ＨＰＬＣ法測定小兒氨酚黃那敏顆粒中對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的含量

施　猛　嚴(yán)　玲　谷容斌

【摘要】目的：建立小兒氨酚黃那敏顆粒中對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的高效液相色譜（HPLC）含量測定方法。方法：采用Agilent HC-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以流動相為甲醇-磷酸緩沖液（稱取磷酸氫二鉀3.4g,加0.05%三乙胺，加水1000ml，磷酸調(diào)PH=4.0）（10:90）為流動相，紫外檢測波長為210nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μl。結(jié)果:對乙酰氨基酚在10μg/ml～140μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：A=28.51C+31.13 r=0.9998，平均回收率為99.74%，；馬來酸氯苯那敏在1μg/ml～8μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：A=23.617C+0.1903r=0.9999，平均回收率101.73%。結(jié)論：該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，為對乙酰氨基酚與馬來酸氯苯那敏含量測定提供了一種方法。

【關(guān)鍵詞】HPLC法;小兒氨酚黃那敏顆粒;對乙酰氨基酚;馬來酸氯苯那敏;含量測定

【中圖分類號】R969.1【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)12-0018-02

Determinate the content of Paracetamol and Chlorphenamine Maleate in Xiao'er

Anfen Huang Namin Kernel by HPLC

SHI Meng,YAN Ling,GU Rongbin

(Guangzhou HaiRui Pharmaceutical Co., Ltd.,Guangdong,Guangzhou,510663)

【Abstract】 objective:To establish a method for the determination of Paracetamol and Chlorphenamine Maleate in Xiao'er Anfen Huang Namin Kernel by HPLC。method:The chromatographic column was Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）.The Mobile phase was made up of acetronitrile- anhydrous di-potassium hydrogen phosphate- triethylamine(10：90：0.05).The UV detection wavelength was set at 210 nm.The flow rate was 1.0ml?min-1 .The column temperature was 30℃。results:The calibration curves were linear in the range of 10μg/ml～140μg/ml for Paracetamol(r=0.9998)，1μg/ml～8μg/ml for Chlorphenamine Maleate (r=0.9999)，The average recoveries were 99．73% with RSD of 0.94%;101.73% with RSD of 0.96%。Conclusion:The proposed method appeared to be simple，rapid，sensitive and accurste．It is available to the quality control of Xiaoer Anfen Huang Namln Granules。

【Keywords】HPLC；Xiao'er Anfen Huang Namin Kernel；Paracetamol；Chlorphenamine Maleate；Determination

小兒氨酚黃那敏顆粒是一種適用于緩解兒童普通感冒及流行性感冒引起的發(fā)熱、頭痛、四肢酸痛、打噴嚏、流鼻涕、鼻塞、咽痛等癥狀常用的復(fù)方制劑?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[1]中僅采用紫外-可見分光光度法測定對乙酰氨基酚的含量，專屬性不強(qiáng)，結(jié)果重現(xiàn)性差，且未控制馬來酸氯苯那敏的含量，因此產(chǎn)品質(zhì)量可控性差。為更有效地控制產(chǎn)品檢驗過程，本文建立反相高效液相色譜法（RP-HPLC）對小兒氨酚黃那敏顆粒中對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏含量進(jìn)行測定，結(jié)果準(zhǔn)確有效，為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供實驗依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1100高效液相色譜儀（G1311A四元梯度泵，G1367A自動進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，G1379A真空在線脫氣機(jī)，工作站Chemstation for LC，美國安捷倫公司），分析天平（XS205，梅特勒-托利多儀器上海有限公司），KQ-250B型超聲波清洗器。

1.2試藥對乙酰氨基酚對照品（100018-200408，中國藥品生物制品檢定所）；馬來酸氯苯那敏對照品（100047-200305，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純）（Fisher Scientific公司）；水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純；小兒氨酚黃那敏顆粒（09010502、09011501、09020701，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-磷酸緩沖液（稱取磷酸氫二鉀3.4g,加0.05%三乙胺，加水1000ml，磷酸調(diào)PH=4.0）（10：90）；溶劑：流動相；紫外檢測波長：210nm；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μl。以峰面積外標(biāo)法定量，理論塔板數(shù)以對乙酰氨基酚計算不得低于3000。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品貯備溶的制備①精密稱取對乙酰氨基酚對照品100.06mg于100ml量瓶中，加流動相適量，超聲溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。②精密稱取馬來酸氯苯那敏對照品25.63mg于250ml量瓶中，加流動相適量，超聲溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2供試品溶液的制備精密稱取裝量差異項下的樣品適量（約相當(dāng)于對乙酰氨基酚40mg）置50ml量瓶中，加流動相適量，超聲溶解，加流動相稀釋至刻度，過濾，取續(xù)濾液，得樣品（1）；精密移取續(xù)濾液5ml至100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，得樣品（2）?！緲悠罚?）用于測定馬來酸氯苯那敏含量，樣品（2）用于測定對乙酰氨基酚含量】

2.2.3專屬性試驗溶液的制備按其工藝處方比例制備不含對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的陰性樣品溶液，照上述樣品溶液的制備制成專屬性試驗溶液。

2.3專屬性試驗精密吸取對乙酰氨基酚對照品貯備液、馬來酸氯苯那敏對照品貯備各6ml置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。分別吸取配制好的對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏對照品溶液和按上述供試品溶液制備、專屬性試驗溶液制備好的樣品溶液、專屬性試驗溶液注入液相色譜儀并記錄色譜圖。結(jié)果在專屬性試驗溶液的色譜圖中并沒有出現(xiàn)對乙酰氨基酚及馬來酸氯苯那敏對應(yīng)的色譜峰，證明輔料不存在對樣品的干擾。（結(jié)果見圖1、圖2）

2.4線性關(guān)系考察精密吸取對乙酰氨基酚對照品貯備液溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0m、8.0ml、10.0ml、12.0ml、14.0ml，馬來酸氯苯那敏對照品貯備液溶2.0ml、4.0ml、6.0m、8.0ml、10.0ml、12.0ml、14.0ml、16.0ml液置于100ml容量瓶中，加流動相至刻度，定容,搖勻，得對乙酰氨基酚對照品濃度為10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml、120μg/ml、140μg/ml和馬來酸氯苯那敏對照品溶液濃度為1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、7μg/ml、8μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，每次進(jìn)樣均為10μl.，以峰面積A對濃度C進(jìn)行回歸，乙酰氨基酚對照品溶液濃度范圍10～140μg/ml.，回歸方程為：A= 28.51C +31.13 r=0.9998馬來酸氯苯那敏對照品溶液濃度范圍1～8μg/ml得回歸方程為：A= 23.617C +0.1903r=0.9999

2.5精密度試驗分別精密吸取對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，其峰面積的RSD%分別為：0.2%、0.5%，結(jié)果表明：該儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗取已處理好的同一供試品溶液，每隔2小時測定1次，共測7次，對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的峰面積的RSD%分別為：0.70%,1.11%，結(jié)果表明：本品在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7回收率試驗取上述不含對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的陰性對照溶液，按標(biāo)示量的80%、100%、120%加入對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏對照品溶液適量，進(jìn)樣，在上述色譜條件下測定對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的含量并分別計算回收率。結(jié)果顯示馬來酸氯苯那敏平均回收率101.73%，RSD為0.96％；對乙酰氨基酚回收率99.74% ，RSD為0.96％，結(jié)果表明：兩者回收率良好。（分別見表1、表2）。

2.8樣品含量測定取上述對照品溶液和樣品溶液，按上述色譜條件測定，用峰面積外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表3。

3討論

本試驗通過將對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏在紫外-可見分光光度儀下波長掃描[2] [3]，并對不同波長進(jìn)行比較，最終選擇檢測波長210nm。

曾經(jīng)選用流動相乙腈-0.5%磷酸溶液[4] 、乙腈-0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖溶液為流動相，乙腈、甲醇、流動相為溶劑，結(jié)果各組分之間的分離度不理想，有嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象。以甲醇-磷酸緩沖液（稱取磷酸氫二鉀3.4g,加0.05%三乙胺，加水1000ml，磷酸調(diào)PH=4.0）（10:90）為流動相的分離效果較好，樣品主峰達(dá)到良好的基線分離，峰型良好，在二極管陣列檢測器下對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏峰進(jìn)行了三維圖譜掃描[5]，對峰純度進(jìn)行檢查，結(jié)果表明色譜峰的純度良好，兩峰中均不含雜峰。

經(jīng)過方法學(xué)考察，表明該方法具有良好的線性、精密度、穩(wěn)定性、和準(zhǔn)確度?？蓪π喊狈狱S那敏顆粒中對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏的含量進(jìn)行有效、準(zhǔn)確定量，對產(chǎn)品進(jìn)行有效地質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1]國家藥品監(jiān)督管理局.WS-10001-(HD-0214)-2002(試行).小兒氨酚黃那敏顆粒試行標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]周靜安.高效液相法測定小兒氨酚黃那敏顆粒中二組分的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2005，22（5）：416.

[3]翁水旺.高效液相色譜法測定酚麻美敏口腔崩解片中對乙酰氨基酚、氫溴酸右美沙芬、鹽酸偽麻黃堿和馬來酸氯苯那敏4組分的含量[J].現(xiàn)代食品與藥品雜志,2006,16（2）:695-698

[4]黃諾嘉，羅麗娟.HPLC測定撲感片中對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的含量[J].中成藥,2007,29(10)：1462-1465

[5]J．D．Foumemn．A Chron～tospectroscopic Method for Analyzing the Signals Generated During High Performance Liquid Chromatography with Diode-Aray Detection．J．Chrom．Sci．，2001，39(4)：160

(收稿日期：2009.03.10)