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    HPLC法測定婦科凝膠中蛇床子素的含量

    2009-09-21 06:39呂建偉陳惠紅

    呂建偉 陳惠紅

    【摘要】目的:建立婦科凝膠中蛇床子素的HPLC測定方法。方法:采用高效液相色譜法,用Shimpack VP~ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈~水(60∶40)為流動相,流速:1.0mL.min-1,檢測波長為323nm。結(jié)果:蛇床子素在7.2~57.6μg.mL-1,呈良好的線性關(guān)系(r =0.9999),平均回收率為99.14%,RSD=1.32%。結(jié)論:所建方法準(zhǔn)確可靠,操作簡便,穩(wěn)定性好,可用于婦科凝膠的質(zhì)量控制。

    【關(guān)鍵詞】HPLC法;婦科凝膠;蛇床子素

    【中圖分類號】R931.71【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)12-0020-01

    婦科陰道炎是臨床常見病、多發(fā)病之一,是由于婦女卵巢功能衰退、體內(nèi)雌激素缺失,抵抗力衰退以及局部不潔所致的陰道炎癥反應(yīng)[1]。我院傳統(tǒng)經(jīng)驗方婦科洗劑治療各種婦科陰道炎癥獲較滿意的較果,其由黃柏、苦參、蛇床子、魚腥草、野菊花等中藥組成,具有清熱燥濕、瀉火解毒、殺蟲止癢等功效,臨床用于治療婦科各種陰道炎癥。但存在體積大,使用不便等缺點,為更好地發(fā)揮婦科洗劑的臨床療效,提高其生物利用度,將該方的藥材提取有效成分制備成新劑型婦科凝膠。為了控制該制劑質(zhì)量,本文對處方主藥之一蛇床子中蛇床子素的含量測定進(jìn)行研究。

    1儀器與試藥

    1.1儀器LC-20A高效液相色譜儀,SPD-20A紫外檢測器,LC-20AT輸液泵,LCsolution工作站(日本島津公司);AL204電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司);雙頻數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);UV-1601紫外可見分光光度計(日本島津公司)。

    1.2試藥蛇床子素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110822-200305,供含量測定用);乙腈為色譜純;水為純化水;其他試劑均為分析純。婦科凝膠(本院自制,批號:20090415、20090416、20090417)。

    2方法與結(jié)果

    2.1色譜條件色譜柱:Shimpack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流動相:乙腈~水(60∶40),流速:1.0mL.min-1,柱溫:30℃,檢測波長為323 nm,理論塔板數(shù)按蛇床子素峰計算應(yīng)不低于3000。

    2.2測定波長選擇取蛇床子素對照品適量,加乙醇使溶解,用紫外分光光度計于200~400nm范圍內(nèi)掃描,結(jié)果表明,蛇床子素對照品在323nm波長處有最大吸收峰,因此選擇波長323nm為測定波長。

    2.3對照品溶液的制備 取蛇床子素對照品適量,精密稱定,加乙醇制成每0.072mg.mL-1的溶液,即得。

    2.4線性相關(guān)考察精密吸取對照品溶液1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mL于10 mL量瓶中,加乙醇稀釋至刻度,搖勻,分別精密吸取20μL進(jìn)樣,按“2.1”項下的色譜條件,以濃度(C)為橫坐標(biāo),峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析,得回歸方程:A=83416190C+24359,r=0.9999,結(jié)果表明蛇床子素在7.2~57.6μg.mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    2.5供試品溶液的的制備取本品2.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加乙醇20 ml,稱定重量,超聲提取15 min,再稱定重量,用乙醇補足減少的重量,過濾,即得。

    2.6陰性對照試驗取不含蛇床子的陰性樣品,照供試品溶液的制備方法,制備陰性對照溶液。按“2.1”項下的色譜條件,分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20μL進(jìn)樣測定,結(jié)果供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上有一相同保留時間的色譜峰,而陰性對照溶液無干擾,見圖1。

    2.7精密度試驗取同一濃度對照品溶液20μL,按“2.1”項下的色譜條件,重復(fù)進(jìn)樣6次,測得峰面積的RSD為1.08%,結(jié)果表明儀器精密度良好。

    2.8穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液,分別在放置0、0.5、1、2、4、8h后,依法測定,結(jié)果RSD為1.36%,表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.9重復(fù)性試驗取同一批樣品,精密稱定6份,按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液,按“2.1”項下的色譜條件測定,計算含量,RSD為1.52%。

    2.10加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品6份,每份約1.25g,各精密加入蛇床子素對照品,按“2.5”項下方法處理后,再按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,各進(jìn)樣20μL,測得蛇床子素峰面積,計算回收率,詳見表1。

    2.11樣品的測定取批號為20090415、20090416、20090417共3批婦科凝膠,分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL,注入液相色譜儀,按“2.1”項下的色譜條件測定。按外標(biāo)法計算蛇床子素含量,結(jié)果,3批樣品的平均含量分別為0.25、0.20、0.18mg.g-1。

    3討論

    3.1提取時間的選擇本試驗參考有關(guān)資料,樣品用乙醇超聲提取,并考察了超聲提取時間對樣品中蛇床子素提取的影響,結(jié)果用乙醇超聲處理10、20、30min測定結(jié)果相近,為確保提取完全,故選擇超聲處理15min。

    3.2流動相的選擇曾參考相關(guān)文獻(xiàn),分別選用不同比例的甲醇-水,乙腈-水作為流動相進(jìn)行試驗,根據(jù)分離情況,甲醇~水作為流動相雖然經(jīng)濟(jì)實惠,但分離效果不是很理想,最后選擇乙腈~水(60∶40)為流動相,可以使蛇床子素與其他成分很好地分離,峰型理想,且陰性對照無干擾。

    (收稿日期:2009.03.10)

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