高效液相色譜法測定羥苯乙酯中水楊酸含量

張 琰，陳文秋，余敏靈

（1.四川省眉山市人民醫(yī)院，四川 眉山 620010； 2.四川省樂山食品藥品檢驗(yàn)所，四川 樂山 614000）

羥苯乙酯為藥用防腐劑，藥典中采用水楊酸與稀硫酸鐵銨溶液顯色進(jìn)行限量檢測[1]。筆者采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法對該制劑中的水楊酸進(jìn)行定量測定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

美國Waters 515 HPLC pump高效液相色譜儀；Waters 2487型紫外檢測器；Empower Pro數(shù)據(jù)處理工作站。水楊酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100106-200303）；羥苯乙酯（臺山市新寧制藥有限公司）；乙腈（色譜純）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；柱溫：40℃；流動相：0.05 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH=3.4）-乙腈（50 ∶50）；流速：1.00 mL/min；檢測波長：297 nm；進(jìn)樣量：5 μL。

2.2 溶液制備

稱取水楊酸對照品25.50 mg，置250 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得水楊酸貯備液。稱取羥苯乙酯（批號為20070101）5.625 0 g，置1 000 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得羥苯乙酯貯備液。精密量取水楊酸貯備液1 mL，羥苯乙酯貯備液5 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；另分別精密量取水楊酸貯備液1 mL，羥苯乙酯貯備液5 mL，分別置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為水楊酸對照品溶液和羥苯乙酯對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下各溶液分別進(jìn)樣。結(jié)果見圖1。供試品溶液與水楊酸對照品溶液色譜圖中，在相同保留時(shí)間位置上有相應(yīng)的色譜峰，且水楊酸色譜峰與羥苯乙酯色譜峰有較好的分離度，分離度為20.0，理論塔板數(shù)按水楊酸色譜峰計(jì)算為8 324。

線性關(guān)系考察：精密量取水楊酸貯備液 0.5，3，5.5，8，10.5，13 mL，分別置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液分別進(jìn)樣，以峰面積（A）與質(zhì)量濃度（C）作線性回歸，得回歸方程 A=1.909 2 ×104C-2.316 7 ×104，r=0.999 9（n=6）。結(jié)果表明，水楊酸質(zhì)量濃度線性范圍是0.51～13.26 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：精密量取同一批樣品，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果峰面積的 RSD為0.8%（n=5）。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密量取同一對照品溶液，依法測定。結(jié)果水楊酸峰面積變化不大，RSD為0.9%（n=5）。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量的羥苯乙酯適量（約0.2 g），分別置6個100 mL量瓶中，分別加入水楊酸貯備液，依法制備溶液并測定。結(jié)果見表1。

表1 水楊酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

穩(wěn)定性試驗(yàn)：將供試品溶液，于室溫放置0，2，4，8，16 h時(shí)分別測定。結(jié)果峰面積變化不大，RSD為0.8%（n=5）。

2.4 樣品含量測定

稱取4批樣品約0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果批號分別為20070101，20060805，20060302，20060107 的產(chǎn)品中水楊酸含量分別為0.030%，0.031%，0.023%，0.041%。

3 討論

該試驗(yàn)方法結(jié)果準(zhǔn)確，方便，快速，測定溶液穩(wěn)定，適用于羥苯乙酯中游離水楊酸的定量分析。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：910.