大葉紫珠不同采收期總黃酮含量的研究

劉笑蓉 ，周日寶 *，唐麗君 ，童巧珍 ，劉湘丹 ，劉佳勝 ，羅躍龍

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)2008級研究生班，湖南 長沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)2009級研究生班，湖南 長沙 410208）

大葉紫珠不同采收期總黃酮含量的研究

劉笑蓉1，周日寶2*，唐麗君1，童巧珍2，劉湘丹2，劉佳勝3，羅躍龍2

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)2008級研究生班，湖南 長沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)2009級研究生班，湖南 長沙 410208）

目的 為確定大葉紫珠最佳的采收期和采收部位提供科學(xué)依據(jù)。方法 將湖南會同縣大葉紫珠種植基地不同時期采收的根、莖、葉，采用95%乙醇超聲提取3次，每次1 h，采用紫外分光光度法測定總黃酮含量。結(jié)果 大葉紫珠總黃酮含量的積累隨著植株的生長，總黃酮含量也隨之變化，根、莖中總黃酮含量逐步增加，葉中總黃酮含量逐漸減少；不同藥用部位總黃酮含量有顯著差別，依次為：葉＞莖＞根。結(jié)論該項研究根據(jù)有效成分含量動態(tài)變化的規(guī)律為確定大葉紫珠最佳采收期和采收部位提供了一定的實驗依據(jù)。

大葉紫珠；總黃酮；采收期；藥用部位；紫外分光光度法

2010年版《中國藥典》收錄了中成藥抗宮炎片，該藥具有散瘀止血、消腫鎮(zhèn)痛、清熱解毒的功效，是婦科保健和治療的常用中成藥[1]。藥材紫珠為該中成藥的主要原料藥材，來源于馬鞭草科紫珠屬藥用植物廣東紫珠Callicarpa kwangtungensis Chun。長期以來，中成藥抗宮炎片一直收購野生廣東紫珠為藥材原料，導(dǎo)致野生廣東紫珠資源瀕臨枯竭，人工種植剛剛起步，廣東紫珠藥材已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足抗宮炎片生產(chǎn)的需求?，F(xiàn)在市場上大量使用大葉紫珠Callicarpa macrophylla Vahl.替代廣東紫珠。湖南省會同縣已開展了大葉紫珠的人工種植。紫珠中的主要有效成分為黃酮類化合物[2-4]，我們開展了人工栽培大葉紫珠總黃酮含量動態(tài)變化的研究，以便為人工栽培大葉紫珠最佳的采收期和采收部位提供科學(xué)依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 材料

藥材采自湖南省會同縣紫珠種植研究試驗基地，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)周日寶教授鑒定植物系馬鞭草科紫珠屬大葉紫珠Callicarpa macrophylla Vahl.。從2009年10月12日起至2009年12月21日止每隔10 d采集植株，曬干，分別取植株的根、莖、葉作藥材供試品。

1.2 試劑

95%乙醇，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉（均為分析純）；蘆丁對照品（批號1001080-200707，湖南省藥檢所提供）。1.3 儀器

752 pc型紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司制造）；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；FA2004電子天平（上海恒平科學(xué)儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A(鞏義市予華儀器有限公司）；FW135型中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

精密稱取過60目篩的藥材粉末約3 g，加95%乙醇50 mL，80℃超聲波提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇至濾液低于100 mL為止，置100 mL量瓶中，加95%乙醇定容，量取10 mL至50 mL量瓶中,定容,即得。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取于120℃ 干燥至恒質(zhì)量的蘆丁對照品30.0 mg，置于100 mL量瓶中，加入95%乙醇 20 mL，置溫水中加熱使溶解，放冷，用95%乙醇定容。

2.3 吸收波長的確定

取對照品溶液和供試品溶液各5 mL，分別置25 mL量瓶中，定容，搖勻后分別于400～700 nm波長范圍掃描，2種溶液在495 nm處均無吸收峰。另取對照品和供試品溶液各5 mL，分別置25 mL量瓶中，加5%亞硝酸鈉1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉4 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min后分別于400～700 nm波長范圍掃描，在495 nm處均有最大吸收波長，紫外光譜形狀相同。見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取對照品溶液 1、2、3、4、5、6 mL，分別置 25 mL量瓶中，各加95%乙醇至25 mL，按“2.3”項下方法顯色，照分光光度法 (《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄VB)[5]，測定吸光度，繪制濃度一吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸直線方程：

結(jié)果表明蘆丁對照品溶液濃度在0.012～0.073 mg/mL。范圍內(nèi)溶液濃度與吸光度線性關(guān)系良好。

2.5 回收率實驗

精密稱取已知含量的大葉紫珠0.39 g，加入蘆丁對照品，按供試品溶液的制備方法平行制備6份,按上述方法處理測定。試驗結(jié)果蘆丁的平均回收率100.41%，RSD為1.46%，n=6。表明本含量測定方法準(zhǔn)確可靠，結(jié)果見表1。

表1 回收率實驗結(jié)果

2.6 樣品含量測定

精密量取供試品溶液5 mL，置25 mL量瓶中，按“2.3”項下方法測定，用回歸直線方程計算總黃酮含量，結(jié)果見表2。

表2 大葉紫珠不同采收期各部位超聲提取總黃酮含量測定結(jié)果

3 結(jié)論

預(yù)實驗中首先考察了冷凝回流提取與超聲提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，超聲提取的總黃酮含量要遠(yuǎn)高于冷凝回流提取的總黃酮含量。此外，考察了3個因素分別為：A乙醇濃度（%）、B 超聲時間（min）、C 提取次數(shù)，每個因子選取 3 水平，選用L9（34）正交表進(jìn)行試驗，以總黃酮的含量為考察指標(biāo)。正交試驗結(jié)果顯示：總黃酮提取的最優(yōu)條件為：95%乙醇、提取3次、每次1 h。實驗方法學(xué)考察中，儀器的精密度實驗，樣品的穩(wěn)定性實驗和重復(fù)性實驗的RSD均小于2%，表明方法的精密度好。

同一采收期，大葉紫珠各部位總黃酮含量高低依次為：葉＞莖＞根。植株總黃酮含量地上部分高于地下部分，隨著植株生長期的延長，植株葉中的總黃酮含量逐漸減少，莖、根中總黃酮含量逐步增加，說明總黃酮為葉片中的次生代謝產(chǎn)物，逐漸從植物地上部分轉(zhuǎn)移到地下部分。

大葉紫珠葉中有效成分總黃酮含量最高，由于紫珠是全株皆可入藥，所以在植株未落葉而即將落葉時采收藥材其藥用價值是最高的。

[1]馬延升,朱蘭翠.抗宮炎片臨床進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2004,14(10):69-71.

[2]王祝年,韓 壯.裸花紫珠的化學(xué)成分[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報,2007，15(4)：359-362.

[3]周伯庭，李新中，徐平聲，等.廣東紫珠地上部位化學(xué)成分研究(Ⅱ)[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，25(1)：20-22.

[4]梁紀(jì)軍，徐 凱.裸花紫珠總黃酮的抗炎、止血作用研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009，18（26）：3 161-3 162.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京.化學(xué)工業(yè)出版社,2005：附錄 VB.

Research of total flovone content in Callicarpa macrophylla Vahl.in different harvest time

LIU Xiao-rong,ZHOU Ri-bao,TANG Li-jun,TONG Qiao-zhen,LIU Xiang-dan,LIU Jia-sheng,LUO Yue-long
(TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)

ObjectiveTo study the best harvest times and medicinal part of Callicarpa macrophylla Vahl.Method The 95%ethanol was used for ultrasound extract three times,once an hour，and the total flavonoids content were tested by UV spectropnotometer.Result Total flavonolds accumulation of Callicarpa macrophylla Vahl.changed along with the growth of the plants,i.e.the contents increased gradually in the trunk and root decreased in leafs;and the contents of total flavonoids in different parts of the plant were significantly different,and the order was leaf＞root＞trunk.ConclusionThis research can provide a foundation to determine the best harvest times and medicinal part of Callicarpa macrophylla Vahl.

Callicarpa macrophylla Vahl.;total flavonoids;harvest times;medicinal part;UV spectropnotometer

* 周日寶，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：zhouribao20032003@yahoo.com.cn。

R284.1

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2010.11.011.034.03

2010-06-07

湖南省中醫(yī)藥管理局資助項目（2009010）；湖南省教育廳高校創(chuàng)新平臺開放基金資助項目（09k061）。

劉笑蓉(1986-),女,湖南常德人,在讀碩士研究生，從事中藥資源與質(zhì)量研究。

（本文編輯 徐愛良）