中鏈脂肪酸脂質(zhì)體的制備及其性質(zhì)測(cè)定

鄭會(huì)娟，劉成梅*，劉 偉，劉瑋琳，楊水兵，陰婷婷，童桂鴻

(南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047)

中鏈脂肪酸脂質(zhì)體的制備及其性質(zhì)測(cè)定

鄭會(huì)娟，劉成梅*，劉 偉，劉瑋琳，楊水兵，陰婷婷，童桂鴻

(南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047)

以卵磷脂和膽固醇為膜材，中鏈脂肪酸(MCFAs)為油溶性模型材料，采用薄膜分散-動(dòng)態(tài)高壓微射流法(薄膜分散-DHPM法)及動(dòng)態(tài)高壓微射流-凍融法(DHPM-凍融法)制備MCFAs脂質(zhì)體，以包封率和平均粒徑為主要考察指標(biāo)對(duì)兩種方法進(jìn)行比較。結(jié)果表明：薄膜分散-DHPM法最佳制備條件為脂質(zhì)質(zhì)量濃度8g/100mL、磷脂與膽固醇質(zhì)量比5:1、處理壓力140MPa、處理次數(shù)4次；DHPM-凍融法最佳制備條件為冷凍時(shí)間0.5h、融化溫度40℃、冷凍保護(hù)劑為麥芽糖、冷凍保護(hù)劑用量3%。最佳條件下，薄膜分散-DHPM法制備的MCFAs脂質(zhì)體平均粒徑為87.1nm，分布均勻，包封率可達(dá)(66.5±3.1)%；DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體粒徑較大，平均粒徑為110.1nm，包封率較低，為(53.5±4.9)%。通過(guò)MCFAs脂質(zhì)體泄漏動(dòng)力學(xué)和精密度(日間和日內(nèi))實(shí)驗(yàn)考察其穩(wěn)定性。薄膜分散-DHPM法和DHPM-凍融法的穩(wěn)定性都較好，均適合于MCFAs脂質(zhì)體的制備。

中鏈脂肪酸；動(dòng)態(tài)高壓微射流；凍融法；包封率；粒徑

Abstract：Film-dispersion-dynamic high-pressure micro-fluidizer (Film dispersion-DHPM) method and DHPM-freezethawing method were used to prepare medium-chain fatty acid (MCFA) liposome with lecithin and cholesterol as the membrane materials, and MCFA as the core material. Encapsulation efficiency (EE) and average particle size of MCFA liposome were chosen to evaluate both preparation methods. The optimal preparation conditions of MCFA liposome using Film dispersion-DHPM method were lipid content of 8% (m/V), lecithin-cholesterol ratio of 5:1 (m/m), treatment pressure of 140 MPa and repeated treatment number of 4. The optimal preparation conditions of MCFA liposome using DHPM-freeze-thawing method were freezing time of 0.5 h, maltose as the cryoprotectant content of 3% (m/V) and thawing temperature of 40 ℃. Under the optimal preparation conditions, the average diameter and EE of MCFA liposome prepared by Film-dispersion-DHPM method were 87.1 nm and (66.5±3.1)%; MCFA liposome prepared by DHPM-freeze-thawing method exhibited a relative higher average diameter and lower EE, which were 110.1 nm and (53.5±4.9)%, respectively. The stability of MCFA liposome was explored by leakage kinetics. Results exhibited that MCFA liposome prepared by Film dispersion-DHPM method and DHPM-freezethawing method had good stability. Therefore, both methods can be used to prepare MCFA liposome.

Key words：MCFA；dynamic high pressure micro-fluidizer (DHPM)；freeze-thawing；encapsulation efficiency (EE)；particle size

中鏈脂肪酸(medium chain fatty acids，MCFAs)主要指C8的辛酸和C10的癸酸。與LCFAs相比，MCFAs分子小，轉(zhuǎn)運(yùn)不需要肉毒堿、膽鹽等，在小腸吸收后經(jīng)門靜脈進(jìn)入線粒體進(jìn)行氧化，代謝速度快、效率高，可作為肉毒堿缺乏的危重病人、胰液和膽鹽缺乏的早產(chǎn)兒以及胰腺損傷和脂肪吸收障礙病人的能量來(lái)源[1-2]。Koji等[3]研究顯示MCFAs對(duì)患有Ⅱ型糖尿病的動(dòng)物模型及病人具有治療優(yōu)勢(shì)。但MCFAs水溶性差，性質(zhì)不穩(wěn)定，使其非腸道和口服給藥效果差，且其適口性差，若直接服用，會(huì)引起腸道不適。

脂質(zhì)體是一種存在于水相介質(zhì)中、由脂質(zhì)雙分子層包裹了某些組分后自行組裝的膠體粒子[4]。脂質(zhì)體原料的無(wú)毒性以及類生物膜性使其具有良好的生物相容性。其起初用于生物膜的研究，20世紀(jì)70年代開始進(jìn)入幾種實(shí)際應(yīng)用，主要是在載藥方面[5]。過(guò)去20多年中，多種脂質(zhì)體藥物已進(jìn)入臨床使用或臨床實(shí)驗(yàn)階段，如能夠有效降低乳腺癌死亡率的阿霉素聚乙二醇修飾脂質(zhì)體的使用[6-8]。本研究將MCFAs包裹于脂質(zhì)體中，可以克服MCFAs理化性質(zhì)和生理功能的缺點(diǎn)，提高其靶向性和生物利用性[9-10]。脂質(zhì)體常用的制備方法有薄膜法[11]、超聲法[12]、乙醇注入法[13]、逆相蒸發(fā)法[14]、高壓均質(zhì)法[15]、凍融法[16]等。動(dòng)態(tài)高壓微射流技術(shù)(DHPM)其儀器核心原件為撞擊腔，它可將液體在極小空間進(jìn)行強(qiáng)烈的垂直撞擊，撞擊過(guò)程形成持續(xù)高速的剪切力，從而將液體粒徑有效減小到分布均勻的納米級(jí)[17]。Pick[16]研究顯示，凍融法可以提高脂質(zhì)體包封率，卻會(huì)使粒徑增大。

而將DHPM法和傳統(tǒng)的薄膜法結(jié)合成為薄膜分散-DHPM法，以及和傳統(tǒng)的凍融法結(jié)合成為DHPM-凍融法(改良凍融法)來(lái)制備MCFAs脂質(zhì)體目前還未見報(bào)道。本研究采用薄膜分散-DHPM及DHPM-凍融法制備MCFAs脂質(zhì)體。通過(guò)粒徑及其分布、Zeta電位、形貌、精密度及泄漏動(dòng)力學(xué)等物化性質(zhì)的考察，對(duì)兩種制備方法進(jìn)行比較，制備出包封率較高，粒徑較小的MCFAs納米脂質(zhì)體，從而解決MCFAs水溶性、穩(wěn)定性及口感差等問(wèn)題，進(jìn)而提高其生物利用性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

中鏈脂肪酸(辛酸與癸酸總含量＞96%，美國(guó)進(jìn)口分裝)；大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量≥50%) 北京美亞斯磷脂技術(shù)有限公司，膽固醇(純度＞95%)、色譜級(jí)正已烷(純度＞97%) 天津市大茂化學(xué)試劑廠；Triton X-100 汕頭市西隴化工廠有限公司；Tween-80 上海申宇醫(yī)藥化工有限公司；無(wú)水乙醇、甲醇、麥芽糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇、VE等(均為分析純)，磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.4，0.05mol/L)。

1.2 儀器與設(shè)備

Microfluidizer Processor M-700微射流儀 美國(guó)Microfluidics公司；NCJJ-0.2/150nm超高壓均質(zhì)機(jī) 廊坊通用機(jī)械有限公司；6890N氣相色譜儀 美國(guó)Agilent公司；NICOMP380/ZLS納米粒度分析儀 國(guó)PSS粒度分析儀公司；H-600透射電鏡 日本日立公司；TGL-16C冷凍離心機(jī)、Forma-86c超低溫冰箱 美國(guó)Thermo Electron公司；T6新世紀(jì)型紫外-可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器公司；EyelaN-1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 日本東京理化器械株式會(huì)社。

1.3 方法

1.3.1 薄膜分散-DHPM法制備MCFAs脂質(zhì)體

將各類脂材料(磷脂、膽固醇、Tween-80及VE)及MCFAs按一定比例加入無(wú)水乙醇中，攪拌使充分溶解，在一定溫度水浴真空條件下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，待形成均一薄膜后加入一定量pH7.4，0.05mol/L PBS，常壓旋轉(zhuǎn)45min進(jìn)行洗膜，形成白色均勻的脂質(zhì)體溶液。將制備的脂質(zhì)體溶液用DHPM在不同壓力(60、80、100、120、140、160、180MPa)條件下處理不同次數(shù)(1、2、3、4、5、6、7次)，即得到MCFAs脂質(zhì)體溶液，稱為MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ。

1.3.2 DHPM-凍融法制備MCFAs脂質(zhì)體

將各類脂材料(磷脂、膽固醇、Tween-80及VE)及MCFAs按一定比例加入無(wú)水乙醇中，攪拌使充分溶解，在一定溫度水浴真空條件下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，待形成均一薄膜后加入不同濃度的冷凍保護(hù)劑(甘露醇、麥芽糖、海藻糖、蔗糖)一定量pH7.4，0.05mol/L的PBS，常壓旋轉(zhuǎn)45min進(jìn)行洗膜，形成白色均勻的脂質(zhì)體溶液。然后同樣經(jīng)動(dòng)態(tài)高壓處理制得的脂質(zhì)體于－80℃冰箱冷凍一定時(shí)間后，在一定溫度(4、25、40、60℃)條件下充分振蕩，使之完全融化后又重新置于－80℃冷凍。如此反復(fù)冷凍-融解數(shù)次，即得到MCFAs脂質(zhì)體溶液，稱為MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ。

1.3.3 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ包封率的測(cè)定

氣相色譜操作條件：氣化室溫度：280℃；柱溫：程序升溫，150℃保持5min，再以6℃/min升溫到180℃；FID檢測(cè)器溫度：280℃；H2流速450mL/min，空氣40mL/min，載氣為高純N2(純度99.999%)，流速20mL/min，柱內(nèi)流速1.4mL/min；色譜柱：HP-innowax Polyethylene Glycol(30m×0.32mm×0.5μm)。分別進(jìn)樣1μL，記錄各個(gè)出峰面積和出峰時(shí)間。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將辛酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成質(zhì)量濃度為4.8、2.4、1.2、0.6、0.3mg/mL，將癸酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成質(zhì)量濃度為3.2、1.6、0.8、0.4、0.2mg/mL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及趨勢(shì)線方程。得到辛酸甲酯與癸酸甲酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為：y=139.34x－5.7696，R2=0.9997；y=141.11x+3.8366，R2=0.9999。

包封率/%=n/m×100

式中：m為脂質(zhì)體中總中鏈脂肪酸的質(zhì)量/mg；n為包封的中鏈脂肪酸的質(zhì)量/mg。

MCFAs脂質(zhì)體包封率的測(cè)定：先用離心除去游離MCFAs后，通過(guò)氣相色譜檢測(cè)所包裹的MCFAs，具體操作如下：將MCFAs脂質(zhì)體于8000r/min離心30min，用正已烷萃取除去游離MCFAs。取除去了游離MCFAs的脂質(zhì)體，加入TritonX-100的甲醇溶液及硫酸鎂進(jìn)行超聲破乳，然后加入正己烷、水充分混勻，分液取上層液。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到MCFAs脂質(zhì)體的包封率。

1.3.4 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ粒徑及Zeta電位的測(cè)定

用NICOMP 380/ZLS納米粒度分析儀測(cè)定。將待測(cè)脂質(zhì)體懸浮液稀釋至一定濃度，測(cè)定平均粒徑、多分散指數(shù)(PDI)和Zeta電位，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次。

1.3.5 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ形貌觀察

采用負(fù)染色法進(jìn)行透射電鏡觀察：將脂質(zhì)體用蒸餾水按1:10(V/V)稀釋，取稀釋后的樣品與質(zhì)量濃度為2g/100mL的磷鎢酸以1:1(V/V)混合放置3min，然后將處理過(guò)的銅網(wǎng)浸入上述液體，多余的液體用濾紙吸干，放置5min，待其自然干時(shí)，再置于工作電壓為75kV的透射電鏡下觀察脂質(zhì)體形態(tài)[18]。

1.3.6 薄膜分散-DHPM法與DHPM-凍融法精密度考察

包括日內(nèi)精密度與日間精密度實(shí)驗(yàn)，測(cè)定粒徑和包封率，以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

日內(nèi)精密度：考察周期為1 d，分別取兩種脂質(zhì)體，在0、2、4、6、8h取樣進(jìn)行包封率和粒徑的測(cè)定，求得平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。

日間精密度：考察周期為3 d，分別取兩種脂質(zhì)體，于每天同一時(shí)間取樣進(jìn)行一次包封率和粒徑的測(cè)定，計(jì)算平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。

1.3.7 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ泄漏動(dòng)力學(xué)考察

將兩種制備方法得到的MCFAs脂質(zhì)體于4℃貯藏1個(gè)月，每隔5d取樣，按照上述方法測(cè)定此時(shí)粒徑及包封率，并計(jì)算滲漏率：

式中：EE0為起始時(shí)MCFAs脂質(zhì)體的包封率/%；EEi為MCFAs脂質(zhì)體貯藏過(guò)程中的包封率/%。

2 結(jié)果與分析

2.1 薄膜分散-DHPM法工藝條件

首先進(jìn)行各單因素試驗(yàn)，結(jié)果經(jīng)極差分析，得出MCFAs質(zhì)量濃度(15mg/mL)、吐溫80與磷脂質(zhì)量比(3:10)、離子強(qiáng)度(0)、PBS濃度(0.05mol/L)及pH(7.4)、制備溫度(40℃)等因素對(duì)結(jié)果影響較小，篩選出對(duì)結(jié)果影響較大的條件：脂質(zhì)質(zhì)量濃度、磷脂膽固醇質(zhì)量比、處理壓力、處理次數(shù)，進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。正交設(shè)計(jì)軟件生成的四因素三水平的正交表及結(jié)果見表1。

表1 薄膜分散-DHPM法正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)Table 1 Design of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using Film-dispersion-DHPM method

表2 薄膜分散-DHPM法正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Results of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using Film-dispersion-DHPM method

表3 薄膜分散-DHPM法方差分析表Table 3 Variance analysis of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using Film-dispersion-DHPM method

由表2、3可知，對(duì)包封率影響強(qiáng)弱的因素由強(qiáng)到弱依次是：D(處理壓力)＞A(脂質(zhì)質(zhì)量濃度)＞B(磷脂膽固醇質(zhì)量比)＞C(處理次數(shù))，得出制備MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ最佳配方為A2B1C2D3，即脂質(zhì)質(zhì)量濃度8g/100mL、磷脂與膽固醇質(zhì)量比5:1、處理壓力140MPa、處理次數(shù)4次。在此條件下，所得MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ包封率為(66.5±3.1)%。

由上述結(jié)果及前期單因素結(jié)果可知，隨著DHPM處理壓力的增大，包封率表現(xiàn)出先增大后減小的現(xiàn)象。原因可能是反應(yīng)腔內(nèi)強(qiáng)烈的高速剪切力使得多室脂質(zhì)體分裂成單室脂質(zhì)體，導(dǎo)致粒徑變小，從而增加比表面積，而油溶性MCFAs主要是包裹或穿插于磷脂雙分子層內(nèi)，比表面積的增加使MCFAs的包裹量增加；但處理次數(shù)過(guò)多或壓力過(guò)高，脂質(zhì)體被機(jī)械力破壞，磷脂雙分子層破裂發(fā)生團(tuán)聚致使粒徑開始增加。

2.2 DHPM-凍融法工藝條件

首先進(jìn)行各單因素試驗(yàn)，結(jié)果經(jīng)極差分析，得出冷凍溫度(－80℃)、凍融次數(shù)(3次)等因素對(duì)結(jié)果影響較小，篩選出對(duì)結(jié)果影響較大的條件：冷凍時(shí)間、融化溫度、冷凍保護(hù)劑種類及其用量，進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。正交設(shè)計(jì)軟件生成的四因素三水平正交表及結(jié)果見表4。

表4 DHPM-凍融法正交試驗(yàn)因素和水平Table 4 Factors and levels of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using DHPM-freezethawing method

表5 DHPM-凍融法正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 5 Design and results of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using DHPM-freezethawing method

表6 DHPM-凍融法方差分析表Table 6 Variance analysis of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using DHPM-freeze-thawing method

由表5、6結(jié)果可知，對(duì)包封率影響強(qiáng)弱的因素由強(qiáng)到弱依次是：B(融化溫度)＞C(冷凍保護(hù)劑種類)＞D(冷凍保護(hù)劑用量)＞A(冷凍時(shí)間)?？梢娙诨瘻囟仁菍?duì)包封率影響最大的因素。因此得到制備MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ最佳配最佳組合為A1B2C2D2，即融化溫度40℃、冷凍保護(hù)劑為麥芽糖、冷凍保護(hù)劑用量3%、冷凍時(shí)間0.5h。在此最優(yōu)條件下，所得MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ的包封率為(53.5±4.9)%。

2.3 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ粒徑及其分布和Zeta電位

脂質(zhì)體的粒徑及其分布不僅會(huì)影響到載藥量、聚集性等體外特性，而且會(huì)影響到靜脈注射后在血液系統(tǒng)中的循環(huán)時(shí)間，以及由此引發(fā)的生物體內(nèi)分布等體內(nèi)特性，Zeta電位可以表征脂質(zhì)體的穩(wěn)定性[19]。因此需對(duì)最優(yōu)制備工藝下的MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ進(jìn)行粒徑與Zeta電位測(cè)定。

圖1 MCFAs脂質(zhì)體粒徑分布圖Fig.1 Diameter distribution of MCFA liposome prepared by both methods

由圖1可知，MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ平均粒徑為(87.1±1.6)nm，多分散指數(shù)(PDI)為0.207；MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ比Ⅰ粒徑大，為(110.1±2.3)nm，粒徑分布較不均勻，PDI為0.275。原因可能是因?yàn)槔鋬鰰r(shí)有少量冰晶形成，使脂質(zhì)體破裂，而融化過(guò)程脂質(zhì)體相互融合，導(dǎo)致粒徑增大[20]。

體系電位絕對(duì)值達(dá)30mV以上時(shí)，脂質(zhì)體間的靜電斥力較大，分散體系相對(duì)較穩(wěn)定。用DHPM法制備的MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ的Zeta電位為(－50.51±2.4)mV，MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ?yàn)?+92.76±6.8)mV，因此兩種制備方法制得的脂質(zhì)體均較穩(wěn)定。

2.4 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ形貌觀察

由圖2可知，DHPM法制備的脂質(zhì)體為球形或橢球形，粒徑小，分布較均勻；改良凍融法所制備脂質(zhì)體為球形，粒徑稍大，分布較均勻。

圖2 MCFAs脂質(zhì)體掃描電鏡圖Fig.2 TEM photograph of MCFA liposome prepared by both methods

2.5 薄膜分散-DHPM法與DHPM-凍融法精密度實(shí)驗(yàn)

精密度(precision)系指用該法測(cè)定同一勻質(zhì)樣品的一組測(cè)量值彼此符合程度，它們?cè)浇咏捅硎驹摲椒ㄔ骄堋D中Ⅰ(黑色)Ⅱ(白色)分別表示用薄膜分散-DHPM法和DHPM-凍融法制得的MCFAs脂質(zhì)體。

日內(nèi)精密度的測(cè)定結(jié)果見圖3。

圖3 MCFAs脂質(zhì)體日內(nèi)精密度Fig.3 Inner-day precision of MCFA liposome

由圖3可知，MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ的平均粒度為87.6nm，RSD為1.7%；包封率平均值為66.0%，RSD為1.2%，RSD值都小于5%，說(shuō)明薄膜分散-DHPM制備的MCFAs脂質(zhì)體日內(nèi)精密度很高。MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ的平均粒度為108.5nm，RSD為6.4%；包封率平均值為54.2%，RSD為1.8%，說(shuō)明用DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體日內(nèi)精密度較高。

日間精密度的測(cè)定結(jié)果如圖4所示。

由圖4可知，MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ的平均粒度為89.3nm，RSD為1.6%；包封率平均值為64.0%，RSD為2.1%，RSD值都小于5%，說(shuō)明薄膜分散-DHPM法制備的MCFAs脂質(zhì)體日間精密度很高。用MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ的平均粒度為107.7nm，RSD為4.0%；包封率平均值為53.1%，RSD為1.8%，說(shuō)明用DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體日間精密度較高。

圖4 MCFAs脂質(zhì)體日間精密度Fig.4 Inter-day precision of MCFA liposome

由精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，兩種方法都適合于MCFAs脂質(zhì)體的制備。

2.6 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ泄漏動(dòng)力學(xué)考察

脂質(zhì)體在貯藏過(guò)程中可能因?yàn)樽陨淼慕Y(jié)構(gòu)組成特點(diǎn)及外界條件的原因而發(fā)生一定的泄漏，因此可以表征脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。以包封率和粒徑為指標(biāo)，考察MCFAs脂質(zhì)體的泄漏動(dòng)力學(xué)。

由圖5可知，兩種方法所制備的MCFAs脂質(zhì)體在考察期內(nèi)粒徑變化均較小。對(duì)于DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體，在前20d內(nèi)滲漏率大大增加，20d后有所減緩；對(duì)于薄膜分散-DHPM法制備的脂質(zhì)體，在前15d內(nèi)滲漏率較小，15d后滲漏速率增大。脂質(zhì)體的滲漏特性與其結(jié)構(gòu)特征相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)中薄膜分散-DHPM法較DHPM-凍融法制備的脂質(zhì)體滲漏率低，原因可能是薄膜分散-DHPM法制備的脂質(zhì)體是單雙分子層結(jié)構(gòu)類型，而DHPM-凍融法制備的脂質(zhì)體屬于多分子層類型，后者在長(zhǎng)時(shí)間的貯藏過(guò)程中脂質(zhì)體膜發(fā)生融合導(dǎo)致滲漏加劇[21]。

圖5 兩種MCFAs脂質(zhì)體的泄漏動(dòng)力學(xué)Fig.5 Leakage dynamics of MCFA liposome prepared by both methods

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)得到薄膜分散-DHPM法制備MCFAs脂質(zhì)體的最優(yōu)條件為脂質(zhì)質(zhì)量濃度8g/100mL、磷脂與膽固醇質(zhì)量比5:1、處理壓力140MPa、處理次數(shù)4次。DHPM-凍融法最佳配方為冷凍時(shí)間0.5h、融化溫度40℃、冷凍保護(hù)劑為麥芽糖、冷凍保護(hù)劑用量3%。兩種方法最優(yōu)條件下可制備出包封率較高，粒徑較小、均一、球形或橢球形的MCFAs脂質(zhì)體。DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體平均粒徑為110.1nm，包封率為(53.5±4.9)%，與之相比，薄膜分散-DHPM法制備的MCFAs脂質(zhì)體平均粒徑較小，為87.1nm，包封率較高，為(66.5±3.1)%，滲漏率也較低，取得比凍融法更好的效果?？傮w而言，薄膜分散-DHPM法步驟較為簡(jiǎn)單，結(jié)果較好，因此可進(jìn)一步研究?jī)煞N脂質(zhì)體的長(zhǎng)期穩(wěn)定性等性質(zhì)，以更加全面綜合的根據(jù)需要選擇適宜的制備方法。兩種方法精密度均較高，表明薄膜分散-DHPM法和DHPM-凍融法均適合于MCFAs脂質(zhì)體的制備。

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Preparation and Characteristic of Medium-chain Fatty Acid Liposome

ZHENG Hui-juan，LIU Cheng-mei*，LIU Wei，LIU Wei-lin，YANG Shui-bing，YIN Ting-ting，TONG Gui-hong
(State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

R944.1

A

1002-6630(2010)22-0170-06

2010-07-08

國(guó)家“863”計(jì)劃專項(xiàng)(2008AA10Z330)；國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室目標(biāo)導(dǎo)向項(xiàng)目(SKLF-MB-200808)

鄭會(huì)娟(1987—)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭澄?含生物質(zhì))資源的開發(fā)與利用。E-mail：huijuanzheng87@yahoo.com.cn

*通信作者：劉成梅(1963—)，男，教授，博士，研究方向?yàn)槭澄?含生物質(zhì))資源的開發(fā)與利用。E-mail：chengmeiliu@yahoo.com.cn