維他敏膠囊質(zhì)量控制方法研究

達(dá)慶國(guó)，錢 芳，周春來，劉志輝

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029)

維他敏膠囊由山豆根、人參、黃芪、茵陳、苦地丁等中藥組成，具有抗病毒和提高人體免疫力的作用。筆者對(duì)制劑質(zhì)量控制方法進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，包括G1311A四元泵，G1316A柱溫箱，G1314A可變波長(zhǎng)掃描紫外（VWD）檢測(cè)器；Agilent Ver A 10.2色譜工作站；939型全自動(dòng)薄層制板器（重慶市南岸貝爾德儀器技術(shù)廠）；101－1A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（南通滬通制藥機(jī)械設(shè)備廠）；HHS型電熱恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）；WD－9413A型凝膠成像分析儀（北京市六一儀器廠）；KQ－1000E型醫(yī)用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BP－211D型1/10萬電子分析天平(德國(guó)Sartorius)；玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠)。硅膠G（青島海洋化工集團(tuán)）；氧化苦參堿對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào)為0780－9703）、苦參堿對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào)為0805－9703）、人參皂苷Rb1對(duì)照品（定性鑒別用，批號(hào)為704－9407）、人參皂苷Rg1對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào)為0703－9914）、人參皂苷Re對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào)為954－9608）、黃芪甲苷對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào)為110781－200512），均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；維他敏膠囊（規(guī)格為0.4 g，批號(hào)分別為060412，060421，060422，本院自制）。所用試劑均為分析純或色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

人參：取膠囊內(nèi)容物約2 g，加水50 mL使溶解，超聲30 min，濾過，濾液加水飽和的正丁醇萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，加稀氨試液洗脫至下層溶液無色，取上層溶液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對(duì)照品溶液。另取人參對(duì)照藥材粉末2 g，加水50 mL，加熱回流1 h，濾過，放冷，加水飽和的正丁醇萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，加稀氨試液洗脫至下層溶液無色，取上層溶液，水浴蒸干，殘?jiān)? mL甲醇使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。另取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述4種溶液各6!L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－乙酸乙酯－稀氨溶液(5→50)(4∶1∶5)[1]的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加熱至顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上分別顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾（圖1 A）。

黃芪：按人參鑒別項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液。另取黃芪對(duì)照藥材粉末2 g，加水50 mL，加熱回流1 h，濾過，放冷，加水飽和的正丁醇萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，加稀氨試液洗脫至下層溶液無色，取上層溶液，水浴蒸干，殘?jiān)? mL甲醇使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述4種溶液各6!L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－乙酸乙酯－稀氨溶液（5→50）(4∶1∶5)[1]的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加熱至顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上分別顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾（圖1 B）。

圖1 薄層色譜圖

茵陳：取膠囊內(nèi)容物4 g，加水50 mL使溶解，加三氯甲烷萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對(duì)照品溶液。另取茵陳對(duì)照藥材粉末5 g，加水100 mL，加熱提取1 h，濾過，濾液濃縮至適量，加三氯甲烷萃取2次，每次40 mL，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。吸取上述3種溶液各10!L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－三氯甲烷－丙酮（4∶9∶2）[2]為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾（圖1 C）。

苦地丁：取膠囊內(nèi)容物5 g，加水100 mL使溶解，加濃氨試液調(diào)pH至11～12，用三氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并萃取液，水浴蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對(duì)照品溶液。另取苦地丁對(duì)照藥材粉末5 g，加水100 mL，加熱提取30 min，濾過，濾液加濃氨試液調(diào)pH至11～12，加三氯甲烷萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，水浴蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。吸取上述3種溶液各8!L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙醚－乙醇－氨水(18∶2∶1∶0.05)[3]為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾（圖1 D）。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件[4]

色譜柱：Hypersil Aps－2(NH2)柱 (250 mm ×4.6 mm，5!m)；VWD檢測(cè)器；流動(dòng)相：乙腈－0.3%磷酸－無水乙醇（82∶8∶10）；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10!L。理論塔板數(shù)按氧化苦參堿峰、苦參堿峰計(jì)不低于3 000。

2.2.2 溶液制備

取氧化苦參堿、苦參堿對(duì)照品各10 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解成每1 mL含氧化苦參堿0.200 0 mg、苦參堿0.202 0 mg的對(duì)照品溶液。取本品粉末 0.4 g，精密稱定，加水50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液用三氯甲烷萃取3次，每次30 mL，合并萃取液，水浴蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相使溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得供試品溶液。同法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：分別精密吸取2.2.2項(xiàng)下3種溶液各10!L，注入高效液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果氧化苦參堿、苦參堿保留時(shí)間分別為10 min和15 min，陰性對(duì)照無干擾（見圖2）。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取上述對(duì)照品溶液，用流動(dòng)相分別稀釋成氧化苦參堿質(zhì)量濃度為200.00,100.00,50.00,25.00，12.50,6.25!g/mL和苦參堿質(zhì)量濃度 為 202.00,101.00,50.50,25.25,12.625,6.312 5!g/mL的系列對(duì)照品溶液，分別精密吸取系列對(duì)照品溶液各10!L，注入高效液相色譜儀，測(cè)定色譜峰峰面積。經(jīng)線性回歸，得氧化苦參堿回歸方程 Y=630.44 X+6.491 2，r=1.000(n=6)，苦參堿回歸方程 Y=586.51 X+7.781 0，r=0.999 8(n=6)，結(jié)果表明氧化苦參堿質(zhì)量濃度在6.25～200.00!g/mL范圍內(nèi)、苦參堿質(zhì)量濃度在6.312 5～202.00!g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果氧化苦參堿峰面積的 RSD為1.64%，苦參堿峰面積的 RSD為1.52%（n=6），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為060412）粉末0.4 g，共6份，精密稱定，依法制備供試品溶液并測(cè)定峰面積，結(jié)果氧化苦參堿峰面積的 RSD為 1.31%，苦參堿峰面積的 RSD為 1.44%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為060412）6份，分別加入規(guī)定量的對(duì)照品溶液，照上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批號(hào)的制劑各2份，照上述方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果批號(hào)為060412，060421，060422的3批樣品中氧化苦參堿平均含量分別為 0.43，0.48，0.46 mg/粒，苦參堿平均含量分別為 0.32，0.34，0.34 mg/粒（n=2）。

3 討論

人參、黃芪的薄層色譜鑒別中，曾用三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇 －水（15∶40∶22∶10）和三氯甲烷 －甲醇 －水（13∶7∶2）的下層溶液為展開劑展開，結(jié)果薄層色譜圖斑點(diǎn)發(fā)散、不圓整，改用正丁醇－乙酸乙酯－稀氨（5→50）(4∶1∶5)的上層溶液為展開劑展開后，薄層色譜圖斑點(diǎn)集中、清晰，分離較好。人參及相應(yīng)制劑供試品的處理，未用三氯甲烷進(jìn)行脫脂去雜，而是加水溶解，超聲處理后再用水飽和的正丁醇萃取，萃取液再經(jīng)稀氨試液洗脫，該法簡(jiǎn)化了操作，效果較好。

含量測(cè)定中供試品溶液的制備曾采用加三氯甲烷超聲提取方法、加酸水溶解超聲然后萃取的提取方法和文中方法，結(jié)果前兩種提取方法氧化苦參堿、苦參堿的含量均偏低，最終確定文中方法。

[1]王術(shù)玲.人參、三七、黃芪的薄層色譜鑒別[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，4(2)：49.

[2]周仰青，陳慶輝，張偉婷.茵膽平肝膠囊中主要中藥的鑒別[J].海峽藥學(xué)，1998，10(4)：48.

[3]李清娟，陳衛(wèi)平，張宏武.感冒清熱顆粒中苦地丁的薄層色譜鑒別[J].中國(guó)藥事，2005，19(1)：47.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：139，213 －214.