紅細胞冰凍解凍過程中形態(tài)體積變化分析

[摘要] 目的 探索紅細胞在冰凍解凍過程中形態(tài)體積的動態(tài)變化情況，尋求科學的冰凍解凍程序。方法 通過測定觀察紅細胞在冰凍、解凍洗滌過程中的體積和形態(tài)，并運用統(tǒng)計學方法，研究紅細胞的變化規(guī)律。結(jié)果 紅細胞在冰凍解凍過程中體積由大逐漸變小直至恢復正常，形態(tài)由大刺毛細胞或大球形細胞逐漸恢復正常紅細胞的圓盤狀。結(jié)論 隨著紅細胞冰凍解凍過程的順次進行，紅細胞體積和形態(tài)逐漸恢復正常。

[關鍵詞] 紅細胞冰凍; 紅細胞解凍; 細胞體積; 洗滌

[中圖分類號] R197.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)23-113-02

紅細胞的冰凍保存解決了特殊血型血液和自體血液長期儲存的問題，加入細胞內(nèi)冰凍保護劑甘油后，紅細胞在-80℃條件下可保存10年，臨床使用前要做復蘇、洗滌去除冰凍保護劑的處理[1]。本研究著重于觀察分析紅細胞冰凍解凍過程中各步驟細胞形態(tài)體積的動態(tài)變化情況，為紅細胞解凍過程中關鍵控制點的操作提供事實依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標本來源

衡水市中心血站Rh陰性紅細胞冰凍保存、Rh陰性冰凍紅細胞解凍后供應臨床各20例。

1.2 工藝流程

1.2.1 紅細胞的冰凍 加入57.1%的甘油，使甘油在紅細胞中的濃度達40%，于-80℃冰箱冰凍保存。

1.2.2 一洗(第一遍洗滌紅細胞) 于38～40℃水浴解凍紅細胞，然后依次加入濃鹽水、羥乙基淀粉，離心棄去上清液。

1.2.3 二洗(第二遍洗滌紅細胞) 依次加入羥乙基淀粉、生理鹽水洗滌，離心棄去上清液。

1.2.4 三洗(第三遍洗滌紅細胞)加入生理鹽水洗滌，離心棄去上清液。

1.2.5 四洗(第四遍洗滌紅細胞) 加入生理鹽水洗滌，離心棄去上清液。

1.2.6 懸浮 紅細胞用生理鹽水懸浮后供應臨床。

1.3 方法

在工藝過程中紅細胞冰凍前、各洗滌過程離心棄去上清液前、生理鹽水懸浮后分別取樣，用顯微鏡和血細胞計數(shù)儀觀察檢測紅細胞形態(tài)體積的動態(tài)變化，各樣本相互對照研究并與正常紅細胞對照研究。

2 結(jié)果

流程各階段取樣，與正常人紅細胞體積(90fL)[2]作對比分析，結(jié)果見表1。將各階段紅細胞體積相互對比觀察，分析細胞大小變化的顯著性差異，結(jié)果見表2，3。

3 討論

紅細胞的冰凍、解凍過程是一個比較復雜的過程，涉及細胞微細結(jié)構的變化、功能的恢復等。通過與正常紅細胞對照分析，紅細胞在加入冰凍保護劑和解凍洗脫甘油過程一洗——三洗后的紅細胞體積都大于正常，四洗和懸浮后的紅細胞體積恢復正常。通過顯微鏡觀察，紅細胞的形態(tài)由加入甘油后的大刺毛細胞或大球形細胞逐漸恢復至圓盤狀。形態(tài)大小的恢復是決定其輸入人體后發(fā)揮正常生理功能的基礎。

紅細胞在加入甘油后體積與解凍第一次洗滌后的體積無明顯變化，顯微鏡下，其形態(tài)也無明顯變化。在這個過程中，紅細胞內(nèi)的滲透壓變化很大，但形態(tài)體積基本無變化，說明紅細胞在加入甘油后已處于高度膨脹狀態(tài)，所以在甘油的加入過程和解凍時第一次洗滌過程，液體的加入速度一定要慢，并有足夠的平衡時間，促進細胞內(nèi)外滲透壓的平衡，避免造成紅細胞的破裂。一洗——四洗過程中相互之間細胞體積的變化比較顯著，在此過程中紅細胞體積由大逐漸變小，四洗和懸浮后紅細胞之間，體積無明顯差異，說明四洗后紅細胞體積已恢復正常。

[參考文獻]

[1] 王培華. 輸血技術學[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社，1998:68-70.

[2] 全國衛(wèi)生專業(yè)資格考試專家委員會. 2008年全國衛(wèi)生資格考試指導——臨床醫(yī)學檢驗與技術(中級)[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:20.

(收稿日期:2009-03-14)