正交設(shè)計(jì)優(yōu)化尿素軟膏質(zhì)量控制工藝

陳渝軍，楊 杰，梅 艷，管紅珍，李琳琳

(武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心，湖北武漢 430016)

尿素軟膏作為皮膚外用藥，主要適用于皮膚角化癥、手足皸裂、干皮癥、魚鱗病等。其主要成分為尿素，可溶解角蛋白，增加蛋白質(zhì)的水合作用，從而使角質(zhì)軟化和溶解。我院制劑室配制的尿素軟膏是臨床皮膚科常用的藥物。本文采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，根據(jù)中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范[1]收載的紫外分光光度法測(cè)定尿素的含量方法，考察提取次數(shù)、水浴溫度、加10%氯化鈉溶液量及提取時(shí)間的影響，確定尿素軟膏中尿素質(zhì)量控制的最佳提取工藝。

1 儀器與試藥

UV-160A紫外分光光度計(jì)（日本島津）；AB204十萬(wàn)分之一電子分析天平（瑞士梅特勒托利多）。尿素對(duì)照品（中國(guó)生物制品檢定所，批號(hào)：100288-200201）；尿素（湖南省芙蓉聯(lián)合制藥廠，批號(hào)：20080712），甘油、羊毛脂、凡士林等輔料均為藥用級(jí)，其余均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

影響提取工藝的因素主要有：提取次數(shù)、水浴溫度、加10%氯化鈉溶液量及提取時(shí)間等因素，各取三個(gè)水平，按L9（34）設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。 見(jiàn)表 1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平Tab.1 The different factors of orthogonal test

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 專屬性試驗(yàn) 按處方相當(dāng)于尿素25 mg的量的尿素、甘油、羊毛脂、凡士林分別用10%氯化鈉溶液溶解定容于100 ml量瓶中，分別于350～600 nm處掃描，見(jiàn)圖1，在此范圍均無(wú)吸收；分別按照“2.2.3”項(xiàng)下規(guī)定自“精密量取”到“15 min”操作并同樣掃描，見(jiàn)圖2，可見(jiàn)僅尿素在此范圍內(nèi)有吸收，且其最大吸收波長(zhǎng)為430 nm。故本文選擇430 nm為尿素含量的測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取尿素對(duì)照品適量，用10%氯化鈉溶液溶解成0.25 g/L的溶液，備用。按照“2.2.3”項(xiàng)下規(guī)定自“精密量取”到“15 min”操作并在430 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以其吸收度對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程C=220.7413A-0.4864（r=0.9999，n=7）。 結(jié)果，尿素檢測(cè)濃度在50～350 μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.2.3 含量測(cè)定 精密稱取樣品0.25 g，按表2所列條件進(jìn)行提取，合并提取液，定容至100 ml作供試品溶液。精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各4 ml，分別置具塞試管中，各精密加入對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液4 ml，搖勻，暗處放置15 min，立即照紫外分光光度法，在430 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按（A供×C對(duì)）/（A對(duì)×C供）×100%計(jì)算尿素百分含量， 即得。方差分析見(jiàn)表3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 The results of orthogonal test

表3 方差分析結(jié)果Tab.3 The results of variance test

從表2結(jié)果可以看出，對(duì)于提取工藝影響大小順序?yàn)锽＞A＞D＞C；由表 3可知，A、B 因素水平變化對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，C、D因素對(duì)實(shí)驗(yàn)影響不大。結(jié)合直觀分析，擬定最佳提取工藝為A1B1C3D1，即精密稱取樣品0.25 g，采用提取次數(shù)4次、水浴溫度60℃、每次加15 ml 10%氯化鈉溶液提取15 min，合并提取液，定容至100 ml量瓶中，作供試品溶液。

2.3 提取工藝的驗(yàn)證試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：091208）5份，按最佳工藝提取測(cè)定尿素含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為理想，樣品編號(hào)1的尿素含量為92.45%；樣品編號(hào)2的尿素含量為97.47%；編號(hào)3的尿素含量為94.59%；編號(hào)4的尿素含量為98.03%；編號(hào)5的尿素含量為95.62%，所有數(shù)據(jù)的（±s）為（95.63±2.25）。

2.4 與《中國(guó)藥典》2005年版[2]方法比較

取樣品（批號(hào)：091208）適量（約相當(dāng)于尿素 50 mg），共5份，加乙醇20 ml，水浴加熱，溶解后置冰浴中冷卻30 min，過(guò)濾至100 ml量瓶中，用乙醇洗滌容器及濾器并入量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液。另精取尿素對(duì)照品適量，用乙醇稀釋成每毫升約含0.5 mg尿素，為對(duì)照品溶液。精密量取供試品與對(duì)照品溶液各3 ml，分別置25 ml量瓶中，各精密加對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液10 ml，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，暗處放置15 min，必要時(shí)濾過(guò)，立即照紫外分光光度法，在430 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。結(jié)果與優(yōu)選最佳工藝比較，兩種方法有顯著性差異，見(jiàn)表4。

表4 兩種提取方法結(jié)果比較Tab.4 Compare with two kinds of extract method

3 討論

在中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范收載了測(cè)定尿素乳膏含量的方法，沒(méi)有明確規(guī)定水浴溫度，然而在實(shí)際的操作過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其重現(xiàn)性并不理想，故在此對(duì)其提取的方法進(jìn)行了探討。

近幾年的文獻(xiàn)不管用何種方法提取均采用與對(duì)照品或原料對(duì)比計(jì)算尿素含量，本文在反復(fù)實(shí)驗(yàn)中探索也認(rèn)為反應(yīng)受外界條件影響較大，采用對(duì)比法計(jì)算尿素含量較為準(zhǔn)確，故在含量測(cè)定時(shí)也采用對(duì)比法計(jì)算。

《中國(guó)藥典》2005年版中尿素乳膏采用乙醇為溶劑一次提取，方法較為簡(jiǎn)單，但所用試劑成本較高，且與本文所選最佳工藝比較，結(jié)果有顯著性差異，以最佳工藝方法提取率高，更為接近真實(shí)值，故采用本文提取工藝更佳。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局.中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范[S].二版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1995:140.

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