• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    中鏈脂肪酸脂質(zhì)體的制備及其性質(zhì)測定

    2010-10-19 05:25:30鄭會娟劉成梅劉瑋琳楊水兵陰婷婷童桂鴻
    食品科學(xué) 2010年22期

    鄭會娟,劉成梅*,劉 偉,劉瑋琳,楊水兵,陰婷婷,童桂鴻

    (南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室,江西 南昌 330047)

    中鏈脂肪酸脂質(zhì)體的制備及其性質(zhì)測定

    鄭會娟,劉成梅*,劉 偉,劉瑋琳,楊水兵,陰婷婷,童桂鴻

    (南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室,江西 南昌 330047)

    以卵磷脂和膽固醇為膜材,中鏈脂肪酸(MCFAs)為油溶性模型材料,采用薄膜分散-動態(tài)高壓微射流法(薄膜分散-DHPM法)及動態(tài)高壓微射流-凍融法(DHPM-凍融法)制備MCFAs脂質(zhì)體,以包封率和平均粒徑為主要考察指標(biāo)對兩種方法進(jìn)行比較。結(jié)果表明:薄膜分散-DHPM法最佳制備條件為脂質(zhì)質(zhì)量濃度8g/100mL、磷脂與膽固醇質(zhì)量比5:1、處理壓力140MPa、處理次數(shù)4次;DHPM-凍融法最佳制備條件為冷凍時間0.5h、融化溫度40℃、冷凍保護(hù)劑為麥芽糖、冷凍保護(hù)劑用量3%。最佳條件下,薄膜分散-DHPM法制備的MCFAs脂質(zhì)體平均粒徑為87.1nm,分布均勻,包封率可達(dá)(66.5±3.1)%;DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體粒徑較大,平均粒徑為110.1nm,包封率較低,為(53.5±4.9)%。通過MCFAs脂質(zhì)體泄漏動力學(xué)和精密度(日間和日內(nèi))實驗考察其穩(wěn)定性。薄膜分散-DHPM法和DHPM-凍融法的穩(wěn)定性都較好,均適合于MCFAs脂質(zhì)體的制備。

    中鏈脂肪酸;動態(tài)高壓微射流;凍融法;包封率;粒徑

    Abstract:Film-dispersion-dynamic high-pressure micro-fluidizer (Film dispersion-DHPM) method and DHPM-freezethawing method were used to prepare medium-chain fatty acid (MCFA) liposome with lecithin and cholesterol as the membrane materials, and MCFA as the core material. Encapsulation efficiency (EE) and average particle size of MCFA liposome were chosen to evaluate both preparation methods. The optimal preparation conditions of MCFA liposome using Film dispersion-DHPM method were lipid content of 8% (m/V), lecithin-cholesterol ratio of 5:1 (m/m), treatment pressure of 140 MPa and repeated treatment number of 4. The optimal preparation conditions of MCFA liposome using DHPM-freeze-thawing method were freezing time of 0.5 h, maltose as the cryoprotectant content of 3% (m/V) and thawing temperature of 40 ℃. Under the optimal preparation conditions, the average diameter and EE of MCFA liposome prepared by Film-dispersion-DHPM method were 87.1 nm and (66.5±3.1)%; MCFA liposome prepared by DHPM-freeze-thawing method exhibited a relative higher average diameter and lower EE, which were 110.1 nm and (53.5±4.9)%, respectively. The stability of MCFA liposome was explored by leakage kinetics. Results exhibited that MCFA liposome prepared by Film dispersion-DHPM method and DHPM-freezethawing method had good stability. Therefore, both methods can be used to prepare MCFA liposome.

    Key words:MCFA;dynamic high pressure micro-fluidizer (DHPM);freeze-thawing;encapsulation efficiency (EE);particle size

    中鏈脂肪酸(medium chain fatty acids,MCFAs)主要指C8的辛酸和C10的癸酸。與LCFAs相比,MCFAs分子小,轉(zhuǎn)運不需要肉毒堿、膽鹽等,在小腸吸收后經(jīng)門靜脈進(jìn)入線粒體進(jìn)行氧化,代謝速度快、效率高,可作為肉毒堿缺乏的危重病人、胰液和膽鹽缺乏的早產(chǎn)兒以及胰腺損傷和脂肪吸收障礙病人的能量來源[1-2]。Koji等[3]研究顯示MCFAs對患有Ⅱ型糖尿病的動物模型及病人具有治療優(yōu)勢。但MCFAs水溶性差,性質(zhì)不穩(wěn)定,使其非腸道和口服給藥效果差,且其適口性差,若直接服用,會引起腸道不適。

    脂質(zhì)體是一種存在于水相介質(zhì)中、由脂質(zhì)雙分子層包裹了某些組分后自行組裝的膠體粒子[4]。脂質(zhì)體原料的無毒性以及類生物膜性使其具有良好的生物相容性。其起初用于生物膜的研究,20世紀(jì)70年代開始進(jìn)入幾種實際應(yīng)用,主要是在載藥方面[5]。過去20多年中,多種脂質(zhì)體藥物已進(jìn)入臨床使用或臨床實驗階段,如能夠有效降低乳腺癌死亡率的阿霉素聚乙二醇修飾脂質(zhì)體的使用[6-8]。本研究將MCFAs包裹于脂質(zhì)體中,可以克服MCFAs理化性質(zhì)和生理功能的缺點,提高其靶向性和生物利用性[9-10]。脂質(zhì)體常用的制備方法有薄膜法[11]、超聲法[12]、乙醇注入法[13]、逆相蒸發(fā)法[14]、高壓均質(zhì)法[15]、凍融法[16]等。動態(tài)高壓微射流技術(shù)(DHPM)其儀器核心原件為撞擊腔,它可將液體在極小空間進(jìn)行強烈的垂直撞擊,撞擊過程形成持續(xù)高速的剪切力,從而將液體粒徑有效減小到分布均勻的納米級[17]。Pick[16]研究顯示,凍融法可以提高脂質(zhì)體包封率,卻會使粒徑增大。

    而將DHPM法和傳統(tǒng)的薄膜法結(jié)合成為薄膜分散-DHPM法,以及和傳統(tǒng)的凍融法結(jié)合成為DHPM-凍融法(改良凍融法)來制備MCFAs脂質(zhì)體目前還未見報道。本研究采用薄膜分散-DHPM及DHPM-凍融法制備MCFAs脂質(zhì)體。通過粒徑及其分布、Zeta電位、形貌、精密度及泄漏動力學(xué)等物化性質(zhì)的考察,對兩種制備方法進(jìn)行比較,制備出包封率較高,粒徑較小的MCFAs納米脂質(zhì)體,從而解決MCFAs水溶性、穩(wěn)定性及口感差等問題,進(jìn)而提高其生物利用性。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    中鏈脂肪酸(辛酸與癸酸總含量>96%,美國進(jìn)口分裝);大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量≥50%) 北京美亞斯磷脂技術(shù)有限公司,膽固醇(純度>95%)、色譜級正已烷(純度>97%) 天津市大茂化學(xué)試劑廠;Triton X-100 汕頭市西隴化工廠有限公司;Tween-80 上海申宇醫(yī)藥化工有限公司;無水乙醇、甲醇、麥芽糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇、VE等(均為分析純),磷酸鹽緩沖液(PBS,pH7.4,0.05mol/L)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Microfluidizer Processor M-700微射流儀 美國Microfluidics公司;NCJJ-0.2/150nm超高壓均質(zhì)機(jī) 廊坊通用機(jī)械有限公司;6890N氣相色譜儀 美國Agilent公司;NICOMP380/ZLS納米粒度分析儀 國PSS粒度分析儀公司;H-600透射電鏡 日本日立公司;TGL-16C冷凍離心機(jī)、Forma-86c超低溫冰箱 美國Thermo Electron公司;T6新世紀(jì)型紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器公司;EyelaN-1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 日本東京理化器械株式會社。

    1.3 方法

    1.3.1 薄膜分散-DHPM法制備MCFAs脂質(zhì)體

    將各類脂材料(磷脂、膽固醇、Tween-80及VE)及MCFAs按一定比例加入無水乙醇中,攪拌使充分溶解,在一定溫度水浴真空條件下,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇,待形成均一薄膜后加入一定量pH7.4,0.05mol/L PBS,常壓旋轉(zhuǎn)45min進(jìn)行洗膜,形成白色均勻的脂質(zhì)體溶液。將制備的脂質(zhì)體溶液用DHPM在不同壓力(60、80、100、120、140、160、180MPa)條件下處理不同次數(shù)(1、2、3、4、5、6、7次),即得到MCFAs脂質(zhì)體溶液,稱為MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ。

    1.3.2 DHPM-凍融法制備MCFAs脂質(zhì)體

    將各類脂材料(磷脂、膽固醇、Tween-80及VE)及MCFAs按一定比例加入無水乙醇中,攪拌使充分溶解,在一定溫度水浴真空條件下,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇,待形成均一薄膜后加入不同濃度的冷凍保護(hù)劑(甘露醇、麥芽糖、海藻糖、蔗糖)一定量pH7.4,0.05mol/L的PBS,常壓旋轉(zhuǎn)45min進(jìn)行洗膜,形成白色均勻的脂質(zhì)體溶液。然后同樣經(jīng)動態(tài)高壓處理制得的脂質(zhì)體于-80℃冰箱冷凍一定時間后,在一定溫度(4、25、40、60℃)條件下充分振蕩,使之完全融化后又重新置于-80℃冷凍。如此反復(fù)冷凍-融解數(shù)次,即得到MCFAs脂質(zhì)體溶液,稱為MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ。

    1.3.3 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ包封率的測定

    氣相色譜操作條件:氣化室溫度:280℃;柱溫:程序升溫,150℃保持5min,再以6℃/min升溫到180℃;FID檢測器溫度:280℃;H2流速450mL/min,空氣40mL/min,載氣為高純N2(純度99.999%),流速20mL/min,柱內(nèi)流速1.4mL/min;色譜柱:HP-innowax Polyethylene Glycol(30m×0.32mm×0.5μm)。分別進(jìn)樣1μL,記錄各個出峰面積和出峰時間。

    標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:將辛酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成質(zhì)量濃度為4.8、2.4、1.2、0.6、0.3mg/mL,將癸酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成質(zhì)量濃度為3.2、1.6、0.8、0.4、0.2mg/mL,按上述色譜條件進(jìn)行測定。根據(jù)結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及趨勢線方程。得到辛酸甲酯與癸酸甲酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為:y=139.34x-5.7696,R2=0.9997;y=141.11x+3.8366,R2=0.9999。

    包封率/%=n/m×100

    式中:m為脂質(zhì)體中總中鏈脂肪酸的質(zhì)量/mg;n為包封的中鏈脂肪酸的質(zhì)量/mg。

    MCFAs脂質(zhì)體包封率的測定:先用離心除去游離MCFAs后,通過氣相色譜檢測所包裹的MCFAs,具體操作如下:將MCFAs脂質(zhì)體于8000r/min離心30min,用正已烷萃取除去游離MCFAs。取除去了游離MCFAs的脂質(zhì)體,加入TritonX-100的甲醇溶液及硫酸鎂進(jìn)行超聲破乳,然后加入正己烷、水充分混勻,分液取上層液。按上述色譜條件進(jìn)行測定,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到MCFAs脂質(zhì)體的包封率。

    1.3.4 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ粒徑及Zeta電位的測定

    用NICOMP 380/ZLS納米粒度分析儀測定。將待測脂質(zhì)體懸浮液稀釋至一定濃度,測定平均粒徑、多分散指數(shù)(PDI)和Zeta電位,每個樣品平行測定3次。

    1.3.5 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ形貌觀察

    采用負(fù)染色法進(jìn)行透射電鏡觀察:將脂質(zhì)體用蒸餾水按1:10(V/V)稀釋,取稀釋后的樣品與質(zhì)量濃度為2g/100mL的磷鎢酸以1:1(V/V)混合放置3min,然后將處理過的銅網(wǎng)浸入上述液體,多余的液體用濾紙吸干,放置5min,待其自然干時,再置于工作電壓為75kV的透射電鏡下觀察脂質(zhì)體形態(tài)[18]。

    1.3.6 薄膜分散-DHPM法與DHPM-凍融法精密度考察

    包括日內(nèi)精密度與日間精密度實驗,測定粒徑和包封率,以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)作為評價指標(biāo)。

    日內(nèi)精密度:考察周期為1 d,分別取兩種脂質(zhì)體,在0、2、4、6、8h取樣進(jìn)行包封率和粒徑的測定,求得平均值和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。

    日間精密度:考察周期為3 d,分別取兩種脂質(zhì)體,于每天同一時間取樣進(jìn)行一次包封率和粒徑的測定,計算平均值和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。

    1.3.7 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ泄漏動力學(xué)考察

    將兩種制備方法得到的MCFAs脂質(zhì)體于4℃貯藏1個月,每隔5d取樣,按照上述方法測定此時粒徑及包封率,并計算滲漏率:

    式中:EE0為起始時MCFAs脂質(zhì)體的包封率/%;EEi為MCFAs脂質(zhì)體貯藏過程中的包封率/%。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 薄膜分散-DHPM法工藝條件

    首先進(jìn)行各單因素試驗,結(jié)果經(jīng)極差分析,得出MCFAs質(zhì)量濃度(15mg/mL)、吐溫80與磷脂質(zhì)量比(3:10)、離子強度(0)、PBS濃度(0.05mol/L)及pH(7.4)、制備溫度(40℃)等因素對結(jié)果影響較小,篩選出對結(jié)果影響較大的條件:脂質(zhì)質(zhì)量濃度、磷脂膽固醇質(zhì)量比、處理壓力、處理次數(shù),進(jìn)行正交試驗設(shè)計。正交設(shè)計軟件生成的四因素三水平的正交表及結(jié)果見表1。

    表1 薄膜分散-DHPM法正交試驗設(shè)計Table 1 Design of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using Film-dispersion-DHPM method

    表2 薄膜分散-DHPM法正交試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Results of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using Film-dispersion-DHPM method

    表3 薄膜分散-DHPM法方差分析表Table 3 Variance analysis of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using Film-dispersion-DHPM method

    由表2、3可知,對包封率影響強弱的因素由強到弱依次是:D(處理壓力)>A(脂質(zhì)質(zhì)量濃度)>B(磷脂膽固醇質(zhì)量比)>C(處理次數(shù)),得出制備MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ最佳配方為A2B1C2D3,即脂質(zhì)質(zhì)量濃度8g/100mL、磷脂與膽固醇質(zhì)量比5:1、處理壓力140MPa、處理次數(shù)4次。在此條件下,所得MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ包封率為(66.5±3.1)%。

    由上述結(jié)果及前期單因素結(jié)果可知,隨著DHPM處理壓力的增大,包封率表現(xiàn)出先增大后減小的現(xiàn)象。原因可能是反應(yīng)腔內(nèi)強烈的高速剪切力使得多室脂質(zhì)體分裂成單室脂質(zhì)體,導(dǎo)致粒徑變小,從而增加比表面積,而油溶性MCFAs主要是包裹或穿插于磷脂雙分子層內(nèi),比表面積的增加使MCFAs的包裹量增加;但處理次數(shù)過多或壓力過高,脂質(zhì)體被機(jī)械力破壞,磷脂雙分子層破裂發(fā)生團(tuán)聚致使粒徑開始增加。

    2.2 DHPM-凍融法工藝條件

    首先進(jìn)行各單因素試驗,結(jié)果經(jīng)極差分析,得出冷凍溫度(-80℃)、凍融次數(shù)(3次)等因素對結(jié)果影響較小,篩選出對結(jié)果影響較大的條件:冷凍時間、融化溫度、冷凍保護(hù)劑種類及其用量,進(jìn)行正交試驗設(shè)計。正交設(shè)計軟件生成的四因素三水平正交表及結(jié)果見表4。

    表4 DHPM-凍融法正交試驗因素和水平Table 4 Factors and levels of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using DHPM-freezethawing method

    表5 DHPM-凍融法正交試驗設(shè)計及結(jié)果Table 5 Design and results of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using DHPM-freezethawing method

    表6 DHPM-凍融法方差分析表Table 6 Variance analysis of orthogonal experiments for optimizing the preparation processing of MCFA liposome using DHPM-freeze-thawing method

    由表5、6結(jié)果可知,對包封率影響強弱的因素由強到弱依次是:B(融化溫度)>C(冷凍保護(hù)劑種類)>D(冷凍保護(hù)劑用量)>A(冷凍時間)??梢娙诨瘻囟仁菍Π饴视绊懽畲蟮囊蛩亍R虼说玫街苽銶CFAs脂質(zhì)體Ⅱ最佳配最佳組合為A1B2C2D2,即融化溫度40℃、冷凍保護(hù)劑為麥芽糖、冷凍保護(hù)劑用量3%、冷凍時間0.5h。在此最優(yōu)條件下,所得MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ的包封率為(53.5±4.9)%。

    2.3 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ粒徑及其分布和Zeta電位

    脂質(zhì)體的粒徑及其分布不僅會影響到載藥量、聚集性等體外特性,而且會影響到靜脈注射后在血液系統(tǒng)中的循環(huán)時間,以及由此引發(fā)的生物體內(nèi)分布等體內(nèi)特性,Zeta電位可以表征脂質(zhì)體的穩(wěn)定性[19]。因此需對最優(yōu)制備工藝下的MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ進(jìn)行粒徑與Zeta電位測定。

    圖1 MCFAs脂質(zhì)體粒徑分布圖Fig.1 Diameter distribution of MCFA liposome prepared by both methods

    由圖1可知,MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ平均粒徑為(87.1±1.6)nm,多分散指數(shù)(PDI)為0.207;MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ比Ⅰ粒徑大,為(110.1±2.3)nm,粒徑分布較不均勻,PDI為0.275。原因可能是因為冷凍時有少量冰晶形成,使脂質(zhì)體破裂,而融化過程脂質(zhì)體相互融合,導(dǎo)致粒徑增大[20]。

    體系電位絕對值達(dá)30mV以上時,脂質(zhì)體間的靜電斥力較大,分散體系相對較穩(wěn)定。用DHPM法制備的MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ的Zeta電位為(-50.51±2.4)mV,MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ為(+92.76±6.8)mV,因此兩種制備方法制得的脂質(zhì)體均較穩(wěn)定。

    2.4 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ形貌觀察

    由圖2可知,DHPM法制備的脂質(zhì)體為球形或橢球形,粒徑小,分布較均勻;改良凍融法所制備脂質(zhì)體為球形,粒徑稍大,分布較均勻。

    圖2 MCFAs脂質(zhì)體掃描電鏡圖Fig.2 TEM photograph of MCFA liposome prepared by both methods

    2.5 薄膜分散-DHPM法與DHPM-凍融法精密度實驗

    精密度(precision)系指用該法測定同一勻質(zhì)樣品的一組測量值彼此符合程度,它們越接近就表示該方法越精密。圖中Ⅰ(黑色)Ⅱ(白色)分別表示用薄膜分散-DHPM法和DHPM-凍融法制得的MCFAs脂質(zhì)體。

    日內(nèi)精密度的測定結(jié)果見圖3。

    圖3 MCFAs脂質(zhì)體日內(nèi)精密度Fig.3 Inner-day precision of MCFA liposome

    由圖3可知,MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ的平均粒度為87.6nm,RSD為1.7%;包封率平均值為66.0%,RSD為1.2%,RSD值都小于5%,說明薄膜分散-DHPM制備的MCFAs脂質(zhì)體日內(nèi)精密度很高。MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ的平均粒度為108.5nm,RSD為6.4%;包封率平均值為54.2%,RSD為1.8%,說明用DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體日內(nèi)精密度較高。

    日間精密度的測定結(jié)果如圖4所示。

    由圖4可知,MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ的平均粒度為89.3nm,RSD為1.6%;包封率平均值為64.0%,RSD為2.1%,RSD值都小于5%,說明薄膜分散-DHPM法制備的MCFAs脂質(zhì)體日間精密度很高。用MCFAs脂質(zhì)體Ⅱ的平均粒度為107.7nm,RSD為4.0%;包封率平均值為53.1%,RSD為1.8%,說明用DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體日間精密度較高。

    圖4 MCFAs脂質(zhì)體日間精密度Fig.4 Inter-day precision of MCFA liposome

    由精密度實驗結(jié)果可知,兩種方法都適合于MCFAs脂質(zhì)體的制備。

    2.6 MCFAs脂質(zhì)體Ⅰ與Ⅱ泄漏動力學(xué)考察

    脂質(zhì)體在貯藏過程中可能因為自身的結(jié)構(gòu)組成特點及外界條件的原因而發(fā)生一定的泄漏,因此可以表征脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。以包封率和粒徑為指標(biāo),考察MCFAs脂質(zhì)體的泄漏動力學(xué)。

    由圖5可知,兩種方法所制備的MCFAs脂質(zhì)體在考察期內(nèi)粒徑變化均較小。對于DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體,在前20d內(nèi)滲漏率大大增加,20d后有所減緩;對于薄膜分散-DHPM法制備的脂質(zhì)體,在前15d內(nèi)滲漏率較小,15d后滲漏速率增大。脂質(zhì)體的滲漏特性與其結(jié)構(gòu)特征相關(guān),本實驗中薄膜分散-DHPM法較DHPM-凍融法制備的脂質(zhì)體滲漏率低,原因可能是薄膜分散-DHPM法制備的脂質(zhì)體是單雙分子層結(jié)構(gòu)類型,而DHPM-凍融法制備的脂質(zhì)體屬于多分子層類型,后者在長時間的貯藏過程中脂質(zhì)體膜發(fā)生融合導(dǎo)致滲漏加劇[21]。

    圖5 兩種MCFAs脂質(zhì)體的泄漏動力學(xué)Fig.5 Leakage dynamics of MCFA liposome prepared by both methods

    3 結(jié) 論

    本實驗得到薄膜分散-DHPM法制備MCFAs脂質(zhì)體的最優(yōu)條件為脂質(zhì)質(zhì)量濃度8g/100mL、磷脂與膽固醇質(zhì)量比5:1、處理壓力140MPa、處理次數(shù)4次。DHPM-凍融法最佳配方為冷凍時間0.5h、融化溫度40℃、冷凍保護(hù)劑為麥芽糖、冷凍保護(hù)劑用量3%。兩種方法最優(yōu)條件下可制備出包封率較高,粒徑較小、均一、球形或橢球形的MCFAs脂質(zhì)體。DHPM-凍融法制備的MCFAs脂質(zhì)體平均粒徑為110.1nm,包封率為(53.5±4.9)%,與之相比,薄膜分散-DHPM法制備的MCFAs脂質(zhì)體平均粒徑較小,為87.1nm,包封率較高,為(66.5±3.1)%,滲漏率也較低,取得比凍融法更好的效果??傮w而言,薄膜分散-DHPM法步驟較為簡單,結(jié)果較好,因此可進(jìn)一步研究兩種脂質(zhì)體的長期穩(wěn)定性等性質(zhì),以更加全面綜合的根據(jù)需要選擇適宜的制備方法。兩種方法精密度均較高,表明薄膜分散-DHPM法和DHPM-凍融法均適合于MCFAs脂質(zhì)體的制備。

    [1] JONES P M, BUTT Y M, BENNETT M J. Effects of odd-numbered medium-chain fatty acids on the accumulation of long-chain 3-hydroxyfatty acids in long-chainL-3-hydroxyacyl CoA dehydrogenase and mitochondrial trifunctional protein deficient skin fibroblasts[J]. Mol Genet Metab, 2004, 81(2):96-99.

    [2] TSUJI H, KASAI M, TAKEUCHI H, et al. Dietary medium-chain triacylglycerols suppress accumulation of body fat in a double-blind,controlled trial in healthy men and women[J]. J Nutr, 2001, 131(11):2853-2859.

    [3] KOJI N, TERUYOSHI Y. Medium-chain fatty acids:Functional lipids for the prevention and treatment of the metabolic syndrome[J]. Pharmacological Research, 2010, 61(3):208-212.

    [4] LASIC D D, PHPAHADJOPOULOS D. Liposomes Revisited[J].Science, 1995, 267(3):1275-1276.

    [5] BANGHAM A D. Liposome letters[M]. London:Academic Press, 1983:261-268.

    [6] TORCHILIN V P. Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers[J]. Nat Rev Drug Discov, 2005, 4(2):145-160.

    [7] O’SHAUGHNESSY J A. Pegylated liposomal doxorubicin in the treatment of breast cancer[J]. Clin Breast Cancer, 2003, 4(5):318-328.

    [8] EMILIO A, MANUEL R B, MIREIA M, et al. Maintenance treatment with Pegylated liposomal doxorubicin versus observation following induction chemotherapy for metastatic breast cancer:GEICAM 2001-01 study[J]. Breast Cancer Res Treat, 2010, 122(1):169-176.

    [9] LIU Chengmei, YANG Shuibing, LIU Wei, et al. Preparation and characterization of medium-chain fatty-acid liposomes by lyophilization[J]. J Liposome Res, 2010, 20(3):183-190.

    [10] 劉成梅, 王瑞蓮, 劉偉, 等. 中鏈脂肪酸脂質(zhì)體的制備及其特性評價[J]. 食品科學(xué), 2007, 28(10):143-146.

    [11] PUPO E, PADRON A, SANTANA E, et al. Preparation of plasmid DNA-containing liposomes using a high-pressure homogenization-extrusion technique[J]. J Control Release, 2005, 104(2):379-396.

    [12] LIU Nan, PARK H J. Chitosan-coated nanoliposome as vitamin E carrier[J]. J Microencapsul, 2009, 26(3):235-242.

    [13] 吳亞妮, 徐云龍, 孫文曉. 木瓜蛋白酶納米脂質(zhì)體的制備及其粒度控制[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報:農(nóng)業(yè)科學(xué)版, 2007, 25(2):1052-1091.

    [14] ZHENG Xiaoli, LU Jianping, ZHENG Lideng, et al. Preparation and characterization of magnetic cationic liposome in gene delivery[J]. Int J Pharmaceut, 2009, 366(1/2):211-217.

    [15] LI Yang, YANG Wenzhan, BI Dianzhou, et al. A novel method to prepare highly encapsulated interferon-α-2b containing liposomes for intramuscular sustained release[J]. Eur J Pharm Biopharm, 2006, 64(1):9-15.

    [16] PICK U. Liposomes with a large trapping capacity prepared by freezing and thawing of sonicated phospholipid mixtures[J]. Arch Biochem Biophys, 1981, 212(1):186-194.

    [17] 劉成梅, 劉偉, 高蔭榆, 等. 微射流均質(zhì)機(jī)的流體動力學(xué)行為分析[J].食品科學(xué), 2004, 25(4):58-62.

    [18] HATZIANTONIOU S, NEZIS I P, MARGARITIS L H, et al.Visualisation of liposomes prepared from skin and stratum corneum lipids by transmission electron microscopy[J]. Micron, 2007, 38(8):777-781.

    [19] BRANDL M, DRECHSLER M, BACHMANN D, et al. Preparation and characterization of semi-solid phospholipid dispersions and dilutions thereof[J]. Int J Pharmaceut, 1998, 170(2):187-199.

    [20] 儲茂泉, 古宏晨, 劉國杰. 丹參酮脂質(zhì)體的制備及其穩(wěn)定性[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)志, 2001, 32(9):400-404.

    [21] 范明輝. 紅景天苷納米脂質(zhì)體的研制[D]. 無錫:江南大學(xué), 2008.

    Preparation and Characteristic of Medium-chain Fatty Acid Liposome

    ZHENG Hui-juan,LIU Cheng-mei*,LIU Wei,LIU Wei-lin,YANG Shui-bing,YIN Ting-ting,TONG Gui-hong
    (State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

    R944.1

    A

    1002-6630(2010)22-0170-06

    2010-07-08

    國家“863”計劃專項(2008AA10Z330);國家重點實驗室目標(biāo)導(dǎo)向項目(SKLF-MB-200808)

    鄭會娟(1987—),女,碩士研究生,研究方向為食物(含生物質(zhì))資源的開發(fā)與利用。E-mail:huijuanzheng87@yahoo.com.cn

    *通信作者:劉成梅(1963—),男,教授,博士,研究方向為食物(含生物質(zhì))資源的開發(fā)與利用。E-mail:chengmeiliu@yahoo.com.cn

    成人亚洲精品一区在线观看| 大陆偷拍与自拍| 日韩欧美国产一区二区入口| 精品福利观看| 国精品久久久久久国模美| 成人三级做爰电影| 成人国语在线视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 午夜福利免费观看在线| 国产又色又爽无遮挡免| 三上悠亚av全集在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久久久国产欧美日韩av| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲国产欧美在线一区| 国产成人免费观看mmmm| 十分钟在线观看高清视频www| 久久国产精品大桥未久av| 美女中出高潮动态图| 国产亚洲一区二区精品| 久久 成人 亚洲| 中文字幕高清在线视频| 一进一出抽搐动态| 十八禁人妻一区二区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲国产看品久久| 亚洲精品一区蜜桃| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲精品第二区| 不卡av一区二区三区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产成人免费观看mmmm| 后天国语完整版免费观看| 国产有黄有色有爽视频| 久久亚洲精品不卡| 激情视频va一区二区三区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 多毛熟女@视频| 一区二区av电影网| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一个人免费在线观看的高清视频 | 亚洲欧美精品综合一区二区三区| svipshipincom国产片| 亚洲熟女精品中文字幕| av有码第一页| 少妇被粗大的猛进出69影院| 飞空精品影院首页| 老司机在亚洲福利影院| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 日韩大码丰满熟妇| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产不卡av网站在线观看| videos熟女内射| 18禁观看日本| 麻豆乱淫一区二区| av不卡在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久久精品94久久精品| 夜夜夜夜夜久久久久| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 色播在线永久视频| 日本av手机在线免费观看| 2018国产大陆天天弄谢| 成人国产av品久久久| 欧美xxⅹ黑人| 性色av乱码一区二区三区2| 国产成人精品无人区| tocl精华| 少妇人妻久久综合中文| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 少妇人妻久久综合中文| 后天国语完整版免费观看| 久久久久国内视频| 一级片免费观看大全| 久久性视频一级片| 超色免费av| 免费人妻精品一区二区三区视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 狂野欧美激情性xxxx| 精品一区在线观看国产| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品欧美一区二区三区在线| 在线av久久热| √禁漫天堂资源中文www| 欧美久久黑人一区二区| 午夜91福利影院| 丝袜脚勾引网站| 蜜桃国产av成人99| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品一二三区在线看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产不卡av网站在线观看| 久久中文看片网| 十八禁网站免费在线| 日本精品一区二区三区蜜桃| 欧美变态另类bdsm刘玥| 男女无遮挡免费网站观看| 国产野战对白在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 好男人电影高清在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 无遮挡黄片免费观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久久久久久久久久大奶| 美女主播在线视频| 多毛熟女@视频| 色播在线永久视频| 国产亚洲av高清不卡| 精品人妻1区二区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 桃花免费在线播放| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 最近中文字幕2019免费版| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| svipshipincom国产片| 无限看片的www在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲国产精品一区三区| 99九九在线精品视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产亚洲av高清不卡| 午夜精品国产一区二区电影| 免费少妇av软件| 国产精品久久久人人做人人爽| 一二三四社区在线视频社区8| 精品免费久久久久久久清纯 | 婷婷丁香在线五月| a 毛片基地| 午夜福利视频在线观看免费| 国产精品二区激情视频| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲精品自拍成人| 一区二区av电影网| 国产高清国产精品国产三级| 在线观看舔阴道视频| 亚洲五月色婷婷综合| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产免费av片在线观看野外av| 啦啦啦 在线观看视频| 久久久欧美国产精品| 午夜福利一区二区在线看| 在线观看免费视频网站a站| 精品亚洲成国产av| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲久久久国产精品| 久久久久精品人妻al黑| 天天操日日干夜夜撸| 日本av免费视频播放| 99久久精品国产亚洲精品| 久久久久精品国产欧美久久久 | 99久久综合免费| av在线播放精品| 91精品国产国语对白视频| 在线观看舔阴道视频| av免费在线观看网站| a级毛片黄视频| 热re99久久国产66热| 亚洲成人手机| 9191精品国产免费久久| 91精品伊人久久大香线蕉| 中文字幕高清在线视频| 国产精品免费视频内射| 成人av一区二区三区在线看 | 国产精品av久久久久免费| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久久久久久久久久久大奶| 在线观看免费日韩欧美大片| 99香蕉大伊视频| 一本色道久久久久久精品综合| www.熟女人妻精品国产| 久久久久久久精品精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久国产精品影院| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲精品在线美女| av在线app专区| 国产淫语在线视频| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 69av精品久久久久久 | 岛国毛片在线播放| av有码第一页| 色精品久久人妻99蜜桃| 日韩视频一区二区在线观看| 日韩欧美免费精品| 亚洲五月婷婷丁香| 女警被强在线播放| 爱豆传媒免费全集在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 一本综合久久免费| 老司机影院成人| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久狼人影院| 国产精品.久久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 18禁国产床啪视频网站| 美女午夜性视频免费| 日韩一区二区三区影片| 超碰97精品在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 乱人伦中国视频| 免费在线观看完整版高清| 久久中文字幕一级| 免费观看av网站的网址| 他把我摸到了高潮在线观看 | 欧美日韩av久久| 乱人伦中国视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产区一区二久久| 91九色精品人成在线观看| www.自偷自拍.com| 成年人免费黄色播放视频| 久久久国产成人免费| 日韩大片免费观看网站| 欧美一级毛片孕妇| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 97人妻天天添夜夜摸| 老汉色∧v一级毛片| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 视频区欧美日本亚洲| 一本综合久久免费| 日韩中文字幕欧美一区二区| videos熟女内射| 亚洲国产日韩一区二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 一进一出抽搐动态| www.熟女人妻精品国产| 在线 av 中文字幕| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 涩涩av久久男人的天堂| 黄片小视频在线播放| 老司机影院毛片| 这个男人来自地球电影免费观看| 日本wwww免费看| 久久综合国产亚洲精品| 老司机深夜福利视频在线观看 | 人成视频在线观看免费观看| 日本vs欧美在线观看视频| 一级毛片精品| 天堂俺去俺来也www色官网| 精品一品国产午夜福利视频| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲伊人久久精品综合| 美女福利国产在线| 悠悠久久av| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 少妇精品久久久久久久| 捣出白浆h1v1| 大型av网站在线播放| 视频区图区小说| 久久午夜综合久久蜜桃| 韩国高清视频一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 国产精品二区激情视频| 亚洲精华国产精华精| 日本wwww免费看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 曰老女人黄片| 精品亚洲成国产av| 亚洲人成电影观看| 午夜激情久久久久久久| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲中文字幕日韩| 日本欧美视频一区| 欧美日本中文国产一区发布| 青草久久国产| 精品国内亚洲2022精品成人 | 超碰97精品在线观看| 久久狼人影院| 国产av精品麻豆| 久久香蕉激情| 久久午夜综合久久蜜桃| 韩国高清视频一区二区三区| 18禁国产床啪视频网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| 成人国语在线视频| 精品高清国产在线一区| 黄色 视频免费看| 国产欧美日韩一区二区三 | bbb黄色大片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 精品福利观看| 国产又爽黄色视频| 99国产综合亚洲精品| 波多野结衣一区麻豆| 天堂8中文在线网| 国产精品1区2区在线观看. | 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 97人妻天天添夜夜摸| 午夜影院在线不卡| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 男人操女人黄网站| 男女高潮啪啪啪动态图| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 91九色精品人成在线观看| 999精品在线视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲欧美精品自产自拍| 欧美日韩一级在线毛片| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产亚洲精品第一综合不卡| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美精品一区二区大全| 首页视频小说图片口味搜索| 啦啦啦视频在线资源免费观看| videos熟女内射| 成人亚洲精品一区在线观看| 69精品国产乱码久久久| 久久精品国产综合久久久| 无遮挡黄片免费观看| 91av网站免费观看| 中文字幕色久视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 免费少妇av软件| 精品福利永久在线观看| av一本久久久久| 国产精品免费视频内射| 两个人免费观看高清视频| 超色免费av| 亚洲国产精品一区三区| 免费在线观看影片大全网站| 十八禁网站网址无遮挡| 国产麻豆69| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲第一青青草原| 在线观看免费午夜福利视频| 丁香六月欧美| 国产日韩欧美视频二区| 国产av一区二区精品久久| 亚洲黑人精品在线| 成人影院久久| 国产高清视频在线播放一区 | 亚洲欧美一区二区三区久久| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 在线观看www视频免费| 91成年电影在线观看| 热99re8久久精品国产| 又黄又粗又硬又大视频| 久久狼人影院| 在线观看免费日韩欧美大片| 精品高清国产在线一区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 男女边摸边吃奶| 亚洲精品av麻豆狂野| 丁香六月天网| 青草久久国产| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 深夜精品福利| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲国产欧美网| 久热这里只有精品99| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 老司机影院毛片| 欧美国产精品一级二级三级| 不卡一级毛片| 日韩欧美免费精品| 欧美精品av麻豆av| 欧美 日韩 精品 国产| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美国产精品一级二级三级| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 一级毛片电影观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 最新的欧美精品一区二区| 色播在线永久视频| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲国产av影院在线观看| 九色亚洲精品在线播放| videosex国产| 制服人妻中文乱码| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| a在线观看视频网站| 91九色精品人成在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 母亲3免费完整高清在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲av国产av综合av卡| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲国产看品久久| 精品熟女少妇八av免费久了| 99国产精品一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三 | 精品久久蜜臀av无| 性色av一级| 国产在线免费精品| 国产成人免费观看mmmm| 一边摸一边做爽爽视频免费| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲天堂av无毛| 老司机亚洲免费影院| 国产精品久久久人人做人人爽| 777米奇影视久久| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲人成电影观看| 在线观看免费高清a一片| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久久精品免费免费高清| 国产欧美日韩一区二区精品| 一区二区三区乱码不卡18| 久久久久精品人妻al黑| 欧美一级毛片孕妇| 国产视频一区二区在线看| 天天添夜夜摸| 黄色怎么调成土黄色| 免费少妇av软件| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99| av天堂久久9| 精品亚洲成国产av| 精品国产乱码久久久久久小说| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 精品国内亚洲2022精品成人 | 一本一本久久a久久精品综合妖精| 桃花免费在线播放| 麻豆乱淫一区二区| 91av网站免费观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 一级a爱视频在线免费观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美精品av麻豆av| 波多野结衣av一区二区av| 久久久国产成人免费| 一级a爱视频在线免费观看| 91av网站免费观看| 一区二区三区四区激情视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产男人的电影天堂91| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 制服诱惑二区| 一级黄色大片毛片| 在线看a的网站| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | www.精华液| 男女午夜视频在线观看| 久久九九热精品免费| 国产精品久久久久成人av| 十八禁网站免费在线| 黑人猛操日本美女一级片| 日本五十路高清| 中国美女看黄片| 中文字幕av电影在线播放| 精品视频人人做人人爽| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产日韩欧美视频二区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲熟女精品中文字幕| 五月天丁香电影| 俄罗斯特黄特色一大片| xxxhd国产人妻xxx| 99re6热这里在线精品视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 97在线人人人人妻| 最黄视频免费看| 亚洲精品国产区一区二| 最新的欧美精品一区二区| 岛国在线观看网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲成人国产一区在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品人妻1区二区| 69精品国产乱码久久久| 热re99久久精品国产66热6| 午夜福利在线观看吧| 热99国产精品久久久久久7| 最近中文字幕2019免费版| 精品国内亚洲2022精品成人 | 免费在线观看黄色视频的| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 黄色毛片三级朝国网站| 十八禁网站网址无遮挡| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 18禁国产床啪视频网站| 欧美国产精品一级二级三级| 国产日韩欧美在线精品| 桃花免费在线播放| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲av男天堂| 亚洲第一av免费看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 91成人精品电影| 少妇人妻久久综合中文| 久久久国产欧美日韩av| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 嫁个100分男人电影在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 中文字幕高清在线视频| 女人久久www免费人成看片| 国产99久久九九免费精品| 国产av一区二区精品久久| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲精品一二三| 久久久久久久久免费视频了| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品 欧美亚洲| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲欧洲日产国产| 久久狼人影院| 午夜成年电影在线免费观看| 日韩电影二区| 多毛熟女@视频| 18禁国产床啪视频网站| 91老司机精品| 女人久久www免费人成看片| 中文字幕av电影在线播放| 国产精品九九99| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产成人免费无遮挡视频| 大香蕉久久网| 亚洲成人手机| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲欧美清纯卡通| 免费观看人在逋| www日本在线高清视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 色婷婷av一区二区三区视频| av天堂在线播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 99国产极品粉嫩在线观看| 日本wwww免费看| 午夜免费成人在线视频| 性少妇av在线| 丝袜喷水一区| 少妇的丰满在线观看| 亚洲国产看品久久| 国产精品 欧美亚洲| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲情色 制服丝袜| 国产欧美亚洲国产| 免费在线观看日本一区| 女人久久www免费人成看片| 99国产精品99久久久久| 亚洲中文av在线| 9191精品国产免费久久| 亚洲九九香蕉| 老司机影院成人| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 婷婷成人精品国产| 两性夫妻黄色片| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲伊人色综图| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲精品国产一区二区精华液| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品二区激情视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产精品.久久久| 91九色精品人成在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久精品亚洲av国产电影网| 久久久久久人人人人人| 国产97色在线日韩免费| 12—13女人毛片做爰片一| 人人妻人人澡人人看| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲综合色网址| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 91精品国产国语对白视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲欧美一区二区三区久久| 性色av乱码一区二区三区2| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲精华国产精华精| 一区二区三区激情视频| 久久久国产成人免费| 嫩草影视91久久| 成人国产av品久久久|