實驗猴主要細(xì)菌性感染疾病的病理特點分析

趙璽龍，李 鋒，趙萬秋，王 力，宋蜀伶，戴 芳，楊麗琳，楊舉倫

（1.解放軍昆明總醫(yī)院病理科 實驗動物病理檢測中心，昆明 650032；2.昆明醫(yī)學(xué)院研究生部；昆明 650031；3.云南省靈長類實驗動物有限公司，昆明 650216）

實驗動物標(biāo)準(zhǔn)化是科學(xué)進行動物實驗和保證實驗結(jié)果精確的前提，近年來關(guān)于實驗猴的標(biāo)準(zhǔn)化檢測的要求愈來愈高，國家和政府也加強了對實驗動物質(zhì)量檢測的管理和認(rèn)證，發(fā)布了環(huán)境檢測、微生物檢測、遺傳檢測國家標(biāo)準(zhǔn)，但實驗動物病理檢測標(biāo)準(zhǔn)尚為發(fā)布，目前實驗動物病理檢測依據(jù)衛(wèi)生部《醫(yī)學(xué)實驗動物病理標(biāo)準(zhǔn)》和衛(wèi)生部實驗動物管委會制定的《醫(yī)學(xué)實驗動物監(jiān)測手冊實驗動物病理學(xué)監(jiān)測分冊》進行，有關(guān)實驗動物病理檢測基礎(chǔ)研究資料尚不完善。

實驗猴是非常重要和珍貴的實驗動物，在人類學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、毒理學(xué)等研究中具有重要作用，特別是在新藥臨床前安全性評價中非人靈長類是不可替代的實驗動物［1］。實驗猴價格昂貴，使用上也有更高的要求，目前有關(guān)實驗猴的病理檢測資料還很不足。在實驗動物微生物檢測國家標(biāo)準(zhǔn)中（國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，2001年）規(guī)定了影響實驗猴質(zhì)量的共17種必檢微生物項目（細(xì)菌5種，病毒5種，寄生蟲6種和皮膚病原真菌），但這些必檢微生物的病理改變?nèi)狈ρ芯?，國?nèi)尚未見報道，這給實驗猴病理檢測帶來困難。我們根據(jù)相關(guān)資料［2，3］選擇分析了實驗猴5種必檢細(xì)菌性疾病的臟器病理改變，補充了實驗猴檢測資料，有利于實驗動物病理檢測標(biāo)準(zhǔn)化。

1 材料方法

1.1 材料

選擇收集云南省靈長類中心2000年-2008年實驗猴臟器標(biāo)本86例，所選標(biāo)本有細(xì)菌病原學(xué)檢測資料，其中包括：沙門菌病20例、志賀菌病19例、結(jié)核桿菌病17例、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌病16例、空腸彎曲菌病14例。所有標(biāo)本均為實驗猴處死后2h以內(nèi)解剖，4％甲醛液玻璃容器密閉保存。

1.2 大體觀察、取材和制片

將收集好的臟器標(biāo)本編號后，按器官分別取出，進行大體觀察描述。主要病變器官和肉眼觀察有病變的部位重點取材。取材組織大小約為2×2cm，厚度約為0.3cm，將組織塊按動物組織脫水程序處理，常規(guī)石蠟包埋、制片、HE染色。

1.3 鏡下組織病理學(xué)檢查

OlympusBX41顯微鏡，由2名有經(jīng)驗的病理醫(yī)師鏡下分別觀察并記錄病變。當(dāng)所描述病變不同時與第三方上級醫(yī)師討論確定。

2 結(jié)果

2.1 沙門菌病病理變化

主要累及部位：空腸、回腸、肝臟、膽囊。大體觀察：腸管擴張，腸腔內(nèi)可見灰黃、灰紅色滲出物。腸黏膜腫脹、粗燥，可見片狀壞死和潰瘍，潰瘍呈橢圓形或圓形，邊緣較整齊。肝臟多有腫大，表面及切面可散在孤立性白色或黃色病灶。膽囊囊壁多增厚，呈灰白色。鏡下主要特點：特征性改變?yōu)閭庋磕[，可見病變處大量單核吞噬細(xì)胞（傷寒細(xì)胞），其胞漿內(nèi)可見被吞噬的紅細(xì)胞和或淋巴細(xì)胞（圖1）。病變腸道，黏膜充血水腫，上皮細(xì)胞有不同程度的變性壞死，伴炎細(xì)胞浸潤，中性粒細(xì)胞少見。黏膜下淋巴小結(jié)內(nèi)淋巴細(xì)胞減少甚至消失，可形成傷寒小結(jié)。部分區(qū)黏膜層廣泛壞死脫落，形成淺表潰瘍。肝臟內(nèi)散在肉芽腫結(jié)節(jié)，由中性粒細(xì)胞和多核巨細(xì)胞構(gòu)成，可見灶狀、片狀壞死，病變部位可見靜脈內(nèi)血栓。膽囊表現(xiàn)為黏膜急慢性炎、化膿性炎，囊壁充血水腫明顯，常見上皮細(xì)胞壞死脫落。

2.2 結(jié)核桿菌病病理變化

主要累及部位：肺、腸、腦、骨、淋巴結(jié)等。大體觀察：病灶小者如針頭、粟粒大小，灰白、灰黃色，境界清楚，大者可有2～5cm，有時可呈空洞性改變（肺）或表現(xiàn)為潰瘍（腸）。鏡下主要特點：病變處可見結(jié)核肉芽腫，肉芽腫中心有程度不等的粉染壞死灶，壞死徹底呈干酪樣，壞死灶周圍為結(jié)核性肉芽組織，可見類上皮細(xì)胞及Langhans巨細(xì)胞的（見圖2），Langhans巨細(xì)胞為多核巨細(xì)胞，直徑可達(dá)300μm，胞質(zhì)豐富。細(xì)胞核的數(shù)目有十個個到幾十個不等。核排列在胞漿周圍呈花環(huán)狀、馬蹄形或密集于胞體的一端。結(jié)核肉芽腫外圍伴有小淋巴細(xì)胞的浸潤和少量反應(yīng)性增生的纖維組織。隨病程進展，結(jié)核肉芽腫可發(fā)生鈣化或纖維化改變。

2.3 志賀菌病病理變化

主要累及部位：直腸和結(jié)腸。大體觀察：大腸腸腔擴大，腸壁可呈斑塊狀增厚，黏膜面散在瘀點、潰瘍。潰瘍較小，較表淺，邊緣不規(guī)則。腸黏膜表面可見假膜被覆。鏡下主要特點：黏膜水腫，充血、灶性出血，上皮細(xì)胞有不同程度的變性壞死，伴有多量炎細(xì)胞浸潤，腸黏膜表面被復(fù)假膜，由壞死黏膜上皮細(xì)胞，中性粒細(xì)胞和纖維素構(gòu)成（圖3）。部分區(qū)有潰瘍形成，潰瘍邊緣不整，底部不平，有較多肉芽組織。肉芽組織增生可引起腸腔狹窄。2.4 空腸彎曲菌病病理變化

主要累及部位：空腸、結(jié)腸。大體觀察：腸黏膜呈普遍性或斑塊狀紅斑，可散在瘀點、潰瘍，潰瘍一般較小，多呈散在分布。鏡下主要特點：黏膜水腫，腺體間及絨毛間距離增大，絨毛變粗短，黏膜固有層充血、出血，伴有中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤（圖4）。腺窩上皮黏液分泌增加，炎細(xì)胞可累及腺窩并形成腺窩膿腫，上皮細(xì)胞變性壞死、脫落，形成糜爛或潰瘍。

2.5 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌病病理變化

主要累及部位：小腸（回、盲腸為甚）、結(jié)腸，肝臟。大體觀察：回腸和盲腸末端腸壁腫脹，可見病變黏膜皺襞隆起，嚴(yán)重時可出現(xiàn)糜爛或潰瘍。腸系膜淋巴結(jié)常見腫大，切面可見灰黃色病灶。肝臟也可見灰黃色灶性病變。鏡下主要特點：腸黏膜充血水腫，多量中性粒細(xì)胞浸潤，組織細(xì)胞反應(yīng)性增生。部分區(qū)可形成與腸管平行的縱行潰瘍，潰瘍邊緣可略呈穿鑿狀（圖5）。潰瘍其表面被覆以大量中性粒細(xì)胞及纖維蛋白性滲出物。部分區(qū)可見由上皮樣細(xì)胞和巨細(xì)胞構(gòu)成的肉芽腫，潰瘍底部大量中性粒細(xì)胞浸潤，中央可有小膿腫形成。腸系膜淋巴結(jié)顯微鏡下可見散在或融合的化膿性病灶，伴有淋巴組織增生，血管增生。病變區(qū)肝細(xì)胞水樣變、嗜酸性變，伴有炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的壞死，甚至彌漫性大面積變性壞死（圖1～5見彩插4）。

3 討論

實驗猴5種細(xì)菌性感染疾病是實驗猴標(biāo)準(zhǔn)化檢查的重要檢查內(nèi)容，我們對這5種疾病的臟器標(biāo)本進行了病理大體、顯微鏡下觀察。結(jié)果顯示不同病原菌引起的病理學(xué)改變有相應(yīng)特點，與部分文獻報道一致［3-8］。5種必檢細(xì)菌可累及全身多處臟器，以結(jié)核分枝桿菌受累范圍最廣，其他4種細(xì)菌主要累及消化系統(tǒng)。病理改變大體檢查隨病情嚴(yán)重程度有不用表現(xiàn)。主要發(fā)病部位腸道表現(xiàn)為腸壁水腫、增厚、腸黏膜糜爛、潰瘍。顯微鏡下觀察以沙門菌病、結(jié)核桿菌病的病理改變最有特點，鏡下發(fā)現(xiàn)傷寒肉芽腫、結(jié)核肉芽腫可做出準(zhǔn)確初步診斷；小腸結(jié)腸炎耶爾森菌病鏡下為腸黏膜急性炎及腸系膜淋巴結(jié)化膿性肉芽腫；志賀菌病、空腸彎曲菌病鏡下類似主要表現(xiàn)為腸黏膜急性炎和表淺潰瘍。腸道是5種細(xì)菌性感染疾病的主要病變器官，應(yīng)做為實驗猴病理檢測的重要檢測內(nèi)容。病理檢查對5種必檢細(xì)菌性疾病的分析診斷有重要提示意義，通過對實驗猴病理檢測結(jié)果分析可以發(fā)現(xiàn)病理檢測在實驗動物細(xì)菌性感染疾病的監(jiān)測分析中具有重要意義，典型病變可以確診，在疾病初期病原尚難分離，病因診斷困難時，病理診斷可提出有價值的診斷意見，可為及時采取防范措施提供依據(jù)。

值得注意的是通過觀察，5種細(xì)菌性感染疾病有時個別不典型病例病理改變不典型，可表現(xiàn)為非特異性炎癥，相對缺乏特異性，為病理檢測增加了困難。因此實驗動物常規(guī)病理檢測應(yīng)該實驗室病原學(xué)檢查資料來完善檢測結(jié)果。實驗室病原學(xué)檢查是實驗動物質(zhì)量檢測的重要的組成部分，實驗室病原學(xué)檢查可較為迅速和準(zhǔn)確地提供病原學(xué)資料，是不能替代的檢測之一。但實驗室檢測不能對感染動物具體病變情況、是否出現(xiàn)器質(zhì)性改變，病變具體部位，是否合并、繼發(fā)其他病變等情況做出綜合分析判斷。實驗猴臟器病理檢查通過對臟器大體和顯微鏡現(xiàn)觀察，可了解和判斷具體病變程度，病變累及范圍，病變轉(zhuǎn)歸，對檢測的實驗猴可進行更為綜合和直觀的評價，動物臟器出現(xiàn)器質(zhì)性病變往往也會引起其他繼發(fā)改變，通過病理檢查是了解繼發(fā)病變的最為科學(xué)和有效的方式之一，這是實驗室檢測不能提供和判斷的。在實際操作中，需要結(jié)合實驗猴實驗室檢測資料來補充實驗猴細(xì)菌性感染疾病病理檢測，使之更加全面、科學(xué)地分析及診斷疾病。

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