• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    夏枯草總黃酮的提取分離與自由基清除活性研究

    2010-03-23 02:04:51熊雙麗李安林
    食品科學(xué) 2010年22期
    關(guān)鍵詞:黃酮質(zhì)量

    熊雙麗,李安林

    (西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,四川 綿陽 621010)

    夏枯草總黃酮的提取分離與自由基清除活性研究

    熊雙麗,李安林

    (西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,四川 綿陽 621010)

    分析超聲波輔助提取對夏枯草總黃酮得率的影響,采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化總黃酮提取工藝,篩選適合于分離總黃酮的大孔吸附樹脂,最后研究其自由基清除活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn):超聲波輔助提取不能提高夏枯草總黃酮得率,最佳提取條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、料液比1:30(g/mL)、時(shí)間3h、溫度80℃,得率可達(dá)5.05%;大孔吸附樹脂AB-8適合于分離夏枯草總黃酮;紫外-可見光譜分析其可能為黃烷酮和雙氫黃酮醇類;隨質(zhì)量濃度增加,夏枯草總黃酮的DPPH自由基和羥自由基清除活性越接近VC,當(dāng)質(zhì)量濃度分別大于82μg/mL和0.83mg/mL時(shí),兩者的清除率都大于90%,顯著高于叔丁基羥基茴香醚。

    夏枯草;黃酮;自由基;分離純化

    抗氧化劑不僅能防止食品氧化,提高保鮮效果,還有許多預(yù)防和保健功能。由于合成抗氧化劑如BHT和BHA的安全性問題,以及人們對健康食品的要求,開發(fā)安全性的高活性天然抗氧化劑已成為當(dāng)前迫切的研究課題[1-3]。夏枯草(Prunella vulgaris Linn)主要含有三萜、甾醇、黃酮類、香豆素及糖類等,具有降壓、抗病毒、及抗腫瘤等多種藥理作用[4-6],為進(jìn)一步了解其化學(xué)成分與生物活性之間的關(guān)系和控制其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),對其多糖、三萜類化合物及香豆素研究甚多,而關(guān)于黃酮類化合物的提取分離及生物活性研究還處于相當(dāng)滯后的狀態(tài),廖麗等[7]發(fā)現(xiàn)不同居群夏枯草總黃酮含量變異幅度2.16%~10.29%。袁萍等[8]認(rèn)為非極性大孔吸附樹脂D-101適合用于夏枯草總黃酮的分離純化。杜輝等[9]卻發(fā)現(xiàn)弱極性大孔吸附樹脂AB-8適合于夏枯草總黃酮的分離。本實(shí)驗(yàn)首先分析超聲波輔助提取對夏枯草總黃酮得率的影響,再采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化夏枯草總黃酮提取工藝,再篩選適合于分離夏枯草總黃酮的大孔吸附樹脂,最后研究其對DPPH自由基和羥自由基清除活性,為夏枯草總黃酮的構(gòu)效關(guān)系及應(yīng)用研究提供一定參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    夏枯草 涪江中藥飲片廠。蘆丁對照品 南京替斯艾么中藥研究所;DPPH自由基(二苯代苦味肼基自由基)、叔丁基羥基茴香醚(BHA) Sigma公司;D-101、AB-8、X-5、DA-201 天津海光化工有限公司;乙醇、硝酸鋁、VC等(均為分析純)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    全溫振蕩培養(yǎng)箱 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司;紫外-可見近紅外分光光度計(jì) 日本島津公司;MODULYOD冷凍真空干燥機(jī) 美國ThermoSavant公司;UNICO7200型可見分光光度計(jì) 尤尼柯上海儀器有限公司;超聲波清洗器 昆山超聲儀器有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 夏枯草總黃酮的提取分離工藝流程

    夏枯草→60℃烘干,粉碎過40目篩備用→ 提取→抽濾→真空濃縮(50℃)→ 離心(4500r/min,15min)→石油醚萃取→取水層用大孔吸附樹脂分離→冷凍真空干燥,以分析自由基清除活性

    1.3.2 夏枯草總黃酮的超聲波輔助提取工藝分析

    提取溶劑乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%、料液比為1:30 (g/mL)時(shí),分別比較50、60、70、80℃條件下,超聲波輔助浸提15、30、60、120、180min對夏枯草總黃酮得率的影響,分析超聲波輔助提取是否適合于夏枯草總黃酮的提取。

    1.3.3 夏枯草總黃酮的提取工藝優(yōu)化

    實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),超聲波輔助提取不能增加夏枯草總黃酮得率,而且乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時(shí)間、料液比對夏枯草總黃酮得率影響較大。本研究以提取液中夏枯草總黃酮得率為指標(biāo),采用四因素三水平優(yōu)化夏枯草總黃酮的提取工藝,正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2。

    1.3.4 夏枯草總黃酮的測定

    蘆丁質(zhì)量濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線制作和總黃酮得率的計(jì)算[10]

    回歸方程:Y=0.931X+0.011 (R2=0.9991,Y=吸光度,X=蘆丁質(zhì)量/mg)。

    1.3.5 夏枯草總黃酮的分離[11-13]

    樹脂的預(yù)處理:將樹脂先用95%的乙醇浸泡4h,然后用乙醇洗至流出液加適量水無白色渾濁現(xiàn)象,再用去離子水洗盡醇味,再用5%鹽酸浸泡4h,濾過后去離子洗至近中性,最后用4%氫氧化鈉溶液浸泡4h,并用去離子水洗至中性備用。

    大孔吸附樹脂的吸附性能和解吸性能測定:準(zhǔn)確稱取經(jīng)預(yù)處理的樹脂1g(濾紙吸干)裝入100mL具塞磨口三角瓶中,精密加入一定質(zhì)量濃度的夏枯草總黃酮提取液25mL,置全溫振蕩培養(yǎng)箱振蕩吸附24h,取一定量上清液測定黃酮含量并計(jì)算樹脂吸附量和吸附率。在上述樹脂進(jìn)行飽和吸附后,將上清液濾去,然后各自加入95%乙醇25mL,并置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱震蕩解吸24h,吸取上清液測定解吸液中總黃酮質(zhì)量濃度并計(jì)算解吸率。吸附量(Q)、吸附率(E)和解吸率(X)分別按以下公式計(jì)算:

    式中:Ca為吸附前樣液中總黃酮質(zhì)量濃度/(mg/ mL);Cb為吸附后剩余液中總黃酮質(zhì)量濃度/(mg/mL);V為加入的原樣液體積/mL;m為樹脂質(zhì)量/g;Cm為(解吸液中總黃酮質(zhì)量濃度/(mg/mL);Vm為解吸液中的總黃酮質(zhì)量濃度/(mg/mL)。

    1.3.6 夏枯草總黃酮的紫外-可見光譜掃描分析

    將夏枯草總黃酮用95%乙醇配制成適當(dāng)質(zhì)量濃度的溶液進(jìn)行紫外-可見光譜掃描分析。

    1.3.7 DPPH自由基清除活性測定[14-15]

    首先向不同試管中分別加入去離子水或不同質(zhì)量濃度的被測樣品1mL,然后加入1.5mL DPPH乙醇溶液,混勻靜置30min后于517nm比色。同時(shí),為扣除樣品本身顏色,需用無水乙醇代替DPPH乙醇溶液測定各自吸光度。按下式計(jì)算DPPH自由基清除率(K)。

    式中:Ai為加試樣(夏枯草總黃酮、VC、BHA)反應(yīng)后DPPH溶液吸光度;Aj為不加DPPH,只加試樣(夏枯草總黃酮、VC、BHA)的溶液的吸光度;Ac為不加試樣,只加DPPH的溶液的吸光度。

    1.3.8 夏枯草總黃酮羥自由基清除活性測定[7]

    [7]的方法基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn),在各試管中依次加入6mmol/L FeSO4溶液0.6mL、去離子水或不同質(zhì)量濃度試樣(夏枯草總黃酮、VC、BHA)溶液2mL、6mmol/L H2O2溶液0.6mL,搖勻,靜置10min,再加入6mmol/L水楊酸溶液0.6mL,搖勻,靜置10min后于510nm處測得空白吸光度Ac和不同試樣(夏枯草總黃酮、VC、BHA)吸光度Ai。同時(shí)用水代替水楊酸時(shí)測得某試樣質(zhì)量濃度Aj。按下式計(jì)算夏枯草總黃酮的羥自由基清除率(R):

    表1 超聲波輔助提取對夏枯草總黃酮得率的影響Table1 Effect of ultrasonic-assisted extraction on extraction rate of flavonoids

    1.3.9 統(tǒng)計(jì)分析

    所得數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)的平均值,采用SPSS 13.0分析軟件進(jìn)行正交設(shè)計(jì)的方差分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 超聲波輔助提取對黃酮得率的影響

    由于超聲波的空化效應(yīng)、熱學(xué)和機(jī)械振動效應(yīng),往往會增強(qiáng)活性成分如黃酮、多糖和生物堿等的提取效率。而表1顯示,在不同溫度和不同時(shí)間條件下,超聲波輔助提取都不能增加夏枯草總黃酮得率,而且,得率在超聲波輔助提取條件下略有減少的趨勢。這可能與夏枯草總黃酮類型、存在形式和超聲波提取功率有關(guān),需要用可調(diào)頻率和功率的超聲波提取器進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證分析。

    2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果直觀分析和方差分析

    表2 L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table2 Design and results of orthogonal experiments

    從表2中的極差分析可知,影響黃酮得率因素的主次順序依次是料液比>提取溫度>提取時(shí)間>乙醇體積分?jǐn)?shù);最優(yōu)組合為A1B3C3D3,即料液比1:30、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、提取溫度為80℃、時(shí)間3h。

    正交試驗(yàn)的直觀分析法簡便、直觀、計(jì)算量小,但不能估計(jì)試驗(yàn)誤差,需要對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析。由表3可知,各因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響程度是料液比>提取溫度>提取時(shí)間>乙醇體積分?jǐn)?shù),料液比具有顯著性差異,這與直觀分析結(jié)果相吻合。

    表3 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)方差分析表Table3 Variance analysis of orthogonal experiments

    2.3 大孔吸附樹脂對夏枯草總黃酮的吸附效果

    在相同條件下,吸附樹脂的種類、結(jié)構(gòu)、表面積,以及孔隙率不同,不但吸附能力不同,其解吸能力也是不同的。表4表明,弱極性大孔吸附樹脂AB-8吸附容量最大,其值為55.65mg/g樹脂,解吸率為72.89%。非極性大孔樹脂D101和X-5的吸附容量和解吸率都顯著低于AB-8。極性大孔吸附樹脂DA-201的解吸率雖然最高,但其吸附量和吸附率都低于AB-8弱極性大孔吸附樹脂。綜合分析認(rèn)為AB-8適合于分離夏枯草總黃酮。

    表4 不同類型樹脂種樹脂對夏枯草總黃酮的吸附量及解吸率Table4 Effects of different macroporous resins on absorption and desorption rates of flavonoids

    2.4 夏枯草總黃酮的紫外可見光譜掃描曲線

    圖1 夏枯草總黃酮的紫外-可見掃描光譜曲線Fig.1 UV-visible spectral scanning of flavonoids from Prunella vulgaris Linn

    圖1 顯示,夏枯草總黃酮在275~295nm之間和300~330nm之間有吸收峰、肩峰,說明它們可能為黃烷酮和雙氫黃酮醇類。

    2.5 夏枯草總黃酮DPPH自由基和羥自由基清除活性

    圖2 不同抗氧化劑對DPPH自由基的清除活性Fig.2 Scavenging rates of different antioxidants on DPPH free radicals

    圖3 不同抗氧化劑對羥自由基的清除活性Fig.3 Scavenging rates of different antioxidants on hydroxyl free radicals

    圖2 、3顯示出夏枯草總黃酮、VC和BHA對DPPH自由基和羥自由基的清除率都隨質(zhì)量濃度升高而逐漸增加。對于DPPH自由基,在各試樣質(zhì)量濃度小于6μg/mL時(shí),清除率由大到小的順序分別為VC、BHA和夏枯草總黃酮,而當(dāng)試樣質(zhì)量濃度大于6μg/mL時(shí),夏枯草總黃酮的DPPH自由基清除率卻大于BHA,質(zhì)量濃度越高,清除率越接近于VC,當(dāng)質(zhì)量濃度超過82μg/mL時(shí),其DPPH自由基清除率超過90%,而BHA對DPPH自由基的清除率隨質(zhì)量濃度的增加而緩慢增加,在所測質(zhì)量濃度范圍內(nèi)的自由基清除率都小于80%。對于羥自由基,VC高于夏枯草總黃酮高于BHA,在質(zhì)量濃度為0.83mg/ mL時(shí),夏枯草總黃酮對羥自由基的清除活性接近VC,清除率大于92%,幾乎是BHA的1倍。

    3 結(jié) 論

    在不同時(shí)間和不同溫度條件下,超聲波輔助提取都不能增強(qiáng)夏枯草總黃酮得率。夏枯草總黃酮最佳提取工藝:乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、料液比1:30(g/mL)、時(shí)間3h、溫度80℃,得率5.05%。弱極性大孔吸附樹脂AB-8比非極性大孔吸附樹脂更適合于分離夏枯草總黃酮。該黃酮可能屬于黃烷酮和雙氫黃酮醇類。夏枯草總黃酮對DPPH自由基和羥自由基的清除活性都隨質(zhì)量濃度的升高而增加,質(zhì)量濃度越高,夏枯草總黃酮的自由基清除活性越接近VC,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于BHA。為進(jìn)一步了解夏枯草總黃酮與自由基清除活性的構(gòu)效關(guān)系,下一步需要通過化學(xué)或柱層析分離各類黃酮,并進(jìn)行活性和結(jié)構(gòu)分析。

    參考文獻(xiàn):

    [1]GALLARDO C, JIMENEZ L, GARCIA-CONESA M T. Hydroxycinnamic acid composition and in vitro antioxidant activity of selected grain fractions[J]. Food Chemistry, 2006, 99(3): 455-463.

    [2]CHANG W C, SEI C K, SOON S H, et al. Antioxidant activity and free radical scavenging capacity between Korean medicinal plants and flavonoids by assay-guided comparison[J]. Plant Science, 2002, 163(6): 1161-1168.

    [3]REBAI B A, WISSEM B, MOHAMED B S, et al. Antioxidant and free radical-scavenging properties of three flavonoids isolated from the leaves of Rhamnus alaternus L. (Rhamnaceae): A structure-activity relationship study[J]. Food Chemistry, 2009, 116(1): 258-264.

    [4]延璽木, 劉會青, 鄒永青, 等. 黃酮類化合物生理活性及合成研究進(jìn)展[J]. 有機(jī)化學(xué), 2008, 28(9): 1534-1544.

    [5]鄧斌, 蔣剛彪, 黃紅英, 等. 分光光度法測定夏枯草中總黃酮的含量[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2008, 19(7): 1608-1609.

    [6]袁萍, 黃艷萍. 正交試驗(yàn)優(yōu)選夏枯草中總黃酮的提取工藝[J]. 今日藥學(xué), 2008, 18(4): 70-71.

    [7]廖麗, 郭巧生, 劉麗, 等. 夏枯草總黃酮提取方法及其在居群間分布特征研究[J]. 中國中藥雜志, 2008, 33(6): 651-653.

    [8]袁萍, 黃艷萍, 李俊鋒. 大孔吸附樹脂對夏枯草總黃酮的分離純化工藝研究[J]. 中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2009, 15(3): 85-87.

    [9]杜暉, 陳曉青, 黃冰. 大孔吸附樹脂分離純化夏枯草總黃酮的工藝研究[J]. 中成藥, 2008, 30(9): 1294-1298.

    [10]熊雙麗, 李安林, 任飛, 等. 苦蕎和甜蕎麥粉及麥殼中總黃酮的提取和自由基清除活性[J]. 食品科學(xué),2009, 30(3): 118-122.

    [11]黃少偉, 池汝安, 張?jiān)椒? 等. 大孔吸附樹脂分離純化土茯苓總黃酮[J]. 中國中藥雜志, 2008, 33(10): 1133-1138.

    [12]葉春, 闞建全, 譚書明, 等. 魚腥草葉總黃酮的提取分離[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào), 2008, 24(10): 227-232.

    [13]王婷婷, 曹樹穩(wěn), 余燕影, 等. 大孔吸附樹脂吸附分離豐城雞血藤總黃酮的研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2008, 20(3): 477-481.

    [14]吳向陽, 范群艷, 仰榴青, 等. 匙羹藤粗多糖的提取及其清除羥自由基活性研究[J]. 食品科學(xué), 2008, 29(1): 107-110.

    [15]AL-DABBAS M M, AL-ISMAIL K, KITAHARA K, et al. The effects of different inorganic salts, buffer systems, and desalting of Varthemia crude water extract on DPPH radical scavenging activity[J]. Food Chemistry, 2007, 104(2):734-739.

    Extraction, Isolation and Free Radical-Scavenging Activity of Flavonoids from Prunella vulgaris Linn

    XIONG Shuang-li,LI An-lin
    (College of Life Science and Engineering, Southwest University of Science and Technology, Mianyang 621010, China)

    The aims of this study are to explore the effect of ultrasonic-assisted extraction on extraction rate of flavonoids from Prunella vulgaris Linn, optimize extraction processing of flavonoids using orthogonal experiments, screen appropriate macroporous resin for flavonoid purification, and investigate the scavenging capability of flavonoids on free radicals. Results indicated that ultrasonic-assisted extraction did not increase the extraction rate of flavonoids from Prunella vulgaris Linn. The optimal extraction conditions were ethanol concentration of 50%, material-liquid ratio of 1:30, extraction temperature of 80 ℃and extraction time of 3 h. The extraction rate of total flavonoids was up to 5.05% under the optimal conditions. Meanwhile, macroporous resin AB-8 was suitable for the separation of total flavonoids. UV-visible spectrum exhibited that flavanone and dihydroflavonol were the major components. The scavenging capability of total flavonoids from Prunella vulgaris Linn on DPPH and hydroxyl free radicals was a concentration-dependent manner, which was close to the scavenging capability of ascorbic acid and higher than that of tert-butylated hydroxyanisonle (BHA).

    Prunella vulgaris Linn;flavonoids;free radical;isolation and purification

    TQ929.2

    A

    1002-6630(2010)22-0194-04

    2010-01-09

    西南科技大學(xué)國防重點(diǎn)學(xué)科實(shí)驗(yàn)室重點(diǎn)培育項(xiàng)目(07JGZB18)

    熊雙麗(1977—),女,副教授,博士,研究方向?yàn)樘妓衔锱c生物技術(shù)。E-mail:lxberry225@yahoo.com.cn

    猜你喜歡
    黃酮質(zhì)量
    “質(zhì)量”知識鞏固
    桑黃黃酮的研究進(jìn)展
    質(zhì)量守恒定律考什么
    做夢導(dǎo)致睡眠質(zhì)量差嗎
    一測多評法同時(shí)測定腦心清片中6種黃酮
    中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:57:00
    HPLC法同時(shí)測定固本補(bǔ)腎口服液中3種黃酮
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:40
    MIPs-HPLC法同時(shí)測定覆盆子中4種黃酮
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:13
    關(guān)于質(zhì)量的快速Q(mào)&A
    DAD-HPLC法同時(shí)測定龍須藤總黃酮中5種多甲氧基黃酮
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:50
    質(zhì)量投訴超六成
    汽車觀察(2016年3期)2016-02-28 13:16:26
    超碰97精品在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美精品一区二区大全| 成人国产av品久久久| 日韩免费高清中文字幕av| 精品国产亚洲在线| 另类亚洲欧美激情| 欧美精品一区二区大全| av网站在线播放免费| 中文字幕高清在线视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 午夜福利,免费看| 精品福利永久在线观看| 成人三级做爰电影| 欧美性长视频在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜老司机福利片| 国产免费视频播放在线视频| 午夜视频精品福利| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产色视频综合| 国产高清videossex| 欧美日韩av久久| 日本欧美视频一区| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲国产av影院在线观看| 丁香六月欧美| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 99国产精品免费福利视频| 日韩大码丰满熟妇| av一本久久久久| 国产精品一区二区精品视频观看| 成年动漫av网址| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产欧美日韩精品亚洲av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 黄色丝袜av网址大全| 激情在线观看视频在线高清 | 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲精品在线美女| 国产xxxxx性猛交| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 免费看a级黄色片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 一夜夜www| 两性夫妻黄色片| 国产区一区二久久| 女人精品久久久久毛片| 国产在线精品亚洲第一网站| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 中文字幕精品免费在线观看视频| 高清欧美精品videossex| 亚洲 国产 在线| 久久中文看片网| 国产成人精品久久二区二区91| 电影成人av| 欧美日韩一级在线毛片| 老司机福利观看| 性少妇av在线| www.精华液| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 在线观看免费视频日本深夜| 999久久久精品免费观看国产| 不卡一级毛片| 久久久国产欧美日韩av| 宅男免费午夜| 大陆偷拍与自拍| 日本av免费视频播放| 日韩大片免费观看网站| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲专区字幕在线| 老熟妇仑乱视频hdxx| 考比视频在线观看| 18禁美女被吸乳视频| 最黄视频免费看| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 咕卡用的链子| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 三上悠亚av全集在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 国产有黄有色有爽视频| 老汉色∧v一级毛片| videosex国产| 黄网站色视频无遮挡免费观看| svipshipincom国产片| 69av精品久久久久久 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 高潮久久久久久久久久久不卡| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲国产av影院在线观看| 日韩欧美三级三区| 国产成人欧美| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲国产av新网站| 麻豆av在线久日| 欧美午夜高清在线| tube8黄色片| 婷婷成人精品国产| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品成人在线| 蜜桃在线观看..| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产在线精品亚洲第一网站| 又大又爽又粗| 天堂中文最新版在线下载| 少妇被粗大的猛进出69影院| 大型黄色视频在线免费观看| 丝袜美足系列| 人妻久久中文字幕网| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 深夜精品福利| 国产野战对白在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 一级片'在线观看视频| 大型av网站在线播放| 十八禁网站免费在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 在线观看免费高清a一片| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 老司机影院毛片| 人妻 亚洲 视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久久久国产一级毛片高清牌| 性色av乱码一区二区三区2| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一级黄色大片毛片| 美女福利国产在线| xxxhd国产人妻xxx| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 制服诱惑二区| 亚洲av日韩在线播放| 三级毛片av免费| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | tocl精华| 中亚洲国语对白在线视频| 成年人免费黄色播放视频| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 成人特级黄色片久久久久久久 | 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产亚洲av高清不卡| 丝袜美足系列| 一级毛片电影观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 在线观看免费午夜福利视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 亚洲 国产 在线| 丰满饥渴人妻一区二区三| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品国产国语对白av| 亚洲国产欧美网| 啦啦啦在线免费观看视频4| 欧美大码av| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 两性夫妻黄色片| 男女边摸边吃奶| 亚洲一码二码三码区别大吗| 成人免费观看视频高清| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产在线视频一区二区| 国产欧美亚洲国产| 亚洲精品美女久久av网站| 国产精品.久久久| 日韩欧美免费精品| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产福利在线免费观看视频| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| svipshipincom国产片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 一区二区av电影网| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 操出白浆在线播放| 大码成人一级视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 婷婷丁香在线五月| 高清av免费在线| www.精华液| 久久久久久久久免费视频了| 91老司机精品| 一级毛片女人18水好多| 91大片在线观看| 精品高清国产在线一区| 午夜激情久久久久久久| 国产单亲对白刺激| 狂野欧美激情性xxxx| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | www.999成人在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 深夜精品福利| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 午夜福利一区二区在线看| 成在线人永久免费视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 18禁美女被吸乳视频| 国产成人精品在线电影| 天堂动漫精品| 韩国精品一区二区三区| 欧美成人午夜精品| 欧美日韩av久久| 最近最新中文字幕大全电影3 | 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产在线免费精品| 岛国毛片在线播放| 久久中文字幕一级| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲三区欧美一区| 成人国产av品久久久| 一夜夜www| 亚洲专区中文字幕在线| 少妇 在线观看| 日韩免费av在线播放| 午夜福利一区二区在线看| 免费观看人在逋| 成人黄色视频免费在线看| 久久久国产一区二区| 国产成人精品久久二区二区免费| 在线观看66精品国产| 国产一区有黄有色的免费视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 嫁个100分男人电影在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 男男h啪啪无遮挡| 妹子高潮喷水视频| 国产主播在线观看一区二区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲伊人久久精品综合| av天堂久久9| 9热在线视频观看99| 无遮挡黄片免费观看| 99国产综合亚洲精品| 99热国产这里只有精品6| 2018国产大陆天天弄谢| 下体分泌物呈黄色| 在线观看免费视频网站a站| 久久久国产精品麻豆| 波多野结衣一区麻豆| 高清在线国产一区| 一级黄色大片毛片| 欧美黑人精品巨大| 最近最新中文字幕大全免费视频| 女人精品久久久久毛片| 真人做人爱边吃奶动态| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 宅男免费午夜| cao死你这个sao货| 中文字幕色久视频| 国产99久久九九免费精品| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲第一青青草原| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲成国产人片在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品一二三| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 少妇的丰满在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 无遮挡黄片免费观看| 国产av精品麻豆| 美女主播在线视频| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲熟女毛片儿| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 啦啦啦在线免费观看视频4| 麻豆乱淫一区二区| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲人成电影观看| www.精华液| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产xxxxx性猛交| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲国产中文字幕在线视频| 岛国在线观看网站| 亚洲成人免费av在线播放| 俄罗斯特黄特色一大片| 黄色片一级片一级黄色片| 怎么达到女性高潮| 热re99久久精品国产66热6| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产黄色免费在线视频| 黄色丝袜av网址大全| 欧美精品亚洲一区二区| 久久久精品免费免费高清| 成人手机av| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 麻豆av在线久日| 国产成人av激情在线播放| 久久久久久人人人人人| 成年人免费黄色播放视频| 99香蕉大伊视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 免费观看人在逋| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一本久久精品| 涩涩av久久男人的天堂| 18禁美女被吸乳视频| 日本一区二区免费在线视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 在线观看www视频免费| 天堂动漫精品| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产免费视频播放在线视频| av天堂在线播放| 性色av乱码一区二区三区2| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲熟女毛片儿| 欧美黄色片欧美黄色片| 免费人妻精品一区二区三区视频| www.精华液| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲第一青青草原| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 搡老乐熟女国产| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| av电影中文网址| 99re在线观看精品视频| 视频在线观看一区二区三区| 久久热在线av| 精品国产亚洲在线| 欧美日本中文国产一区发布| 国产国语露脸激情在线看| 精品少妇内射三级| 97在线人人人人妻| 狠狠狠狠99中文字幕| 黄色丝袜av网址大全| 悠悠久久av| 亚洲av电影在线进入| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久久国产一区二区| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 三级毛片av免费| 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美午夜高清在线| 免费观看a级毛片全部| 国产精品电影一区二区三区 | 麻豆成人av在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 黄色片一级片一级黄色片| 757午夜福利合集在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线 | 国产精品国产av在线观看| 夜夜爽天天搞| 淫妇啪啪啪对白视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 91av网站免费观看| www.精华液| 欧美亚洲日本最大视频资源| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产伦人伦偷精品视频| 国产片内射在线| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久国产精品麻豆| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美日韩黄片免| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品久久电影中文字幕 | 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲成人免费av在线播放| 一级,二级,三级黄色视频| 中文字幕高清在线视频| 一进一出好大好爽视频| 亚洲伊人久久精品综合| 一级黄色大片毛片| 亚洲成人免费av在线播放| cao死你这个sao货| 久久青草综合色| 91字幕亚洲| 男女之事视频高清在线观看| svipshipincom国产片| www.自偷自拍.com| 欧美在线一区亚洲| 国产一区二区 视频在线| 新久久久久国产一级毛片| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 大香蕉久久成人网| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 精品国产一区二区三区四区第35| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲国产成人一精品久久久| 久久精品成人免费网站| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 丝袜喷水一区| 女警被强在线播放| 91精品国产国语对白视频| 国产在线观看jvid| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 天堂动漫精品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产高清视频在线播放一区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 超碰成人久久| 久久中文看片网| 午夜成年电影在线免费观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 电影成人av| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜福利,免费看| 一级毛片电影观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 18禁国产床啪视频网站| 国产一区二区在线观看av| 又紧又爽又黄一区二区| 日韩欧美免费精品| 精品少妇久久久久久888优播| av欧美777| 欧美日韩成人在线一区二区| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| av电影中文网址| videosex国产| 我的亚洲天堂| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 精品国产乱码久久久久久小说| 老汉色∧v一级毛片| 成人免费观看视频高清| 一区在线观看完整版| 热99国产精品久久久久久7| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美日韩一级在线毛片| 国产精品亚洲av一区麻豆| 在线观看66精品国产| 91av网站免费观看| 日日爽夜夜爽网站| 人妻一区二区av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 999久久久精品免费观看国产| 久久精品成人免费网站| 国产成人欧美| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲av第一区精品v没综合| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 宅男免费午夜| www.精华液| 免费看a级黄色片| 亚洲人成电影免费在线| 日韩一区二区三区影片| 狠狠狠狠99中文字幕| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久久精品人妻al黑| 午夜成年电影在线免费观看| 丝袜喷水一区| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲熟女毛片儿| 满18在线观看网站| 大片免费播放器 马上看| 99国产精品免费福利视频| √禁漫天堂资源中文www| 精品亚洲成国产av| 一区二区av电影网| 悠悠久久av| 青草久久国产| av免费在线观看网站| 露出奶头的视频| 国产精品一区二区免费欧美| 久久亚洲精品不卡| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 中文字幕制服av| 制服诱惑二区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 大型av网站在线播放| 国产精品久久久久成人av| 一个人免费在线观看的高清视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 日韩欧美三级三区| 成人18禁在线播放| 国产一区有黄有色的免费视频| 性少妇av在线| 嫩草影视91久久| 99热国产这里只有精品6| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 一级片免费观看大全| av电影中文网址| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| netflix在线观看网站| 十八禁网站免费在线| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美午夜高清在线| 亚洲欧洲日产国产| 免费少妇av软件| 精品一区二区三区四区五区乱码| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久午夜亚洲精品久久| 999久久久精品免费观看国产| 久久精品亚洲av国产电影网| 曰老女人黄片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av| 午夜日韩欧美国产| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲久久久国产精品| 免费在线观看日本一区| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久影院123| 一进一出好大好爽视频| 欧美大码av| 国产精品二区激情视频| 黄片播放在线免费| 91精品三级在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 蜜桃在线观看..| 国产人伦9x9x在线观看| kizo精华| 亚洲情色 制服丝袜| 精品少妇黑人巨大在线播放| 怎么达到女性高潮| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 中文字幕最新亚洲高清| 宅男免费午夜| 久久久久久久久免费视频了| 免费在线观看完整版高清| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲av美国av| 青青草视频在线视频观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 日日爽夜夜爽网站| 五月开心婷婷网| 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 精品卡一卡二卡四卡免费| 叶爱在线成人免费视频播放| 午夜福利影视在线免费观看| 国产免费福利视频在线观看| 女性被躁到高潮视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 又紧又爽又黄一区二区| 青草久久国产| 黄色 视频免费看| 欧美日韩福利视频一区二区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 99久久国产精品久久久| 老熟女久久久| 国产97色在线日韩免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| 777米奇影视久久| 一区福利在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲男人天堂网一区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美乱码精品一区二区三区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久久久网色| 男女边摸边吃奶| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲熟女精品中文字幕| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲伊人久久精品综合| 丝袜喷水一区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 91国产中文字幕| 亚洲国产成人一精品久久久| 三级毛片av免费| 一个人免费看片子| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 国产精品 国内视频| 女同久久另类99精品国产91| 国产精品成人在线| 12—13女人毛片做爰片一| 无人区码免费观看不卡 | 免费在线观看黄色视频的| www.自偷自拍.com| 777米奇影视久久| 亚洲国产看品久久| 国产精品亚洲av一区麻豆| 91字幕亚洲| 首页视频小说图片口味搜索| 少妇精品久久久久久久| 多毛熟女@视频|