高效液相色譜法測(cè)定丹參酮ⅡA含量的系統(tǒng)適用性優(yōu)化

鄭金聰，林王椿，姚步華

（福建省寧德市閩東醫(yī)院，福建福安 355000）

丹參酮ⅡA是丹參的重要有效成分之一，臨床上能夠改善冠心病、心絞痛和胸悶等癥狀[1]，并具有抗血管炎癥的作用[2]。目前，《中國(guó)藥典》2010年版對(duì)丹參酮ⅡA含量測(cè)定采用的高效液相色譜法的流動(dòng)相條件的專屬性差。為此，作者采用不同流動(dòng)相比例進(jìn)行試驗(yàn)，其結(jié)果分別與在 《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下得出的結(jié)果進(jìn)行比較，摸索出了一套穩(wěn)定性好、精密度高、出峰時(shí)間更短，并適用于丹參酮ⅡA含量測(cè)定HPLC法。

1 儀器與試藥

安捷倫1200高效液相色譜儀；北京京立LG16-W型離心機(jī)；梅特勒托利多AL204型電子天平；威固特VGT-1730T型超聲波清洗器；丹參酮ⅡA對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供（批號(hào)：110766-20041667）；甲醇為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：安捷倫 Hypersil ODS（4.0 mm ×250 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 ml/min；流動(dòng)相：A（甲醇∶水為 75∶25）[3]、B （甲醇∶水為 80∶20）、C （甲醇∶水為 85∶15）；進(jìn)樣量：20 μl。

2.2 貯備液的制備

精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品0.5 mg，加甲醇溶解，制成每毫升含量約為20 μg的溶液。

2.3 結(jié)果

2.3.1 色譜圖 取一定量的貯備液，將其配制成濃度為10 μg/ml的溶液，在“2.1”項(xiàng)下方法操作進(jìn)樣，所得的不同比例流動(dòng)相測(cè)得的丹參酮ⅡA的HPLC色譜圖見圖1。

2.3.2 色譜峰參數(shù)比較 見表1。

表1 不同流動(dòng)相比例測(cè)得的丹參酮ⅡA的色譜峰參數(shù)

由表1數(shù)據(jù)可知，①三者的理論塔板數(shù)均大于2 000，符合《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定。②色譜峰拖尾因子T用以衡量色譜峰的對(duì)稱性，在《中國(guó)藥典》2010年版中規(guī)定T應(yīng)為0.95～1.05，從表1 中可見，三者均符合要求。③劉德旺等[4]也采用高效液相色譜法測(cè)定丹參酮ⅡA的含量，其保留時(shí)間為12min左右，而丹參酮ⅡA在本試驗(yàn)色譜條件C下的保留時(shí)間為6.225 min，與色譜條件A、色譜條件B下的保留時(shí)間和劉德旺等報(bào)道的保留時(shí)間相比，均有顯著縮短，這使試驗(yàn)更加快速，并可節(jié)約試驗(yàn)成本。④由表1可知，在A、B、C三個(gè)條件下出峰的峰寬 W 相比較為：WA＞W(wǎng)B＞W(wǎng)C，根據(jù)公式：W=4σ 可知，W越小說(shuō)明σ越小、分散程度越小、極點(diǎn)濃度越高、峰形越瘦、柱效越高[5]，說(shuō)明在色譜條件C下出峰形狀最好，試驗(yàn)柱效最高。由此可見，在色譜條件C下丹參酮ⅡA的出峰效果最好。

2.4 對(duì)色譜條件C的方法考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 分別精密量取上述貯備液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于 10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件C，分別進(jìn)樣20 μl，測(cè)定峰面積。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，丹參酮ⅡA濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為：Y=35.308X-45.208（r=0.998 9），結(jié)果表明丹參酮ⅡA含量在2～10 μg/ml范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一貯備液， 分別于 0、1、2、4、8、24 h在上述色譜條件C下進(jìn)樣，測(cè)得丹參酮ⅡA峰面積值的RSD為1.015%，表明丹參酮ⅡA在24 h內(nèi)的面積分值基本穩(wěn)定不變。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 取同一貯備液，在上述色譜條件C下連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定丹參酮ⅡA峰面積積分值，RSD為0.992%。

2.4.4 回收率試驗(yàn) 精密稱取5份丹參酮ⅡA對(duì)照品各0.2 mg，分別用甲醇溶解于25 ml量瓶中，按色譜條件C下進(jìn)樣，按“2.4.1”項(xiàng)下公式測(cè)定每份的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)

3 討論

液相色譜條件，通過(guò)參考相關(guān)文獻(xiàn)，分別比較了A（甲醇∶水為 75∶25）、B（甲醇∶水為 80∶20）、C（甲醇∶水為 85∶15）等不同比例流動(dòng)相條件下的出峰情況[6-8]，結(jié)果以C（甲醇∶水為85∶15）為流動(dòng)相時(shí)，所得的丹參酮ⅡA峰形更好、出峰時(shí)間更早、柱效更高，效果更滿意。

本法對(duì)《中國(guó)藥典》2010年版關(guān)于高效液相色譜法測(cè)定丹參酮ⅡA含量的條件進(jìn)行了改進(jìn)，優(yōu)化了流動(dòng)相比例，使丹參酮ⅡA的出峰效果更好，同時(shí)縮短了試驗(yàn)時(shí)間，節(jié)省了試驗(yàn)成本。該法具備穩(wěn)定性好、精密度高、回收率等好等特點(diǎn)，可用于丹參酮ⅡA的含量測(cè)定。

[1]陳新謙,金有豫,湯光,等.新編藥物學(xué)[M].16版.北京∶人民衛(wèi)生出版社,2007∶382.

[2]黃永康.丹參酮ⅡA抗血管炎癥的療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,19(10)∶1221-1222.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].二部.北京∶化學(xué)工業(yè)出版社,2010∶71.

[4]劉德旺,齊曼麗.HPLC測(cè)定腦心通片丹參酮ⅡA的含量[J].中成藥,2008,30(8)∶附 8-9.

[5]孫毓慶.分析化學(xué)[M].4 版.北京∶人民衛(wèi)生出版社,2002∶240.

[6]羅茂玉,陳登豐.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方銀杏通脈膠囊中丹參酮ⅡA 的含量[J].海峽藥學(xué),2009,21(11)∶62-64.

[7]王建,邢軍,王紅,等.RP-HPLC法測(cè)定活血脈通膠囊中丹參酮ⅡA的含量[J].齊魯藥事,2009,28(12)∶717-719.

[8]熊云珍,林惠.HPLC測(cè)定暢脈膠囊中丹參酮ⅡA的含量[J].中國(guó)藥師,2010,13(4)∶537-538.