富貴竹的愈傷組織誘導(dǎo)與植株再生試驗(yàn)研究

范昭鶴

摘要以富貴竹莖段為外植體誘導(dǎo)腋芽，再以腋芽誘導(dǎo)愈傷組織，最后進(jìn)行分化及植株再生，篩選出各階段的最適培養(yǎng)基，即腋芽萌生為MS+6-BA 5.0mg/L+NAA 0.1mg/L，愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生均為MS+6-BA 3.0mg/L＋NAA 0.3mg/L。

關(guān)鍵詞富貴竹；組織培養(yǎng)；愈傷組織；植株再生；培養(yǎng)基

中圖分類號S682.39文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739(2009)01-0016-02

富貴竹廣泛分布于亞洲熱帶地區(qū)，我國南方各地廣泛栽植。其葉尖長，富有竹韻，柔美而堅(jiān)韌，清雅而高貴；葉色墨綠有革質(zhì)，光澤锃亮，葉柄基部抱莖、互生、全緣，莖桿筆直挺拔，常作盆栽供室內(nèi)擺設(shè)，又可剪取莖株插瓶用清水養(yǎng)育作瓶花觀賞，也可將剝除葉片后的莖干剪成枝條進(jìn)行催芽做成外圍低中心高3～18層的鴻運(yùn)寶塔擺設(shè)于廳室內(nèi)，還可作高級藝術(shù)插花素材，具有較高的觀賞價(jià)值。富貴竹的適應(yīng)性極強(qiáng)，容易養(yǎng)護(hù)管理，極耐陰，常溫下只要供給足夠的水分，就可正常生長。富貴竹的繁殖為扦插繁殖，繁殖速度5～7倍，很難滿足產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)對種苗的需求(需種苗33萬株/hm2)。通過組織培養(yǎng)途徑誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)，進(jìn)而誘導(dǎo)愈傷組織和植株再生，為富貴竹的繁殖提供了一條新的途徑。

1材料與方法

1.1供試材料

富貴竹的莖段、頂芽、腋芽。

1.2各階段采用的培養(yǎng)基

1.2.1腋芽誘導(dǎo)。外植體不同部位誘導(dǎo)腋芽萌生能力強(qiáng)弱所用培養(yǎng)基：①6-BA 6mg/L+NAA 0.1mg/L。中下部莖斷誘導(dǎo)腋芽萌生的培養(yǎng)基：②6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L；③6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L；④6-BA 2.5mg/L+NAA 0.1 mg/L；⑤6-BA 3.0mg/L+NAA 0.1mg/L；⑥6-BA 4.0mg/L+NAA 0.1mg/L；⑦6-BA 5.0mg/L+NAA 0.1mg/L；⑧6-BA 6.0 mg/L+NAA 0.1mg/L；⑨6-BA 7.0mg/L+NAA 0.1mg/L；⑩6-BA 9.0mg/L+NAA 0.1mg/L。

1.2.2愈傷組織誘導(dǎo)。6-BA＋2，4-D對愈傷組織形成的影響：{11}6-BA 0.1mg/L+2，4-D 1.0mg/L；{12}6-BA 0.1mg/L+2，4-D 2.0mg/L；{13}6-BA 0.1mg/L+2，4-D 3.0mg/L。6-BA+NAA及腋芽不同切分方式對愈傷組織形成的影響：{14}6-BA 2.0mg/L+NAA 0.02mg/L；{15}6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L。腋芽縱切情況下6-BA+NAA對愈傷組織形成的影響：

1.2.3不定芽分化及植株再生。培養(yǎng)基采用{16}～{24}。

1.3操作方法

取0.8～1.5cm粗的莖段作為外植體，用自來水沖洗掉外部的泥土和雜物，剪成長6～8cm帶1～2個(gè)芽的節(jié)段，置于0.15%升汞中處理13～15min，用無菌水沖洗3～4次，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)腋芽萌動。當(dāng)芽長2.5～4.5cm時(shí)，將無菌芽切下，誘導(dǎo)愈傷組織，繼而分化出不定芽，經(jīng)不斷繼代以達(dá)到擴(kuò)大繁殖的目的?；九囵B(yǎng)基為MS，并根據(jù)需要附加6-BA、2，4-D及NAA等激素，蔗糖30g/L，瓊脂4.5g/L，pH值5.8，培養(yǎng)溫度25±1℃，每天光照10～12h，光照強(qiáng)度1 300～1 500 Lx。

2結(jié)果與分析

2.1腋芽的誘導(dǎo)

2.1.1外植體不同部位產(chǎn)生腋芽情況。把經(jīng)滅菌處理的不同部位富貴竹接種到培養(yǎng)基MS+6-BA 6.0mg/L+NAA 0.1mg/L上，經(jīng)過14d培養(yǎng)，下部莖段腋芽開始萌動，萌發(fā)的腋芽如米粒狀，光亮的白色或淺綠色。再過2d，中部莖段腋芽開始萌動，而頂部的莖段到第20天才有腋芽萌動的跡象。繼續(xù)培養(yǎng)25～30d，下部莖段的腋芽展開伸長至2.5～3.5cm，芽粗壯而正常；中部莖段的腋芽也伸長至2.5～3.5cm，而頂部的莖段腋芽只伸長至1.5～2.5cm，芽較矮小而瘦弱。經(jīng)過50d的培養(yǎng)和觀察，結(jié)果表明莖段腋芽萌發(fā)的能力以中下部的較強(qiáng)，出芽率85%以上，上部的較差(見表1)。

2.1.26-BA＋NAA對中下部莖段腋芽誘導(dǎo)的影響。選取經(jīng)滅菌處理的中下部莖段，接種到②～⑩號培養(yǎng)基組合上，以找出6-BA對腋芽誘導(dǎo)的影響。經(jīng)50d的培養(yǎng)和觀察，結(jié)果表明，在試驗(yàn)范圍內(nèi)，不論培養(yǎng)基中6-BA濃度高低均有較高的腋芽誘導(dǎo)率，但腋芽質(zhì)量以6-BA 4.0～5.0mg/L的誘導(dǎo)效果較好，芽粗壯，顏色深綠，且出芽率較高，超過95%；但在其他的培養(yǎng)基上，芽相對較矮小而瘦弱(見表2)。

2.2愈傷組織誘導(dǎo)

2.2.12，4-D對愈傷組織形成的影響。將誘導(dǎo)出的腋芽橫切成1mm左右厚的薄片，接入到{11}～{13}號培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)，以誘導(dǎo)愈傷組織。接種7d后在含2，4-D 1.0～2.0mg/L的{11}、{12}號培養(yǎng)基上的部分切片表面膨大，14d表面形成少許白色點(diǎn)狀物，漸增多且濕潤，21d成為無色的半透明愈傷組織。培養(yǎng)35d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率分別為25.0%、21.7%和4.3%。

2.2.26-BA＋NAA對愈傷組織形成的影響。分別將無菌芽的葉片、莖段(切去上端1/3～1/2部分，并縱切兩半)以及莖段切片(橫切厚0.5～1.0mm)接種到{11}、{14}、{15}號培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。5d后{15}號培養(yǎng)基上的莖段基部膨大，12d表面形成少許白色點(diǎn)狀物，18d出現(xiàn)無色的半透明愈傷組織，且有的愈傷組織有白色突起。培養(yǎng)35d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率，結(jié)果表明帶芽莖斷縱切誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織的能力比葉片及莖斷橫切片強(qiáng)，同時(shí)較高濃度的NAA對愈傷組織的誘導(dǎo)率比2，4-D高(見表3)。

2.2.3腋芽縱切情況下6-BA＋NAA對愈傷組織形成的影響。將腋芽縱切接種到6-BA＋NAA 不同組合的培養(yǎng)基{16}～{24}上進(jìn)行暗培養(yǎng)。5d在{25}號培養(yǎng)基上的莖段表面出現(xiàn)膨大，隨后2d各個(gè)組合上的莖段均出現(xiàn)不同程度的膨大，17d表面形成少許白色點(diǎn)狀物，25d形成無色的半透明愈傷組織，且在各個(gè)組合的莖段愈傷組織表面有白色突起。經(jīng)過35d的培養(yǎng)和觀察，結(jié)果表明：6-BA 3.0mg/L+NAA 0.3mg/L培養(yǎng)基的愈傷組織誘導(dǎo)率最高；同時(shí)隨NAA濃度的升高，愈傷組織的誘導(dǎo)率有逐漸升高的趨勢。這說明在愈傷組織誘導(dǎo)的過程中，當(dāng)細(xì)胞分裂素濃度在一定允許范圍時(shí)，生長素濃度越高，愈傷組織誘導(dǎo)效果越好(見表4)。

2.3不定芽分化及植株再生

將愈傷組織隨機(jī)轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基{16}～{24}上。15d后在{23}號培養(yǎng)基上的白色突起均分化成淺綠色小芽體；有的莖段則直接分化出嫩葉。35d后小芽體展開成具莖、葉的小植株。經(jīng)過60d的培養(yǎng)和觀察，每瓶分化出3～5個(gè)長0.5～1.5cm的小苗。

3討論

3.1不同部位的外植體腋芽發(fā)生和生長能力

在植物組織中高度分化的細(xì)胞，通過人工培養(yǎng)都能使之脫分化，從而恢復(fù)到幼齡的胚胎性細(xì)胞階段。但由于各種內(nèi)在原因和外界條件的限制，還不能輕易使植物任何部位的任一細(xì)胞都恢復(fù)胚性，重新開始它的胚胎發(fā)育，雖然理論上有這種可能性，現(xiàn)實(shí)中更多的是采用植物的某些器官或組織來進(jìn)行組織培養(yǎng)。經(jīng)試驗(yàn)，富貴竹外植體不同部位（頂部、中部和基部）均能誘導(dǎo)產(chǎn)生腋芽，但頂部、中部的生長速度不但不及基部的快，腋芽數(shù)也不及基部的多，芽體也沒有基部的粗壯。由此可見，在相同的條件下，不同部位的莖段萌發(fā)能力有著明顯的不同，富貴竹的腋芽誘導(dǎo)能力以基部的最強(qiáng)。

3.2不同外植體對愈傷組織誘導(dǎo)的效果

外植體對激素的不同反應(yīng)很可能與材料本身的生理狀態(tài)、植物受體的多樣性以及與內(nèi)源激素的合成和代謝上的差異有密切關(guān)系。表4的結(jié)果顯示，不同外植體的出愈情況存在較大的差異。富貴竹不同外植體（葉片、莖段、莖段切片）均誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，莖段的出愈率最高為100%，其次為莖段切片，再為葉片。莖段愈傷組織表面能產(chǎn)生芽體，繼而分化出小苗；切片也可以誘導(dǎo)出愈傷組織形成小芽體，進(jìn)而分化成植株；葉片只能形成深綠色成團(tuán)刺狀物。因此，利用愈傷組織對富貴竹進(jìn)行快速繁殖，選擇合適的外植體是非常重要的。

3.3植物激素對莖段愈傷組織形成的影響

研究結(jié)果表明：在愈傷組織誘導(dǎo)過程中，在沒有激素或單獨(dú)使用2，4-D的培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率極低；而在使用了2，4-D的培養(yǎng)基上附加一定濃度的細(xì)胞分裂素6-BA，則能出現(xiàn)較低的出愈率。6-BA和NAA二者配合使用不但可誘導(dǎo)莖段形成愈傷組織，還可以使產(chǎn)生的愈傷組織分化出小苗。這說明植物激素按一定比例進(jìn)行組合是誘導(dǎo)愈傷組織形成的關(guān)鍵因子。

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