劑量的阿司匹林在裸鼠抗腫瘤化學(xué)預(yù)防作用中的安全性。研究表明阿司匹林能抑制胃癌細(xì)胞和移植瘤的生長(zhǎng)，具有一定的抗腫瘤作用。目前，消化道腫瘤，尤其是胃癌就診病例幾乎均為中晚期患者，就其治療而言，遠(yuǎn)期療效尚無(wú)突破性進(jìn)展。隨著腫瘤發(fā)病人群的日趨年輕化，腫瘤對(duì)人類(lèi)的危害也日益嚴(yán)重。

針對(duì)比較明確的腫瘤病因以及相關(guān)危險(xiǎn)因素的一級(jí)預(yù)防固然是腫瘤防治的理想策略，但是由于腫瘤發(fā)病的多階段性以及各相關(guān)危險(xiǎn)因素之間交互作用的復(fù)雜性，一級(jí)預(yù)防還難在實(shí)際工作中開(kāi)展[3]。因此，除了改善膳食結(jié)構(gòu)與采用先進(jìn)的早期診斷、治療技術(shù)，做到早期診斷和早期治療外，尋找有效的化學(xué)預(yù)防藥物已成為新近腫瘤二級(jí)預(yù)防的策略[4][5]。以阿司匹林為代表的NSAID有望在胃癌等腫瘤及其癌前病變的化學(xué)預(yù)防領(lǐng)域取得突破性進(jìn)展，研究的最終目標(biāo)是為把NSAID作為腫瘤的化學(xué)預(yù)防藥物提供科學(xué)依據(jù)。