海洛因依賴者血清中Th1和Th2細(xì)胞產(chǎn)生主要細(xì)胞因子水平的研究

何 軍 左 麗 (貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室,貴陽(yáng)550004)

阿片類物質(zhì)濫用現(xiàn)象已成為—個(gè)全球性健康和社會(huì)問(wèn)題,越來(lái)越引起人們的重視。阿片類物質(zhì)影響機(jī)體神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫、循環(huán)、代謝等各個(gè)器官系統(tǒng)的功能狀態(tài)[1,2],長(zhǎng)期吸食海洛因可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的降低,使機(jī)體對(duì)寄生蟲、病毒、細(xì)菌的機(jī)會(huì)感染率增高,同時(shí)長(zhǎng)期海洛因依賴者多交叉采用不潔凈注射器靜脈注射吸毒,使其遭受血源傳播性病原體如乙肝、丙肝、梅毒、HIV、炭疽等感染遠(yuǎn)高于正常人群[3,4]。早在1974年,Brown等[5]提出海洛因?qū)γ庖吖δ苡袚p傷作用的觀點(diǎn),表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著降低。Bhargara等[6]又發(fā)現(xiàn)海洛因可廣泛抑制機(jī)體細(xì)胞免疫功能,使淋巴細(xì)胞增殖和活性受抑制。

細(xì)胞因子作為細(xì)胞間信號(hào)傳遞分子,主要參與調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、免疫細(xì)胞分化發(fā)育、介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等。有學(xué)者認(rèn)為,細(xì)胞因子含量測(cè)定可作為了解機(jī)體免疫功能的一項(xiàng)重要指標(biāo)[7]。到目前為止,阿片類藥物影響機(jī)體的免疫功能主要從性別、年齡、吸毒方式等進(jìn)行研究,而排除常見(jiàn)血液性傳播病毒感染的海洛因依賴者,根據(jù)吸食海洛因時(shí)間長(zhǎng)短,檢測(cè)不同亞類T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的主要細(xì)胞因子來(lái)了解海洛因?qū)C(jī)體免疫功能的影響報(bào)道較少,本文做了相關(guān)研究,報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 受檢對(duì)象:海洛因依賴組:收集2009年1月～12月貴州省第二人民醫(yī)院美沙酮維持治療門診就診的海洛因依賴者共93例,其中男69例,女24例,年齡20～52歲,平均38.2歲。吸食海洛因時(shí)間平均8.0年,海洛因日均用量0.25～5.2克。全部患者海洛因?yàn)E用史明確,符合DSM-Ⅲ-R關(guān)于阿片類藥物依賴診斷標(biāo)準(zhǔn)。均排除HBsAg、HCV、HIV、TP陽(yáng)性(用ELISA法),全自動(dòng)生化分析儀排除肝功能異常(ALT＞40),腎功能異常(BUN、CRE、UA在參考范圍外),排除接受過(guò)美沙酮治療,6月內(nèi)使用免疫制劑。對(duì)照組:來(lái)自貴州省第二人民醫(yī)院體檢中心正常健康體檢者31例,其中男22例,女9例,年齡在21～50歲,平均年齡37歲。各例排除內(nèi)容同上。

1.2 主要試劑和儀器 主要的ELISA試劑盒為美國(guó)GBD公司原裝,試劑批號(hào):I015-50,I042-00。-40℃低溫冰箱(青島海爾公司),德國(guó)Eppendorf微量移液器,美國(guó)BIO-TEK ELX800UV酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀,北京普朗DNX-9620A電腦洗板機(jī),恒溫水浴箱(上海醫(yī)療器械七廠600型)。

1.3 研究方法 標(biāo)本收集:提供血樣者均空腹采集靜脈血4 ml于真空采血管,37℃水浴 30分鐘后,3 000 r/min離心15分鐘,取血清1.5 ml于Ep管,-40℃冰箱保存待測(cè)。測(cè)定方法:雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清IFN-γ、IL-4水平,按照試劑說(shuō)明書操作。

2 結(jié)果

2年以內(nèi)組、5-10年組、10年以上組海洛因依賴者血清IFN-γ水平均高于正常對(duì)照組(P＜O.O5),而血清IL-4水平均低于正常對(duì)照組(P＜0.05)。IFN-γ水平,2年以內(nèi)組低于5～10年組,兩組間有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05),而與10年以上組相當(dāng),兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異;5～10年組高于10年以上組,兩組間有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05)。IL-4水平,2年以內(nèi)組含量高于5～10年組,兩組間有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05);2年以內(nèi)組與10年以上組相當(dāng),兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)差異;5～10年組低于10年以上組,兩組間有統(tǒng)計(jì)差異(P ＜0.05,表 1,圖1 、2)。

表1 各組海洛因依賴者血清中Th1和Th2細(xì)胞產(chǎn)生主要細(xì)胞因子水平的比較(±s,pg/ml)Tab.1 Comparisons among theconcentrations of the cytokines produced mainly by Th1/Th2 cell in sera from theheroin addicts of different periods of time(±s,pg/ml)

表1 各組海洛因依賴者血清中Th1和Th2細(xì)胞產(chǎn)生主要細(xì)胞因子水平的比較(±s,pg/ml)Tab.1 Comparisons among theconcentrations of the cytokines produced mainly by Th1/Th2 cell in sera from theheroin addicts of different periods of time(±s,pg/ml)

Note:1)Compared with normal,P＜0.05;2)Compared with 5-10 yearsgroup,P＜0.05;3)Compared with over 10 yearsgroup,P＜0.05.

Cytokines Heroin addicts groups Within 2 years 5-10 years Over 10 years Normal group IFN-γ 108.52±25.841)2) 133.13±36.351)3) 113.4±38.171) 88.73±33.94 IL-4 129.18±83.421)2) 76.35±47.011)3) 139.74±111.371) 251.50±58.01

圖1 吸食海洛因2年內(nèi)、5-10年、10年以上和正常人血清IFN-γ、IL-4水平比較Fig.1 Comparison of concentrations of IFN-γand IL-4 in sera between the groups of heroin addicts of within 2 years,5-10 years,over 10 years and the normal group

3 討論

海洛因是阿片類衍生物,與阿片受體結(jié)合后發(fā)揮作用,人體內(nèi)包括免疫細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞表面廣泛表達(dá)阿片受體。當(dāng)海洛因作為外源性阿片物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體后,影響機(jī)體的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò),使機(jī)體的免疫系統(tǒng)的固有免疫、細(xì)胞免疫和體液免疫功能嚴(yán)重受損[8]。Vallejo等[9]認(rèn)為外源性海洛因通過(guò)下丘腦-垂體-腎上腺軸和自主神經(jīng)系統(tǒng)抑制免疫功能,至少部分由中樞、外周神經(jīng)和免疫細(xì)胞的阿片受體介導(dǎo)。Saurer等[10]證實(shí)神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)伏核作為海洛因的神經(jīng)基質(zhì)參與誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)改變。細(xì)胞因子作為免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵性介質(zhì),與神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)聯(lián)系緊密,故研究海洛因依賴者血清細(xì)胞因子水平對(duì)了解海洛因影響機(jī)體免疫功能有重要意義。

人體的免疫系統(tǒng)存在復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制,其中T細(xì)胞亞群對(duì)于免疫應(yīng)答的方向和結(jié)果有著非常重要的意義[11]。CD4+T細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體適應(yīng)性免疫功能的重要組成部分,根據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞因子及生物學(xué)功能的不同分為Thl、Th2細(xì)胞等。Th1細(xì)胞主要產(chǎn)生IFN-γ等細(xì)胞因子,Th2細(xì)胞主要產(chǎn)生IL-4等細(xì)胞因子,IFN-γ和IL-4相互拮抗,調(diào)控Th1和Th2細(xì)胞的擴(kuò)增和功能。

本實(shí)驗(yàn)觀察在海洛因依賴者吸食海洛因三個(gè)時(shí)間段IFN-γ水平均高于正常對(duì)照組,與目前國(guó)內(nèi)外研究的吸毒者IFN-γ水平降低存在一定差異[12],但與嗎啡依賴大鼠的報(bào)道一致[13],而IL-4水平均低于正常對(duì)照組,與研究文獻(xiàn)報(bào)道一致[12,14,15],與另一些研究文獻(xiàn)報(bào)道也存在差異[16,17],各研究報(bào)道不一致,可能為研究方法不同或吸毒方式、吸毒者年齡、性別不同及物種不同等有關(guān),有待進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)觀察從2年以內(nèi)、5～10年到10年以上海洛因依賴者血清中T細(xì)胞產(chǎn)生主要細(xì)胞因子的變化,IFN-γ水平逐漸降低,IL-4水平從降低到升高改變。IFN-γ水平的升高和IL-4水平的降低提示Th1細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能亢進(jìn),抑制Th2細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫功能,導(dǎo)致Th1/Th2平衡紊亂。Th細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,主要包括Th1和Th2,Th1細(xì)胞主要分泌的IFN-γ,促進(jìn)MHC分子表達(dá)和抗原遞呈,溶解病毒感染的單核細(xì)胞,同時(shí)釋放大量的細(xì)胞因子,血清IFN-γ的升高,提示T細(xì)胞的大量激活。IFN-γ還可刺激CTL細(xì)胞的增殖和分化,特異性殺傷病毒或胞內(nèi)寄生病原體感染的靶細(xì)胞。Th2細(xì)胞主要分泌的IL-4,促進(jìn)B細(xì)胞的活化、增殖、分化,抗體的產(chǎn)生和IgE類別轉(zhuǎn)換,可抑制Th1類細(xì)胞因子產(chǎn)生。Th1和Th2的調(diào)節(jié)對(duì)維持機(jī)體正常免疫功能至關(guān)重要[18],正常情況下,Th1/Th2通過(guò)分泌細(xì)胞因子發(fā)揮相互調(diào)節(jié)和彼此制約作用,Mosmann[19]認(rèn)為Th1與Th2的平衡是決定身體免疫狀態(tài)的基礎(chǔ),Th1與Th2比值發(fā)生偏移,將導(dǎo)致機(jī)體的某一種反應(yīng)占優(yōu)勢(shì),繼而引起疾病。本研究海洛因依賴者的三個(gè)吸食海洛因時(shí)間段的Th1/Th2均高于正常對(duì)照組,說(shuō)明海洛因依賴者的Th1/Th2處于失衡狀態(tài)。尤其海洛因依賴5～10年間時(shí)表現(xiàn)更為顯著,表現(xiàn)體液免疫功能嚴(yán)重缺陷,此時(shí),增加了病原體入侵機(jī)體并使之感染的風(fēng)險(xiǎn),分泌抗體減少,可能罹患病毒感染并使之消除的難度就更加大。吸食海洛因超過(guò)10年,機(jī)體表現(xiàn)IFN-γ分泌逐漸減少,IL-4產(chǎn)生相對(duì)升高,細(xì)胞免疫缺陷趨勢(shì)增加,機(jī)體感染細(xì)菌、病毒、寄生蟲的機(jī)會(huì)就會(huì)越來(lái)越大。多項(xiàng)研究表明,阿片肽系統(tǒng)一方面對(duì)機(jī)體Th1和Th2型細(xì)胞因子有調(diào)節(jié)作用,另一方面,細(xì)胞因子也同樣對(duì)阿片肽和阿片受體系統(tǒng)有調(diào)控作用[20]。

Th1、Th2細(xì)胞產(chǎn)生主要細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4在海洛因依賴者血清中水平改變明顯,證明海洛因依賴者存在Th1/Th2功能紊亂,特別是吸食5～10年間以Th1亢進(jìn),Th2降低為主。

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