三種方法檢測乙肝病毒血清標(biāo)記物的結(jié)果比較分析

[摘要] 目的 比較金標(biāo)快速檢測板、酶聯(lián)免疫法和熒光定量PCR檢測乙肝五項(xiàng)結(jié)果的一致性，分析其產(chǎn)生原因及臨床應(yīng)用價值。方法 對我單位2004年1月～2008年1月511例疑似乙肝患者血清進(jìn)行金標(biāo)快速檢測板、酶聯(lián)免疫法和熒光定量PCR三種方法檢測，比較三種方法的一致性。結(jié)果 HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)組(大三陽組)患者287例經(jīng)酶聯(lián)免疫法和熒光定量PCR檢測全部檢出，符合率100%，金標(biāo)快速檢測板檢測出285例，符合率99.3%;HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)組(小三陽組)患者210例經(jīng)酶聯(lián)免疫法檢出208例，符合率99.04%，熒光定量PCR檢測全部檢出，金標(biāo)快速檢測板檢測出199例，符合診斷率94.76%。結(jié)論 傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫法檢測乙型肝炎病毒檢出率高，結(jié)果準(zhǔn)確，出現(xiàn)少見模式時易出現(xiàn)檢測錯誤;熒光定量PCR檢測法靈敏度高，可為臨床HBV感染、復(fù)制及傳染性的判斷提供可靠的依據(jù);金標(biāo)快速檢測板方法簡單、快速，但靈敏度不如前兩種方法，較適于急診檢驗(yàn)。

[關(guān)鍵詞] 金標(biāo)快速檢測板; 酶聯(lián)免疫法; 熒光定量PCR檢測; 乙肝五項(xiàng); HBV

[中圖分類號] R512.62;R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)23-112-02

乙型肝炎是常見的傳染病之一，我國是該病的高發(fā)區(qū)，人群感染率約為10%[1]。隨著臨床檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，乙肝病毒的檢測方法隨之增加。我單位自2004年1月～2008年1月對511例疑似乙肝患者血清進(jìn)行酶聯(lián)免疫(ELISA法)法、金標(biāo)快速檢測板法和熒光定量PCR檢測法進(jìn)行比較分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

資料來源于2004年1月～2008年1月來我單位就診的511例疑似乙型肝炎患者，其中男298例，女213例，年齡16～73歲。511例疑似病例首先經(jīng)金標(biāo)快速檢測板檢測，未檢出HBeAb者，采用酶聯(lián)免疫法補(bǔ)充檢測，后經(jīng)熒光定量PCR檢測法進(jìn)行檢測和量化判斷。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 金標(biāo)快速檢測板采用艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司產(chǎn)品，批號為:200405024。ELISA法檢測試劑由北京瑪諾生物制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字S19983029。深圳匹基生物工程股份有限公司生產(chǎn)的HBV-DNA熒光定量檢測試劑盒，批號20050901。德靈BEP2000型全自動酶聯(lián)免疫系統(tǒng)分析儀，美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司Prism?誖 7000型實(shí)時熒光定量PCR儀。全部檢測嚴(yán)格按照儀器和試劑和說明書操作。

1.2.2 檢測方法 金標(biāo)快速檢測板采用快速免疫層析法，其中HBsAg、HBeAg采用雙抗體夾心法，HBsAb采用雙抗原夾心法，HBeAb、HBcAb采用競爭抑制法，按說明書要求操作并判斷結(jié)果。ELISA法采用全自動酶免系統(tǒng)分析儀，以S/CO值判定結(jié)果。熒光定量PCR檢測的定量結(jié)果采用求對數(shù)平均值的方法計(jì)算HBV-DNA的平均拷貝數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，組間采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05具有顯著性差異。

2 結(jié)果

以目前最靈敏的熒光定量PCR檢測法為參照。511例疑似乙肝患者血清標(biāo)本中，檢出HBV-DNA陽性497例。大三陽合小三陽組的檢出率三種方法分別為:99.3%和94.76%;100%和99.04%;100%。見表1。

3 討論

本組研究表明，金標(biāo)快速檢測板、酶聯(lián)免疫法和熒光定量PCR檢測乙肝病毒三種方法都比較實(shí)用，對于檢測HBV的感染與復(fù)制，三種方法都具有一定的HBV-DNA檢出率。金標(biāo)快速檢測板有11例未能檢出HBeAb，符合率94.76%，由于HBeAb的檢測是采用競爭法，結(jié)果的判定是比較檢測線和控制線顏色的深淺，而當(dāng)這兩條線顏色相近時，肉眼辨色困難而影響判定，因此造成金標(biāo)快速檢測板HBeAb的假陰性增多[2]。而對于HBcAb的檢測，金標(biāo)快速檢測板的靈敏度和特異性稍差[3]。酶聯(lián)免疫法出現(xiàn)少見模式時，如HBsAb(+)、HBeAb(+)及HBeAb(+)ELISA法檢測為HBeAb陽性，HBcAb陰性，而熒光定量PCR檢測法則HBeAb伴隨HBcAb同時陽性。出現(xiàn)上述原因主要是由于酶聯(lián)免疫法測HBcAb標(biāo)本是1∶30稀釋后檢測，而測HBeAb則用原血清。因此出現(xiàn)很多HBeAb陽性而HBcAb陰性模式，而金標(biāo)快速檢測板和熒光定量PCR檢測法均用的原血清，所以不存在此問題。另外一個原因可能是酶聯(lián)免疫法采集的標(biāo)本水浴處理時間短，血球沉降不充分，試管壁上有血痂，快速離心導(dǎo)致溶血，因血球中過氧化物酶溶出粘附于酶標(biāo)板未被洗去，產(chǎn)生過氧化物酶樣作用而顯色致假陽性[4]。熒光定量PCR檢測法采用了完全閉管和熒光探針，通過光電傳導(dǎo)系統(tǒng)直接探測PCR擴(kuò)增過程中熒光信號的變化以獲得定量結(jié)果，從而決定被測物質(zhì)的濃度不受黃膽溶血及脂血影響，避免了交叉感染，因此其假陽性率較低[5]。此外熒光定量PCR檢測法還可以準(zhǔn)確的反應(yīng)出HBV-DNA的復(fù)制水平、病程變化和治療恢復(fù)情況[6]。

綜上所述，三種方法檢測乙肝病毒各具優(yōu)勢。金標(biāo)快速檢測板法靈敏、簡單、快速，適合于急診應(yīng)用;傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫法設(shè)備簡單、收費(fèi)低廉、易于開展，適用于常規(guī)檢查[7];而熒光定量PCR檢測法非常精確，其高靈敏度可為早期診斷HBV感染提供依據(jù)，并可提供準(zhǔn)確的HBV-DNA感染、復(fù)制和傳染性等情況。建議臨床根據(jù)實(shí)際情況，疑似乙肝患者采用多種方法檢測乙肝病毒[8]。

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(收稿日期:2009-03-04)