• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    核黃素結(jié)合蛋白的性質(zhì)及其功能

    2010-09-12 12:07:12吳子健陶琳
    食品研究與開發(fā) 2010年11期
    關(guān)鍵詞:核黃素二硫鍵蛋清

    吳子健,陶琳

    (天津商業(yè)大學生物技術(shù)與食品科學學院,天津市食品生物技術(shù)重點實驗室,天津 300134)

    核黃素結(jié)合蛋白的性質(zhì)及其功能

    吳子健,陶琳

    (天津商業(yè)大學生物技術(shù)與食品科學學院,天津市食品生物技術(shù)重點實驗室,天津 300134)

    來自雞的包括雞蛋的核黃素結(jié)合蛋白是單亞基磷酸糖蛋白,能特異性地結(jié)合VB2并將其輸送到胚胎,以維持胚胎的生長發(fā)育。介紹它的種類、分子的組成與結(jié)構(gòu)、結(jié)合核黃素的分子機理、分子的熱穩(wěn)定性、對鹽酸胍的化學穩(wěn)定性以及生物學方面的功能。

    核黃素結(jié)合蛋白;結(jié)合核黃素的分子機理;分子結(jié)構(gòu)

    Abstract:Riboflavin-binding protein,a globular monomeric phosphoglycoprotein originated from chicken,is able to specific bind and transport riboflavin to the embryo,sustaining its growth and development until hatching.It is to introduce the categories,composition and structure,molecular riboflavin-binding mechanism,thermal stability,chemical stability under the existence of GdnHCl,and its biological functions.

    Key words:riboflavin-binding protein;molecular riboflavin-binding mechanism;molecular structure

    雞卵中核黃素結(jié)合蛋白(Riboflavin-binding Protein,RfBP),也稱為黃素蛋白或卵黃素蛋白,是分子量約為29.2 ku的球狀單亞基磷酸糖蛋白,對核黃素(即VB2)具有高度親和力[1]。雞蛋清的淺黃色正是由于該種蛋白特異性結(jié)合核黃素導致的[2]。其含量占整個蛋清蛋白的0.8%,并且在蛋黃和產(chǎn)蛋母雞的血漿中也發(fā)現(xiàn)了該種蛋白[3]。RfBP蛋白能儲存水溶性的VB2并將其輸送到胚胎,用以維持胚胎的生長發(fā)育直到孵化。目前,關(guān)于核黃素結(jié)合蛋白的研究國內(nèi)剛剛開始,綜述國內(nèi)外研究現(xiàn)狀,介紹該蛋白分子的性質(zhì)。

    1 核黃素結(jié)合蛋白的種類

    雞核黃素結(jié)合蛋白分為3種,即蛋清核黃素結(jié)合蛋白(Egg-white Riboflavin-binding Protein,wRfBP)、蛋黃核黃素結(jié)合蛋白(Egg-yolk Riboflavin-binding Protein,yRfBP)和雞血清核黃素結(jié)合蛋白(Serum Riboflavin-binding Protein,sRfBP)。3種蛋白氨基酸序列都是由同一基因編碼的,只是經(jīng)歷了不同的翻譯后修飾[2]。wRfBP由輸卵管細胞合成[4];sRfBP是由雞的肝臟受雌激素控制下合成的;而yRfBP則是蛋白酶將通過卵母細胞膜的血漿核黃素結(jié)合蛋白上末端11個~13個氨基酸殘基酶解掉形成的[5]。wRfBP蛋白和sRfBP蛋白擁有同樣的氨基酸殘基序列,不同的是Asn36和Asn147位點的糖基是不同的;目前已知sRfBP蛋白和yRfBP蛋白的糖基一級結(jié)構(gòu)是相同的[6],而wRfBP蛋白目前只知道其糖基的組成,但糖基一級結(jié)構(gòu)至今鮮見研究報道。

    2 核黃素結(jié)合蛋白的組成與結(jié)構(gòu)

    WRBP蛋白由219個氨基酸殘基組成[7],其N-端為焦谷氨酰殘基。在翻譯后修飾過程中,該蛋白分子內(nèi)的8個絲氨酸殘基被磷酸化,2個天冬氨酸殘基被糖基化。1997年,Monaco報道了其高分辨率X-射線晶體結(jié)構(gòu)[1],明確表明:分子內(nèi)約30%氨基酸殘基參與形成6個α-螺旋(分別被命名為A到F);約15%氨基酸殘基參與形成了4個β-折疊(分別被命名為a到d);在這些二級結(jié)構(gòu)中,4個α-螺旋(A到D)和4個β-折疊參與構(gòu)建了蛋白中高親和力的核黃素結(jié)合位點,而剩余的2個α-螺旋則圍繞著186位至197位氨基酸殘基形成的可折疊的高度磷酸化區(qū)域。WRBP蛋白分子的空間大小約為50×40×35 A?(如圖1和圖2所示)。

    整個結(jié)構(gòu)可分為2個區(qū)域:(1)一個配基結(jié)合區(qū)域(N-末端至Cys169),該區(qū)域較大,且含有一個寬度約為20 A?、深度為15 A?的裂縫,可容納與之結(jié)合的核黃素;(2)較小的磷酸化motif(從Cys169到C-末端),含有很多帶負電荷的氨基酸殘基(8個磷酸絲氨酸殘基和10個谷氨酰基殘基)[8],這些磷酸絲氨酸殘基高度密集形成群簇,如:Ser185-Glu-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu190-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Met-Ser(P)195-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu200[9]。該區(qū)域是3種RfBP蛋白都含有的區(qū)域,現(xiàn)在已知這個磷酸化區(qū)域參與了卵母細胞對PRBP蛋白的吸收,它在PRBP蛋白與卵黃生成素(vitellogenin)相互作用中起到了關(guān)鍵的作用。

    這3種RfBP蛋白另一個特點是分子中都含18個半胱氨酸殘基(其中9個半胱氨酸殘基位于無規(guī)則卷曲,7個位于α-螺旋上,2個位于β-折疊上),共形成9個二硫鍵(如表1所示),穩(wěn)定著該蛋白天然的結(jié)構(gòu)[11],其中8個二硫鍵位于核黃素的結(jié)合區(qū)域,剩下的一個則是負責連接兩個結(jié)構(gòu)域。這些二硫鍵在空間上與核黃素之間的相對位置如圖2所示。

    表1 雞卵清RfBP蛋白中的二硫鍵[12]Table 1 Disulfide bridges of chicken riboflavin-binding protein

    RfBP蛋白中有組成中有14%為糖,分布在2個N-糖基化位點上(即,Asn-36和Asn-147,如圖1所示),主要是巖藻糖,甘露糖,半乳糖,N-乙酰葡糖胺和唾液酸,這2個糖基化位點的周圍5個殘基具有保守性序列(4個為相同氨基酸殘基);但2個位點的糖基化方式(即類型與分布)卻不同:一般在Asn-147位點結(jié)合的糖具有3到5個支鏈[13],而Asn-36位點上糖鏈較Asn-147位點的分支少。說明蛋白質(zhì)局部二級、三級結(jié)構(gòu)或糖基化的次序會影響糖基化位點上結(jié)合的寡糖結(jié)構(gòu)(Rohrer and White III 1992)。另一方面wRfBP蛋白結(jié)合的寡糖不同于yRfBP分子結(jié)合的寡糖,是由于這兩種核黃素結(jié)合蛋白是由不同組織合成,且具有不同的功能。

    3 RfBP與核黃素的結(jié)合

    3.1 核黃素結(jié)合位點

    核黃素與脫輔基RfBP蛋白按照1∶1的比例強烈結(jié)合[14],其解離常數(shù)大約為1.3×10-9M。核黃素由核糖醇鏈和異咯嗪環(huán)組成,其中異咯嗪環(huán)(賦予蛋清淡黃色)具有兩性性質(zhì):二甲苯部分具有疏水性,嘧啶基團部分具親水性[15]??梢姽夂妥贤饩€的照射會導致核黃素單體轉(zhuǎn)變?yōu)楣恻S素,特別是在堿性的溶液中,但一旦與蛋白質(zhì)結(jié)合,核黃素可在長期激光脈沖的照射下保持穩(wěn)定[16]。RfBP蛋白的核黃素結(jié)合區(qū)域是一個約20 A?寬15A?深的憎水性裂口,含有蛋白質(zhì)中5/6的絲氨酸殘基。核黃素上異咯嗪環(huán)與Trp-156和Tyr-75的芳香環(huán)平面相互平行堆積在一起。圖3清楚地顯示了核黃素分子以及與其結(jié)合接觸的氨基酸殘基側(cè)鏈的電子密度。

    并且在RfBP蛋白與核黃素結(jié)合時,異咯嗪環(huán)中憎水性的二甲苯部分深入蛋白的內(nèi)部。核黃素中的異咯嗪與蛋白間的相互作用主要為憎水相互作用。

    3.2 二硫鍵對RfBP結(jié)合核黃素的影響

    1981年Kozik A[17]利用巰基乙醇或二硫蘇糖醇的還原作用將脫輔基的蛋清RfBP分子中的所有二硫鍵斷開,結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛋清RfBP分子喪失了結(jié)合核黃素的能力,并且其動力學和統(tǒng)計分析表明該蛋白分子內(nèi)的任何一個二硫鍵對于蛋白結(jié)合核黃素都是至關(guān)重要的。同時該項研究也表明結(jié)合了維生素的核黃素結(jié)合蛋白復合體中的二硫鍵較難以被還原斷開,但若被還原,反應呈現(xiàn)一級反應的規(guī)律。

    3.3 RfBP中寡糖對RfBP結(jié)合核黃素的影響

    1981年Miller等在溫和條件下酸解和乳糖氧化酶去除RfBP中的唾液酸,利用來自黑曲霉的各種糖苷酶混合物去除RfBP中的N-乙酰氨基葡糖和乳糖,然后對比研究發(fā)現(xiàn)去除了糖基的RfBP分子對于核黃素結(jié)合的能力低于天然分子的能力。說明去除糖鏈會致使其與核黃素集合能力的下降。

    3.4 pH值對RfBP結(jié)合核黃素的影響

    pH值對于RfBP與核黃素的結(jié)合影響較大:通常pH值在4.5與9之間,核黃素與蛋白質(zhì)結(jié)合緊密;但當pH低于4.0時,兩者的結(jié)合常數(shù)會迅速下降:核黃素與RfBP解離,形成脫輔基蛋白與游離的核黃素[18]。當pH>4.5時,核黃素結(jié)合位點構(gòu)象是固定的,但pH<4.0時,圓二色譜法檢測表明其芳香族氨基酸側(cè)鏈的遷移率,分子體積,分子表面,蛋白質(zhì)的水化作用均有顯著的變化,同時各向異性也會降低。酸性pH值可誘導的核黃素結(jié)合位點的酪氨酸和色氨酸芳香環(huán)重新定向,從而導致蛋白中富含芳香族氨基酸殘基的裂口部位張開并釋放核黃素。在pH值較低時,提高RfBP蛋白溶液的離子強度會顯著增加解離常數(shù),但是在中性pH值時,卻不會。

    4 RfBP的穩(wěn)定性

    4.1 RfBP分子的熱穩(wěn)定性

    2000年Marcin Wasylewski利用示差掃描量熱法技術(shù)測定了蛋清RfBP分子熱力學折疊的各種參數(shù),考察了含輔基的RfBP分子以及不含輔基的RfBP分子的熱變性參數(shù),發(fā)現(xiàn)[19]:RfBP蛋白的熱穩(wěn)定性高,不含輔基的RfBP分子的變性溫度為60.8℃,且結(jié)合核黃素會增強其熱穩(wěn)定性,變性溫度可直接提高到72.8℃。在2004年Marcin Wasylewski進一步研究證明[20]:蛋白分子中的9個二硫鍵會使RfBP分子形成緊湊的結(jié)構(gòu),并且使其分子熱變性過程可逆,通常其熱變性過程分為2個獨立的進程,而這一特點與該蛋白中存在2個獨立的結(jié)構(gòu)區(qū)域(N-端核黃素結(jié)合區(qū)域、C-端磷酸化區(qū)域)有關(guān),在被加熱時,2個結(jié)構(gòu)區(qū)域會依次打開折疊而伸展;N-端核黃素結(jié)合區(qū)域比C-端磷酸化區(qū)域的變性溫度要低;同時配基結(jié)合會大大提高N-端區(qū)域的熱穩(wěn)定性,而對C-端區(qū)域的熱穩(wěn)定性影響輕微。

    4.2 化學變性

    若利用鹽酸胍對RfBP進行化學變性,當鹽酸胍的濃度從0 mol/L變化到6 mol/L時,天然RfBP有兩個打開分子重疊而伸展的階段[21]。當鹽酸胍濃度從0 mol/L到2 mol/L時,RfBP蛋白失去一些三級結(jié)構(gòu),在鹽酸胍濃度在2 mol/L到4 mol/L時,RfBP蛋白分子成為穩(wěn)定的中間態(tài),當鹽酸胍濃度在4 mol/L到6 mol/L時,該蛋白分子完全變性并且失去其二級結(jié)構(gòu)。由于憎水性裂口的坍塌,當鹽酸胍濃度為3 mol/L時,所有的核黃素分子都會從蛋白的分子上解離下來(Zhong and Zewail 2001)。只要9個二硫鍵存在,在變性劑去除后,變性的RfBP蛋白會很快重新折疊。如果RfBP蛋白事先被還原過,正確的二硫鍵不會立即重新形成,該蛋白也就會喪失其結(jié)合核黃素的能力[22]。

    5 RfBP蛋白的功能

    5.1 輸送VB2供雞胚胎發(fā)育[1]

    RfBP蛋白最主要的生物學功能是儲存水溶性的VB2并將其輸送到胚胎,以維持胚胎的生長發(fā)育直到孵化。禽蛋中RfBP的量在其他營養(yǎng)載體蛋白中是相對充足的,因為核黃素對于胚胎的正常發(fā)育至關(guān)重要。1992年White III HB等研究表明:缺乏RfBP的產(chǎn)蛋母雞所下的受精蛋是無法成為能夠存活的胚胎,缺乏核黃素的雞蛋形成的胚胎會在孵育約13 d左右而死亡。這主要是由于在孵化13 d時,恰逢黃素激酶活性大大增加,這是一種利用核黃素合成FMN、FAD的酶。

    5.2 抗菌作用[23]

    RfBP在蛋清中可以充當核黃素的吞噬者,可消除游離的核黃素,從而抑制需要利用核黃素作為營養(yǎng)的微生物的生長,從而保護雞胚胎不受細菌侵害。

    5.3 選擇性的甜味抑制劑和苦味抑制劑[24-25]

    2007年Kenji Maehas等的研究表明蛋清RfBP分子可以選擇性地抑制蛋白類甜味劑的甜味,諸如:竹芋蛋白、莫尼糖蛋白和溶菌酶等,但是無法抑制小分子的甜味劑的甜度,諸如:蔗糖、甘氨酸、D-苯丙氨酸、糊精、環(huán)氨酸鹽、阿斯巴甜和甜菊糖等。2008年該研究組還揭示:蛋清RfBP還可以作為苦味抑制劑,抑制諸如:鹽酸喹啉、柚(皮)苷、可可堿、咖啡因、Gly-Phe和苯甲地那銨等物質(zhì)的苦味。因此RfBP蛋白也許可用于降低食品或藥物的苦味。

    6 展望

    目前人們對于蛋清RfBP蛋白結(jié)構(gòu)與功能、其與核黃素結(jié)合過程關(guān)系等有了較為深入的了解,特別是其可選擇性地抑制蛋白類甜味劑的甜味并抑制苦味,該蛋白可有助于揭示甜味蛋白物質(zhì)、苦味物質(zhì)結(jié)構(gòu)與活性之間的關(guān)系以及人類甜味和苦味感知的機理。

    [1]Monaco H L.Crystal structure of chicken riboflavin-binding protein[J].The EMBO Journal,1997,16(7):1475-1483

    [2]WhiteHBIII,Merrill AHJr.Riboflavin-bindingproteins[J].AnnuRev Nutr,1988(8):279-299

    [3]White HB 3rd,Armstrong J,Whitehead C C.Riboflavin-binding protein.Concentration and fractional saturation in chicken eggs as a function of dietary riboflavin[J].Biochem J,1986,238(3):671-675

    [4]Mandeles S,Ducay E D.Site of egg white protein formation[J].J Biol Chem,1962,237(10):3169-3199

    [5]Norioka N,Okada T,Hamazume Y,et al.Comparison of the amino acid sequences of hen plasma,yolk and white riboflavin-binding proteins[J].J Biochem,1985,97(1):19-28

    [6]Rohrer J S,White HB III.Separation and characterization of the two Asn-linked glycosylation sites of chicken serum riboflavinbinding protein[J].Biochem J,1992,285(Pt 1):275-280

    [7]Hamazune Y,Mega T,Ikenaka T.Characterization of hen egg whiteand yolk-riboflavin binding proteins and amino acid sequence of egg whiteriboflavin bindingprotein[J].JBiochem,1984,95(6):1633-1644[8]Miller M S,Mas M T,White HB III.Highly phosphorylated region of chicken riboflavin binding protein:chemical characterization and 31P NMR studies[J].Biochem,1984,23(3):569-576

    [9]Li-chan E,Nakai S.Biochemical basis for the properties of egg white[J].Crit Rev Poultry biology,1989(2):21-58

    [10]Kraulis P J.MOLSCRIPT:a program to produce both detailed and schematic plots of protein structures[J].J Appl Crystallogr,1991,24(5):946-950

    [11]Hamazune Y,Mega T,Ikenaka T.Positions of disulfide bonds in riboflavin-binding protein of hen egg white[J].J Biochem,1987,101(1):217-223

    [12]Laskowski R A,MacArthur M W,Moss D S,et al.PROCHECK:a program to check the stereochemical quality of protein structures[J].J.Appl Crystallogr,1993,26(2):283-291

    [13]Amoresano A,Brancaccio A,Andolfo A,et al.The carbohydrates of the isoforms of three avian riboflavin-binding proteins[J].Eur J Biochem,1999,263(3):849-858

    [14]Stevens L.Egg proteins:what are their functions[J].Sci Prog,1996,79(Pt1):65-87

    [15]Massey V.The chemical and biological versatility of riboflavin[J].Biochem Soc Trans,2000,28(4):283-296

    [16]Zhong D,Zewail A H.Femtosecond dynamics of flavoproteins:charge separation and recombination in riboflavin (vitamin B2)-binding protein and in glucose oxidase enzyme[J].PNAS,2001,98(21):11867-11872

    [17]Kozik A.Disulfide Bonds in Egg-White Riboflavin-Binding Protein Chemical Reduction Studies[J].Eur J Biochem,1982,121(2):395-400

    [18]Kumosinski T F,Pessen H,Farrell H M.Structure and mechanism of action of riboflavinbinding protein:small-angle X-ray scattering,sedimentation,and circular dichroism studies on the holo-and apoproteins[J].Arch Biochem Biophys,1982,214(2):714-725

    [19]Wasylewsky M.Binding study of riboflavin-binding protein with riboflavin and its analogues by differential scanning calorimetry[J].J Prot Chem,2000,19(6):523-528

    [20]Marcin Wasylewski.Evaluation of riboflavin binding protein domain interaction using differential scanning calorimetry[J].Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-Proteins&Proteomics,2004,1702(2):137-143

    [21]Zhong D,Zewail A H.Femtosecond dynamics of flavoproteins:charge separation and recombination in riboflavin (vitamin B2)-binding protein and in glucose oxidase enzyme[J].PNAS 2001,98:11867-11872

    [22]McClelland D A,McLaughlin S H,Freedman R B,et al.The refolding of hen egg white riboflavin-binding protein:effect of protein disulphide isomerase on the reoxidation of the reduced protein[J].Biochem J,1995,311(Pt 1):133-137

    [23]White H B III,Nuwaysir E F,Komara S P,et al.Effect of riboflavinbinding protein deficiency on riboflavin metabolism in the laying hen[J].Arch Biochem Biophys,1992,295(1):29-34

    [24]Kenji Maehashi,Mami Matano,Azusa Kondo,et al.Riboflavin-Binding Protein Exhibits Selective Sweet Suppression toward Protein Sweeteners[J].Chem.Senses,2007,32(2):183-190

    [25]Kenji Maehashi,Mami Matano,Miho Nonaka,et al.Riboflavin-BindingProteinIsaNovelBitterInhibitor[J].ChemSenses,2008,33(1):57-63

    Properties and Functions of Riboflavin-binding Protein Originated from Chicken

    WU Zi-jian,TAO Lin
    (School of Biotechnology and Food Science,Tianjin University of Commerce,Tianjin Key Laboratory of Food and Biotechnology,Tianjin 300134,China)

    2010-06-11

    吳子?。?973—),男(漢),副教授,碩士,研究方向:生物活性物質(zhì)提取與應用。

    猜你喜歡
    核黃素二硫鍵蛋清
    拒絕“剩宴” 蛋清變貓頭
    學與玩(2022年10期)2022-11-23 08:32:12
    二硫鍵影響GH11木聚糖酶穩(wěn)定性研究進展
    基于質(zhì)譜技術(shù)的二硫鍵定位分析方法研究進展
    液相色譜質(zhì)譜對重組人生長激素-Fc(CHO 細胞)二硫鍵連接的確認
    蛋清寶寶獨立記
    分不開的蛋清與蛋黃
    二硫鍵在蛋白質(zhì)中的作用及其氧化改性研究進展
    中國飼料(2016年17期)2016-12-01 08:08:19
    治療口腔炎的核黃素
    亞硫酸氫鈉-過氧化氫超微弱化學發(fā)光體系用于核黃素檢測
    雞蛋清的生活小妙用
    欧美精品啪啪一区二区三区 | 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲免费av在线视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| www日本在线高清视频| 精品人妻1区二区| 亚洲第一青青草原| 国产福利在线免费观看视频| 免费不卡黄色视频| 午夜91福利影院| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲国产看品久久| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 99久久国产精品久久久| 亚洲色图综合在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 1024香蕉在线观看| 国产黄色免费在线视频| 夫妻午夜视频| 老司机在亚洲福利影院| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美日韩一级在线毛片| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 考比视频在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 少妇人妻久久综合中文| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 久久人人97超碰香蕉20202| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久免费观看电影| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日本91视频免费播放| 亚洲av电影在线进入| av福利片在线| 中文字幕av电影在线播放| 蜜桃国产av成人99| 国产一区二区三区综合在线观看| 中文欧美无线码| av天堂久久9| 国产精品一区二区精品视频观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产福利在线免费观看视频| 午夜久久久在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 国产一卡二卡三卡精品| tocl精华| 亚洲精品av麻豆狂野| 妹子高潮喷水视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 制服诱惑二区| 亚洲精品av麻豆狂野| 18禁观看日本| 久久国产精品大桥未久av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 在线观看舔阴道视频| www.自偷自拍.com| 亚洲av电影在线进入| 亚洲伊人久久精品综合| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 精品国产一区二区三区久久久樱花| bbb黄色大片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 少妇粗大呻吟视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 最新在线观看一区二区三区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 搡老岳熟女国产| 51午夜福利影视在线观看| 各种免费的搞黄视频| 无限看片的www在线观看| 在线观看人妻少妇| 国产福利在线免费观看视频| 国产高清videossex| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲第一青青草原| 在线观看免费午夜福利视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 黄频高清免费视频| 一级片'在线观看视频| 亚洲一区中文字幕在线| 国产av一区二区精品久久| 中国美女看黄片| 久久ye,这里只有精品| 99热全是精品| 十八禁网站网址无遮挡| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲专区字幕在线| 精品一品国产午夜福利视频| 国产成人影院久久av| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| bbb黄色大片| 搡老熟女国产l中国老女人| 丝袜喷水一区| 久久久久久久久久久久大奶| 成人影院久久| 悠悠久久av| 女人久久www免费人成看片| av福利片在线| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 男女午夜视频在线观看| 亚洲九九香蕉| 午夜久久久在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产一区二区激情短视频 | 国产成人系列免费观看| 午夜福利在线观看吧| 国产精品一区二区免费欧美 | 亚洲免费av在线视频| 五月天丁香电影| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产精品偷伦视频观看了| 午夜免费鲁丝| 亚洲伊人色综图| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美中文综合在线视频| 亚洲精品第二区| 深夜精品福利| 亚洲国产av新网站| 色老头精品视频在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 最黄视频免费看| 午夜日韩欧美国产| 免费少妇av软件| 老鸭窝网址在线观看| 精品第一国产精品| 亚洲全国av大片| 丝袜美腿诱惑在线| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 午夜两性在线视频| 国产精品一区二区在线观看99| 日韩大片免费观看网站| 一二三四在线观看免费中文在| 国产91精品成人一区二区三区 | 国产成人a∨麻豆精品| videos熟女内射| 黄频高清免费视频| 国产精品一区二区免费欧美 | 老司机福利观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 深夜精品福利| 十分钟在线观看高清视频www| 丝袜脚勾引网站| 亚洲第一青青草原| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美激情久久久久久爽电影 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| videos熟女内射| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 十八禁高潮呻吟视频| 大型av网站在线播放| 国产精品一区二区在线不卡| 悠悠久久av| 日韩欧美免费精品| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久精品国产a三级三级三级| 免费观看人在逋| 国产精品 欧美亚洲| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产伦人伦偷精品视频| av天堂久久9| 中文字幕制服av| 国产精品av久久久久免费| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲国产成人一精品久久久| 午夜福利在线免费观看网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲三区欧美一区| 99国产综合亚洲精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久精品94久久精品| 亚洲少妇的诱惑av| 1024视频免费在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产成人av教育| 女性被躁到高潮视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 极品人妻少妇av视频| 国产精品1区2区在线观看. | www.自偷自拍.com| 国产黄色免费在线视频| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品久久久人人做人人爽| av福利片在线| 久热爱精品视频在线9| 国产一区二区激情短视频 | 欧美日本中文国产一区发布| 免费在线观看黄色视频的| 丰满少妇做爰视频| 男人添女人高潮全过程视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲国产精品999| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产一区二区在线观看av| 9191精品国产免费久久| 日本91视频免费播放| 日韩欧美免费精品| 国产国语露脸激情在线看| 中文欧美无线码| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产亚洲av高清不卡| 午夜福利,免费看| 精品久久久久久电影网| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲成人免费av在线播放| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 操美女的视频在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产有黄有色有爽视频| 欧美国产精品一级二级三级| 国产精品1区2区在线观看. | 国产免费福利视频在线观看| bbb黄色大片| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 丝袜喷水一区| 亚洲黑人精品在线| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 97精品久久久久久久久久精品| 国产日韩欧美在线精品| 大陆偷拍与自拍| 亚洲成国产人片在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 中文字幕人妻丝袜制服| 久久香蕉激情| 老司机亚洲免费影院| 少妇精品久久久久久久| 国产成人影院久久av| 午夜日韩欧美国产| 天天影视国产精品| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产99久久九九免费精品| 天天影视国产精品| 国产欧美日韩一区二区精品| 美国免费a级毛片| 国产一卡二卡三卡精品| 99香蕉大伊视频| 国产精品欧美亚洲77777| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产深夜福利视频在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美另类一区| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久av网站| 丝袜人妻中文字幕| 一级毛片电影观看| 国产亚洲一区二区精品| 久久中文看片网| 亚洲人成电影观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 精品亚洲成a人片在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 91老司机精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 又大又爽又粗| 久久ye,这里只有精品| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久精品人人爽人人爽视色| 午夜老司机福利片| 91精品国产国语对白视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | videosex国产| 国产麻豆69| 一本大道久久a久久精品| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久久久久久久久久久大奶| 天堂8中文在线网| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 91av网站免费观看| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲中文字幕日韩| 国产在线视频一区二区| 国产麻豆69| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲精品一二三| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| netflix在线观看网站| 国产日韩欧美在线精品| 国产黄频视频在线观看| 美国免费a级毛片| 久久天堂一区二区三区四区| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 手机成人av网站| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 99九九在线精品视频| www.av在线官网国产| 搡老乐熟女国产| av欧美777| 最新在线观看一区二区三区| 涩涩av久久男人的天堂| 极品人妻少妇av视频| 午夜视频精品福利| 欧美日韩一级在线毛片| 中文字幕制服av| 香蕉国产在线看| 一二三四在线观看免费中文在| 在线看a的网站| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产99久久九九免费精品| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲成人国产一区在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久热这里只有精品99| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 新久久久久国产一级毛片| 午夜老司机福利片| 亚洲精品国产av蜜桃| 成人黄色视频免费在线看| 性色av一级| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲中文字幕日韩| 国产色视频综合| 国产亚洲av高清不卡| 母亲3免费完整高清在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 天天添夜夜摸| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜福利免费观看在线| 99久久综合免费| 国产一区二区激情短视频 | 黄频高清免费视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日韩欧美免费精品| 老司机深夜福利视频在线观看 | 少妇 在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 久久国产精品影院| av网站免费在线观看视频| 在线 av 中文字幕| 亚洲黑人精品在线| 亚洲国产精品成人久久小说| 69av精品久久久久久 | 久久亚洲精品不卡| 精品一区在线观看国产| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 91成年电影在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产欧美亚洲国产| 啦啦啦在线免费观看视频4| 91精品三级在线观看| 国产成人av激情在线播放| 宅男免费午夜| 黄色a级毛片大全视频| 99re6热这里在线精品视频| 久久影院123| 国产91精品成人一区二区三区 | 在线观看www视频免费| 亚洲五月婷婷丁香| 飞空精品影院首页| 欧美日韩福利视频一区二区| 丝瓜视频免费看黄片| 日本wwww免费看| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 欧美一级毛片孕妇| avwww免费| 国产激情久久老熟女| 精品一品国产午夜福利视频| 久久ye,这里只有精品| 宅男免费午夜| 脱女人内裤的视频| 亚洲av电影在线进入| 午夜91福利影院| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久久久网色| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲精品国产区一区二| 视频区图区小说| 亚洲伊人色综图| 夜夜夜夜夜久久久久| 日本91视频免费播放| 成年女人毛片免费观看观看9 | 成年人午夜在线观看视频| 欧美精品一区二区大全| 国产日韩欧美视频二区| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产欧美亚洲国产| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 大陆偷拍与自拍| 我要看黄色一级片免费的| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产成人精品久久二区二区免费| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 下体分泌物呈黄色| 久久精品成人免费网站| 动漫黄色视频在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 午夜精品国产一区二区电影| 极品人妻少妇av视频| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲国产中文字幕在线视频| 蜜桃在线观看..| 久久热在线av| 国产在线免费精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久精品国产亚洲av高清一级| 午夜91福利影院| 成年美女黄网站色视频大全免费| 下体分泌物呈黄色| 十八禁人妻一区二区| 韩国高清视频一区二区三区| 99香蕉大伊视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 两人在一起打扑克的视频| 成年av动漫网址| 操美女的视频在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 老司机亚洲免费影院| 一个人免费在线观看的高清视频 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 人人澡人人妻人| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久久精品区二区三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产熟女午夜一区二区三区| 午夜两性在线视频| 久久免费观看电影| 欧美性长视频在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 一个人免费在线观看的高清视频 | 久久久久久久久免费视频了| 嫩草影视91久久| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品免费视频内射| 高清黄色对白视频在线免费看| 丰满少妇做爰视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 91老司机精品| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产男人的电影天堂91| 亚洲成人免费av在线播放| 久久这里只有精品19| 亚洲精品国产av蜜桃| 久9热在线精品视频| 欧美日韩黄片免| 又大又爽又粗| 秋霞在线观看毛片| 91av网站免费观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 老司机深夜福利视频在线观看 | 9色porny在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 高清av免费在线| 亚洲第一av免费看| 视频区图区小说| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 成年人黄色毛片网站| 国产亚洲一区二区精品| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品一区二区免费欧美 | 欧美大码av| av天堂在线播放| 亚洲精品乱久久久久久| 美女中出高潮动态图| 国产精品欧美亚洲77777| 午夜福利一区二区在线看| 国产成人影院久久av| a级毛片黄视频| 日韩欧美免费精品| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品第一国产精品| 宅男免费午夜| 日本av手机在线免费观看| 国产91精品成人一区二区三区 | 一本久久精品| 国产av精品麻豆| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产精品久久久av美女十八| 少妇的丰满在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一区二区av电影网| 在线观看人妻少妇| av网站在线播放免费| 考比视频在线观看| 欧美大码av| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 国产91精品成人一区二区三区 | 啦啦啦中文免费视频观看日本| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久99热这里只频精品6学生| 日本精品一区二区三区蜜桃| 黑人欧美特级aaaaaa片| 91成人精品电影| 色综合欧美亚洲国产小说| 美女午夜性视频免费| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产深夜福利视频在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 国产成人欧美| 青草久久国产| 丰满饥渴人妻一区二区三| 成人黄色视频免费在线看| 成人av一区二区三区在线看 | a 毛片基地| a级毛片在线看网站| 欧美性长视频在线观看| 美女大奶头黄色视频| 少妇 在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 老司机靠b影院| 精品国产乱码久久久久久小说| 纯流量卡能插随身wifi吗| 后天国语完整版免费观看| 久久久久久人人人人人| 99香蕉大伊视频| 91字幕亚洲| 国产极品粉嫩免费观看在线| 久久久精品区二区三区| 69精品国产乱码久久久| 免费在线观看影片大全网站| 操出白浆在线播放| 91字幕亚洲| 99热网站在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产97色在线日韩免费| 在线观看一区二区三区激情| 欧美一级毛片孕妇| 成年动漫av网址| 制服人妻中文乱码| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产av国产精品国产| 色94色欧美一区二区| 在线观看舔阴道视频| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美性长视频在线观看| 永久免费av网站大全| 亚洲专区国产一区二区| 久久久久国内视频| 99热全是精品| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产一区二区在线观看av| 国产三级黄色录像| 一级毛片女人18水好多| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 精品国产国语对白av| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产精品偷伦视频观看了| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲av男天堂| 日韩精品免费视频一区二区三区| 91大片在线观看| 日韩三级视频一区二区三区| 色播在线永久视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产精品1区2区在线观看. | 男人爽女人下面视频在线观看| 国产精品 国内视频| 性色av一级| 一区二区av电影网| 亚洲第一青青草原| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产极品粉嫩免费观看在线| kizo精华| 免费日韩欧美在线观看| 99久久国产精品久久久| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 操出白浆在线播放| 蜜桃在线观看..| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产成人精品久久二区二区免费| 十八禁人妻一区二区| 亚洲第一av免费看| 精品高清国产在线一区| 国产黄频视频在线观看| 美女中出高潮动态图| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美xxⅹ黑人| 久热爱精品视频在线9| 麻豆国产av国片精品| 乱人伦中国视频| 亚洲国产欧美在线一区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 免费不卡黄色视频| 日韩电影二区| 国产成人av激情在线播放| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 热99久久久久精品小说推荐| 黄色毛片三级朝国网站| 久久精品国产亚洲av高清一级|