活性氧對P-糖蛋白調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展

董憲喆，畢明剛

惡性腫瘤是人類死亡的重要原因之一，化療是目前臨床治療惡性腫瘤的主要手段。而腫瘤的化療被內(nèi)源性或獲得性多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)所限制，其中P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的過表達(dá)及其對底物的外排作用是最主要也是最普遍的耐藥機(jī)制。P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥表型是以P-gp高表達(dá)，使藥物外排增加，細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積減少為特征的。許多體外多藥耐藥模型的建立就是采用抗癌藥物反復(fù)處理培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞或化療后復(fù)發(fā)的腫瘤的方法的。在逆轉(zhuǎn)MDR表型的的策略中，化學(xué)逆轉(zhuǎn)劑被普遍接受，其主要通過逆轉(zhuǎn)劑與MDR轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合，競爭性抑制多藥耐藥相關(guān)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對化療藥物的外排而逆轉(zhuǎn)MDR［1］。另外下調(diào)MDR基因的表達(dá)，進(jìn)而抑制其編碼的P-gp的過表達(dá)也是一個有效的策略［2］。因此，這些逆轉(zhuǎn)劑特異性較差，往往有不明確的嚴(yán)重的不良反應(yīng)。所以，能直接抑制P-gp的表達(dá)，同時具有一定的抗腫瘤活性的逆轉(zhuǎn)劑具有相當(dāng)高的臨床應(yīng)用價值。

1 P-gp與多藥耐藥

P-gp是由多藥耐藥基因(MDR1)編碼的分子量為170 ku的與腫瘤多藥耐藥有關(guān)的跨膜磷酸糖蛋白，又稱P-170。其介導(dǎo)的MDR機(jī)制在目前關(guān)于MDR發(fā)生中研究的較為深入，目前臨床上主要的MDR逆轉(zhuǎn)劑也是以P-gp為靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)MDR的［3］。P-gp最早在秋水仙堿耐藥的中國倉鼠卵巢中發(fā)現(xiàn)，屬于轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ATP結(jié)合盒(ATP-binding cassette，ABC)超家族，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在人的多種正常組織中也廣泛存在，是人體內(nèi)有毒物質(zhì)的清除者，能抵御外源性毒素對機(jī)體正常組織造成的損傷［4］。它在多種具有天然耐藥性和獲得性耐藥表型的腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)，多項研究顯示其過表達(dá)是腫瘤化療過程中產(chǎn)生MDR現(xiàn)象的主要原因［5］。

P-gp由1 280個氨基酸殘基組成，有4個基本結(jié)構(gòu)域，即兩個疏水性的跨膜區(qū)(transmembrane domains，TMD)和兩個親水性的核苷酸結(jié)合區(qū)(nucleotide-binding domains，NBD)。分別具有結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)底物的功能和結(jié)合并水解ATP釋放能量的功能［6］。P-gp在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成，最后定位于細(xì)胞膜。其在細(xì)胞膜外側(cè)有3個N連接的糖基化位點(diǎn)，在高爾基體上進(jìn)行糖基化修飾，但糖基化修飾不是P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)底物的關(guān)鍵［7］，只有助于P-gp發(fā)揮其它的生理作用。目前關(guān)于P-gp的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究結(jié)果尚不一致，主要有幾種模型，包括孔模型、外轉(zhuǎn)酶模型、疏水真空泵模型等，分別從不同角度論證了P-gp對底物轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制［8］。在這些模型中，P-gp是ATP依賴的疏水真空泵的觀點(diǎn)被廣泛接受。該假設(shè)認(rèn)為底物與P-gp上相應(yīng)的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合后，兩個NBD分別與一個ATP結(jié)合，同時形成NBD二聚體;二聚體導(dǎo)致TMD構(gòu)象的改變，結(jié)合位點(diǎn)轉(zhuǎn)移至胞外，同時使得P-gp與底物的親和力下降，底物脫離P-gp，在胞外釋放出來。隨后ATP水解使NBD二聚體分離，P-gp恢復(fù)原來的構(gòu)象。在整個過程中，ATP的結(jié)合和水解起到了至關(guān)重要的作用，故而認(rèn)為P-gp具有ATP酶的活性［9］。P-gp的底物分子量一般較大，多為脂溶性物質(zhì)，易與P-gp結(jié)合，可被動擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞［10］。目前已發(fā)現(xiàn)多種常用藥物均為P-gp的底物，如紫杉醇、長春新堿、秋水仙堿、替尼泊苷、阿霉素、依托泊苷、利多卡因等。所以，尋找P-gp的抑制劑勢在必行。

2 ROS的生理作用及其誘導(dǎo)劑

ROS是呼吸鏈底物端和氧端漏出的電子沒有參加ATP合成，而在線粒體內(nèi)被氧化產(chǎn)生的活性氧自由基［11］。ROS是細(xì)胞內(nèi)重要的信號分子，有研究顯示［12］，納摩爾水平的ROS是有利于細(xì)胞增殖的，而微摩爾水平的ROS則可以激活細(xì)胞內(nèi)凋亡途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，毫摩爾水平的ROS可致細(xì)胞損傷壞死。ROS是線粒體去極化的重要介質(zhì)，可以引起caspase-9活化，激活EPK1/2，激活線粒體凋亡途徑;可以促進(jìn)CD95 DISC的形成和caspase-8的活化，激活死亡受體途徑;還可以刺激內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+的釋放，繼而激活核酸內(nèi)切酶，造成DNA損傷，或激活蛋白激酶C，引起原癌基因表達(dá)，即激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［13］。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種抗腫瘤藥物或細(xì)胞毒藥物，如砷劑［14］、非甾體抗炎藥、調(diào)節(jié)Ca2+的藥物、某些植物提取物、以及電離輻射、多柔比星等作為外源性的促凋亡信號，都是通過引起細(xì)胞內(nèi)ROS水平的升高，破壞細(xì)胞內(nèi)氧化還原的平衡而起到誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用的［15］。

3 ROS對P-gp的調(diào)節(jié)作用

3.1 過高濃度ROS對P-gp的調(diào)節(jié) 不同濃度的ROS在機(jī)體內(nèi)的作用可能是截然相反的。有研究顯示高濃度的ROS導(dǎo)致細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)會升高M(jìn)DR1和MRP-1基因的表達(dá)。Christina等［16］將大鼠肝細(xì)胞用過氧化氫酶CAT抑制劑預(yù)處理1 h后再用過氧化氫處理，發(fā)現(xiàn)MDR1基因的mRNA和P-gp的表達(dá)均被上調(diào)，羅丹明123外排增加。而抗氧化劑(1 mmol·L－1維生素 C，10 mmol·L－1甘露醇，2% 二甲基亞砜，10 mmol·L－1N-乙酰半胱氨酸)則可以明顯抑制MDR1基因mRNA和P-gp的過表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)僅當(dāng)過氧化氫的濃度超過500 μmol·L－1時P-gp的水平才被上調(diào)。此外，紫外照射、細(xì)胞外pH較低以及滲透壓休克、熱休克等應(yīng)激反應(yīng)都能誘導(dǎo)P-gp的表達(dá)，而這些應(yīng)激因素都伴隨著內(nèi)源性的ROS的大量產(chǎn)生，其水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于生理水平。

環(huán)氧化酶-2(Cox-2)是催化前列腺素合成第一步的酶，在大多數(shù)腫瘤中過表達(dá)，具有抗凋亡作用。Cox-2是ROS的來源，能導(dǎo)致內(nèi)源性ROS的明顯升高以及DNA單鏈斷裂，而這種現(xiàn)象可以被Cox-2特異性抑制劑SC 58125明顯抑制［17］。近來發(fā)現(xiàn)Cox-2對P-gp有一定的上調(diào)作用，而Cox-2抑制劑則可以抑制P-gp的表達(dá)。Vimal等［18］以腺病毒為載體把Cox-2 cDNA轉(zhuǎn)染到大鼠腎小球細(xì)胞并采用基因芯片觀察差異基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在Cox-2過表達(dá)的細(xì)胞內(nèi)MDR1基因表達(dá)明顯升高，而MDR1基因表達(dá)的上調(diào)可以被Cox-2的特異性抑制劑NS398抑制。Zatelli等［19］也發(fā)現(xiàn)Cox-2抑制劑通過抑制P-gp的表達(dá)而抑制乳腺癌細(xì)胞的化療耐藥性?？梢奀ox-2對P-gp的表達(dá)有一定的調(diào)節(jié)作用，推測這是由于過量的Cox-2能明顯升高細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，引發(fā)細(xì)胞的氧化應(yīng)激，應(yīng)激狀態(tài)下的細(xì)胞為了避免受到過氧化損傷，使P-gp清除外源性有害物質(zhì)的作用增強(qiáng)，表達(dá)升高。而Cox-2抑制劑則能降低細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，由此推測此時ROS的濃度應(yīng)高于生理水平但低于應(yīng)激水平，Cox-2抑制劑對P-gp的調(diào)節(jié)作用可能是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)ROS的含量而達(dá)到的。

有研究發(fā)現(xiàn)P-gp的過表達(dá)與抗凋亡的Bcl-xL蛋白水平相關(guān)，認(rèn)為P-gp可能是通過調(diào)節(jié)caspase依賴的凋亡途徑抑制凋亡的。另外，多項研究表明，缺氧的實(shí)體腫瘤易于產(chǎn)生化學(xué)耐藥性，并且由此導(dǎo)致的預(yù)后不良更甚于供氧充足的腫瘤。故推測實(shí)體瘤中內(nèi)源性P-gp的表達(dá)與腫瘤組織中心缺氧有關(guān)，又因為ROS作為細(xì)胞內(nèi)重要的信號分子，在缺氧狀態(tài)下水平明顯升高，被認(rèn)為是缺氧狀態(tài)下最早的損傷信號［20］，推測ROS的過度升高造成的細(xì)胞氧化應(yīng)激，繼而上調(diào)P-gp的表達(dá)。ROS作為調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的信號因子時，其濃度在納摩爾到微摩爾水平，此濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于造成DNA斷裂所需要的濃度水平。而應(yīng)激狀態(tài)下的ROS水平明顯高于生理條件下，已經(jīng)達(dá)到毫摩爾水平，當(dāng)過高濃度的ROS對細(xì)胞生存造成嚴(yán)重威脅時，P-gp的生理角色就轉(zhuǎn)變成毒素清除者，旨在防止細(xì)胞凋亡。

3.2 高濃度ROS對P-gp的調(diào)節(jié) ROS水平的過度升高可刺激細(xì)胞在氧化應(yīng)激狀態(tài)下進(jìn)行自我保護(hù)，反而使得P-gp的表達(dá)升高。而在抗氧化劑或氧化劑抑制劑的適量存在下，則可以使得細(xì)胞內(nèi)ROS水平適度高于生理水平，而降低P-gp的表達(dá)。

3.2.1 谷胱甘肽抑制劑對P-gp的調(diào)節(jié) 谷胱甘肽是機(jī)體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，它能夠清除掉人體內(nèi)的自由基，保護(hù)許多蛋白質(zhì)和酶等分子中的巰基不被自由基等有害物質(zhì)氧化，從而讓蛋白質(zhì)和酶等分子發(fā)揮其生理功能。有研究顯示［21］，細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的活性被谷胱甘肽抑制劑抑制后，內(nèi)源性的多藥耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-gp的表達(dá)同時被下調(diào)。丁胱亞磺酰亞胺(L-Buthionine Sulfoximine，BSO)是一種人工合成的氨基酸，可抑制γ-谷氨酰胺半胱氨酸合成酶的合成，降低細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的水平，已經(jīng)成功應(yīng)用于癌癥患者的體內(nèi)實(shí)驗，并顯示出使腫瘤細(xì)胞對抗癌藥物增敏的效果［22］。Maria等采用BSO處理細(xì)胞抑制細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的合成，進(jìn)而升高細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞內(nèi)ROS升高的同時，P-gp的表達(dá)被下調(diào)。同時 p27Kip1、ERK1/2及JNK被激活。而BSO處理后的細(xì)胞內(nèi)P-gp表達(dá)的下調(diào)可以被多種受體絡(luò)氨酸激酶信號途徑的阻斷劑所終止［23］，如蛋白激酶C抑制劑BIM-1、Ro-31-8220、p21ras法尼基蛋白轉(zhuǎn)化酶抑制劑Ⅲ、抑制ERK1/2活化的c-Raf抑制劑ZM336372和PD98059等。由此可見，ROS對P-gp的表達(dá)有一定的調(diào)節(jié)作用。而谷胱甘肽抑制劑通過升高細(xì)胞內(nèi)ROS水平，可以下調(diào)細(xì)胞內(nèi)P-gp的表達(dá)。其具體的作用機(jī)制可能是ROS作為第二信使參與酪氨酸激酶信號途徑，通過激活該信號途徑，使MAPK成員磷酸化，進(jìn)而下調(diào)P-gp蛋白的表達(dá)。

3.2.2 糖酵解抑制劑對P-gp的調(diào)節(jié) 糖酵解途徑是指細(xì)胞在細(xì)胞質(zhì)中分解葡萄糖生成丙酮酸的過程，這一過程在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行，不需要氧氣，每一反應(yīng)基本都由特異的酶催化，并伴有少量ATP的生成。Maria等［24］采用轉(zhuǎn)染了P-gp-EGFP融合基因的前列腺癌細(xì)胞DU-145、神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞Gli36及人子宮頸癌細(xì)胞KB-3-1，這些細(xì)胞都有P-gp的高表達(dá)，使用碘醋酸酯(IA)或2-脫氧-D-葡萄糖(2-DDG)等糖酵解抑制劑抑制上述細(xì)胞糖酵解24 h后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高，同時P-gp表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞對多柔比星的外排作用被明顯減弱。而外源性自由基清除劑丙酮酸鹽在降低ROS的產(chǎn)生的同時，P-gp的表達(dá)及細(xì)胞對底物多柔比星的外排作用均升高。由此可見P-gp的表達(dá)水平和腫瘤細(xì)胞糖酵解密切相關(guān)，可能是由于糖酵解抑制劑可以通過干擾細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)，升高內(nèi)源性ROS水平，進(jìn)而下調(diào)P-gp的表達(dá)，抑制細(xì)胞對多柔比星的外排，也提示了糖酵解抑制劑在逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥表型方面的前景。

3.2.3 HIF-1α對P-gp的調(diào)節(jié) 缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxiainducible factor-1α，HIF-1α)是缺氧或某些氧化應(yīng)激狀態(tài)下產(chǎn)生的誘導(dǎo)低氧基因和修復(fù)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的調(diào)節(jié)因子。低氧時HIF-1α表達(dá)增強(qiáng)，由此誘發(fā)的基因表達(dá)可以增加缺氧組織氧供或降低氧耗，使細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)保持平衡，在氧充足的條件下HIF-1α的亞基受到蛋白酶體的降解和遍在蛋白化作用的調(diào)節(jié)，而這種調(diào)節(jié)作用是依賴氧的存在的。研究顯示［25］，P-gp在缺氧的條件下受 HIF-1α的調(diào)節(jié)。在 ROS生成酶Nox-1過表達(dá)的前列腺細(xì)胞DU-145Nox1及其親代細(xì)胞DU-145中，多柔比星處理后的DU-145Nox1細(xì)胞內(nèi)HIF-1α和P-gp水平均明顯低于DU-145細(xì)胞，而ROS水平則明顯高于親代細(xì)胞DU-145，并且此時P-gp介導(dǎo)的MDR減弱。而用自由基清除劑維生素E和維生素C預(yù)處理的DU-145Nox1細(xì)胞中，HIF-1α和 P-gp水平均升高，但對 MDR1 mRNA的表達(dá)沒有影響。可見HIF-1α和ROS在蛋白水平上對P-gp的表達(dá)存在一定的調(diào)節(jié)作用，ROS水平的升高可以減少P-gp的表達(dá)，抑制耐藥細(xì)胞的MDR表型。但是ROS和HIF-1α何者為上游調(diào)控者還有待于進(jìn)一步研究。

3.2.4 其他ROS誘導(dǎo)劑對P-gp的調(diào)節(jié) 其他ROS誘導(dǎo)劑也表現(xiàn)出對P-gp的調(diào)節(jié)作用。在低濃度的過氧化氫和表皮生長因子處理的細(xì)胞中P-gp的表達(dá)下調(diào)，且都能夠適度升高細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，其程度不至于造成細(xì)胞的氧化應(yīng)激，使細(xì)胞損傷性壞死，由此可以認(rèn)為P-gp的表達(dá)受低濃度ROS的調(diào)節(jié);在腫瘤壞死因子α(TNF-α)處理過的細(xì)胞內(nèi)P-gp表達(dá)下調(diào)，同時MDR表型被逆轉(zhuǎn)［26］。而TNF-α是利用低濃度的ROS進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的，進(jìn)一步說明 P-gp表達(dá)受低濃度的ROS的調(diào)節(jié)。Silvina等［27］研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)的重亞基鐵蛋白(heavy ferritin，H-FT)也能通過減輕細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)，誘導(dǎo)P-gp的表達(dá)。H-FT轉(zhuǎn)染的細(xì)胞MDR1 mRNA和P-gp表達(dá)增加，細(xì)胞表現(xiàn)出獲得性MDR表型。H-FT有亞鐵氧化酶活性，其水平的升高可以降低細(xì)胞內(nèi)正常的ROS水平。由此可見，內(nèi)源性ROS水平的適度升高可以防止MDR表型的產(chǎn)生。

4 ROS調(diào)節(jié)P-gp表達(dá)的可能機(jī)制

綜上可見，ROS對P-gp確有調(diào)節(jié)作用，ROS水平的適度升高可以下調(diào)P-gp的表達(dá)，然而具體的機(jī)制目前還不確切。根據(jù)ROS的生理功能和P-gp的外排機(jī)制及其上游調(diào)控者的特點(diǎn)，推測有以下兩種可能:①可能與ROS對線粒體能量代謝的調(diào)節(jié)有關(guān)。ROS產(chǎn)生于線粒體，同時對線粒體也有一定的調(diào)節(jié)作用，一旦ROS產(chǎn)生過多或細(xì)胞抗氧化能力下降，線粒體就會受到ROS的氧化攻擊，造成線粒體電子傳遞鏈功能障礙、三羧酸循環(huán)障礙、ATP生成不足［28］，而ATP是細(xì)胞內(nèi)蛋白合成修飾等酶促反應(yīng)發(fā)生的基礎(chǔ)。故ROS有可能通過影響線粒體內(nèi)能量的生成進(jìn)一步影響P-gp的合成，使P-gp的表達(dá)下調(diào)。② ROS作為第二信使直接參與調(diào)節(jié)P-gp的上游調(diào)控通路。MAPK家族成員如細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)、JNK、MAPK等的激活可以下調(diào)mdr1基因的表達(dá)，而ROS處于MAPK的上游，可能通過調(diào)節(jié)這一通路進(jìn)而調(diào)節(jié)mdr1基因的表達(dá)，間接下調(diào)P-gp的表達(dá)［29］。

5 目前針對P-gp的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑

以P-gp為靶點(diǎn)的MDR逆轉(zhuǎn)劑的作用方式有幾種，或與底物競爭性結(jié)合P-gp疏水區(qū)，或與細(xì)胞膜作用，修飾改變P-gp蛋白構(gòu)象，或抑制P-gp與ATP的結(jié)合進(jìn)而阻斷外排泵能量來源，或與藥物結(jié)合成復(fù)合物使藥物不受P-gp識別，或直接下調(diào)P-gp的表達(dá)最終發(fā)揮抑制P-gp外排的作用［30］，目前發(fā)現(xiàn)的特異性高、不良反應(yīng)小的逆轉(zhuǎn)劑還很少。P-gp的抑制劑到目前已經(jīng)發(fā)展了三代，維拉帕米作為第一代P-gp逆轉(zhuǎn)劑的代表，是一種鈣離子拮抗劑。它的感受器是P-gp本身，是競爭性抑制劑，所以其發(fā)揮作用需要很高的血藥濃度，而高血藥濃度暗示可能會有高的不良反應(yīng)發(fā)生率，所以第一代逆轉(zhuǎn)劑由于其非特異性而限制了應(yīng)用。第二代逆轉(zhuǎn)劑的代表右旋維拉帕米，雖P-gp的親和力升高，但也由于較低的藥理活性而無法用于臨床。第三代逆轉(zhuǎn)劑在活性和特異性方面都明顯優(yōu)于前兩代逆轉(zhuǎn)劑，能明顯增加化療藥物在細(xì)胞內(nèi)的濃度，但是在提高癌癥患者的長期存活率方面并無顯效［31］。通過改變化療藥物劑型使之避免被P-gp識別并排出細(xì)胞外也是逆轉(zhuǎn)劑的一個研究方向，目前還在研究當(dāng)中。

6 ROS誘導(dǎo)劑成為P-gp調(diào)節(jié)劑的可能性

好的MDR逆轉(zhuǎn)劑首先應(yīng)該具有一定的抗腫瘤活性，在對正常細(xì)胞沒有明顯不良影響的情況下，通過直接下調(diào)P-gp蛋白及其上游基因MDR1的表達(dá)，從根本上逆轉(zhuǎn)MDR。而通過誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)源性ROS水平升高激活細(xì)胞內(nèi)各相關(guān)的凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路恰恰是多數(shù)抗腫瘤藥物的作用機(jī)制，同時ROS又能通過多種途徑下調(diào)P-gp蛋白和MDR1基因的表達(dá)，所以ROS誘導(dǎo)劑表現(xiàn)出了良好的逆轉(zhuǎn)MDR的前景。Liu等［32］發(fā)現(xiàn)了一種逆轉(zhuǎn)劑 ACMS-GOX，就是ROS生成酶，通過連續(xù)生成較低濃度的過氧化氫而逆轉(zhuǎn)P-gp過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞的MDR表型。很多研究還發(fā)現(xiàn)許多中藥單體也具有良好的逆轉(zhuǎn)MDR的活性，如粉防己堿，延胡索乙素，槲皮素，川芎嗪等［33］，其中有些單體成分也具有升高 ROS水平的功能。因此，可以看到ROS誘導(dǎo)劑作為逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的腫瘤MDR的新的逆轉(zhuǎn)劑有著良好的應(yīng)用前景。但是，在使用ROS誘導(dǎo)劑抑制P-gp表達(dá)的同時，我們必須清醒的認(rèn)識到，ROS誘導(dǎo)劑在升高腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性ROS的同時，其使用劑量需精確控制，因為細(xì)胞內(nèi)過高的ROS水平會引發(fā)細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)，反而使得細(xì)胞內(nèi)P-gp的表達(dá)上調(diào)。所以，我們可以推測，ROS誘導(dǎo)劑在作為抑制P-gp的MDR逆轉(zhuǎn)劑時，應(yīng)該盡可能的在保證有逆轉(zhuǎn)活性的前提下，使用較低劑量，以使細(xì)胞內(nèi)的ROS水平不會超過生理水平過高，造成細(xì)胞的氧化應(yīng)激，這樣也剛好可以降低逆轉(zhuǎn)劑對正常細(xì)胞的毒性和不良反應(yīng)。而目前的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑往往因為最初都是有其它功效的藥物，因此特異性較低，使用劑量較大，產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)而限制了其在臨床的應(yīng)用。所以ROS誘導(dǎo)劑在逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥方面有著很好的臨床研究價值。

［1］Martin L.Recent advances in the development of P-gp inhibitors［J］.Anticancer Agents Med Chem，2009，9(4):415 －36.

［2］Wang Q，Strab R，Kardos P，et al.Application and limitation of inhibitors in drug-transporter interactions studies［J］.Int J Pharm，2008，356(1 －2):12 －8.

［3］Hirose M.The process behind the expression of mdr-1/P-gp and mrp/MRP in human leukemia/lymphoma［J］.Anticancer Res，2009，29(4):1073 －7.

［4］涂春華，楊冬梓.P-糖蛋白結(jié)構(gòu)及作用機(jī)制［J］.中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報，2009，25(1):7 －11.

［4］Tu C H，Yang D Z.Molecular structure and functions of P-glycoprotein［J］.Chin J Biochem Mol Biol，2009，25(1):7 －11.

［5］張小平，陶永輝，陳其亮，等.人乳腺癌細(xì)胞MCF-7紫杉醇耐藥株的建立及其生物學(xué)特征研究［J］.中國藥理學(xué)通報，2008，24(6):804－9.

［5］Zhang X P，Tao Y H，Chen Q L，et al.Establishm and characteristics of a paclitaxel resistant human mammary adenocarcinoma cell subline(MCF-7/Taxol)［J］.Chin Pharmacol Bull，2008，24(6):804－9.

［6］劉 艷，崔德威.P-糖蛋白與腫瘤多藥耐藥［J］.海南醫(yī)學(xué)，2010，21(1):117 －9.

［6］Liu Y，Cui D W.P-glycoprotein and cancer multidrug resistance［J］.Hainan Med J，2010，21(1):117 －9.

［7］The human ATP-binding cassette(ABC)transporter supperfamily［J］.J Lipid Res，2001，21:1007 －17.

［8］曾 瑋，雷正明.多藥耐藥蛋白P-糖蛋白及其抑制劑的研究進(jìn)展［J］.西南軍醫(yī)，2010，12(1):114 －6.

［8］Zeng W，Lei Z M.The research progress of P-glycoprotein and P-glycoprotein inhibitor［J］.J Mil Surg Southw China，2010，12(1):114－6.

［9］Takeshita A，Shigeno K，Shinjo K，et al.All-trans retinoic acid(ATRA)differentiates acute promyelocytic leukemia cells independently of P-glycoprotein(P-gp)related multidrug resistance［J］.Leuk Lymphoma，2001，42(4):739 －46.

［10］李 斌.P-糖蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的構(gòu)效關(guān)系［J］.國外醫(yī)學(xué)·藥學(xué)分冊，2000，27(5):264 －8.

［10］Li B.The structure-activity relationship of multidrug resistance reversal agents which is mediated by P-glycoprotein［J］.Fore Med Sci Sect Pharm，2000，27(5):264 －8.

［11］Ralph S J，Rodríguez-Enríquez S，Neuzil J，et al.The causes of cancer revisited:“mitochondrial malignancy”and ROS-induced oncogenic transformation-why mitochondria are targets for cancer therapy［J］.Mol Aspects Med，2010，31(2):145 －70.

［12］Wartenberg M，Ling F C，Muschen M，et al.Regulation of the multidrug resistance transporter P-glycoprotein in multicellular tumor spheroids by hypoxia-inducible factor(HIF-1)and reactive oxygen species［J］.Faseb J，2003，17(3):503 －5.

［13］Roland M，Shamim N，Christoph R，Wolfgang F G.Cytosolic Ca2+prevents the subplasmalemmal clustering of STIM1:an intrinsic mechanism to avoid Ca2+overload［J］.Cell Sci，2008，121:3133－9.

［14］Charles P，Kim Caryn N，Guo F F，Bhalla Kapil N.Arsenic induces apoptosis of multidrug-resistant human myeloid leukemia cells that express Bcr-Abl or overexpress MDR，MRP，Bcl-2，or Bcl-Xl［J］.Blood，2000，95:1014 －22.

［15］Shuang L M，Cheng C A，Ye W，et al.Trichomislin，a novel ribosome-inactivating protein，induces apoptosis that involves mitochondria and caspase-3［J］.Archives Biochem Biophys，2005，434(2):258－65.

［16］Ziemann C，Burkle A，Kahl G F，Hirsch-Ernst K I.Reactive oxygen species participate in mdr1b mRNA and P-glycoprotein overexpression in primary rat hepatocyte cultures［J］.Carcinogenesis，1999，20(3):407 －14.

［17］Anna M，Gunamani S，Anderson L M.Mutant K-rasV12 increases COX-2，peroxides and DNA damage in lung cells［J］.Carcinogenesis，2004，25(11):2231 －7.

［18］Vimal A P，Michael J D，Sorokin A.Regulation of MDR-1(P-glycoprotein)by Cyclooxygenase-2［J］.Biol Chem，2002，277(41):38915－20.

［19］Zatelli M C，Luchin A，Tagliati F，et al.Cyclooxygenase-2 inhibitors prevent the development of chemoresistance phenotype in a breast cancer cell line by inhibiting glycoprotein p-170 expression［J］.Endocr Relat Cancer，2007，14(4):1029 －38.

［20］Benhar M，Engelberg D，Levitzki A.ROS，stress-activated kinases and stress signaling in cancer［J］.EMBO Rep，2002，3(5):420 －5.

［21］Maria W，Ling F C，Maurice S，et al.Down-regulation of intrinsic P-glycoprotein expression in multicellular prostate tumor spheroidsby reactive oxygen species［J］.Blol Chem，2001，276(20):17420－8.

［22］Xu Z，Yang J，Yu J，et al.Effects of BSO，GSH，Vit-C and DMPS on the nephrotoxicity of mercury［J］.Toxicol Ind Health，2007，23(7):403 －10.

［23］Shan X Y，Chen B A，Xia G H，et al.Reversal of multidrug-resistance in human leukemia cell line K562/A02 by tyrosine kinase inhibitors［J］.J Exp Hematol，2010，18(1):90 －5.

［24］Maria W，Madeleine R，Andre D，et al.Glycolytic pyruvate regulates P-glycoprotein expressionin multicellular tumor spheroids via modulation of the intracellular redox state［J］.Cell Biochem，2010，109:434－46.

［25］Maria W，Edda H，Heinrich S，et al.Reactive oxygen specieslinked regulation of the multidrug resistance transporter P-glycoprotein in Nox-1 overexpressing prostate tumor spheroids［J］.FEBS Lett，2005，579:4541 － 9.

［26］Safrit J T，Berek J S，Bonavida B.Sensitivity of drug-resistant human ovarian tumor cell lines to combined effects of tumor necrosis factor(TNF-alpha)and doxorubicin:failure of the combination to modulate the MDR phenotype［J］.Gynecol Oncol，1993，48(2):214－20.

［27］Silvina E，Hava G，Virginie P，et al.H-ferritin subunit overexpression in erythroid cells reduces the oxidative stress response and induces multidrug resistance properties［J］.Blood，1999，94:3593－603.

［28］Ralph S J，Rodríguez-Enríquez S，Neuzil J，Moreno-Sánchez R.Bioenergetic pathways in tumor mitochondria as targets for cancer therapy and the importance of the ROS-induced apoptotic trigger［J］.Mol Aspects Med，2010，31(1):29 －59.

［29］劉傳亮，王 輝，陳偉娟，等.Snail增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞MCF-7中P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥［J］.中國藥理學(xué)通報，2010，26(1):87 －90.

［29］Liu C L，Wang H，Chen W J，et al.Highexpression of Snail leads to the P-gp modulateds MDR in breast cancer cell MCF-7［J］.Chin Pharmacoll Bull，2010，26(1):87 －90.

［30］Mire Z，Glenn W K，Simon G.Inhibitors of multidrug resistance(MDR)affinity for MDR substrates［J］.Bioorg Med Chem Lett，2004，14:881 －5.

［31］戴春嶺，符立梧.腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的研究進(jìn)展［J］.中國藥理學(xué)通報，2005，21(5):513 －8.

［31］Dai C L，F(xiàn)u L W.The development of the reversal of tumor multidrug resistance［J］.Chin Pharmacol Bull，2005，21(5):513 －8.

［32］Liu Q，Shuhendler A，Cheng J，et al.Cytotoxicity and mechanism of action of a new ROS-generating microsphere formulation for circumventing multidrug resistance in breast cancer cells［J］.Breast Cancer Res Treat，2010，121(2):323 －33.

［33］譚 蓉.P-糖蛋白與中藥及其化學(xué)成分的相互作用［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29(23):2028－9.

［33］Tan R.The interaction of P-glycoprotein and Chinese medicinal materials or their chemical composition［J］.Chin Hosp Pharm J，2009，29(23):2028 －9.