飼料中蛋白質(zhì)與維生素B6水平及其互作對(duì)烏鱧蛋白質(zhì)代謝的影響

吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 王桂芹 李子平 牛小天 蘆洪梅

吉林省長(zhǎng)春市水產(chǎn)研究院 郭貴良 孫 麗

吉林省新立城水庫(kù)管理局 朱興華 李清華

維生素B6是維持機(jī)體正常代謝所必需的低分子有機(jī)化合物，可作為轉(zhuǎn)氨酶的輔酶參與機(jī)體蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝，在轉(zhuǎn)氨、脫氨和脫硫基以及催化氨基的分解與合成中發(fā)揮重要作用。餌料中維生素B6的缺乏會(huì)引起魚(yú)蝦的厭食和生長(zhǎng)不良等缺乏癥（Albrektsen 和 Sandnes，1995），特別是集約化養(yǎng)殖條件下，當(dāng)投喂高蛋白質(zhì)飼料時(shí)，維生素B6的不足可能引起氨基酸代謝的異常，并可影響魚(yú)、蝦等水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和氨基酸組成。肉食性魚(yú)類對(duì)蛋白質(zhì)的需求較高，相應(yīng)對(duì)維生素B6的需求也較高，二者之間可能存在相互作用（Giri等，1997）。本文旨在探討飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6水平對(duì)烏鱧蛋白質(zhì)代謝的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)日糧 以魚(yú)粉為蛋白質(zhì)源，以魚(yú)油、大豆油、糊精和面粉為能源、纖維素為填充物配制半精制日糧。試驗(yàn)共配制成由3個(gè)可消化蛋白（DP）水平（34.82%、38.78%和42.35%）和3個(gè)維生素B6水平（0、12 mg/kg 和 24 mg/kg 飼料）組合而成的9種的配合飼料。試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表 1，其中 L、M和 H分別表示含 34.82%、38.78%和42.35%可消化蛋白質(zhì)水平，數(shù)字1、2、3分別表示含0、12 mg/kg和24 mg/kg飼料。飼料原料經(jīng)粉碎過(guò)60目篩，按配方稱重、均勻混合，擠壓成直徑為1.5 mm顆粒，曬干后置于-4℃冰柜中保存、備用。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2 試驗(yàn)魚(yú)和飼養(yǎng)管理 生長(zhǎng)試驗(yàn)于2008年7月30日到2008年9月26日在東遼縣安西水庫(kù)池塘網(wǎng)箱（1.0 m×1.0 m×1.0 m）中進(jìn)行。烏鱧魚(yú)苗購(gòu)于沈陽(yáng)蘇家屯，飼養(yǎng)于土池中2個(gè)月，試驗(yàn)前2周，挑選規(guī)格整齊4000尾魚(yú)置于網(wǎng)箱中進(jìn)行馴養(yǎng)，期間從冰鮮雜魚(yú)逐漸過(guò)渡到配合飼料。待全部攝食配合飼料后開(kāi)始試驗(yàn)，試驗(yàn)開(kāi)始前先停飼24 h，稱重，隨機(jī)取魚(yú)放養(yǎng)，每種飼料3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放養(yǎng)100尾魚(yú)，持續(xù)飼養(yǎng)8周。試驗(yàn)期間水溫為23～30℃，pH為7.1±0.1，溶解氧大于5 mg/L，氨氮小于0.5 mg/L。試驗(yàn)期間記錄死魚(yú)數(shù)并稱重。

1.3 樣品收集與測(cè)定

1.3.1 樣品的收集和測(cè)定 生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，魚(yú)饑餓1 d，從每組中隨機(jī)取15尾，取出胃、全部腸道的前1/3和肝胰臟，剔除附著物，用去離子水清洗腸道內(nèi)容物，濾紙吸干，-20℃保存待測(cè)。

粗酶液的制備和蛋白酶活力的測(cè)定：樣品稱重，加入10倍體積的高純水勻漿，在4℃冰箱中靜置過(guò)夜，3000 r/min離心10 min，取上清液作為粗酶液，4℃保存、待測(cè)。在24 h內(nèi)測(cè)定完畢。采用福林-酚法測(cè)定蛋白酶活力。1個(gè)蛋白酶比活力單位定義為：pH 7.0（測(cè)定胃蛋白酶活性時(shí)pH為2.2）底物酪蛋白濃度為 20 mg/mL、（37±1）℃條件下保溫10 min，每毫克酶蛋白、每分鐘產(chǎn)生1 μg酪氨酸的酶量。

1.3.2 GPT和LDH酶活性分析 取肝胰臟和背側(cè)白肌，測(cè)定其谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和乳酸脫氫酶的活性 （LDH）（其試劑盒購(gòu)自江蘇省南京建成生物研究所）。

1.4 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行雙因素方差分析，用Duncan’s多重比較分析組間差異顯著性程度。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對(duì)烏鱧蛋白酶比活力的影響 見(jiàn)表2。飼料蛋白質(zhì)水平極顯著影響胃、腸道和肝胰臟蛋白酶比活力（P<0.01），在同一維生素B6水平下，隨蛋白質(zhì)水平的提高，各器官蛋白酶比活力顯著提高。維生素B6極顯著影響胃和肝胰臟蛋白酶比活力（P<0.01），但對(duì)腸道蛋白酶比活力無(wú)顯著影響（P>0.05），飼料蛋白質(zhì)和維生素B6的交互作用對(duì)胃、腸道和肝胰臟蛋白酶比活力無(wú)顯著影響（P>0.05）。

2.2 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對(duì)烏鱧氨基酸代謝酶的影響 見(jiàn)表3。飼料蛋白質(zhì)水平極顯著影響肝胰臟和肌肉中乳酸脫氫酶的活力 （P<0.01），顯著影響肝胰臟和肌肉中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力（P<0.05），在同一維生素B6水平下，隨蛋白質(zhì)水平的提高，各器官乳酸脫氫酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力都顯著提高。維生素B6極顯著影響肝胰臟和肌肉中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力和肌肉中乳酸脫氫酶的活力（P<0.01），顯著影響肝胰臟乳酸脫氫酶的活力（P<0.05）。飼料蛋白質(zhì)和維生素B6的交互作用對(duì)各器官乳酸脫氫酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力無(wú)顯著影響（P>0.05）。

表2 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對(duì)烏鱧蛋白酶比活力的影響

表3 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對(duì)烏鱧肝胰臟和肌肉中氨基酸代謝酶的影響U/g

3 討論與小結(jié)

3.1 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對(duì)烏鱧蛋白酶的影響 消化酶活性是反映魚(yú)類消化機(jī)能的一項(xiàng)重要指標(biāo)，消化酶活性決定魚(yú)類對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收的能力，從而決定其生長(zhǎng)和發(fā)育的速度。對(duì)鯉（Kawai和 Ikeda，1972）、草魚(yú)（張家國(guó)等，1997；李廣麗和王義強(qiáng)，1994；黃耀桐和劉永堅(jiān)，1988）、兩棲胡子鯰（Mukhopadhyay，1997）、鱖魚(yú)（趙東海，2004）等研究都表明，蛋白酶活性的高低與飼料蛋白水平關(guān)系密切，在一定飼料蛋白質(zhì)水平范圍內(nèi)，蛋白酶活性隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加而升高，當(dāng)達(dá)到最適蛋白質(zhì)水平后，酶活性不再增加甚至?xí)陆担砻髟谝欢ǚ秶鷥?nèi)，適當(dāng)提高飼料蛋白質(zhì)水平，促進(jìn)胰臟分泌蛋白酶，將有助于腸道內(nèi)食物的消化吸收，同時(shí)適當(dāng)較多地?cái)z入蛋白質(zhì)，有利于魚(yú)體內(nèi)消化酶的合成，增強(qiáng)其新陳代謝水平，促進(jìn)組織蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)生長(zhǎng)。本研究結(jié)果也得到相同的結(jié)果。邢浩春（2005）研究表明，維生素B6缺乏可分別引起史氏鱘肝胰臟、胰腺胰蛋白酶活力下降。維生素B6是蛋白質(zhì)和氨基酸代謝相關(guān)酶的輔酶，在轉(zhuǎn)氨、脫羧、脫氨、脫巰基以及催化氨基酸分解與合成中起重要作用，維生素B6提高以5-磷酸吡哆醛為輔酶的轉(zhuǎn)氨酶活力，促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)合成；增強(qiáng)蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)代謝。

3.2 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對(duì)烏鱧氨基酸代謝酶的影響 所有氨基酸轉(zhuǎn)氨酶的輔酶均是磷酸吡哆醛，轉(zhuǎn)氨酶在機(jī)體生長(zhǎng)代謝中發(fā)揮著極其重要的作用，血清和組織中的丙氨酸和天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)移酶活性已被作為評(píng)價(jià)魚(yú)等體內(nèi)維生素B6狀態(tài)的指標(biāo)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性器官是肝胰臟和腎臟，谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性可作為魚(yú)肝胰臟、腎功能破壞 的檢測(cè) 指 標(biāo) （Shaik，2001；Shiau 和 Hsieh，1997）。維生素B6被認(rèn)為是蛋白質(zhì)維生素，因與氨基酸的代謝密切相關(guān)，缺乏會(huì)導(dǎo)致一些依賴磷酸吡哆醛的酶的活力下降，使得體內(nèi)氨基酸代謝異常。隨飼料中蛋白質(zhì)水平的升高，烏鱧肝胰臟GPT活性均呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，這可能是由機(jī)體對(duì)飼料蛋白質(zhì)的含量具有某種適應(yīng)機(jī)制導(dǎo)致的結(jié)果，因?yàn)镚PT為氨基轉(zhuǎn)移酶，直接參與消化吸收后進(jìn)入肝細(xì)胞中的氨基酸代謝過(guò)程 （Baker和Davis，2002）。由于維生素B6在轉(zhuǎn)氨基過(guò)程中的特殊作用，故各種組織和器官中轉(zhuǎn)氨酶活性可間接反映動(dòng)物體內(nèi)維生素B6的營(yíng)養(yǎng)狀況，且餌料中缺乏維生素B6可引起肌肉GOT活性的降低（Kissil等，1981；Smith 等，1974）。 本研究發(fā)現(xiàn)，添加維生素B6后肝胰臟GPT活性是未添加飼料組的1～2.0倍，其變化趨勢(shì)與飼料中維生素B6含量相吻合，說(shuō)明維生素B6作為轉(zhuǎn)氨酶的輔酶，與其活性的高低密切相關(guān)，在一定程度上也能反映機(jī)體蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)狀況。在本試驗(yàn)條件下，中高蛋白質(zhì)水平飼料中適當(dāng)添加維生素B6可促進(jìn)烏鱧蛋白質(zhì)代謝。

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