紫外分光光度法測定腫節(jié)風(fēng)不同部位總黃酮的含量

勵 娜，楊榮平，王賓豪，張小梅

(重慶市中藥研究院，重慶 400065)

腫節(jié)風(fēng) Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai又名九節(jié)茶、草珊瑚、接骨木等，是金粟蘭科草珊瑚屬植物，在民間廣泛用于接骨祛風(fēng)、消炎解毒，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明其具有抗菌消炎、抗癌和增強(qiáng)免疫功能等功效，已制成針劑、片劑、膜劑、含漱劑、口服液等多種劑型。主要用于各種常見炎癥性疾病的治療和癌癥的輔助性治療。腫節(jié)風(fēng)中所含黃酮類化合物是其主要有效成分[1]。筆者根據(jù)黃酮類化合物特性，以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法對腫節(jié)風(fēng)的葉、莖、根中總黃酮進(jìn)行了含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

UV-1601型紫外可見分光光度計、AEG-45SM型電子天平(十萬分之一，日本島津);BP121-S型電子天平(萬分之一，德國Sartorius公司);HH-2型恒溫水浴箱、KQ-250型超聲波清洗器(鞏義市英峪予華儀器廠)。腫節(jié)風(fēng)(重慶紅池藥業(yè)有限公司提供，本院生藥鑒定室秦松云副研究員鑒定);蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100080-200306);所有試劑均為分析純(重慶川東化工＜集團(tuán)＞有限公司化學(xué)試劑廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

精密稱取蘆丁對照品7.03 mg，置10 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.703 g/L的對照品溶液。取腫節(jié)風(fēng)藥材各部位粉末(40目)約5 g，精密稱定，置燒瓶中，加85%乙醇100 mL，冷浸30 min后，在水浴上加熱回流提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，濃縮至50 mL，作為供試品溶液。

2.2 測定波長選擇[2]

取對照品溶液和供試品溶液0.5 mL，分別置25 mL量瓶中，加5%NaNO21 mL，混勻，放置 6 min，加 10%Al(NO3)31 mL，搖勻，放置 6 min，加 NaOH試液 10 mL，加 85%乙醇至刻度，搖勻放置15 min后，在400～800 nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果二者在500 nm波長處有最大吸收，故選擇500 nm為測定波長。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密量取對照品溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分別置25 mL量瓶中，加5%NaNO21 mL，混勻，放置6 min，加10%Al(NO3)31 mL，搖勻，放置 6 min，加 NaOH 試液 10 mL，加 85%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min后，于500 nm波長處測定吸光度。以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)、吸光度值為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=0.496 2 X-0.026，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，蘆丁質(zhì)量濃度在0.351 5～3.163 5 g/L范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對照品溶液(0.703 g/L)1 mL，置25 mL量瓶中，依法操作，經(jīng)放置顯色后，于500 nm波長處測定吸光度。結(jié)果的 RSD為0.140%(n=6)，表明儀器精密度較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取腫節(jié)風(fēng)藥材全草樣品5 g，依法制備供試品溶液，經(jīng)放置顯色后，在不同時間測定其吸光度。結(jié)果樣品總黃酮含量平均值為25.93 mg/g，RSD為1.55%(n=6)，表明供試品溶液在顯色后60 min內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取腫節(jié)風(fēng)藥材全草樣品，依法平行制備供試品溶液6份，經(jīng)放置顯色后，于500nm波長處測定吸光度。結(jié)果總黃酮的含量平均值為25.95mg/g，RSD為0.75%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的腫節(jié)風(fēng)藥材9份，精密稱定。按樣品中總黃酮含量的80%，100%，120%精密加入對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定吸光度。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取腫節(jié)風(fēng)藥材各部位粉末(40目)約5 g，各5份，精密稱定，按供試品溶液制備方法依法制備，各取0.5 mL，置25 mL量瓶中，依法操作，經(jīng)放置顯色后，于500 nm波長處測定吸光度，代入回歸方程，計算總黃酮的含量(n=5)。結(jié)果葉、莖、根的平均含量分別為3.17%，2.38% ，2.11%。

3 討論

采用紫外分光光度法測定腫節(jié)風(fēng)藥材中總黃酮的含量，方法快速、簡便、準(zhǔn)確、可靠，為今后腫節(jié)風(fēng)中總黃酮含量的檢測提供了便捷方法，同時為深入開發(fā)利用腫節(jié)風(fēng)中黃酮類成分的研究奠定了基礎(chǔ)。經(jīng)檢測的腫節(jié)風(fēng)中，葉中的總黃酮含量高達(dá)3.17%。因此，藥材腫節(jié)風(fēng)中黃酮類化合物具有非常重要的開發(fā)利用價值。

表1 蘆丁加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

本試驗(yàn)僅考察了不同部位對腫節(jié)風(fēng)中總黃酮含量的影響，產(chǎn)地、采收期等因素對腫節(jié)風(fēng)中總黃酮及其他活性物質(zhì)的動態(tài)變化影響還有待進(jìn)一步研究。

[1]李石蓉，夏繪晶，康麗潔，等.中藥草珊瑚中異嗪皮啶和總黃酮含量的分析研究[J].中南藥學(xué)，2005，3(6):327-329.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:154.