中國(guó)明對(duì)蝦caspase基因的克隆與表達(dá)分析

宋光年, 金松君, 張繼泉, 相建海

（1. 中國(guó)科學(xué)院 海洋研究所, 山東 青島266071; 2. 中國(guó)科學(xué)院 研究生院, 北京 100049）

中國(guó)明對(duì)蝦caspase基因的克隆與表達(dá)分析

宋光年1,2, 金松君1, 張繼泉1, 相建海1

（1. 中國(guó)科學(xué)院 海洋研究所, 山東 青島266071; 2. 中國(guó)科學(xué)院 研究生院, 北京 100049）

利用細(xì)胞凋亡來(lái)清除多細(xì)胞器官受損傷或有害的細(xì)胞, 為動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中保持機(jī)體平衡起到關(guān)鍵作用。為了研究細(xì)胞凋亡在甲殼類動(dòng)物應(yīng)對(duì)病毒感染后所起到的作用, 作者利用同源克隆技術(shù)獲得了中國(guó)明對(duì)蝦（Fenneropenaeus chinensis） caspase基因（FcCasp）的cDNA序列, 并分析了該基因在對(duì)蝦受到白斑綜合癥病毒（white spot syndrome virus,簡(jiǎn)稱WSSV）刺激后的表達(dá)變化規(guī)律。結(jié)果表明, 該基因的cDNA含有954個(gè)核苷酸, 編碼317個(gè)氨基酸, 具有caspase家族典型的QACRG五肽蛋白酶活性位點(diǎn)（190-194氨基酸）。對(duì)注射了WSSV的中國(guó)明對(duì)蝦FcCasp的表達(dá)進(jìn)行分析, 在5個(gè)時(shí)間點(diǎn)取其肝胰臟樣本, 經(jīng)real-time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn), WSSV刺激3 h后, 對(duì)蝦肝胰臟中FcCasp的表達(dá)呈現(xiàn)顯著性上調(diào),說(shuō)明FcCasp的表達(dá)與WSSV感染密切相關(guān), 提示FcCasp基因與細(xì)胞凋亡相關(guān)。

中國(guó)明對(duì)蝦（Fenneropenaeus chinensis）; 基因克隆; Caspase; WSSV攻毒; 實(shí)時(shí)定量PCR分析

對(duì)蝦是目前世界上大規(guī)模養(yǎng)殖、效益好的水產(chǎn)品種類之一, 在中國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中占據(jù)舉足輕重的地位, 1988～1992年, 中國(guó)養(yǎng)殖對(duì)蝦的年產(chǎn)量一直保持在 20 萬(wàn) t左右, 占世界對(duì)蝦年總產(chǎn)量的 1/3, 居世界第一位[1]。由于病害頻發(fā), 特別是 1993年以來(lái)開(kāi)始爆發(fā)的 WSSV病毒性疾病, 使中國(guó)養(yǎng)殖對(duì)蝦的產(chǎn)量由1992年的20萬(wàn)t減至1993～1994年的5萬(wàn)～6萬(wàn)t, 給對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展造成了巨大損失[2]。迄今,尚未找到特效的病害防治方法來(lái)對(duì)付對(duì)蝦WSSV病害的危害。研究對(duì)蝦對(duì)病原感染的免疫應(yīng)答機(jī)制, 可以為有效地進(jìn)行對(duì)蝦的病害防治提供重要的理論指導(dǎo)。

1972年, Kerr等[3]提出細(xì)胞凋亡的概念。細(xì)胞凋亡, 又稱程序性細(xì)胞死亡（programmed cell death, 簡(jiǎn)稱 PCD）, 是多細(xì)胞生物調(diào)控機(jī)體發(fā)育、維護(hù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的一個(gè)重要的生理過(guò)程[4]。細(xì)胞凋亡是由基因控制的, 其核心的分子機(jī)制首先在秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans）中得到闡明。1992年, Cerretti等[5]發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物的白細(xì)胞介素-1β轉(zhuǎn)換酶（leukin 1-converting enzyme, 簡(jiǎn)稱 ICE）與其他已知的哺乳動(dòng)物蛋白幾乎沒(méi)有同源性, 但與秀麗隱桿線蟲中促進(jìn)細(xì)胞凋亡的 CED-3基因有很高的同源性, 這引起了人們對(duì)這類蛋白酶在細(xì)胞凋亡的作用的廣泛研究。到1996年為止, 人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了10個(gè)ICE/CED-3的同源物[6,7], 生物體利用這種機(jī)制有效地清除了衰老細(xì)胞和畸形細(xì)胞, 它們都是結(jié)構(gòu)相似的半胱氨酸蛋白酶, 并能特異地切割 Asp后的肽鍵, 所以人們將其統(tǒng)一命名為 caspase[8]。2000年,Sperandio等[9]發(fā)現(xiàn)一種與細(xì)胞凋亡現(xiàn)象不同而且不受凋亡因子調(diào)控的細(xì)胞自行死亡的形式, 稱為“paraptosis”。2007 年, Overholtzer等[10]發(fā)現(xiàn)一種通過(guò)特殊的細(xì)胞吞噬細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞死亡的方式, 他把這種全新的細(xì)胞死亡方式稱為“entosis”。

caspase家族成員有相似的氨基酸序列、結(jié)構(gòu)和底物特異性。caspase的分子量大約在30～50 kd, 通常以無(wú)活性的蛋白酶原形式在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行合成和分泌。結(jié)構(gòu)上, caspase可以分成 3部分, N-端前肽（prodomain）、大亞基（p20, 20kD）和小亞基（p10,10kD）。Prodomain與 caspase分子的功能密切相關(guān),功能性caspase分子的Prodomain長(zhǎng)度小于30個(gè)氨基酸, 而與炎癥相關(guān)的caspase分子的Prodomain長(zhǎng)度則大于100個(gè)氨基酸。長(zhǎng)的Prodomain往往含有明顯的功能域, 如 caspase募集結(jié)構(gòu)域（caspase recruitment domain,簡(jiǎn)稱 CARD）、死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域（death effector domain,簡(jiǎn)稱DED）、死亡誘導(dǎo)結(jié)構(gòu)域（death inducing domain,簡(jiǎn)稱 DID）等[11,12]。這些功能域參與caspase分子之間的相互作用、caspase酶原的活化和 caspase分子的亞細(xì)胞定位等[12,13], 而短的Prodomain的功能可能是抑制 caspase的活化[14]。caspase在大亞基上均含有QACXG五肽保守序列（X代表R、Q）。在各種caspase酶原間, 大小亞基的同源性較高, 而 N-端前肽的同源性較低, 這是區(qū)別caspase家族各成員的主要指標(biāo)。

作者以中國(guó)明對(duì)蝦為研究對(duì)象, 利用同源克隆的方法獲得了中國(guó)明對(duì)蝦FcCasp基因的cDNA序列,利用real time PCR研究了WSSV刺激后對(duì)蝦肝胰臟中該基因表達(dá)變化規(guī)律, 初步探討了該基因與對(duì)蝦免疫的關(guān)系, 為深入系統(tǒng)了解對(duì)蝦的先天性免疫機(jī)制增添了新的認(rèn)識(shí)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

中國(guó)明對(duì)蝦（體長(zhǎng)14.5 cm± 0.6 cm）購(gòu)于青島市南山市場(chǎng), 實(shí)驗(yàn)前在水族箱中充氣暫養(yǎng) 10 d, 使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)養(yǎng)殖環(huán)境。取健康對(duì)蝦肝胰臟, 并分離胃、腸、神經(jīng)節(jié)、淋巴器官、腮等組織, 提取總RNA用于cDNA合成。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)所用引物

其中, 括號(hào)中的R代表（A、G）, Y代表（T、C）, D代表（G、A、T）, K代表（G、T）, S代表（C、G）。

1.2 WSSV感染實(shí)驗(yàn)

WSSV組織提取液的制備方法如下: 將于?80℃保存的感染W(wǎng)SSV的中國(guó)明對(duì)蝦組織10 g（中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)院黃海水產(chǎn)研究所黃 教授惠贈(zèng)）, 按 1∶1（W/W）比例加入含 2.4%氯化鈉的 PBS, 在冰浴中勻漿10 s, 勻漿液在3 800 g, 4 ℃離心15 min, 沉淀加入同體積的PBS, 按上述方法勻漿和離心兩次, 3次所得上清合并, 加入蔗糖至 30%濃度; 于 31 000g,4 ℃離心50 min, 棄上清, 沉淀用25 mL生理鹽水懸浮, 備用。

選取健康對(duì)蝦若干尾, 采用腹節(jié)注射法進(jìn)行WSSV感染實(shí)驗(yàn)。用WSSV懸液從對(duì)蝦最后腹節(jié)進(jìn)行注射, 每只蝦注射20 μL。感染實(shí)驗(yàn)的對(duì)照組, 每尾對(duì)蝦注射20 μL無(wú)菌PBS 溶液。免疫注射后0、3、5、12、24、48、72 h 分別取蝦8尾, 解剖取其肝胰臟組織, 用于總RNA 的提取。

用注射器從對(duì)蝦第一腹節(jié)基部腹竇處取血淋巴,加入等體積的抗凝劑。8尾對(duì)蝦的血淋巴混在一起,4oC, 800 g離心10 min, 收集的血細(xì)胞用于總RNA的提取。同時(shí), 解剖未處理對(duì)蝦的各組織, 液氮中凍存, 用于后期的RNA提取。

1.3 RNA的提取和cDNA合成

利用Unizol試劑盒（上海博星公司）提取總RNA,方法參照使用說(shuō)明書。用紫外分光光度計(jì)對(duì)RNA進(jìn)行定量檢測(cè), 然后進(jìn)行 MOPS瓊脂糖凝膠電泳, 確認(rèn)RNA無(wú)降解后, ?80℃保存?zhèn)溆?。在進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄之前, 使用 RQ1 RNase-Free DNase（Promega, USA）去除總RNA中殘留的基因組DNA。cDNA合成體系如下: 在 25 μL的反應(yīng)體系中加入 2 μg總 RNA,1×MMLV 緩沖液, 0.5 mmol/L dNTP, 0.4 mmol/L oligo-dT（或六聚體隨機(jī)引物）, 20 units RNase抑制劑（Promega）和 200 units MMLV 反轉(zhuǎn)錄酶（Promega）,用于特異性基因片段克隆的cDNA, 用oligo-dT進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄; 用于基因表達(dá)定量分析的cDNA, 用隨機(jī)引物六聚體進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。

1.4 caspase基因cDNA（FcCasp）片段的克隆

根據(jù)NCBI上已經(jīng)公布的部分caspase的氨基酸序列: 家蠶（Bombyx mori） （BAF74126）、瘧蚊（Anopheles gambiae） （XP_308993）、墨吉明對(duì)蝦（Fenneropenaeus merguiensis） （AY839873.1）、凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei） （EU421939.1）、日本囊對(duì)蝦（Marsupenaeus japonicus） （EF079670.1）和斑節(jié)對(duì)蝦（Penaeus monodon） （DQ846887.1）, 設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物CAS3-dF和 CAS3-dR, 以中國(guó)明對(duì)蝦血細(xì)胞 cDNA為模板, 擴(kuò)增中國(guó)明對(duì)蝦caspase基因片段。PCR反應(yīng)條件為94℃變性4 min; 94℃變性30 s, 62℃退火30 s, 72℃延伸1.5 min, 共35個(gè)循環(huán); 72℃延伸10 min。擴(kuò)增片段克隆到pMD19-T載體（大連寶生物公司）中, 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌 TOP10菌株, 挑取克隆經(jīng)PCR驗(yàn)證后進(jìn)行測(cè)序。

1.5 生物信息學(xué)分析

將測(cè)序獲得的序列利用 http://www.ncbi.nlm.nih.gov網(wǎng)站上的 BLAST工具進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)基因序列相似性及同源性的查找和比較。全長(zhǎng)序列ORF分析等用 Bioedit軟件進(jìn)行。選取部分在 GenBank中與FcCasp相似的其他物種的caspase序列, 采用Clustal W軟件進(jìn)行多序列比對(duì)分析。將根據(jù)cDNA 序列推導(dǎo)的氨基酸序列利用 http://www.expasy.ch網(wǎng)站提供的蛋白質(zhì)組和序列分析工具（Proteomics and sequence analysis tools）進(jìn)行分析; 用 ProtParam 軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)基本物理化學(xué)參數(shù)分析。

1.6 FcCasp的表達(dá)分析

利用 real-time PCR檢測(cè)中國(guó)明對(duì)蝦肝胰臟中FcCasp在注射WSSV不同時(shí)間后轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)變化。取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組不同時(shí)間點(diǎn)取樣保存的肝胰臟樣品, 按前述方法分別提取總 RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA后用于定量 PCR檢測(cè)。利用 RT-CASF/RTCASR進(jìn)行轉(zhuǎn)錄表達(dá)檢測(cè)。擴(kuò)增片段大小為 129bp,同時(shí)利用中國(guó)明對(duì)蝦 18S rRNA作為參考基因, 以18S-F/18S-R為引物對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)生136bp的PCR產(chǎn)物。real-time PCR 反應(yīng)在 Eppendorf 公司 Mastercycler ep realplex 4S PCR 儀上進(jìn)行, 采用Blend Taq-Plus-PCR 反應(yīng)體系（TOYOBO）, 所用染料為 SYBR Green。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的cDNA樣品做兩組PCR, 一組為內(nèi)標(biāo)基因 18S rRNA, 另一組為目的基因 FcCasp,每組反應(yīng)進(jìn)行3次重復(fù)。18S rRNA 基因的反應(yīng)條件為: 94 ℃變性2 min, 1個(gè)循環(huán); 94 ℃變性15 s, 55℃退火20 s, 72 ℃延伸20 s, 40個(gè)循環(huán)。FcCasp基因的反應(yīng)條件為: 94 ℃變性2 min, 1 個(gè)循環(huán); 94 ℃變性15 s, 59.1 ℃退火20s, 72 ℃延伸20 s, 40個(gè)循環(huán)。數(shù)據(jù)處理采用2-??Ct 方法[15]。

2 結(jié)果

2.1 中國(guó)明對(duì)蝦FcCasp的部分cDNA片段的克隆

通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得了954bp的cDNA片段, 經(jīng)過(guò)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)BlastX比對(duì)（圖1）, 發(fā)現(xiàn)它與caspase家族基因具有很高的同源性, 該cDNA編碼317個(gè)氨基酸。FcCasp蛋白的預(yù)測(cè)分子量為35592.8Da, 理論等電點(diǎn)為5.37。通過(guò)功能域分析發(fā)現(xiàn)FcCasp推導(dǎo)的氨基酸序列中含有1個(gè)caspase家族典型的QACRG五肽保守序列（定位在190-194位氨基酸）。P20大亞基定位在 67-196位氨基酸, P10小亞基定位在218-317位氨基酸。

2.2 FcCasp的組織分布

采用real-time PCR方法分析FcCasp在其不同組織中的表達(dá)情況（圖 2）。從圖 2中可以看出 FcCasp在各組織中均有表達(dá), 其中在鰓、胃和腸等組織中表達(dá)量較低; 在血細(xì)胞、淋巴器官和肝胰臟等組織中表達(dá)量較高; 在血細(xì)胞中表達(dá)水平最高。

2.3 中國(guó)明對(duì)蝦 FcCasp與已報(bào)道的其他物種caspase的比較

作者比對(duì)了來(lái)自不同物種的 26個(gè)caspase的氨基酸序列, 利用 MEGA4.1軟件對(duì)這些 caspase進(jìn)行了分子系統(tǒng)學(xué)分析, 在構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)的基礎(chǔ)上研究了中國(guó)明對(duì)蝦 FcCasp的分類歸屬以及 FcCasp和其他物種caspase之間的進(jìn)化關(guān)系, 結(jié)果如圖3所示。由圖3可見(jiàn), 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分叉為兩個(gè)分支: 脊椎動(dòng)物（人）的caspase與無(wú)脊椎動(dòng)物（包括昆蟲、海洋無(wú)脊椎動(dòng)物）分別屬于兩個(gè)不同的類群, 這就體現(xiàn)了不同物種caspase的進(jìn)化差異。所有關(guān)于人、鼠、非洲爪蟾（Xenopes laevis）和斑馬魚（Danio rerio）的caspase都聚在進(jìn)化樹(shù)的一分支。而中國(guó)明對(duì)蝦的FcCasp則與瘧蚊（Anopheles gambiae）、果蠅（Drosophila Virilis）、凡納濱對(duì)蝦, 以及其他“昆蟲型（insect-type）”的 caspase共同聚類于進(jìn)化樹(shù)的另一分支, 這個(gè)分支上的蛋白全都由無(wú)脊椎動(dòng)物的caspase組成。

2.4 注射 WSSV后 FcCasp在中國(guó)明對(duì)蝦肝胰臟中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)

WSSV感染后, 中國(guó)明對(duì)蝦肝胰臟中FcCasp的表達(dá)變化如圖4所示。在注射后12 h, 對(duì)蝦肝胰臟中FcCasp明顯上調(diào)表達(dá), 并達(dá)到表達(dá)的最高值。而在注射后 48 h, 肝胰臟中 FcCasp的表達(dá)有明顯下降,并低于0 h的表達(dá)量; 在注射后72 h, FcCasp的表達(dá)大致恢復(fù)到注射前的水平。

3 討論

圖1 中國(guó)明對(duì)蝦FcCasp核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸序列Fig. 1 cDNA and deduced amino acid sequences of FcCasp ofFenneropenaeus chinensis

有關(guān)caspase的基因克隆、表達(dá)已經(jīng)在許多物種中得到研究。推測(cè)的蛋白質(zhì)包含一個(gè)典型的保守蛋白酶活性結(jié)構(gòu)域, 存在于大多數(shù)的caspase中。通常caspase以非活性狀態(tài)存在, 由兩個(gè)連續(xù)的蛋白水解激活, 首先位于caspase前體的N-端前肽和大亞基之間的特定位點(diǎn)被水解去除 N-端前肽, 然后在大小亞基之間切割釋放大小亞基, 由大亞基和小亞基組成異源二聚體, 再由兩個(gè)二聚體形成有活性的四聚體[16,17]。這些短的N-端前肽可能與哺乳動(dòng)物的caspase-3和7相似, 起到效應(yīng) caspase的作用[18,19]。在本研究中,克隆得到的caspase cDNA的ORF、蛋白的推導(dǎo)分子量、典型蛋白酶切活性結(jié)構(gòu)域、推導(dǎo)切割位點(diǎn)以及N-端前肽都與先前的已報(bào)道的研究相似[20]。這個(gè)結(jié)果清晰地表明本研究分離得到的caspase與其他甲殼類動(dòng)物的caspase具有高度相似性。

圖2 FcCasp在中國(guó)明對(duì)蝦中的組織分布Fig. 2 Tissue distributions of FcCasp inFenneropenaeus chinensis

圖3 中國(guó)明對(duì)蝦的FcCasp和其他物種caspase構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)◆表示本研究中的物種Fig. 3 Phylogenetic analysis on the amino acid sequence of FcCasp and caspase family members of other species◆denotes the species in this study

多細(xì)胞器官?gòu)V泛利用細(xì)胞凋亡來(lái)清除受損傷或有害的細(xì)胞, 為動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中保持機(jī)體平衡起到關(guān)鍵作用[21]。在脊椎動(dòng)物中, 胸腺中的細(xì)胞凋亡是淋巴細(xì)胞死亡的主要機(jī)制。本研究通過(guò)使用 real-time PCR的方法, 發(fā)現(xiàn)FcCasp基因廣泛分布在對(duì)蝦組織中, 包括血細(xì)胞、肝胰臟、腮、淋巴器官、神經(jīng)節(jié)等,但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)該基因在心臟中存在。

caspase蛋白酶家族在細(xì)胞凋亡過(guò)程中有重要作用, 它們接受外界信號(hào), 使細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡, 它們還是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的具體執(zhí)行者, 完成對(duì)特定蛋白底物的水解, 從而使細(xì)胞顯示出一系列細(xì)胞凋亡的特征。作者利用real-time PCR分析研究的結(jié)果表明, 對(duì)蝦肝胰臟FcCasp基因在WSSV[22]感染后出現(xiàn)明顯的上調(diào)表達(dá)。FcCasp基因的表達(dá)與病毒刺激有相關(guān)性, 說(shuō)明該基因可能參與了對(duì)蝦抗病毒免疫過(guò)程, 推測(cè)該基因可能會(huì)通過(guò)細(xì)胞凋亡清除體內(nèi)被病毒感染的細(xì)胞, 從而清除體內(nèi)的病毒, 進(jìn)而起到抗病毒的作用。目前已報(bào)道的有 4種對(duì)蝦 caspase: 凡納濱對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦[23]、斑節(jié)對(duì)蝦[24]、墨吉明對(duì)蝦[25], 但對(duì)對(duì)蝦的 caspase具體功能目前尚不完全清楚, 還正在進(jìn)一步研究之中。迄今, 對(duì)蝦相關(guān)基因的研究還處于一個(gè)起步的階段, 主要由于還沒(méi)有一套成熟的系統(tǒng)可用于研究對(duì)蝦基因的功能。相比哺乳動(dòng)物而言, 由于沒(méi)有對(duì)蝦細(xì)胞系, 進(jìn)行其基因功能研究, 顯得十分困難。在接下來(lái)的工作中, 通過(guò)獲得的FcCasp cDNA序列, 將采用RNAi技術(shù)用于對(duì)蝦基因功能的研究。FcCasp基因特異的dsRNA推測(cè)可能特異地抑制該基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá), 由此來(lái)進(jìn)一步研究該基因的作用, 為對(duì)蝦免疫病害防治提供指導(dǎo)。

圖4 對(duì)蝦肝胰臟FcCasp基因在WSSV刺激后不同時(shí)間轉(zhuǎn)錄水平的變化Fig. 4 Profile of FcCasp expression in the hepatopancreas of shrimps challenged with WSSV

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Received: Apr., 1, 2010

Key words:Fenneropenaeus chinensis; caspase gene cloning; WSSV challenge; real-time PCR

Abstract:Apoptosis eliminates unwanted cells, from an organism including damaged and virus-infected cells, being a fundamental cellular process that plays a critical role in normal development and tissue homeostasis. Here we studied a caspase homolog from Chinese shrimpFenneropenaeus chinensis,designated FcCasp. An open reading frame of 954 nucleotides encoding 317 amino acids （aa） contained a conserved motif, QACRG, of known caspases-3, and was located at aa 190–194. FcCasp expressions were measured in normal shrimp and in shrimp infected by white spot syndrome virus （WSSV） at five time-points post-injection （p.i.） with real-time PCR, revealng different expression profiles of FcCasp gene in hepatopancreas of shrimps after they were challenged by WSSV.The transcription of FcCasp in hepatopancreas showed up-regulation 12 h post-challenge, indicating the expression of FcCasp was closely related to WSSV challenge. Therefore, FcCasp might be involved in the apoptosis.

（本文編輯:譚雪靜）

Cloning and expression of a caspase gene in Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis

SONG Guang-nian1,2, JIN Song-jun1, ZHANG Ji-quan1, XIANG Jian-hai1
（1. Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Qingdao 266071, China; 2. Graduate University, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China）

Q789

A

1000-3096（2010）12-0001-07

2010-04-01;

2010-10-10

國(guó)家 973資助項(xiàng)目（2006CB101804）; 國(guó)家 863計(jì)劃項(xiàng)目（2006AA10A401）; 國(guó)家自然基金項(xiàng)目（30970422）

宋光年（1984-）, 男, 山東省青島人, 碩士研究生, 主要從事海洋生物分子生物學(xué)研究, 電話: 0532-82898570, E-mail: songpeter@163.com; 相建海, 通信作者, E-mail: jhxiang@qdio.ac.cn