PHⅡ-7對人乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR體外殺傷活性和逆轉(zhuǎn)耐藥作用

師銳贊 張秀麗 楊銘 張硯君 彭洪薇 任思楣林陽 劉榮 李崴 熊冬生

1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所藥物室，天津 300020；2.山西醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，山西 太原 030001

PHⅡ-7對人乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR體外殺傷活性和逆轉(zhuǎn)耐藥作用

師銳贊1，2張秀麗1楊銘1張硯君1彭洪薇1任思楣1林陽1劉榮1李崴1熊冬生1

1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所藥物室，天津 300020；2.山西醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，山西 太原 030001

背景與目的：多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）是惡性乳腺癌化療失敗的主要原因，而ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的P-glycoprotein（P-gp）高表達(dá)是MDR的主要機(jī)制之一。因此研制能抑制P-gp表達(dá)及其功能的新型抗癌藥是目前研究的熱點(diǎn)。本研究旨在研究PHⅡ-7對人乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR體外抗瘤活性及逆轉(zhuǎn)耐藥的作用。方法：采用MTT法檢測PHⅡ-7、多柔比星（adriamycin，ADR）及二者聯(lián)合應(yīng)用對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR的IC50值；采用流式細(xì)胞儀測定PHⅡ-7對MCF-7及MCF-7/ADR細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用；采用逆轉(zhuǎn)錄PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測PHⅡ-7對多藥耐藥基因1（multidrug resistance gene 1，mdr1）表達(dá)水平的影響；通過流式細(xì)胞儀觀察PHⅡ-7處理前后，MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)Rhodamine123濃度的改變，分析PHⅡ-7對P-gp外排功能的影響。結(jié)果：PHⅡ-7對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞均有生長抑制作用，IC50值分別為（6.07±0.85）和（5.51±1.22）μmol/L；低濃度PHⅡ-7與ADR聯(lián)合應(yīng)用能增強(qiáng)其細(xì)胞毒作用，二者具有協(xié)同作用。PHⅡ-7可誘導(dǎo)MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞凋亡；在誘導(dǎo)凋亡過程中，PHⅡ-7可降低MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)mdr1基因的表達(dá)，抑制P-gp外排功能。結(jié)論：PHⅡ-7可誘導(dǎo)MCF-7/ADR凋亡，并具有對MCF-7相同的體外殺傷活性。PHⅡ-7可通過抑制P-gp的表達(dá)和功能逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR耐藥性。

PHⅡ-7； 多藥耐藥； mdr1； P-gp； 逆轉(zhuǎn)耐藥

乳腺癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一，發(fā)病率居女性腫瘤第二位?；熢谌橄侔┑木C合治療中起著不可替代的作用，而多藥耐藥性（multidrug resistance，MDR）是導(dǎo)致乳腺癌化療失敗的重要原因［1］。在未經(jīng)治療的乳腺癌病例中，耐藥比例可高達(dá) 50%，且該比例在治療過程中還會(huì)不斷升高，并可達(dá)75%。由于多藥耐藥導(dǎo)致化療失敗并由此引起的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，限制了腫瘤的有效治療?？朔﨧DR的方法之一是使用逆轉(zhuǎn)劑。目前的逆轉(zhuǎn)劑多在體外實(shí)驗(yàn)中有效，在人體上則因血藥濃度尚未達(dá)到有效逆轉(zhuǎn)濃度時(shí)已產(chǎn)生嚴(yán)重不良反應(yīng)而無法應(yīng)用于臨床［2］。維拉帕米（verapamil）是應(yīng)用最早的MDR逆轉(zhuǎn)劑之一，但其不良反應(yīng)嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用，因此，尋找高效、低毒，作用靶點(diǎn)廣，逆轉(zhuǎn)作用顯著的腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑刻不容緩。

本研究所用PHⅡ-7是本研究室以靛玉紅為模板而設(shè)計(jì)合成的具有較高抗腫瘤活性且不良反應(yīng)較低的一種3-取代基氧化吲哚化合物（圖1）。PHⅡ-7經(jīng)體外研究證實(shí)除對人乳腺癌細(xì)胞具有較強(qiáng)殺傷作用外，對其多藥耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR則具有耐藥逆轉(zhuǎn)的作用。應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，對其殺傷及逆轉(zhuǎn)作用進(jìn)行了初步探討。因此，本研究以維拉帕米作為陽性對照藥物，衡量PHⅡ-7的逆轉(zhuǎn)作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 藥物和試劑 PHⅡ-7由本實(shí)驗(yàn)室合成，溶于DMSO中，配制成1 mg/mL貯存液，使用時(shí)用0.9%的NaCl溶液稀釋至所需濃度。RPMI 1640購于Gibco BRL公司；新生牛血清由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所保存；維拉帕米、MTT和多柔比星（adriamycin，ADR）購自Sigma公司；Annexin V/PI凋亡試劑盒購自BD公司；TRIzol試劑購自美國Invitrogen公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR所用 SYBR?Premix Ex TaqTM 購自TaKaRa公司。

1.1.2 細(xì)胞培養(yǎng) 人乳腺癌細(xì)胞（MCF-7）和多柔比星誘導(dǎo)的耐藥細(xì)胞系（MCF-7/ADR）由本研究室培養(yǎng)傳代，采用10%新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液，在37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。MCF-7/ADR細(xì)胞高表達(dá)P-gp蛋白。為維持其耐藥性，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，向MCF-7/ADR細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入1 μg/mL的ADR，實(shí)驗(yàn)前2周撤藥。

1.2 方法

1.2.1 MTT法測ADR、PHⅡ-7體外抗腫瘤活性 各取細(xì)胞密度為2.5×104個(gè)/mL的對數(shù)生長期MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞，接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔180 μL，24 h后加入20 μL不同濃度的ADR（0~350 μmol/L）和PHⅡ-7（0~15 μmol/L），對照孔加入20 μL 0.9%NaCl溶液。繼續(xù)培養(yǎng)72 h，向每孔加入20 μL MTT，避光溫育4 h后，棄上清液，每孔加入200 μL DMSO，振蕩混勻后于酶標(biāo)儀上波長546 nm處測吸光度。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次計(jì)算平均半數(shù)抑制濃度（50% concentration of inhibition，IC50值），并計(jì)算耐藥倍數(shù)（resistant fold）。耐藥倍數(shù)=IC50 MCF-7/ADR/IC50 MCF-7。

1.2.2 MTT法測ADR及與PHⅡ-7聯(lián)合應(yīng)用的體外抗腫瘤活性 取3.0×104個(gè)/mL的對數(shù)生長期MCF-7/ADR細(xì)胞，接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔160 μL，加入20 μL不同濃度的ADR（0~350 μmol/L）和20 μL固定濃度的PHⅡ-7（0.5、1和2 μmol/L）或10 μmol/L維拉帕米，其余操作同上，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次計(jì)算平均IC50值，并計(jì)算耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)（fold-reversal of MDR）。耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)由逆轉(zhuǎn)倍數(shù)由單獨(dú)應(yīng)用ADR時(shí)MCF-7/ADR細(xì)胞IC50值除以與PHⅡ-7（或維拉帕米）合用時(shí)MCF-7/ADR IC50值計(jì)算得到：耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)=IC50ADR/ IC50（ADR+PHⅡ-7或維拉帕米）。

1.2.3 細(xì)胞凋亡測定 對數(shù)生長期的MCF-7、MCF-7/ADR細(xì)胞，經(jīng)2 μg/mL（7.5 μmol/L）PHⅡ-7處理12 h后，參照Annexin V /PI雙染凋亡試劑盒操作說明書操作。0.25%胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，用100 μL Binding buffer將待測細(xì)胞的密度調(diào)整為5 × 105~1 ×106個(gè)細(xì)胞懸液，加入5 μL Annexin V-FITC標(biāo)記液和5 μL PI，輕輕混勻。避光室溫染色15 min，400 μL Binding buffer重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀（FACS calibur，BD）測定各組細(xì)胞發(fā)生凋亡的百分?jǐn)?shù)。

1.2.4 逆轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real time PCR）檢測mdr1基因的表達(dá)水平

1.2.4.1 引物設(shè)計(jì)與合成 根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫提供的多藥耐藥基因1（multidrug resistance gene1，mdr1）基因序列信息，采用Premier5.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物，經(jīng)BLAST分析，由Invitrogen公司合成。β-actin引物為：上游5’-CTACAA TGAGCTGCGTGTGGC-3’；下游5’-CAGGTCCAGACGCAGGATGGC-3’；片段長271 bp。mdr1引物為：上游5’-ATAATGCGACAGGAGATAGG-3’；下游5’-TTGCCATTGACT GAAAGAAC-3’，片段長度為133 bp。

1.2.4.2 RNA提取和cDNA合成 接種2.5×105個(gè)/mL的MCF-7/ADR細(xì)胞于6孔板中，每孔2 mL，用不同濃度的PHⅡ-7處理12 h后收集細(xì)胞，用TRIzol試劑提取細(xì)胞總RNA。獲得的總RNA用20 μL DEPC水溶解。紫外吸收法測定總RNA在吸光度260 nm和280 nm處吸收值，以計(jì)算其濃度和純度。取總RNA 2 μg，按Invitrogen公司MMLV First Strand cDNA Synthesis Kit說明書合成cDNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4.3 反轉(zhuǎn)錄PCR檢測mdr1基因的表達(dá)水平PCR擴(kuò)增條件為94 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，72℃ 50 s, 共30個(gè)循環(huán)。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離目的條帶和內(nèi)參，條帶經(jīng)紫外顯色灰度掃描，半定量檢測MCF-7/ADR細(xì)胞系中mdr1基因表達(dá)水平的改變。

1.2.4.4 實(shí)時(shí)定量PCR檢測mdr1基因的表達(dá)水平 采用Bio-Rad IQTM5儀進(jìn)行測定。內(nèi)參照GAPDH和mdr1的PCR反應(yīng)體系均為20 μL，上下游引物（10 μmol/L）各0.5 μL，cDNA（稀釋5倍）1 μL，2×SYBR premixture 10 μL，用ddH2O補(bǔ)至20 μL。反應(yīng)條件為95 ℃ 10 min，95 ℃變性15 s，55 ℃退火1 min，共40個(gè)循環(huán)。各組設(shè)2個(gè)平行孔，反應(yīng)結(jié)束后，設(shè)定閾值，軟件輸出Ct值。根據(jù)比較Ct值法公式 2-△△Ct，其中△△Ct=實(shí)驗(yàn)組（Ct目的基因-Ct管家基因）-對照組（Ct目的基因-Ct管家基因），獲得不同組間相關(guān)基因表達(dá)比值。

1.2.5 細(xì)胞內(nèi)Rhodamine123累積實(shí)驗(yàn) 取對數(shù)生長期的MCF-7/ADR細(xì)胞，經(jīng)（0.5、2 μmol/L）PHⅡ-7或陽性逆轉(zhuǎn)劑維拉帕米（10 μmol/L）處理24 h后收獲。在含有1 mg/mL Rhodamine123的培養(yǎng)液中37 ℃條件下振蕩溫育60 min，預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞2遍；流式細(xì)胞儀（FACS calibur，BD）測定細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度（mean fluorescenceintensity，MFI），Ex 488 nm，Em 530 nm，觀察PHⅡ-7對細(xì)胞內(nèi)Rhodamine123含量的影響。

1.3 統(tǒng)計(jì)處理 用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)作處理，數(shù)據(jù)以表示，均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)，多均數(shù)比較采用單因素方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 PHⅡ-7體外抗腫瘤活性 MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞經(jīng)不同濃度ADR（0~350 μmol/L）、PHⅡ-7（0~15 μmol/L）或二者聯(lián)合作用72 h后，采用MTT比色法觀察細(xì)胞生長抑制作用。結(jié)果顯示，ADR對MCF-7/ADR細(xì)胞的IC50值是MCF-7細(xì)胞的近40倍，而PHⅡ-7對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞均有生長抑制作用，IC50值接近，分別為（6.07±0.85）和（5.51±1.22）μmol/L（表1）。低濃度PHⅡ-7與ADR聯(lián)合化療具有協(xié)同殺傷作用，與維拉帕米的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)54.68相比，2 μmol/L PHⅡ-7的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)達(dá)250.55，可明顯提高ADR對MCF-7/ADR細(xì)胞的生長抑制作用（表2）。

表 1 ADR與PHⅡ-7單獨(dú)使用對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞增殖的抑制作用Tab. 1 Inhibitory effect of ADR and PHⅡ-7 on proliferation of MCF-7 and MCF-7/ADR cells

2.2 PHⅡ-7對細(xì)胞凋亡的影響 用藥物處理前，MCF-7與MCF-7/ADR細(xì)胞僅有少量出現(xiàn)凋亡，經(jīng)2 μg/mL（7.5 μmol/L）PHⅡ-7處理12 h后，F(xiàn)ITC-Annexin V/PI染色檢測結(jié)果顯示早期凋亡細(xì)胞明顯增高（圖2）。結(jié)合MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證實(shí)PHⅡ-7明顯抑制MCF-7、MCF-7/ADR細(xì)胞的增殖，促使細(xì)胞凋亡。

2.3 PHⅡ-7對MCF-7/ADR mdr1基因的影響

PHⅡ-7對MCF-7/ADR mdr1基因的抑制作用非常明顯（圖3）。經(jīng)從實(shí)時(shí)定量PCR相對定量結(jié)果看，0.5、1、2和4 μmol/L PHⅡ-7對mdr1的降低率依次為84.38%、98.35%、98.93%和100.00%，具有明顯的濃度依賴性。

表 2 ADR與PHⅡ-7聯(lián)合應(yīng)用對MCF-7/ADR細(xì)胞增殖的抑制作用Tab. 2 Inhibitory effect of combined ADR with PHⅡ-7 on proliferation of MCF-7/ADR cells

2.4 PHⅡ-7對MCF-7/ADR細(xì)胞Rhodamine123蓄積功能的影響 與維拉帕米相似（圖4A），經(jīng)0.5和2 μmol/L PHⅡ-7處理后的MCF-7/ADR細(xì)胞， Rhodamine123熒光波峰右移，細(xì)胞內(nèi)熒光明顯增強(qiáng)（圖4B）；提示PHⅡ-7可抑制MCF-7/ADR細(xì)胞P-gp泵的外排功能，增加Rhodamine123在細(xì)胞內(nèi)的蓄積。

3 討 論

腫瘤細(xì)胞對某一化療藥物產(chǎn)生耐藥后, 對其他化學(xué)結(jié)構(gòu)及作用機(jī)制不同的化療藥物也可產(chǎn)生交叉耐藥即為MDR。產(chǎn)生MDR的機(jī)制有多種,包括藥物外排（P-gp、MRP、BCRP和LRP等）、酶介導(dǎo)的耐藥機(jī)制（GST、Topo Ⅱ和PKC等）、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因（Bcl-2過表達(dá)，p53基因突變等）、轉(zhuǎn)錄因子及其他因素。

由P-gp介導(dǎo)的藥物外排是MDR產(chǎn)生的主要機(jī)制之一。P-gp屬于ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族，由多藥耐藥基因1（multidrug resistance gene1，mdr1）編碼，是一種相對分子質(zhì)量為170×103、具有能量依賴性“藥泵”功能的跨膜糖蛋白，能將細(xì)胞內(nèi)帶陽性電荷的親脂類化療藥物逆濃度泵至細(xì)胞外，使細(xì)胞內(nèi)化療藥物達(dá)不到有效作用濃度而產(chǎn)生耐藥性。這種由P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥稱為典型多藥耐藥（t-MDR）。因此研制能逆轉(zhuǎn)mdr1/P-gp，并能通過多途徑逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的新型抗癌藥已成為當(dāng)前腫瘤防治研究的熱點(diǎn)。

靛玉紅是中藥當(dāng)歸龍薈丸的有效成分，除用于抗慢性粒細(xì)胞白血病外，近年研究發(fā)現(xiàn)對多種實(shí)體瘤也有殺傷作用［3-5］。但因其水溶性差并能引起胃腸道問題，限制了其臨床應(yīng)用。因此，開發(fā)療效更強(qiáng)，不良反應(yīng)更少的靛玉紅衍生物成為研究熱點(diǎn)。

基于靛玉紅在化學(xué)結(jié)構(gòu)屬于氧化吲哚類這一事實(shí)，本研究設(shè)計(jì)合成了一系列氧化吲哚類衍生物：Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ類。經(jīng)構(gòu)-效分析后最終篩選出抗癌作用最強(qiáng)毒性最低的化合物：PHⅡ-7。前期研究發(fā)現(xiàn)，PHⅡ-7可抑制多種人腫瘤細(xì)胞的生長，且對多藥耐藥腫瘤細(xì)胞同樣有效［6］。本實(shí)驗(yàn)用乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞株為研究對象，結(jié)果表明， PHⅡ-7單獨(dú)應(yīng)用可誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡，當(dāng)與多柔比星聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，可大大提高M(jìn)CF-7/ADR對其的敏感性。與陽性對照藥維拉帕米相比，4 μmol/L PHⅡ-7具有非常強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)耐藥功能，相當(dāng)于維拉帕米的4.58倍。因多柔比星是P-gp的底物，因此，PHⅡ-7對多柔比星的增敏作用可能與P-gp有關(guān)。進(jìn)一步的研究表明，經(jīng)PHⅡ-7作用后，MCF-7/ADR細(xì)胞中mdr1 mRNA表達(dá)水平明顯降低，P-gp外排泵功能抑制，細(xì)胞內(nèi)Rhodamine123蓄積量明顯增高，表明PHⅡ-7可逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥。

此外，研究表明，P-gp除其泵功能外，還可能直接或間接地參與細(xì)胞的分子代謝、增殖和分化等方面的調(diào)控，具有潛在的多種生理功能［7-8］。P-gp還可介導(dǎo)耐藥細(xì)胞的凋亡抵抗。通過抑制激活Caspases來調(diào)節(jié)由多種因素誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，特別是依賴激活Caspases的細(xì)胞凋亡途徑［9-10］。這些發(fā)現(xiàn)為P-gp與凋亡在分子水平建立起了有機(jī)的聯(lián)系。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PHⅡ-7可以顯著抑制MCF-7/ADR細(xì)胞的增殖活性，并誘導(dǎo)其凋亡。而且與ADR聯(lián)合作用，能明顯增強(qiáng)ADR殺傷MCF-7/ADR細(xì)胞的能力，0.5、1和2 μmol/L的PHⅡ-7分別增加ADR殺MCF-7/ADR作用為21.48%、86.47%和99.60%。在誘導(dǎo)凋亡同時(shí)，PHⅡ-7可通過抑制P-gp表達(dá)和功能而逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR耐藥性。

綜上所述，筆者認(rèn)為，PHⅡ-7既可以誘導(dǎo)MCF-7/ADR細(xì)胞凋亡，又可降低mdr1基因表達(dá)，抑制P-gp外排泵功能，是一種通過多途徑逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的新型抗癌藥。

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In vitrocytotoxity and reversal effects of PHⅡ-7 in human multidrug-resistant breast cancer MCF-7/ ADR cells

SHI Rui-zan, ZHANG Xiu-li, YANG Ming, ZHANG Yan-jun, PENG Hong-wei, REN Simei, LIN Yang, LIU Rong, LI Wei, XIONG Dong-sheng(State Key Laboratory of Experimental Hematology, Institute of Hematology and Hospital of Blood Diseases, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China)

XIONG Dong-sheng E-mail：dsxiong@hotmail.com

Background and purpose：Multidrug resistance (MDR) is one of the major causes of progressive breast cancer chemotherapy failure. One of the major mechanisms of MDR is the overexpression of P-glycoprotein(P-gp). Therefore, the identification of novel agents which can inhibit the drug transporter function of P-gp or its expression is of utmost interest in cancer research. The aim of this study was to explore the antitumor and reversal effect of PHⅡ-7, natural products from traditional Chinese medicine (TCM).Methods：The cytotoxicity of PHⅡ-7 alone and combined application of PHⅡ-7 and adriamycin (ADR) on breast cancer cells were determined using MTT assay. Annexin V–FITC/PI apoptosis detection kit was used to observe the apoptosis-inducing effect of PHⅡ-7 in MCF-7 and MCF-7/ADR cells. The effect of PHⅡ-7 on mdr1 mRNA was determined by reverse transcription PCR and real time PCR, fl ow cytometer was used to measure the intracellular ADR accumulation.Results：PHⅡ-7 alone inhibited cell growth of MCF-7 and MCF-7/ADR cells with the IC50(6.07±0.85), (5.51±1.22)μmol/L, respectively when combined with ADR, PHⅡ-7 enhanced the cytotoxicity of ADR toward MCF-7/ADR cells. In addition, PHⅡ-7 induced apoptosis both on MCF-7 and MCF-7/ADR cells; PHⅡ-7 reversed the drug resistance to ADR in MCF-7/ADR cells by inhibiting mdr1 mRNA transcription and increasing the intracellular ADR accumulation.Conclusion：PHⅡ-7 displayed significant anti-proliferative and apoptosis-inducing effect on sensitive and multidrug resistant breast cellsin vitro. PHⅡ-7 reversed effectively MDR by blocking the drugs to be pumped out by inhibiting P-gp expression and function pathway.

PHⅡ-7; multidrug resistance; mdr1; P-gp; reverse resistance

R737.9

A

1007-3639(2010)05-0321-06

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No：30873091)。

熊冬生 E-mail:dsxiong@hotmail.com

2010-01-06

2010-02-23）