• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    南美白對(duì)蝦蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物過(guò)敏原消減效果研究

    2010-03-23 03:34:42王麗娟胡志和陳照麗吳海明
    食品科學(xué) 2010年17期
    關(guān)鍵詞:蛋白酶解豚鼠南美

    王麗娟,胡志和,周 汛,陳照麗,吳海明

    (1.天津市食品生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300134;2.天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院,天津 300134)

    南美白對(duì)蝦蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物過(guò)敏原消減效果研究

    王麗娟1,2,胡志和1,2,周 汛2,陳照麗2,吳海明2

    (1.天津市食品生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300134;2.天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院,天津 300134)

    采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶分解南美白對(duì)蝦的蛋白質(zhì),以消減其中的蛋白質(zhì)過(guò)敏原;應(yīng)用全身過(guò)敏反應(yīng)和離體回腸平滑肌過(guò)敏性收縮實(shí)驗(yàn)?zāi)P停瑢?duì)該工藝蛋白酶酶解產(chǎn)物的致敏性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示,3種蛋白酶的蝦蛋白酶解產(chǎn)物所致的全身過(guò)敏反應(yīng)均明顯減輕(與蝦蛋白組比較,0.01<P<0.05或P<0.01);同時(shí),3種酶解產(chǎn)物致敏的離體回腸平滑肌對(duì)蝦蛋白和酶解產(chǎn)物過(guò)敏原攻擊的反應(yīng)也明顯減弱(與蝦蛋白致敏組比較,0.01<P<0.05或P<0.01)。綜合評(píng)價(jià)3種酶解產(chǎn)物的致敏性,認(rèn)為木瓜蛋白酶的酶解工藝較好,過(guò)敏原消減比較理想,食用更安全。

    南美白對(duì)蝦;胰蛋白酶;木瓜蛋白酶;菠蘿蛋白酶;過(guò)敏實(shí)驗(yàn)

    近年來(lái),食品安全問(wèn)題已成為人們普遍關(guān)心的問(wèn)題。其中食物過(guò)敏問(wèn)題也越來(lái)越受到人們的重視,它是某些嚴(yán)重過(guò)敏性疾病發(fā)病的誘因[1]。海產(chǎn)品作為人類(lèi)一種重要的食物性蛋白質(zhì)的來(lái)源,深受人們的喜愛(ài)。然而,蝦與蟹等甲殼類(lèi)動(dòng)物及其制品又是引起食物過(guò)敏較常見(jiàn)的一類(lèi)食品,且多數(shù)為終生過(guò)敏[2]。因此,研究蝦過(guò)敏及蝦過(guò)敏原,探索消減蝦過(guò)敏原的工藝技術(shù),進(jìn)一步為開(kāi)發(fā)低敏及脫敏的蝦類(lèi)制品奠定基礎(chǔ)。本研究通過(guò)觀察并比較南美蝦蛋白酶解產(chǎn)物的全身性過(guò)敏反應(yīng)及對(duì)豚鼠回腸平滑肌的致敏作用,以評(píng)價(jià)和比較蝦蛋白酶解工藝,尋找削減蝦蛋白過(guò)敏原的工藝技術(shù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    南美白對(duì)蝦(活) 市售。

    卵白蛋白(Ⅱ型) 美國(guó)Sigma公司;南美蝦蛋白、3種蝦蛋白酶解產(chǎn)物 實(shí)驗(yàn)室自制;撲爾敏(批號(hào)0903006)天津力生制藥股份有限公司。

    表1 全身過(guò)敏反應(yīng)致敏與激發(fā)方法Table 1 Sensitization and stimulation methods of general allergic reactions

    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    英國(guó)種Hartly豚鼠,體質(zhì)量170~250g,雌雄各半,由天津市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào)為SCXK津2005-0001。

    1.3 儀器與設(shè)備

    BL-420F生物信號(hào)采集系統(tǒng) 成都泰盟科技有限公司。

    1.4 方法

    1.4.1 南美白對(duì)蝦蛋白的制備

    將南美白對(duì)蝦去殼去頭去尾去腸線(xiàn)后放在勻漿器中勻漿,然后加入4倍體積的冷丙酮(-20℃預(yù)冷過(guò)夜),4℃、8000r/min離心15min,收集沉淀物,將沉淀物轉(zhuǎn)移至干凈的濾紙上,分散并讓其在室溫下空氣中風(fēng)干后粉碎,之后用抽提液(1mol/L KCl、0.5mmol/L DTT(1,4-dithiothreitol,pH7.4)按1:10的比例抽提過(guò)夜,再次4℃、8000r/min離心15min,取上清,沉淀用抽提液繼續(xù)抽提4h,離心取上清。透析過(guò)夜,兩次獲得的上清液合并后冷凍干燥,于-20℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.4.2 南美蝦蛋白酶解產(chǎn)物的制備

    將南美蝦蛋白用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶進(jìn)行分解,其酶解條件為胰蛋白酶:pH8.0,酶與底物比1:100,45℃,底物質(zhì)量濃度3g/100mL;木瓜蛋白酶:pH6.5,酶與底物比1:100,60℃,底物質(zhì)量濃度3g/100mL;菠蘿蛋白酶:pH7.5,酶與底物比1:100,55℃,底物質(zhì)量濃度5g/100mL。在酶解過(guò)程中,注意控制酶解液的pH值,酶解時(shí)間均為3h。酶解結(jié)束后,將酶解液pH值至中性,用80℃滅酶10min,冷凍干燥備用[3-4]。

    1.4.3 全身過(guò)敏反應(yīng)

    將48只豚鼠隨機(jī)分為8組,每組6只,雌雄各半。在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)1周后進(jìn)行初次致敏,激發(fā)時(shí)靜脈注射不成功者舍棄。各組的致敏與激發(fā)方法見(jiàn)表1。致敏期間每天兩次觀察豚鼠的反應(yīng),包括一般狀態(tài)、進(jìn)食、有無(wú)過(guò)敏反應(yīng)等。激發(fā)后立即觀察60min內(nèi)動(dòng)物的反應(yīng),觀察指標(biāo)及過(guò)敏反應(yīng)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2[5]。

    表2 豚鼠過(guò)敏反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Evaluation standards for allergic reactions in guinea pigs

    1.4.4 致敏豚鼠離體回腸平滑肌過(guò)敏性收縮實(shí)驗(yàn)

    將豚鼠隨機(jī)分為7組,每組4~5只。各組先用卵白蛋白等致敏物質(zhì)進(jìn)行致敏。致敏時(shí)進(jìn)行腹腔注射,每次1.0mL/只,隔日1次,共3次。末次注射后第14天進(jìn)行離體腸平滑肌過(guò)敏原攻擊實(shí)驗(yàn),取致敏豚鼠,放血處死,取出回腸一段,按離體器官裝置進(jìn)行描記,浴管內(nèi)均加入30mL臺(tái)氏液。待腸收縮曲線(xiàn)基線(xiàn)穩(wěn)定后,進(jìn)行過(guò)敏抗原攻擊,觀察、記錄腸收縮幅度[6],并比較各組腸收縮變化率。

    式中:F1為攻擊后的腸平滑肌收縮力/g;F0為攻擊前的腸平滑肌收縮力/g。

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    采用方差分析和t檢驗(yàn),所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以x±s表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 全身過(guò)敏反應(yīng)

    按照表1的分組和表2的評(píng)判指標(biāo)和評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),對(duì)卵白蛋白、南美蝦蛋白及其酶解產(chǎn)物各組豚鼠分別進(jìn)行致敏和激發(fā),在致敏和激發(fā)后密切觀察、記錄,并進(jìn)行評(píng)分。各組動(dòng)物全身過(guò)敏反應(yīng)的結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 動(dòng)物全身過(guò)敏反應(yīng)結(jié)果與評(píng)分Table 3 Results and scores of general allergic reactions in guinea pigs

    由表3可以看出,南美蝦蛋白存在有明顯的過(guò)敏反應(yīng),表現(xiàn)為Ⅰ型速發(fā)型變態(tài)反應(yīng),嚴(yán)重者出現(xiàn)過(guò)敏性休克而死亡,反應(yīng)與陽(yáng)性對(duì)照品卵白蛋白極其相似。而蝦蛋白酶解產(chǎn)物的過(guò)敏反應(yīng)則明顯減輕,不論用蝦蛋白致敏,還是用各種蝦蛋白酶解產(chǎn)物致敏,再分別用各種蝦蛋白酶解產(chǎn)物激發(fā)后的全身過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率均明顯降低,過(guò)敏反應(yīng)的表現(xiàn)均明顯減輕。

    2.2 致敏豚鼠離體回腸平滑肌過(guò)敏性收縮實(shí)驗(yàn)

    將卵白蛋白、南美蝦蛋白以及3種蝦蛋白酶解產(chǎn)物致敏并攻擊后的離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的變化匯總見(jiàn)表4。通過(guò)分析并比較各組腸平滑肌在攻擊前后收縮力的變化,評(píng)價(jià)各酶解產(chǎn)物過(guò)敏原消減的效果。

    表4 卵白蛋白、南美蝦蛋白以及3種酶解產(chǎn)物的致敏作用比較Table 4 Comparison of allergic effects of egg-white protein, South American white shrimp protein and its hydrolysates prepared with three proteases

    從表4及圖1中可以看出,用各蛋白酶酶解產(chǎn)物致敏后,無(wú)論用蝦蛋白過(guò)敏原攻擊還是用酶解產(chǎn)物進(jìn)行攻擊,腸平滑肌的收縮均較卵白蛋白和蝦蛋白致敏組明顯減弱,而且腸平滑肌對(duì)相同濃度的撲爾敏反應(yīng)也較弱,經(jīng)撲爾敏作用后,致敏的腸平滑肌對(duì)酶解產(chǎn)物的攻擊反應(yīng)也減弱,說(shuō)明各酶解產(chǎn)物的致敏性明顯降低。剪輯腸收縮曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。

    圖1 致敏回腸平滑肌在過(guò)敏原攻擊前后的收縮曲線(xiàn)Fig.1 Contraction curves of isolated ileum smooth muscle before and after allergic attack

    3 討 論

    近年來(lái),國(guó)外有報(bào)道[7]稱(chēng)過(guò)敏性疾病的發(fā)生呈上升趨勢(shì),食品過(guò)敏是過(guò)敏性疾病的一種,可能成為某些嚴(yán)重過(guò)敏性疾病的誘因。國(guó)內(nèi)調(diào)查,健康人群自訴有食物過(guò)敏的占5.7%,其中皮膚點(diǎn)刺實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性者占自訴曾患食物過(guò)敏的33.5%,占被調(diào)查人數(shù)的1.9%[8]。與成人相比,兒童食物過(guò)敏的發(fā)生率較高,重慶地區(qū)0~24個(gè)月兒童,家長(zhǎng)自訴有食物過(guò)敏的為13.7%,被確診食物過(guò)敏的占5.7%[9]。在致敏的食物中,蝦及蟹等海鮮類(lèi)食品過(guò)敏的人較多,食用蝦等海產(chǎn)品過(guò)敏引起過(guò)敏性休克的病例并非罕見(jiàn)[10-11]。食物過(guò)敏是一個(gè)非常復(fù)雜的反應(yīng)過(guò)程,臨床數(shù)據(jù)顯示,90%以上的食物過(guò)敏屬于Ⅰ型(速發(fā)型)變態(tài)反應(yīng)[12],包括3個(gè)階段,即食物過(guò)敏原的致敏階段、激發(fā)階段和效應(yīng)階段。過(guò)敏體質(zhì)的人群,食入過(guò)敏原可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生IgE抗體[13];當(dāng)再次接觸該類(lèi)食物,過(guò)敏原與致敏肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞表面IgE抗體特異性結(jié)合,使之脫顆粒,釋放出組胺、5-羥色胺、白三烯等生物活性物質(zhì),作用于效應(yīng)組織和器官,引起局部或全身過(guò)敏反應(yīng)[14]。食物過(guò)敏可以累及全身許多臟器,如口腔、消化道、呼吸道、皮膚及心血管等,引起各種臨床表現(xiàn),如惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉,甚至出現(xiàn)呼吸困難、休克,進(jìn)而危及生命[15]。因此,設(shè)法消除蝦中的過(guò)敏原,讓人們吃的安全十分必要。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[16],多種蛋白酶能夠?qū)讱ゎ?lèi)動(dòng)物過(guò)敏原產(chǎn)生良好的降解作用。

    該實(shí)驗(yàn)工藝提取的蝦蛋白過(guò)敏原具有很強(qiáng)的過(guò)敏性,其過(guò)敏反應(yīng)的強(qiáng)度或效價(jià)與卵白蛋白相近,但全身過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生的速度較卵白蛋白稍慢(與卵白蛋白比較,P>0.05),證明該工藝提取蝦蛋白過(guò)敏原可行。用該蝦蛋白酶解的各種產(chǎn)物的全身過(guò)敏反應(yīng)及致敏的豚鼠回腸平滑肌收縮實(shí)驗(yàn)中,胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶酶解產(chǎn)物的致敏性均明顯降低,但均未能完全消除。綜合分析全身過(guò)敏反應(yīng)和豚鼠回腸平滑肌收縮實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,認(rèn)為木瓜蛋白酶酶解產(chǎn)物的反應(yīng)發(fā)生率較低,反應(yīng)的表現(xiàn)較輕,食用的安全性較高。下一步研究將放在優(yōu)化消減過(guò)敏原的工藝上,使蝦過(guò)敏原消減效果更加理想。

    [1] KULIG M, BERGMANN R, TACKE U, et al. Long-lasting sensitization to food during the first two years precedes allergic airway disease. The MAS Study Group, Germany[J]. Pediatr Allergy Immunol, 1998, 9 (2): 61-67.

    [2] ALTMAN D R, CHIARMAONTE L T. Public perception of food allergy[J]. Allergy Clin Immunol, 1996, 97(6): 1247-1251.

    [3] 王曉雯. 中國(guó)對(duì)蝦主要過(guò)敏原的鑒定及性質(zhì)的研究[D]. 青島: 中國(guó)海洋大學(xué), 2008.

    [4] 趙振興. 蝦過(guò)敏原免疫活性的研究[D]. 青島: 中國(guó)海洋大學(xué), 2006.

    [5] 徐叔云, 卞如濂, 陳修. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 3版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2003: 1411.

    [6] 徐叔云, 卞如濂, 陳修. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 2版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1991: 1200.

    [7] HUNSON L, TELEMO E. The growing allergy problerm[J]. Acta Paediatr, 1997, 86(9): 916-918.

    [8] 呂相征, 劉秀梅, 楊曉光. 健康人群食物過(guò)敏狀況的初步調(diào)查[J]. 中國(guó)食品衛(wèi)生雜志, 2005, 17(2): 119-121.

    [9] 胡燕, 黎海芪. 0~24個(gè)月兒童食品過(guò)敏的流行病學(xué)研究[J]. 中華兒科雜志, 2000, 38(7): 431-434.

    [10] 安愛(ài)芝, 孫月芹. 食坑蝦引起過(guò)敏性休克1例[J]. 醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐, 2003, 16(8): 87.

    [11] 許巖, 許紅. 食用蝦爬子引起過(guò)敏性休克1例[J]. 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2000, 2(2): 108.

    [12] TYALOR S L, SMUMER S S. Food allergies and related diseases and IFT outstanding symposium[J]. Food Technology, 1992, 46(5): 135-136.

    [13] LIN X P, MAGNUSSON J, AHLSTEDT S, et al. Local allergic reaction in food-hypersensitive adults despite a lack of systemic food-hypersensitive IgE[J]. J Allergy Clin Immunol, 2002, 109(5): 879-887.

    [14] COEFFIER M, LORENTZ A, MANNS M P, et al. Epsilon germ-line and IL-4 transcripts are expressed in human intestinal mucosa and enhanced in patients with food allergy[J]. Allergy, 2005, 60(6): 822-827.

    [15] BISCHOFF S, CROWE S E. Gastrointestinal food allergy: new insights into pathophysiology and clinical perspectives[J]. Gastroenterology, 2005, 128(4): 1089-1113.

    [16] SHIMAKURA K, TONOMURA Y, HAMADA Y, et al. Allergenicity of crustacean extractives and its reduction by protease digestion[J]. Food Chemistry, 2005, 91(2): 247-253.

    Elimination of Allergens in South American Shrimp by Protease Hydrolysis

    WANG Li-juan1,2,HU Zhi-he1,2,ZHOU Xun2,CHEN Zhao-li2,WU Hai-ming2
    (1. Tianjin Key Laboratory of Food Technology, Tianjin 300134, China;2. College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China)

    In order to eliminate the allergens in South American shrimp, proteases such as trypsin, papain and bromelain were individually used to hydrolyze South American shrimp proteins. General immunity experiments in allergic guinea pigs and allergic contraction experiments of isolated ileum were used to evaluate the allergenicity of hydrolysates. The results showed that hydrolysates from South American shrimp proteins digested by each of the three proteases could result in an obvious attenuation of general allergic reactions (Compared with the group of South American shrimp protein, 0.01<P<0.05 or P<0.01). Meanwhile, a reduced allergic contraction reaction of isolated ileum smooth muscle was observed in hydrolyzed South American shrimp proteins (Compared with the group of South American shrimp protein, 0.01<P<0.05 or P<0.01). Comprehensive evaluation exhibited that papain hydrolysates could provide an excellent elimination effect on allergens and higher food safety.

    South American white shrimp;trypsin; papain;bromelain;hypersensitive test

    TS201.6;R151.41

    A

    1002-6630(2010)17-0263-04

    2010-04-01

    “十一五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃重大項(xiàng)目(2008BAD94B09)

    王麗娟(1961—),女,教授,碩士,主要從事食品毒理學(xué)研究。E-mail:wljuan@tjcu.edu.cn

    猜你喜歡
    蛋白酶解豚鼠南美
    太平軍余部參戰(zhàn)在南美
    《豚鼠特工隊(duì)》:身懷絕技的動(dòng)物007
    南美熱帶雨林
    小布老虎(2016年8期)2016-12-01 05:46:30
    肺豚鼠耳炎諾卡菌病1例
    小麥蛋白酶解物中抗氧化肽的純化與鑒定
    黔南美
    做瑜伽的小豚鼠
    軍事文摘(2015年6期)2015-06-16 08:47:58
    做瑜伽的小豚鼠
    茶葉籽蛋白酶解物的制備及其抗氧化活性
    雞蛋蛋清蛋白酶解產(chǎn)物的研究進(jìn)展
    99香蕉大伊视频| videosex国产| 国产av精品麻豆| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 久久久久久久久久久久大奶| bbb黄色大片| 国产97色在线日韩免费| 久久 成人 亚洲| 欧美乱码精品一区二区三区| 九色亚洲精品在线播放| 97人妻天天添夜夜摸| 老熟妇仑乱视频hdxx| 美女免费视频网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| а√天堂www在线а√下载| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲av电影在线进入| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精华一区二区三区| 国产成人欧美在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| av免费在线观看网站| 亚洲专区中文字幕在线| 一区福利在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 国产极品粉嫩免费观看在线| svipshipincom国产片| 桃色一区二区三区在线观看| 久久青草综合色| 国产免费男女视频| 午夜成年电影在线免费观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 黄片大片在线免费观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看 | 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 两个人看的免费小视频| 91老司机精品| 午夜福利成人在线免费观看| 制服人妻中文乱码| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美中文综合在线视频| 操美女的视频在线观看| 91国产中文字幕| 午夜精品在线福利| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 黄色片一级片一级黄色片| 精品久久蜜臀av无| 成熟少妇高潮喷水视频| 首页视频小说图片口味搜索| 日韩有码中文字幕| 老司机午夜十八禁免费视频| 禁无遮挡网站| 视频在线观看一区二区三区| 国产不卡一卡二| 亚洲男人天堂网一区| 日本欧美视频一区| 国产99久久九九免费精品| 在线观看免费视频日本深夜| 国产亚洲av高清不卡| 在线观看www视频免费| 老汉色∧v一级毛片| 不卡一级毛片| 精品电影一区二区在线| 999精品在线视频| 自线自在国产av| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 1024视频免费在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产精品久久视频播放| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 十八禁网站免费在线| 老司机靠b影院| 亚洲熟女毛片儿| 老汉色∧v一级毛片| 动漫黄色视频在线观看| 9191精品国产免费久久| 咕卡用的链子| 啦啦啦韩国在线观看视频| 午夜免费激情av| 日本在线视频免费播放| 我的亚洲天堂| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲欧美精品综合久久99| 九色国产91popny在线| 在线播放国产精品三级| 天堂影院成人在线观看| 亚洲第一电影网av| 色尼玛亚洲综合影院| x7x7x7水蜜桃| 黄色丝袜av网址大全| 日日夜夜操网爽| 最近最新中文字幕大全电影3 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 99国产精品99久久久久| 免费观看精品视频网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 成年女人毛片免费观看观看9| 在线av久久热| 十八禁人妻一区二区| 成年人黄色毛片网站| 久久久久国内视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 日本a在线网址| 色精品久久人妻99蜜桃| 两个人免费观看高清视频| 两个人免费观看高清视频| 日本黄色视频三级网站网址| 成人国产综合亚洲| 一进一出好大好爽视频| 国产高清有码在线观看视频 | 不卡av一区二区三区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 啦啦啦免费观看视频1| cao死你这个sao货| 欧美黄色淫秽网站| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 又黄又爽又免费观看的视频| 韩国精品一区二区三区| 一个人免费在线观看的高清视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产成人av激情在线播放| 国产精品免费视频内射| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲激情在线av| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 精品电影一区二区在线| videosex国产| 在线av久久热| 国产熟女xx| 久久欧美精品欧美久久欧美| av在线天堂中文字幕| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美久久黑人一区二区| 免费在线观看影片大全网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日本一区二区免费在线视频| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 999久久久精品免费观看国产| 午夜福利高清视频| 久久香蕉国产精品| 国产成人av教育| 91老司机精品| 亚洲成人久久性| 91麻豆精品激情在线观看国产| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久草成人影院| 一本综合久久免费| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲av熟女| 亚洲欧美精品综合久久99| 成人手机av| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 黄频高清免费视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲九九香蕉| 91国产中文字幕| 免费在线观看亚洲国产| 久久草成人影院| 亚洲在线自拍视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美日韩精品网址| 国产精品一区二区精品视频观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 午夜精品国产一区二区电影| 国产一区二区三区视频了| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 999久久久国产精品视频| 国产野战对白在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 午夜免费成人在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 国内精品久久久久久久电影| 看黄色毛片网站| 少妇粗大呻吟视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲精品国产一区二区精华液| 美女国产高潮福利片在线看| 不卡一级毛片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 精品人妻在线不人妻| 黄色视频不卡| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品久久久精品久久久| 精品欧美一区二区三区在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲国产看品久久| 国产成人系列免费观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美乱妇无乱码| 免费观看人在逋| 国产三级黄色录像| av视频在线观看入口| 精品久久蜜臀av无| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲无线在线观看| 级片在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产色视频综合| 亚洲在线自拍视频| 美女午夜性视频免费| 男人的好看免费观看在线视频 | 老司机福利观看| 欧美成人午夜精品| 免费观看人在逋| 久久午夜综合久久蜜桃| 91成人精品电影| 中国美女看黄片| 日日爽夜夜爽网站| av视频免费观看在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产精品二区激情视频| 成熟少妇高潮喷水视频| ponron亚洲| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲第一电影网av| 午夜影院日韩av| 十八禁人妻一区二区| 不卡一级毛片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美乱色亚洲激情| 中文字幕色久视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 真人一进一出gif抽搐免费| 成年人黄色毛片网站| 女警被强在线播放| 首页视频小说图片口味搜索| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产片内射在线| 久久 成人 亚洲| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲五月色婷婷综合| 成人国产一区最新在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 精品人妻1区二区| 中亚洲国语对白在线视频| 国产成人免费无遮挡视频| 一a级毛片在线观看| 在线观看日韩欧美| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 性色av乱码一区二区三区2| xxx96com| av欧美777| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品国产高清国产av| 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美中文综合在线视频| 国产三级在线视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 99国产综合亚洲精品| 欧美大码av| 午夜影院日韩av| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美不卡视频在线免费观看 | 日韩免费av在线播放| av网站免费在线观看视频| 真人做人爱边吃奶动态| 91麻豆精品激情在线观看国产| 午夜老司机福利片| 亚洲中文字幕日韩| 母亲3免费完整高清在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 99re在线观看精品视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 悠悠久久av| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日韩欧美国产在线观看| 精品人妻1区二区| 欧美乱妇无乱码| 国产免费男女视频| 变态另类丝袜制服| 国产精品一区二区在线不卡| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产区一区二久久| 亚洲伊人色综图| 欧美乱妇无乱码| 国语自产精品视频在线第100页| 久久精品人人爽人人爽视色| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 免费看a级黄色片| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久精品影院6| 成人18禁在线播放| 美女大奶头视频| 午夜精品在线福利| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 午夜免费鲁丝| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美成人免费av一区二区三区| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 国产99白浆流出| 99热只有精品国产| 日本在线视频免费播放| 在线视频色国产色| 很黄的视频免费| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 色播亚洲综合网| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 欧美中文综合在线视频| 一区福利在线观看| 精品欧美一区二区三区在线| 国产三级在线视频| 女人精品久久久久毛片| 精品电影一区二区在线| 99riav亚洲国产免费| 亚洲最大成人中文| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 波多野结衣一区麻豆| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲国产精品成人综合色| 一区二区三区国产精品乱码| 在线天堂中文资源库| 天堂影院成人在线观看| 午夜免费观看网址| 国产精品永久免费网站| 在线观看免费视频网站a站| 欧美黄色淫秽网站| 午夜免费成人在线视频| 精品无人区乱码1区二区| 色哟哟哟哟哟哟| 中国美女看黄片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| av在线天堂中文字幕| 日日夜夜操网爽| av视频免费观看在线观看| 校园春色视频在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 99久久综合精品五月天人人| 久久久久亚洲av毛片大全| 午夜精品在线福利| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 高清黄色对白视频在线免费看| 国产亚洲精品av在线| 国产精品日韩av在线免费观看 | 精品国产乱码久久久久久男人| 久久久久久久久中文| 99在线人妻在线中文字幕| 精品一区二区三区av网在线观看| 日韩欧美三级三区| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美激情 高清一区二区三区| www.精华液| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 男女午夜视频在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲国产精品999在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| e午夜精品久久久久久久| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲精品一区av在线观看| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲伊人色综图| 免费不卡黄色视频| 波多野结衣av一区二区av| 中文字幕色久视频| 在线观看免费视频网站a站| 日韩欧美在线二视频| avwww免费| 久久伊人香网站| 两个人免费观看高清视频| √禁漫天堂资源中文www| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 黄色丝袜av网址大全| 久久精品国产清高在天天线| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产三级黄色录像| 搡老熟女国产l中国老女人| 成在线人永久免费视频| 搞女人的毛片| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品1区2区在线观看.| 日本 欧美在线| 一级黄色大片毛片| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲一区二区三区色噜噜| 后天国语完整版免费观看| 国产精品综合久久久久久久免费 | 亚洲电影在线观看av| 国产精华一区二区三区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 很黄的视频免费| 色在线成人网| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲片人在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久精品影院6| 男男h啪啪无遮挡| 90打野战视频偷拍视频| 天天一区二区日本电影三级 | 国产高清视频在线播放一区| 可以在线观看的亚洲视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 女人精品久久久久毛片| 在线观看免费视频网站a站| 级片在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲av成人一区二区三| 满18在线观看网站| 久久国产精品影院| 久久午夜亚洲精品久久| 好男人电影高清在线观看| x7x7x7水蜜桃| 亚洲国产精品sss在线观看| 精品日产1卡2卡| 国产高清激情床上av| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美激情 高清一区二区三区| 一级毛片女人18水好多| 黑丝袜美女国产一区| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产成人精品无人区| 国产精品98久久久久久宅男小说| 真人一进一出gif抽搐免费| 97碰自拍视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美在线黄色| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲中文av在线| 国产亚洲精品一区二区www| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲avbb在线观看| 免费在线观看完整版高清| 日日爽夜夜爽网站| 搡老妇女老女人老熟妇| 好男人在线观看高清免费视频 | 国产一区二区三区综合在线观看| 在线观看舔阴道视频| 男女之事视频高清在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 夜夜爽天天搞| 不卡av一区二区三区| 香蕉丝袜av| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 一本综合久久免费| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产精品一区二区在线不卡| 国产一区在线观看成人免费| 性少妇av在线| 久久婷婷成人综合色麻豆| 在线观看午夜福利视频| 老司机在亚洲福利影院| 久久人妻av系列| 在线观看一区二区三区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 中文亚洲av片在线观看爽| 电影成人av| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美丝袜亚洲另类 | 多毛熟女@视频| 亚洲国产看品久久| 精品欧美一区二区三区在线| 久久久国产欧美日韩av| 国产成人av教育| 国产精品综合久久久久久久免费 | 热re99久久国产66热| 国产精品二区激情视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 精品乱码久久久久久99久播| 日韩欧美在线二视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 一区在线观看完整版| 成年版毛片免费区| 老鸭窝网址在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 999久久久精品免费观看国产| 国产成人精品无人区| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲熟女毛片儿| 在线观看免费日韩欧美大片| 少妇粗大呻吟视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久久久亚洲av毛片大全| 午夜免费激情av| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 黄片大片在线免费观看| 国产精品野战在线观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| av网站免费在线观看视频| 免费观看精品视频网站| 国产精品久久久av美女十八| 夜夜夜夜夜久久久久| 村上凉子中文字幕在线| 久久久久国产一级毛片高清牌| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 夜夜夜夜夜久久久久| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产极品粉嫩免费观看在线| xxx96com| 宅男免费午夜| а√天堂www在线а√下载| 久久精品国产综合久久久| av中文乱码字幕在线| 人妻久久中文字幕网| 国产欧美日韩一区二区三| 色尼玛亚洲综合影院| 宅男免费午夜| 亚洲国产欧美网| 亚洲av电影在线进入| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 亚洲av五月六月丁香网| 麻豆av在线久日| 悠悠久久av| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 国产人伦9x9x在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 搞女人的毛片| 视频在线观看一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产私拍福利视频在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 又黄又粗又硬又大视频| 国产成人影院久久av| 亚洲 国产 在线| 亚洲成国产人片在线观看| 宅男免费午夜| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久久久九九精品影院| 国产99白浆流出| 日本vs欧美在线观看视频| 男女下面进入的视频免费午夜 | 香蕉久久夜色| 夜夜爽天天搞| 亚洲全国av大片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 岛国视频午夜一区免费看| 中文字幕av电影在线播放| 99国产精品一区二区蜜桃av| 999精品在线视频| 久久草成人影院| 欧美黄色片欧美黄色片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产成人啪精品午夜网站| 一二三四社区在线视频社区8| 99国产精品一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 久久久久久国产a免费观看| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 麻豆国产av国片精品| 国产在线观看jvid| 国产成人av激情在线播放| 精品久久久久久久毛片微露脸| 一级黄色大片毛片| 精品无人区乱码1区二区| 黄色女人牲交| 亚洲av成人一区二区三| 高清毛片免费观看视频网站| 国产野战对白在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲av成人av| 欧美激情久久久久久爽电影 | 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产片内射在线| 久久久久久国产a免费观看| 麻豆成人av在线观看| x7x7x7水蜜桃| 国产精品久久久久久精品电影 | 最好的美女福利视频网| 正在播放国产对白刺激| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 制服诱惑二区| 国产一区在线观看成人免费| 成人欧美大片| 亚洲精华国产精华精| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产成人欧美在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 曰老女人黄片| 热99re8久久精品国产| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美日本视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 精品国内亚洲2022精品成人| 色播亚洲综合网| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| www.熟女人妻精品国产| 国产精品av久久久久免费| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 婷婷丁香在线五月|