• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于 ISSR標(biāo)記的黃河下游區(qū)域魯桑地方品種遺傳關(guān)系分析

    2010-12-31 13:50:06沈興家趙衛(wèi)國
    關(guān)鍵詞:亞類桑樹條帶

    張 林,黃 勇,沈興家,劉 利,趙衛(wèi)國,強 勝

    (1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院雜草研究室,江蘇 南京 210095;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所,江蘇 鎮(zhèn)江 212018;

    3.江蘇科技大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院,江蘇 鎮(zhèn)江 212018;4.國家農(nóng)業(yè)部蠶桑遺傳改良重點開放實驗室,江蘇 鎮(zhèn)江 212018)

    在中國,桑 (MorusalbaL.)的栽培歷史悠久,遺傳資源十分豐富。根據(jù)地理分布可將中國桑地方品種分為 8個不同的生態(tài)類型,每個生態(tài)類型均有各自的特征,在枝條形態(tài)、葉形大小、發(fā)芽期、抗逆性等方面都有一定的差異。黃河下游區(qū)域栽培的魯?!睲orusalbavar.multicaulis(Perro tt.)Loud.〕是 8個生態(tài)類型之一,是中國北方主蠶區(qū)的代表性桑品種,也是中國桑品種資源庫的重要組成部分[1-2],主要分布在山東省蠶區(qū),也包括河北省的部分蠶區(qū)。

    ISSR分子標(biāo)記具有簡單和重復(fù)性好的優(yōu)點,已廣泛應(yīng)用于桑樹的分子生物學(xué)研究。其原理是根據(jù)植物中廣泛存在簡單重復(fù)序列(SSR)的特點,利用在植物基因組中常出現(xiàn)的 SSR本身設(shè)計引物,用于擴增的引物通常具有 16~18個堿基,一般由 1~4個堿基組成的串聯(lián)重復(fù)和幾個非重復(fù)的錨定堿基組成,無需預(yù)先克隆和測序。目前已廣泛應(yīng)用于植物品種鑒定、遺傳作圖、基因定位、遺傳多樣性、進(jìn)化及分子生態(tài)學(xué)研究中。

    目前,有關(guān)桑樹 ISSR分子標(biāo)記的研究較多,研究方向主要集中于桑樹遺傳多樣性和親緣關(guān)系方面,研究對象主要是不同品種以及不同生態(tài)類型。V ijayan等[3-5]采用 ISSR分子標(biāo)記對印度的桑屬 (MorusL.)栽培品種、高產(chǎn)品種及野生種進(jìn)行了遺傳多樣性分析;Awasthi等[6]采用 ISSR分子標(biāo)記對桑樹的部分栽培品種進(jìn)行了親緣關(guān)系分析,研究結(jié)果顯示品種間差異明顯;趙衛(wèi)國等[7-14]利用 ISSR分子標(biāo)記對桑樹的栽培種和野生種、二倍體、同源四倍體、選育品種、芽變類型以及 8個不同生態(tài)類型進(jìn)行了遺傳多樣性分析及分子系統(tǒng)學(xué)研究;Kar等[15]利用與某些生化性狀有關(guān)的 ISSR標(biāo)記分析了印度桑樹遺傳資源的遺傳變異和親緣關(guān)系。但迄今為止,對桑樹同一生態(tài)類型不同地方品種間親緣關(guān)系的研究卻較少,對魯桑地方品種遺傳多樣性的研究則未見報道。

    作者利用 ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對黃河下游區(qū)域(河北省和山東省)46個魯桑地方品種的遺傳多樣性進(jìn)行了分析,以期在分子水平上研究魯桑不同地方品種的遺傳關(guān)系,為魯桑種質(zhì)資源DNA指紋圖譜的建立及品種鑒定提供科學(xué)依據(jù)。這對于魯桑種質(zhì)資源的保護(hù)、重要農(nóng)藝性狀基因的發(fā)掘和利用都具有重要意義。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    供試的 46個魯桑地方品種均種植于江蘇鎮(zhèn)江的國家桑樹資源圃,原產(chǎn)地及各地方品種的主要性狀見表 1。采集當(dāng)年生嫩葉供試。

    實驗使用的 ISSR引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成,TaqDNA聚合酶、PCR buffer、dNTPs以及 DL2000 m arker均購自寶生物工程 (大連)有限公司。

    1.2 方法

    隨機采集各地方品種當(dāng)年生新鮮嫩葉,用 CTAB法[16]提取總DNA,并置于 -70℃條件下保存、備用。用魯桑品種‘大雞冠’的總DNA對23個 ISSR引物進(jìn)行初步篩選,選擇擴增條帶清晰、多態(tài)性高、重復(fù)性好且擴增結(jié)果穩(wěn)定的 15個引物,用于 46個魯桑地方品種總DNA的 ISSR擴增反應(yīng)。

    ISSR-PCR反應(yīng)體系總體積為 15μL,包括 10 ng模板 DNA、0.7μL引物 (10 ng·μL-1)、1 UTaqDNA聚合酶、1.5μL 10×PCR buffer和 0.25μLdNTPs(200μmo l·L-1),用純水補足至 15μL。

    ISSR-PCR擴增程序為:94℃預(yù)變性 2 m in;然后于 94℃變性 40 s、40℃~60℃退火 45 s(根據(jù)每個引物的 Tm值設(shè)定具體退火溫度)、72℃延伸90 s,共 36個循環(huán)反應(yīng);最后于 72℃延伸 7m in。擴增產(chǎn)物置于4℃條件下保存。

    ISSR-PCR擴增產(chǎn)物通過用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù) 1%的瓊脂糖凝膠(含質(zhì)量濃度 0.5μg·mL-1EB)進(jìn)行電泳檢測,并對電泳結(jié)果進(jìn)行拍照記錄。

    表 1 供試 46個魯桑地方品種的原產(chǎn)地及主要性狀Tab le 1 The or ig in sand m a in characters of for ty-six loca l var ieties of M o rus a lba var.m u lticau lis(Perrott.)L oud.for tested

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    按照清晰易辨、重復(fù)、穩(wěn)定的原則對擴增條帶進(jìn)行統(tǒng)計,有條帶的記為“1”、同一位置沒有條帶的則記為“0”,以此形成 0、1數(shù)據(jù)矩陣。統(tǒng)計每個引物擴增出的條帶數(shù)和其中的多態(tài)性條帶數(shù),并計算多態(tài)性條帶百分率。按照 Nei等[17]的方法,利用 Popgene 3.0 (PHYL IP 3.5版本)系統(tǒng)分析軟件計算各地方品種間的遺傳相似系數(shù)和遺傳距離,并采用類平均數(shù)聚類方法(UPGMA)進(jìn)行聚類分析,構(gòu)建魯桑地方品種間的遺傳關(guān)系樹狀圖。

    2 結(jié)果和分析

    2.1 ISSR擴增結(jié)果

    經(jīng)過初篩實驗,從 23個 ISSR引物中篩選出擴增條帶清晰、多態(tài)性高、重復(fù)性好且擴增結(jié)果穩(wěn)定的 15個引物用于 46個魯桑地方品種指紋圖譜的構(gòu)建和遺傳多樣性分析,引物序列和擴增結(jié)果見表 2,引物ISSR04的擴增圖譜見圖 1。

    由表 2可見,在篩選出的 15個引物中,12個引物(ISSR03~I(xiàn)SSR07和 ISSR09~I(xiàn)SSR15)含有 2個堿基的微衛(wèi)星重復(fù)單位,2個引物 (ISSR02和 ISSR08)含有 3個堿基的微衛(wèi)星重復(fù)單位,1個引物 (ISSR01)含有 4個堿基的微衛(wèi)星重復(fù)單位。通過 PCR反應(yīng),共擴增出 109條清晰條帶,其中多態(tài)性條帶 81條,多態(tài)性條帶百分率為 74.31%,平均每個引物擴增的條帶數(shù)為 7.3條,平均每個引物擴增的多態(tài)性條帶數(shù)為 5.4條。不同引物擴增的條帶數(shù)為 5~11條,引物 ISSR11擴增出的條帶數(shù)最少,僅有 5條;引物 ISSR05擴增出的條帶數(shù)最多,為 11條。各引物擴增出的片段大小為 250~2 000 bp(圖 1)。

    表2 用于46個魯桑地方品種總DNA ISSR標(biāo)記分析的引物序列及擴增結(jié)果Tab le 2 Pr im er sequence and am p lifica tion resu lts of ISSR m arker ana lysis of tota l DNA from for ty-six loca l var ieties of M o rus a lba var. m u lticau lis(Perrott.)Loud.

    2.2 基于 ISSR標(biāo)記的聚類分析結(jié)果

    以 46個魯桑地方品種總DNA的 ISSR-PCR擴增反應(yīng)產(chǎn)生的 81條多態(tài)性條帶為基礎(chǔ)數(shù)據(jù),計算各地方品種間的遺傳相似系數(shù),結(jié)果表明,46個地方品種間的遺傳相似系數(shù)變異范圍為 0.602~0.898,平均遺傳相似系數(shù)為 0.750。由于實驗所涉及的魯桑地方品種均為山東省和河北省典型的地方品種,這 2個省份毗鄰且不排除相互引種的可能性,因此,計算出的平均遺傳相似系數(shù)相對偏大。其中,品種‘萊蕪接?!汀嗤┥!约捌贩N‘小雞冠’和‘三岔黃魯’間的遺傳相似系數(shù)最大,為 0.898,表明它們之間的遺傳距離最小,親緣關(guān)系很近;來源于河北的品種‘冀豐’和山東的品種‘新泰打?!倪z傳相似系數(shù)最小,僅為0.602,表明二者間的遺傳距離最大,親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。

    基于魯桑不同地方品種間的遺傳相似系數(shù)、采用UPGMA法進(jìn)行了聚類分析,結(jié)果見圖 2。由圖 2可見,在遺傳相似系數(shù)約 0.637處,供試的 46個魯桑地方品種 (40個為山東地方品種,6個為河北地方品種)被劃分成 2大類。其中,品種‘冀豐’和‘冀黃魯選’為河北省地方品種,且均為雌株,被聚在一起成為第 1大類;其余 44個地方品種聚為第 2大類,該大類包括 40個來自山東省的魯桑地方品種和 4個來自河北省的魯桑地方品種。綜合各地方品種的產(chǎn)地、性狀及遺傳相似性系數(shù),可進(jìn)一步將第 2大類的 44個地方品種細(xì)分為9個亞類,分別為A、B、C、D、E、F、G、H和 I亞類。其中,A、E、F、G、H和 I亞類共包含了36個地方品種,全部為原產(chǎn)山東省的魯桑地方品種,占供試的山東魯桑地方品種數(shù)(40個)的 90%;劃歸B、C和D亞類的地方品種均包含了分別來自山東省和河北省的地方品種,其中,B亞類包含了來自河北深縣的品種‘碗?!蛠碜陨綎|蒙陰的品種‘紅條擗?!?C亞類包含了來自河北寬城的品種‘桲欏桑’、來自河北深縣的品種‘深縣黃魯’和來自山東青州的品種‘益都大白條’,D亞類包含了來自河北深縣的品種‘大碗?!约皝碜陨綎|臨朐的品種‘選 792’和‘黃魯頭’;此外,E亞類較為特殊,僅包含 1個品種,即產(chǎn)自山東蒙陰的品種‘白條擗桑’,是 46個供試品種中惟一的 1個三倍體品種,在遺傳特性上具有明顯的特殊性。

    圖1 引物 ISSR04對46個魯桑地方品種總DNA的 ISSR擴增圖譜Fig.1 ISSR am p lifica tion pa ttern of tota lDNA from for ty-six loca l var ietiesofM o rus a lba var.m u lticau lis(Perrott.)Loud.am p lified by pr im er ISSR04

    圖2 基于46個魯桑地方品種總DNA ISSR標(biāo)記分析的 UPGM A聚類圖F ig.2 UPGM A cluster dendrogram based on ISSRm arker ana lysis of tota lDNA from for ty-six loca l var ieties of M o rus a lba var.m u lticau lis(Perrott.)Loud.

    3 討論和結(jié)論

    買買提依明等[18]對 16個新疆地方桑樹品種資源(包括 2個引進(jìn)的品種)進(jìn)行了 RAPD標(biāo)記研究,發(fā)現(xiàn)新疆特有的桑樹品種資源藥桑與引進(jìn)的品種‘西慶1號’和‘西慶 2號’間的指紋圖譜差異較大,表明不同桑樹地方品種的遺傳關(guān)系與其地理分布具有一定的相關(guān)性。在本研究中,利用 ISSR分子標(biāo)記對 46個魯桑地方品種進(jìn)行進(jìn)一步的劃分,結(jié)果顯示,魯桑地方品種的各大類和各亞類與各地方品種的地理分布具有一定的關(guān)系,地理位置相近的品種遺傳相似系數(shù)較大,一般被聚在一起。例如,來自山東各地的 40個魯桑地方品種均被聚入第 2大類中,形態(tài)特征相似的魯桑地方品種聚為同一個亞類,且很多來自同一個縣。其中,A亞類中的‘大雞冠’和‘小雞冠’都為來自山東臨朐的魯桑地方品種,均為雌雄同株;D亞類中的‘選 792’和‘黃魯頭’以及 G亞類中的‘雞冠一生子’和‘黑魯桑’也都為來自山東臨朐的魯桑地方品種,且形態(tài)特征相似;I亞類中的‘小黃?!汀绿┐蛏!簿鶠閬碜陨綎|新泰的魯桑地方品種。但B、C和D亞類分別由來自山東和河北的魯桑地方品種組成,這一現(xiàn)象很可能與不同產(chǎn)地間的相互引種有關(guān)。

    使用 15個 ISSR引物對 46個來自山東和河北的魯桑地方品種總DNA進(jìn)行擴增反應(yīng),共擴增出 81條多態(tài)性條帶,多態(tài)性條帶百分率為 74.31%,說明供試的魯桑地方品種間具有豐富的遺傳多樣性。46個魯桑地方品種間的遺傳相似系數(shù)為 0.602~0.898,數(shù)值偏大,這可能是由于河北和山東兩省距離較近,且可能存在相互引種的現(xiàn)象?;?ISSR分子標(biāo)記對供試的 46個魯桑地方品種進(jìn)行聚類分析,獲得的分組結(jié)果與不同品種的地理分布有一定的相關(guān)性,說明魯桑地方品種間的親緣關(guān)系與地理分布的遠(yuǎn)近有關(guān)。

    [1]中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所.中國桑樹品種志[M].1版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1993.

    [2]中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所.中國桑樹栽培學(xué)[M].1版.上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1985.

    [3]V ijayan K,Srivatsava P P,Nair C V,et al.Molecular characterization and identification ofmarkers associated w ith yield traits in mulberry using ISSRmarkers[J].PlantB reeding,2006,125(3): 298-301.

    [4]V ijayan K,Chatterjee SN.ISSR p rofilingof Indian cu ltivarsofmulberry(Morusspp.)and its relevance to breeding p rogram s[J]. Euphytica,2003,131(1):53-63.

    [5]V ijayan K,AwasthiA K,Srivastava P P,etal.Genetic analysisof Indianmulberry varieties throughmolecu larmarkers[J].Hereditas, 2004,141(1):8-14.

    [6]AwasthiA K,Nagaraja GM,Naik GV,etal.Genetic diversity and relationships inmulberry(genusMorus)as revealed by RAPD and ISSRmarker assays[J].BMC Genetics,2004,5:1-9.

    [7]趙衛(wèi)國,苗雪霞,黃勇平,等.桑樹二倍體及其同源四倍體遺傳差異的 ISSR分析[J].蠶業(yè)科學(xué),2005,31(4):393-397.

    [8]ZhaoW G,Zhou Z H,M iao X X,et al.A comparison of genetic variation among w ild and cultivatedMorusspecies(Moraceae:Morus)as revealed by ISSR and SSRmarkers[J].B iodiversity and Conservation,2007,16(2):275-290.

    [9]ZhaoW G,Zhou ZH,M iao X X,etal.Genetic relatedness among cu ltivated and w ild mulberry(Moraceae:Morus)as revealed by inter-simp le sequence repeatanalysis in China[J].Canadian Journal of Plant Science,2006,86:251-257.

    [10]ZhaoW G,M iao X X,ZangB,etal.Construction of fingerp rinting and genetic diversity ofmulberry cu ltivars in China by ISSRmarkers [J].A cta Genetica Sinica,2006,33(9):851-860.

    [11]ZhaoW G,Pan Y L.Genetic diversity of genusMorusrevealed by RAPD markers in China[J].International Journal of Agricu lture and B iology,2004,6:950-954.

    [12]趙衛(wèi)國,汪 偉,潘一樂.鳳尾桑及其芽變品系間遺傳變異的ISSR分析[J].蠶桑通報,2006,37(3):27-29.

    [13]趙衛(wèi)國,汪 偉,楊永華,等.我國不同生態(tài)類型桑樹地方品種遺傳多樣性的 ISSR分析[J].蠶業(yè)科學(xué),2008,34(1):1-5.

    [14]Zhao W G,Zhang JQ,W ang Y H,et al.Analysis of genetic diversity in w ild populations of mulberry from western part of northeast China determ ined by ISSR markers[J].Journal of GeneticsandMolecularB iology,2006,17(4):196-203.

    [15]Kar P K,Srivastava P P,AwasthiA K,et al.Genetic variability and association of ISSR markers w ith some biochem ical traits in mu lberry(Morusspp.)genetic resources available in India[J]. Tree Genetics&Genomes,2008,4(1):75-83.

    [16]Doyle J J,Doyle JL.A rap id DNA isolation p rocedure for small quantitiesof fresh leaf tissue[J].Phytochem istry Bu lletin,1987, 19:11-15.

    [17]NeiM,L iW H.M athematicalmodel for studying genetic variation in term s of restriction endonucleases[J].Proceedings of the National A cadem y of Sciences of the United States of America, 1979,76(10):5269-5273.

    [18]買買提依明,吳麗莉,郭洪榮,等.新疆桑種質(zhì)資源隨機擴增DNA多態(tài)性(RAPD)研究[J].蠶業(yè)科學(xué),2004,30(1):76-79.

    猜你喜歡
    亞類桑樹條帶
    馬桑樹兒搭燈臺
    基于草原綜合順序分類法的中國山地草地亞類分類研究
    桑樹變身增收“搖錢樹”
    奶奶家的桑樹
    免疫球蛋白G亞型檢測在小兒反復(fù)呼吸道感染中的應(yīng)用
    哭泣的桑樹
    基于條帶模式GEOSAR-TOPS模式UAVSAR的雙基成像算法
    基于 Savitzky-Golay 加權(quán)擬合的紅外圖像非均勻性條帶校正方法
    Evaluation of antidepressant polypharmacy and other interventions for treatment-resistant depression
    系統(tǒng)性硬化癥患者血清IgG亞類特點
    搡老岳熟女国产| 日韩精品免费视频一区二区三区| 美女 人体艺术 gogo| 日本五十路高清| 亚洲色图综合在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲国产看品久久| 757午夜福利合集在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 欧美成人午夜精品| 高清欧美精品videossex| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 极品人妻少妇av视频| 欧美日韩视频精品一区| 99久久精品国产亚洲精品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 午夜久久久在线观看| 久久久久视频综合| 久久久久视频综合| 最近最新中文字幕大全电影3 | 精品国内亚洲2022精品成人 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 91成人精品电影| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 村上凉子中文字幕在线| 99热只有精品国产| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 一区二区日韩欧美中文字幕| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美日韩乱码在线| 满18在线观看网站| 国产精品 国内视频| 亚洲七黄色美女视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 91精品三级在线观看| 国产一区二区激情短视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 色在线成人网| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 日本欧美视频一区| 一a级毛片在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产男靠女视频免费网站| 久久精品国产a三级三级三级| 精品电影一区二区在线| 欧美日韩亚洲高清精品| 超碰97精品在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲三区欧美一区| 国产精品国产高清国产av | 国产三级黄色录像| 国产欧美日韩一区二区三| 免费黄频网站在线观看国产| 又紧又爽又黄一区二区| 老司机在亚洲福利影院| 久久 成人 亚洲| 国产人伦9x9x在线观看| 夫妻午夜视频| 女警被强在线播放| 日韩大码丰满熟妇| 午夜亚洲福利在线播放| 露出奶头的视频| 日韩欧美三级三区| 亚洲美女黄片视频| videos熟女内射| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美精品高潮呻吟av久久| 免费看a级黄色片| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产xxxxx性猛交| 国产淫语在线视频| 十八禁网站免费在线| 国产精品av久久久久免费| 午夜福利欧美成人| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 超色免费av| 亚洲国产精品sss在线观看 | 岛国在线观看网站| 亚洲 国产 在线| 波多野结衣av一区二区av| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久午夜亚洲精品久久| 正在播放国产对白刺激| 女性被躁到高潮视频| 国产高清视频在线播放一区| 欧美在线黄色| 热99久久久久精品小说推荐| 岛国毛片在线播放| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲午夜理论影院| 久热爱精品视频在线9| 婷婷精品国产亚洲av在线 | x7x7x7水蜜桃| 伦理电影免费视频| 看黄色毛片网站| 九色亚洲精品在线播放| av线在线观看网站| 午夜免费观看网址| 男女之事视频高清在线观看| 国产一区二区激情短视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美乱妇无乱码| av片东京热男人的天堂| 午夜免费鲁丝| 激情在线观看视频在线高清 | 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲全国av大片| 精品久久久久久,| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 一区二区三区精品91| 国产亚洲欧美98| 亚洲在线自拍视频| av免费在线观看网站| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 亚洲在线自拍视频| 99热网站在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲黑人精品在线| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 成年人免费黄色播放视频| 天堂动漫精品| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 亚洲国产看品久久| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美成人午夜精品| 一级毛片女人18水好多| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久狼人影院| 色播在线永久视频| av国产精品久久久久影院| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 成人18禁在线播放| 女人被狂操c到高潮| 99热国产这里只有精品6| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 午夜两性在线视频| 国产免费av片在线观看野外av| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 午夜久久久在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 不卡av一区二区三区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 成人18禁在线播放| 亚洲国产欧美网| 午夜激情av网站| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| avwww免费| 午夜福利欧美成人| 欧美黑人欧美精品刺激| 精品国产乱码久久久久久男人| 热99re8久久精品国产| www.熟女人妻精品国产| netflix在线观看网站| 又紧又爽又黄一区二区| 久久久国产欧美日韩av| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产成人影院久久av| 在线播放国产精品三级| 中文字幕av电影在线播放| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲国产精品合色在线| 男人操女人黄网站| 国产成人免费观看mmmm| 啦啦啦在线免费观看视频4| 成人av一区二区三区在线看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产精品99久久99久久久不卡| 波多野结衣av一区二区av| 18禁国产床啪视频网站| 久久久国产精品麻豆| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 免费观看精品视频网站| 国产亚洲av高清不卡| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产精品九九99| 精品熟女少妇八av免费久了| 丰满迷人的少妇在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 在线永久观看黄色视频| 人成视频在线观看免费观看| www.精华液| 亚洲色图av天堂| 啦啦啦免费观看视频1| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 日韩欧美在线二视频 | 精品一区二区三卡| 女性生殖器流出的白浆| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲伊人色综图| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久香蕉国产精品| 久久精品成人免费网站| 国产97色在线日韩免费| 亚洲午夜理论影院| 99久久人妻综合| 十八禁高潮呻吟视频| 欧美黑人精品巨大| 黄色视频,在线免费观看| 超色免费av| 91老司机精品| 999久久久精品免费观看国产| 热99久久久久精品小说推荐| 久久人妻熟女aⅴ| 国产成人av教育| 男女之事视频高清在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 午夜福利在线免费观看网站| 免费观看a级毛片全部| 久久午夜综合久久蜜桃| 又紧又爽又黄一区二区| 久久久精品免费免费高清| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 精品午夜福利视频在线观看一区| 一本大道久久a久久精品| 91字幕亚洲| 国产精品.久久久| 后天国语完整版免费观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久久精品区二区三区| 久久亚洲精品不卡| 免费人成视频x8x8入口观看| 一级片'在线观看视频| 久久 成人 亚洲| av天堂在线播放| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 午夜日韩欧美国产| 悠悠久久av| 黄色女人牲交| 亚洲五月天丁香| 久久久久视频综合| 亚洲一区中文字幕在线| 日韩精品免费视频一区二区三区| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 9色porny在线观看| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产精品1区2区在线观看. | 久久九九热精品免费| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲精品成人av观看孕妇| 午夜免费观看网址| 欧美精品一区二区免费开放| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 母亲3免费完整高清在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 黄色成人免费大全| 亚洲视频免费观看视频| 久99久视频精品免费| 中文字幕av电影在线播放| 久久久久久久国产电影| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 丝袜人妻中文字幕| 最近最新中文字幕大全电影3 | 老司机在亚洲福利影院| 国产欧美日韩精品亚洲av| 黄色片一级片一级黄色片| 久久 成人 亚洲| 亚洲专区中文字幕在线| 国产主播在线观看一区二区| 宅男免费午夜| 欧美午夜高清在线| 亚洲黑人精品在线| 国产亚洲欧美精品永久| 岛国在线观看网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一级毛片精品| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 老司机福利观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产午夜精品久久久久久| 无人区码免费观看不卡| 不卡av一区二区三区| 他把我摸到了高潮在线观看| 午夜精品在线福利| 亚洲av成人一区二区三| 国产真人三级小视频在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲在线自拍视频| 精品人妻1区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产精品 欧美亚洲| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲精品乱久久久久久| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产91精品成人一区二区三区| 久99久视频精品免费| 老司机深夜福利视频在线观看| av视频免费观看在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 日日夜夜操网爽| 下体分泌物呈黄色| 久久青草综合色| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 真人做人爱边吃奶动态| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲视频免费观看视频| 国产成人系列免费观看| 久久亚洲真实| e午夜精品久久久久久久| 在线观看日韩欧美| 免费观看精品视频网站| 老汉色∧v一级毛片| 高清视频免费观看一区二区| 男人的好看免费观看在线视频 | 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 精品无人区乱码1区二区| 国产成+人综合+亚洲专区| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 制服人妻中文乱码| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产人伦9x9x在线观看| 18禁观看日本| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一夜夜www| xxx96com| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 天天操日日干夜夜撸| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久亚洲真实| 91精品国产国语对白视频| 搡老岳熟女国产| 久久久久国内视频| 窝窝影院91人妻| 亚洲欧美色中文字幕在线| 又大又爽又粗| 91九色精品人成在线观看| av在线播放免费不卡| 在线看a的网站| 一级毛片女人18水好多| videos熟女内射| 最近最新免费中文字幕在线| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 日韩有码中文字幕| 亚洲国产欧美网| 精品视频人人做人人爽| 午夜精品久久久久久毛片777| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 在线观看66精品国产| 国产高清激情床上av| 麻豆国产av国片精品| 国产高清videossex| 亚洲成国产人片在线观看| 成年版毛片免费区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 麻豆成人av在线观看| 亚洲九九香蕉| 黄色a级毛片大全视频| 午夜精品国产一区二区电影| 一级片免费观看大全| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 99久久国产精品久久久| 国产精品99久久99久久久不卡| 成人亚洲精品一区在线观看| 午夜成年电影在线免费观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 1024视频免费在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲国产精品sss在线观看 | 91精品三级在线观看| 很黄的视频免费| 一级黄色大片毛片| 人妻一区二区av| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲九九香蕉| 国产免费现黄频在线看| 操出白浆在线播放| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 丝瓜视频免费看黄片| 69av精品久久久久久| 韩国av一区二区三区四区| 午夜福利乱码中文字幕| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久久精品区二区三区| a级毛片在线看网站| 午夜日韩欧美国产| 亚洲男人天堂网一区| 国产成人欧美在线观看 | 欧美黑人精品巨大| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲精品久久午夜乱码| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久精品国产亚洲av高清一级| 真人做人爱边吃奶动态| 宅男免费午夜| 欧美另类亚洲清纯唯美| 新久久久久国产一级毛片| 一区二区三区精品91| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 99国产精品免费福利视频| 最新在线观看一区二区三区| 一区二区三区激情视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 免费av中文字幕在线| 国产乱人伦免费视频| 视频区欧美日本亚洲| 欧美国产精品一级二级三级| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日韩三级视频一区二区三区| 欧美大码av| 在线观看一区二区三区激情| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 动漫黄色视频在线观看| a级毛片在线看网站| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | av国产精品久久久久影院| 9热在线视频观看99| 日韩欧美免费精品| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲片人在线观看| 国产亚洲欧美98| 中文字幕制服av| 亚洲人成电影观看| 色老头精品视频在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产av一区二区精品久久| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 在线观看舔阴道视频| 黄色视频不卡| 国产高清国产精品国产三级| 免费在线观看影片大全网站| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美性长视频在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 黄色怎么调成土黄色| 免费看a级黄色片| 午夜福利在线观看吧| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美午夜高清在线| av网站在线播放免费| 亚洲欧美激情在线| 久久久久久久午夜电影 | 午夜久久久在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| tocl精华| 香蕉久久夜色| 国产一区二区激情短视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美av亚洲av综合av国产av| av片东京热男人的天堂| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 中文欧美无线码| 一级黄色大片毛片| 国产精品 国内视频| 国产精品国产高清国产av | 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费在线观看日本一区| 久久中文看片网| 多毛熟女@视频| 成年动漫av网址| 国产成人欧美在线观看 | 少妇的丰满在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 人人妻人人澡人人看| 美女视频免费永久观看网站| 国产色视频综合| 国产精品一区二区在线不卡| 日韩免费高清中文字幕av| 黄片小视频在线播放| 精品久久久久久电影网| 在线观看66精品国产| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 色综合婷婷激情| 久久久久精品人妻al黑| av一本久久久久| 国产淫语在线视频| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产99白浆流出| 99精国产麻豆久久婷婷| 中文字幕最新亚洲高清| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲人成电影免费在线| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲五月天丁香| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲 国产 在线| 日本一区二区免费在线视频| 自线自在国产av| 黄片大片在线免费观看| 不卡一级毛片| 最新的欧美精品一区二区| av不卡在线播放| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 咕卡用的链子| 十八禁网站免费在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美乱色亚洲激情| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲欧美一区二区三区久久| 精品国产乱码久久久久久男人| 一本综合久久免费| 亚洲九九香蕉| 欧美国产精品va在线观看不卡| 欧美日韩乱码在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 一夜夜www| 下体分泌物呈黄色| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲av熟女| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久性视频一级片| 国产99白浆流出| av福利片在线| 99久久人妻综合| 女人被狂操c到高潮| 国产精品久久久av美女十八| 国产男女内射视频| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产一区在线观看成人免费| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲少妇的诱惑av| 久久久国产成人精品二区 | 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 制服诱惑二区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 日本wwww免费看| 国产男靠女视频免费网站| 最新在线观看一区二区三区| 国产不卡一卡二| 欧美精品av麻豆av| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 久久久久久久国产电影| 黄色片一级片一级黄色片| 国产在线一区二区三区精| 成年女人毛片免费观看观看9 | 视频在线观看一区二区三区| 亚洲五月色婷婷综合| 黄片大片在线免费观看| 午夜视频精品福利| 操美女的视频在线观看| 精品久久久久久,| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 在线观看一区二区三区激情| 欧美另类亚洲清纯唯美| 黄片小视频在线播放| 中文字幕av电影在线播放| 国产精品av久久久久免费| 香蕉久久夜色| 老鸭窝网址在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久久国产成人免费| 国产深夜福利视频在线观看| 操美女的视频在线观看| 国产淫语在线视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 99热只有精品国产| 一区二区三区国产精品乱码| 国产伦人伦偷精品视频| 一级a爱视频在线免费观看| 大香蕉久久成人网| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 99re在线观看精品视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 大香蕉久久网| 亚洲欧美一区二区三区久久| 人成视频在线观看免费观看| 国产亚洲一区二区精品| 欧美日韩福利视频一区二区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 欧美中文综合在线视频| 99热只有精品国产| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 岛国在线观看网站| 中文欧美无线码| 极品少妇高潮喷水抽搐| svipshipincom国产片| 天堂动漫精品| 成人永久免费在线观看视频|