用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化黃連的提取工藝研究

岑志芳　郭淑英

【摘要】目的：比較滲漉法、浸漬法、超聲波法對黃連中小檗堿的提出率，優(yōu)選最佳的提取工藝。方法：采用正交試驗(yàn)方法，用0.5%硫酸作溶媒，按3因素3水平進(jìn)行L₉(34)正交試驗(yàn)，以紫外分光光度法測定鹽酸小檗堿含量作為考察指標(biāo)。結(jié)果:影響小檗堿提出率的主要因素是提取方法。結(jié)論：從黃連中提取鹽酸小檗堿的最佳工藝為：A2B₃C₁，即用黃連粗粉，12倍溶媒量，滲漉法提取。

【關(guān)鍵詞】黃連；正交試驗(yàn)；超聲波；提?。粷B漉法；浸漬法

【中圖分類號】R931.71【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)12-0014-02

黃連為毛茛科植物黃連（Coptis Chinensis Franch.）的干燥根莖?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》列為上品。性寒，味苦，具有清熱燥濕，瀉火解毒之功效[1]，具有抗病原微生物、抗腹瀉、抗炎和免疫促進(jìn)以及降血壓、抗心律失常、降血糖等藥理作用，用于急性腸胃炎、口舌生瘡、燒燙傷、心率失常、高血壓、糖尿病等疾病的治療。黃連中主要有效成分為小檗堿,為避免黃連中小檗堿在煎煮、濃縮過程中損失,中藥復(fù)方制劑中的黃連常單獨(dú)提取。常用的提取方法有稀硫酸滲漉法、乙醇回流提取法、超聲提取法、連續(xù)回流法、煎煮法。筆者以分光光度法測定鹽酸小檗堿含量為指標(biāo)[2]，采用正交設(shè)計(jì)法，以0.5%硫酸溶液作為提取溶媒，考察影響小檗堿提出率的因素，篩選黃連的最佳提取工藝條件。

1儀器與試藥

電子天平(德國賽多利斯制造)，752紫外光柵分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠制造，9802003），CQ-20-36型超聲波清洗器（上海市弘興超聲電子儀器有限公司制造）；鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所）；黃連(購自佛山市中藥飲片廠，批號：20080911，產(chǎn)地：四川。)

2方法與結(jié)果

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取鹽酸小檗堿化學(xué)對照品4mg，用水溶解并移置100ml容量瓶中，定容，得濃度為40μg/ml的儲(chǔ)備液，備用。精密吸取鹽酸小檗堿儲(chǔ)備液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0ml于25ml容量瓶中，用蒸餾水作空白，在其最大吸收波長處（λmax=345nm）[3]分別測得吸收度，結(jié)果見表1。用最小二乘法經(jīng)線性回歸，得方程：C=15.6074A-0.125，r =0.9999。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在1.6～6.4μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2樣品溶液的制備將黃連粉碎成最粗粉（過10目不能過20目篩）、粗粉（過20目不能過40目篩）及中粉（過40目不能過60目篩）。稱取上述藥材粉末100g，用8倍、10倍、12倍0.5%硫酸溶液為溶媒，按滲漉法、浸漬法、超聲波法提取。滲漉法裝筒24小時(shí)后滲漉，按1000g藥材計(jì)算，滲漉速度設(shè)計(jì)為每分鐘為5ml；超聲波法用溶媒浸漬12小時(shí)后用超聲波清洗儀超聲30分鐘，再浸漬12小時(shí)，過濾得濾液。浸漬法浸漬24小時(shí)后，過濾得濾液。將上述各液配成含原藥材83.33mg/ml的溶液，備用。各取上述溶液1ml至25ml量瓶中，加0.5%硫酸溶液稀釋至刻度，再取上述溶液1ml至100ml量瓶中，加0.5%硫酸溶液稀釋至刻度（2500倍）。搖勻，以0.5%硫酸溶液作空白，在345nm波長處測定9份溶液的吸收度。選取藥材粉碎度（A）、溶媒用量（B）、提取方法（C）三個(gè)試驗(yàn)因素，每個(gè)因素取三個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn)。采用L₉（34）正交試驗(yàn)，正交試驗(yàn)及結(jié)果見表2。

滲漉法與浸漬法提前裝筒，浸泡24小時(shí)，再按上法操作。將各提取液配成含原藥材83.33mg/ml溶液，備用。取上述溶液各1ml，用蒸餾水稀釋200倍，搖勻，以蒸餾水作空白在345nm波長處測定9份溶液的吸收度，計(jì)算提出率。

3結(jié)果與討論

3.1實(shí)驗(yàn)方法①本研究采用正交試驗(yàn)對提取黃連的有效成分進(jìn)行工藝研究，滲漉法除了提取率高的優(yōu)點(diǎn)以外，可以避免鹽酸小檗堿成分受熱損失。本文以鹽酸小檗堿為評價(jià)指標(biāo),通過單因素和正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),考察藥材粉碎度、溶媒用量、和提取方法等因素對提取效果的影響，確定滲漉法提取黃連中鹽酸小檗堿成分的最佳工藝條件。②中草藥提取對于提高中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量和臨床療效最為重要。滲漉法提取較為完全，且省去了分離浸出液的時(shí)間和操作。

3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果從表5中R值直觀分析可知,A、B、C3因素對提出率的影響大小為C>A>B,即提取方法的影響最大，藥材粉碎度次之，溶媒用量影響最小。從表6的方差分析結(jié)果看，C、A因素對提出率的影響有顯著性差異，而B因素對提出率的影響沒有顯著性差異，因A₂>A₃>A₁，B₃>B₂>B₁，C₁>C₃>C₂,故應(yīng)選A₂B₃C1為鹽酸小檗堿提取的最佳方案，即將黃連加工成粗粉，用8倍量0.5%硫酸溶液為溶媒，滲漉法提取。

參考文獻(xiàn)

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[3]佟少輝，李娜，蔡玉華.高效液相色譜法測定五柏參洗液中鹽酸小檗堿的含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，5（12）：19,62

[4]岑志芳.正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化川黃柏中鹽酸小檗堿的提取工藝[J].中成藥,2005,27(6):732-733

(收稿日期：2009.03.10)