翻白草的化學(xué)成分

張 莉,楊 杰,陳筱清,王 強(qiáng)

(中國(guó)藥科大學(xué)中藥分析教研室,江蘇 南京 210009)

翻白草 (PotentilladiscolorBunge)又名雞腿兒、雞腳草、鴨腳參、天青地白,為薔薇科 (Rosaceae)委陵菜屬 (PotentillaL.)植物,其干燥全草均可入藥,是常見(jiàn)的中草藥之一。翻白草性平、味甘、微苦,具有清熱、涼血、解毒和止血的功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明,翻白草具有抗菌、止瀉和免疫抑制的作用[1]；近幾年來(lái),還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)翻白草具有降血糖和抗腫瘤的作用[2]。目前,從翻白草中已分離得到黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)、單寧類(lèi)以及一些脂肪酸和酚酸類(lèi)化合物[3-5]。為了進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用翻白草這一藥用植物資源,并尋找與其藥理活性相吻合的有效成分,作者對(duì)翻白草的化學(xué)成分進(jìn)行了深入研究。

1 材料和方法

1.1 材料

供試翻白草購(gòu)自廣西南寧藥材批發(fā)市場(chǎng),由中國(guó)藥科大學(xué)王強(qiáng)教授鑒定,憑證標(biāo)本存放于中國(guó)藥科大學(xué)中藥分析教研室。

主要儀器有 XT-4型雙目體視顯微熔點(diǎn)儀 (上海精密儀器有限公司)、日本島津 FT-IR-8400S型紅外光譜儀（KB r壓片,日本島津公司)、B rukerΑV 500MHz核磁共振譜儀 (德國(guó)B ruker公司)和Αgilent1100 LC/ESI-M SD(美國(guó)Agilent公司)。柱層析及薄層層析硅膠均為青島海洋化工廠(chǎng)出品,所用試劑均為分析純級(jí)。

1.2 方法

稱(chēng)取干燥翻白草全草 5 kg,粉碎后用體積分?jǐn)?shù) 90％乙醇于 85℃左右加熱提取 3次,每次乙醇使用量 40 L,加熱時(shí)間1.5 h,合并提取液并減壓濃縮至無(wú)醇味,用水混懸后先用石油醚萃取 3次,合并石油醚萃取液,回收溶劑后得到石油醚部分浸膏 54 g；然后用乙酸乙酯萃取 3次,合并乙酸乙酯萃取液,回收溶劑后得到乙酸乙酯部分浸膏 150 g；最后用正丁醇萃取3次,合并正丁醇萃取液,減壓回收溶劑后得到正丁醇部分浸膏105 g。

將石油醚部分上硅膠柱進(jìn)行柱層析,用石油醚 -丙酮混合液(體積比 100∶0～0∶100)進(jìn)行梯度洗脫,洗脫物經(jīng)反復(fù)純化后,得到化合物Ⅰ、Ⅸ和Ⅹ,質(zhì)量分別為 28、127和 50m g。

將乙酸乙酯部分進(jìn)行硅膠柱層析,用氯仿 -甲醇混合液(體積比 100∶0～0∶100)進(jìn)行梯度洗脫,共得到 5個(gè)流分,即Fr1～Fr5。其中,Fr1流分(氯仿和甲醇體積比為 95∶5時(shí)的洗脫流分)用聚酰胺進(jìn)行柱層析,以甲醇 -水 (體積比 30∶70～90∶10)溶液進(jìn)行梯度洗脫,收集體積分?jǐn)?shù) 90％甲醇的洗脫流分進(jìn)行反向柱層析并用丙酮 -水混合液(體積比 50∶50～90∶10)進(jìn)行梯度洗脫,洗脫物經(jīng)反復(fù)純化后得到化合物Ⅳ和Ⅷ,質(zhì)量分別為 3和 5m g；將 Fr4流分 (氯仿和甲醇體積比為80∶20時(shí)的洗脫流分)用等體積氯仿 -甲醇混合液溶解,上硅膠柱層析,用氯仿 -甲醇 -水混合液 (體積比 7∶3∶0.1～1∶1∶0.5)洗脫,洗脫物經(jīng)反復(fù)純化后得到化合物Ⅵ,質(zhì)量為 3m g。

將正丁醇部分用水溶解,取上清液用大孔樹(shù)脂進(jìn)行柱層析,依次用體積分?jǐn)?shù) 10％、30％、50％和 90％的乙醇進(jìn)行梯度洗脫,減壓回收溶劑,得到 4個(gè)流分,即 FrA～FrD。其中,FrB用等體積氯仿 -甲醇混合液溶解后進(jìn)行硅膠柱層析,用氯仿-甲醇 -水混合液(體積比 9∶1∶0～1∶1∶0.5)進(jìn)行洗脫,洗脫物經(jīng)反復(fù)純化后得到化合物Ⅱ、Ⅴ和Ⅶ,質(zhì)量分別為 3、11和 4 m g；將 FrC流分用等體積氯仿 -甲醇混合液溶解后進(jìn)行硅膠柱層析,用氯仿 -甲醇 -水混合液(體積比 9∶1∶0～1∶1∶0.5)進(jìn)行洗脫,洗脫物經(jīng)反復(fù)純化后得到化合物Ⅲ,質(zhì)量為 4m g。

采用M S和NMR等方法鑒定化合物Ⅰ～Ⅹ的結(jié)構(gòu)。

2 結(jié) 果

化合物Ⅰ：白色粉末 (氯仿 -甲醇),m p：302℃～304℃,微溶于氯仿和甲醇,易溶于氯仿 -甲醇混合溶液,L ieberm ann -Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性,與文獻(xiàn) [6]報(bào)道的結(jié)果較一致,且薄層層析的 R f值及顯色行為與標(biāo)準(zhǔn)化合物齊墩果酸基本一致,與標(biāo)準(zhǔn)化合物齊墩果酸混合后熔點(diǎn)不下降,故鑒定該化合物為齊墩果酸(o leano lic acid)。

化合物Ⅱ：黃色針狀結(jié)晶 (甲醇),mp：228℃～230℃,用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù) 1％A lC l3顯色呈黃色熒光。1H-NMR(DMSO-d6,500MHz)δ：6.43(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.82(1H, d,J=2.0 Hz,H-8),6.95(2H,d,J=8.5 Hz,H-3′, 5′),8.08(2H,d,J=8.5 Hz,H-2′,6′),5.55(1H,d,J= 7.5 Hz,H-1″),1.15(3H,d,J=7.5 Hz,H-6″),3.0～4.5(m)；13C-NMR(DM SO-d6,125MHz)δ：149.1(C-2), 137.9(C-3),177.8(C-4),163.6(C-5),100.2(C-6),162.6(C-7),95.7(C-8),158.0(C-9),106.5(C-10),123.9(C-1′),131.1(C-2′,6′),116.7(C-3′,5′), 161.0(C-4′),100.3(C-1″),72.1(C-2″),72.4(C-3″),74.0(C-4″),71.6(C-5″),18.4(C-6″)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定該化合物為山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷 (kaem p fero l-7-O-α-L-rham noside)。

化合物Ⅲ：淡黃色粉末（甲醇),用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù) 1％ A lC l3溶液顯色呈黃色熒光。1H-NMR(DM SO-d6,500MHz) δ：12.48(1H,s,5-OH),9.57(1H,s,4′-OH),9.46(1H, s,3-OH),9.26(1H,s,3′-OH),7.72(1H,d,J=2.2Hz,H-2′),7.59(1H,dd,J=2.2,8.5 Hz,H-6′),6.89 (1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),6.78(1H,d,J=2.1 Hz,H-8),6.41(1H,d,J=2.1 Hz,H-6),5.54(1H,d,J=1.7 Hz,H-1″),1.13(3H,d,J=6.2 Hz,6″-CH3),3.0～4.0 (m)；13C-NMR(DM SO-d6,125MHz)δ：176.0(C-4),161.4 (C-7),160.4(C-5),155.7(C-9),147.9(C-2),147.5(C -4′),145.1(C-3′),136.1(C-3),121.8(C-1′),120.2(C-6′),115.6(C-2′),115.2(C-5′),104.7(C-10),98.9(C-6),98.5(C-1″),94.2(C-8),71.6(C-4″),70.2(C-3″),70.1 (C-2″),69.9(C-5″),17.9(C-6″)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致,故鑒定該化合物為槲皮素 -7-O-α-L-鼠李糖苷 (quercetin-7-Oα--L-rham noside)。

化合物Ⅳ：白色粉末 (氯仿 -甲醇)。ESI-M Sm/z：471 [M-H]-(分子式為 C30H48O4)。1H-NMR(CD3OD,500 MHz)δ：0.81(3H,s),0.87(3H,s),0.91(3H,s),0.95 (3H,s),0.99(6H,s),1.18(3H,s),2.85(1H,m,H-18), 3.31(1H,overlap,H-3),3.93(1H,m,H-2),5.26(1H, br.s,H-12)；13C-NMR(CD3OD,125MHz)δ：42.6(C-1),67.2(C-2),80.3(C-3),39.5(C-4),49.4(C-5),19.3(C-6),34.1(C-7),40.9(C-8),48.7(C-9), 39.5(C-10),24.2(C-11),123.7(C-12),144.5(C-13),43.2(C-14),28.9(C-15),24.7(C-16),49.0(C-17),42.3(C-18),47.4(C-19),31.7(C-20),33.9(C-21),35.0(C-22),22.5(C-23),29.3(C-24),17.0(C-25),17.9(C-26),26.0(C-27),181.9(C-28),24.1(C -29),33.6(C-30)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致,故鑒定該化合物為 2α,3α-二羥基 -12-烯 -28-齊墩果酸（2α,3α-dihyd roxyo lean-12-ene-28-acid)。

化合物Ⅴ：淡黃色粉末 (甲醇),mp：290℃～291℃。ESI-M Sm/z：247[M-1]-,495[2M-1]-。1H-NMR (DM SO-d6,500MHz)δ：2.5(2H,t,H-9),7.30(1H,s,H-7),3.17(2H,m,H-10)；13C-NMR(DM SO-d6,125MHz) δ：149.3(C-2),115.6(C-3),140.2(C-3a),145.1(C -4),141.4(C-5),144.3(C-6),108.0(C-7),113.3(C-7a),160.6(C-8),23.8(C-9),32.9(C-10),195.6 (C-11)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定該化合物為短葉蘇木酚 (brevifo lin)。

化合物Ⅵ：白色粉末 (甲醇),mp：高于 300℃。1H-NMR (DM SO-d6,500MHz)δ：7.82(1H,s,H-5′),7.55(1H, s,H-5),4.09(3H,s,-OCH3),4.06(3H,s,-OCH3), 5.42(1H,d,J=6.5 Hz,H-1″)；13C-NMR(DM SO-d6,125MHz)δ：111.3(C-1),141.7(C-2),141.9(C-3),152.9(C -4),112.0(C-5),112.9(C-6),158.4(C-7),114.2(C-1′),141.0(C-2′),140.3(C-3′),151.6(C-4′),112.0(C-5′),112.0(C-6′),158.4(C-7′),101.5(C-1″),73.5(C-2″),76.6(C-3″),69.7(C-4″),77.4(C-5″),61.8(C-6″),61. 1(-OCH3),60.7(-OCH3)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定該化合物為鞣花酸 -3,3′-二甲醚 -4-O-β-D-葡萄糖苷（ellagic acid-3,3′-dimethyl ether-4-Oβ--D-glucopyranoside)。

化合物Ⅶ：白色粉末 (甲醇),m p：高于 300℃。1H-NMR (DM SO-d6,500MHz)δ：7.51(1H,s,H-5),7.74(1H, s,H-5′),4.03(3H,s,3-OCH3),5.48(1H,br.s,H-1″),4.00(1H,m,H-2″),3.85(1H,m,H-3″),3.34 (1H,m,H-4″),3.54(1H,m,H-5″),1.12(3H,d,J=6. 2 Hz,6″-CH3),5.11(1H,2″-OH),4.70(1H,3″-OH),4.90(1H,4″-OH)；13C-NMR（DM SO-d6,125 MHz)δ：111.4(C-1),136.1(C-2),140.1(C-3),152.6 (C-4),111.3(C-5),107.1(C-6),158.6(C-7),114.3 (C-1′),141.2(C-2′),141.8(C-3′),146.4(C-4′), 111.6(C-5′),113.0(C-6′),158.6(C-7′),60.9(3-OCH3),100.1(C-1″),69.9(C-2″),70.0(C-3″),71.7(C -4″),69.8(C-5″),17.8(C-6″)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定該化合物為鞣花酸 -3-甲醚 -4′-O-α-吡喃鼠李糖苷 (ellagic acid-3-methyl ether-4′-O-α-rham nopyranoside)。

化合物 Ⅷ：白色粉末 (氯仿 -甲醇)。ESI-M Sm/z： 471[M-H]-(分子式 C30H48O4)。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δ：0.77(3H,s),0.90(3H,s),0.95(3H,s),0.98 (3H,s),0.99(3H,s),1.68(3H,s),2.91(1H,d,J=9.6 Hz,H-3α),3.61(1H,m,H-2β),4.58(1H,br.s,Hb-30),4.70(1H,br.s,Ha-30)；13C-NMR(CD3OD,125 MHz)δ：48.2(C-1),69.8(C-2),84.5(C-3),39.6(C-4),56.8(C-5),19.7(C-6),35.5(C-7),40.4(C-8), 51.8(C-9),39.5(C-10),22.2(C-11),26.8(C-12), 39.6(C-13),43.6(C-14),30.7(C-15),33.3(C-16), 57.4(C-17),48.3(C-18),50.5(C-19),151.5(C-20),31.7(C-21),38.1(C-22),29.2(C-23),16.7(C-24),17.2(C-25),19.4(C-26),15.2(C-27),180.0(C -28),110.2(C-29),19.5(C-30)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定該化合物為 2α-羥基白樺酸 (2α-hyd roxy-betu linic acid)。

化合物Ⅸ：白色針晶（氯仿),易溶于氯仿,用體積分?jǐn)?shù)10％硫酸乙醇顯色呈紫紅色,mp：138℃～140℃,L ieberm ann -Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性,與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的結(jié)果一致,且薄層層析的 R f值及顯色行為與標(biāo)準(zhǔn)化合物谷甾醇一致,且與標(biāo)準(zhǔn)化合物谷甾醇混合后熔點(diǎn)不下降,故鑒定該化合物為谷甾醇(sitostero l)。

化合物Ⅹ：白色粉末 (氯仿 -甲醇),微溶于甲醇,用體積分?jǐn)?shù) 10％硫酸乙醇顯色呈紫紅色,mp：284℃～286℃, L ieberm ann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性,Mo lish反應(yīng)也呈陽(yáng)性,與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的結(jié)果一致,且薄層層析的 R f值及顯色行為與標(biāo)準(zhǔn)化合物胡蘿卜苷一致,且與標(biāo)準(zhǔn)化合物胡蘿卜苷混合后熔點(diǎn)不下降,故鑒定該化合物為胡蘿卜苷 (daucostero l)。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,從翻白草全株的 90％乙醇提取物中分離出 10種化合物,主要為三萜類(lèi)、黃酮類(lèi)及鞣花酸類(lèi)成分。其中,化合物Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ為首次從委陵菜屬植物中分離得到的成分,化合物Ⅳ則是首次從翻白草中分離得到的成分。對(duì)這些化學(xué)成分的藥用價(jià)值進(jìn)行系統(tǒng)研究,對(duì)于充分開(kāi)發(fā)利用翻白草這一藥用植物資源具有重要的理論及應(yīng)用意義。

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