銀杏內(nèi)酯Ｂ協(xié)同地塞米松對小鼠哮喘模型氣道炎癥和輔助Ｔ細胞亞群影響作用的研究

[摘要] 目的探討銀杏內(nèi)酯B協(xié)同地塞米松對支氣管哮喘氣道變應(yīng)性炎癥及輔助T細胞亞群的作用。方法40只BALB/c小鼠隨機分成正常對照組、哮喘對照組、地塞米松組、銀杏內(nèi)酯B組和聯(lián)合干預(yù)組，每組8只。收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，行白細胞(WBC)及嗜酸性粒細胞( EOS)計數(shù);應(yīng)用ELISA法測定BALF中IFN-γ和IL-4水平。結(jié)果BALF中WBC及EOS計數(shù):3個用藥組較哮喘對照組明顯減少(P<0.01)，聯(lián)合干預(yù)組減少的程度大于地塞米松組(P<0.05)、銀杏內(nèi)酯B組(P<0.01)。3個用藥組小鼠BALF上清中IFN-γ和IL-4水平 與哮喘對照組比較，銀杏內(nèi)酯組、地塞米松組和聯(lián)合干預(yù)組BALF上清中IFN-γ和IL-4水平分別增高和降低(P<0.05或P<0.01)，而聯(lián)合干預(yù)組增高和降低的程度大于地塞米松組(P<0.01)、銀杏內(nèi)酯組(P<0.05)。結(jié)論銀杏內(nèi)酯B能減輕小鼠哮喘模型BALF中炎性細胞浸潤，并減少IL-4的水平;銀杏內(nèi)酯B與激素具有協(xié)同抗炎作用;同時具有更好的調(diào)節(jié)Th亞群失衡的作用。

[關(guān)鍵詞] 支氣管哮喘; 銀杏內(nèi)酯B; 氣道炎癥; T輔助細胞亞群

[中圖分類號] R969 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)23-25-02

Effects of Ginkgolide B Coordinated with Dexamethasone on Allergic Airway Inflammation and T Helper Cell Subsets in Asthmatic Rats

LV Jinquan ZHANG Xiaoming LV Jianping XIN Yue TANG Yan

Pediatrics Department，the Affiliated Hospital of Jiangsu University，Zhenjiang 212001，China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effects of Ginkgolide B(GB)coordinatedwith Dexamethasone(DXM)on allergic airway inflammation and T helper cell subsets in asthmatic rats. Methods Forty BALB/c rats were randomly divided into 5 groups equally:the normal group，the asthma model group，the DXM group，the GB group and the DXM+GB group. The WBC count and eosinophil(EOS)count in bronchoalveolar lavage fluid(BALF) were estimated and ELISA was used to determine the concentrations of IFN-γ and IL-4 in BALF. ResultsCompared with the asthma model group，EOS and WBC count and IL-4 level in BALF were significantly lower in the three treated groups(P<0.01)，particularly in the DXM+GB group，showing a significant difference as compared with the other two groups(P<0.05 or P<0.01)，whereas IFN-γ level was increased. And in the DXM+GB group，they showed a significant difference as compared with the other two groups(P<0.05 or P<0.01). ConclusionGingkgolide B has an inhibitory effect synergistic with Dexamethasone in airway inflammation，and might partly reverse T helper cell subsets in rats with asthma.

[Key Words]Asthma; Gingkgolide B; Inflammation; T-lymphocyte cell subsets

目前，PAF拮抗劑成為哮喘治療的研究方向之一，本文探討天然PAF拮抗劑——銀杏內(nèi)酯B對哮喘小鼠氣道炎癥和T輔助細胞(Th)亞群平衡的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

鼠齡6周的雄性SALB/c純系小鼠40只，體重20～25g，由江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。隨機分為正常對照組、哮喘對照組、地塞米松組、銀杏內(nèi)酯組和聯(lián)合干預(yù)組，每組8 只。

1.2 模型建立和給藥方法

除正常對照組，其余各組均按文獻[1]的方法建立哮喘模型。給藥方法:地塞米松組和銀杏內(nèi)酯組小鼠每次霧化前30min分別予以腹腔注射地塞米松注射液(1mg/kg)、銀杏內(nèi)酯B 2mg/kg，聯(lián)合干預(yù)組則同時給予銀杏內(nèi)酯B 2mg/kg和地塞米松注射液(1mg/ kg)，哮喘對照組腹腔內(nèi)注入生理鹽水，正常對照組則以注射生理鹽水代替OVA致敏和激發(fā)。

1.3 支氣管肺泡灌洗液細胞計數(shù)和分類

最后一次霧化24h后行氣管插管，用生理鹽水0.6mL灌洗支氣管肺泡，反復(fù)沖洗3次，收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，取0.1mL BALF與白細胞稀釋液1︰1 稀釋，用細胞計數(shù)板計數(shù)炎癥細胞總數(shù)及嗜酸性細胞數(shù)量;另外BALF以1200×g離心10min，收集上清液計量體積后置于EP管中，-20℃保存，用于IFN-γ和IL-4測定。

1.4 IFN-γ和IL-4水平測定

用小鼠IFN-γ和IL-4 ELISA試劑盒(購自武漢晶美生物工程有限公司)檢測BALF上清中IFN-γ和IL-4水平，根據(jù)吸光度(A)值計算出標本中IFN-γ和IL-4的水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

用SAS6.12進行統(tǒng)計學(xué)處理，白細胞和嗜酸性粒細胞計數(shù)結(jié)果呈非正態(tài)分布，用范圍和中位數(shù)表示，多組間比較用非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗，兩組間比較用Wilcoxon秩和檢驗; IFN-γ和IL-4以均數(shù)±標準差(χ±s)表示，用多組間比較及兩兩比較均用方差分析(F檢驗)。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠BALF中白細胞總數(shù)(WBC)及嗜酸性粒細胞(EOS)計數(shù)結(jié)果

與哮喘對照組比較，銀杏內(nèi)酯組、地塞米松組和聯(lián)合干預(yù)組BALF中WBC 及EOS計數(shù)顯著減少(P<0.01)，而聯(lián)合干預(yù)組BALF中WBC及EOS計數(shù)減少的程度大于地塞米松組(P<0.05)、銀杏內(nèi)酯組(P<0.01)。見表1。

2.2 各組小鼠BALF上清中IFN-γ和IL-4水平

與哮喘對照組比較，銀杏內(nèi)酯組、地塞米松組和聯(lián)合干預(yù)組BALF上清中IFN-γ和IL-4水平分別增高和降低(P<0.01)，而聯(lián)合干預(yù)組增高和降低的程度大于地塞米松組(P<0.01)、銀杏內(nèi)酯組(P<0.05)。見表2。

3 討論

支氣管哮喘是由嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞等炎性細胞分泌的多種炎性介質(zhì)參與的氣道慢性炎癥，且Th失衡在哮喘發(fā)病中起重要作用。Th分為Th1和Th2兩種類型，Th1分泌IFN-γ，Th2分泌IL-4和IL-5，因此檢測IFN-γ和IL-4水平可間接反映Th1類細胞和Th2類細胞間的平衡。本組資料表明哮喘對照組小鼠BALF中嗜酸性細胞計數(shù)顯著增高，提示哮喘患者發(fā)生了以嗜酸性細胞浸潤為主的氣道炎癥;同時IL-4高于正常，而IFN-γ低于正常對照組，表明哮喘患者Th1功能低下，而Th2功能相對亢進。Th2分泌的IL-4是促進嗜酸性粒細胞聚集、增生的主要細胞因子，嗜酸性粒細胞聚集于氣道可釋放多種炎癥介質(zhì)，兩者共同作用，促使哮喘患者產(chǎn)生以嗜酸粒細胞浸潤為主的氣道變應(yīng)性炎癥，IFN-γ可拮抗IL-4的作用。

激素作為非特異性炎性介質(zhì)拮抗劑是目前治療哮喘的基本藥物，本研究表明，地塞米松組BALF嗜酸性粒細胞和IL-4均明顯下降，IFN-γ有所增高，表明激素可有效減輕氣道炎癥，并可糾正Th亞群失衡。近年來隨著人們對于多種炎性介質(zhì)及其拮抗劑研究的不斷深入，特異性炎性介質(zhì)拮抗劑已成為哮喘治療的發(fā)展方向。目前，白三烯受體拮抗劑已用于哮喘的臨床治療，而在眾多炎性介質(zhì)中，PAF是已知的最強的支氣管致痙劑，其致痙作用比白三烯和組織胺強，且比乙酰膽堿所致的支氣管痙攣作用強1000倍[3]。PAF可通過趨化作用和與血小板的相互作用使嗜酸性粒細胞等聚集于氣道并釋放多種炎癥介質(zhì)導(dǎo)致哮喘，并能增加氣道反應(yīng)性。有研究證實，哮喘患者BALF中PAF明顯增高，動物氣霧吸入PAF后可出現(xiàn)哮喘，我們亦有研究證實哮喘患者發(fā)作期血漿PAF水平明顯增高[3]，表明PAF是一種重要的致喘介質(zhì)參與了哮喘的發(fā)病機制。因而探求PAF拮抗劑有望成為預(yù)防和治療哮喘的一類新型藥物。銀杏內(nèi)酯B是由銀杏葉的提取物精制而成，具有很強的拮抗PAF的作用，有研究表明銀杏內(nèi)酯B可顯著抑制由塵螨和花粉刺激誘發(fā)的支氣管收縮;動物實驗證實它亦可以明顯減弱PAF所致的豚鼠肺條收縮作用，并降低BALF中IL-5的水平[4]。在應(yīng)用銀杏葉片治療哮喘病人臨床療效觀察中證實，銀杏葉片能抑制哮喘患者的嗜酸性粒細胞對氣道的浸潤，并改善哮喘患者肺功能、提高臨床癥狀控制率[5，6]。本研究表明，銀杏內(nèi)酯B能減輕小鼠哮喘模型BALF中炎性細胞浸潤，并減少IL-4的水平;與地塞米松聯(lián)合應(yīng)用，氣道內(nèi)嗜酸性粒細胞和IL-4水平下降更為明顯，提示銀杏內(nèi)酯B與激素具有協(xié)同抗炎作用;同時具有更好的調(diào)節(jié)Th亞群失衡的作用。

[參考文獻]

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(收稿日期:2009-06-03)