硝苯地平緩釋片（Ⅰ）含量及含量均勻度測(cè)定方法的改進(jìn)

安徽省合肥市食品藥品檢驗(yàn)中心（230088）王瑋 秦紹剛

硝苯地平緩釋片（Ⅰ）是一種預(yù)防和治療冠心病心絞痛常用藥物，并未收載與中國(guó)藥典中，其執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-056)2004Z，本文參照藥典[1]中硝苯地平片含量測(cè)定項(xiàng)下方法，建立一種測(cè)定硝苯地平緩釋片（Ⅰ）中含量及含量均勻度的方法，結(jié)果準(zhǔn)確，硝苯地平和降解產(chǎn)物可以完全分離。

1 儀器與試藥

1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；AB265-S電子分析天平（德國(guó)梅特勒-托利多公司）；UV-3900紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本日立公司）。硝苯地平對(duì)照品（批號(hào)：100338-201103，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；硝苯地平緩釋片（Ⅰ）片（亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)120107和120903）；甲醇為色譜純，水為屈臣氏重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水（60∶40），流速為1.0ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm，進(jìn)樣量：20μl，柱溫：30.0℃。理論塔板數(shù)按硝苯地平峰計(jì)算應(yīng)不小于2000，硝苯地平與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取硝苯地平對(duì)照品10.90mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品20片，精密稱取總片重，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于硝苯地平10mg），置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取硝苯地平對(duì)照品10.70mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml分別置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按擬定的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖，以硝苯地平濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作線性回歸，得回歸方程Y=57.798X-92.149，r=0.9998。表明硝苯地平在8.56～42.8μg·mL-1濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取同一種對(duì)照品溶液（21.8μg·mL-1），在上述色譜條件下，重復(fù)測(cè)定6次，每次20μl，主峰面積的RSD為0.18%（n=6），表明精密度良好。

分別取同一批硝苯地平緩釋片（Ⅰ）（批號(hào)：120903）共6份，在上述色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，硝苯地平含量測(cè)定的RSD為0.15%，表明本法重復(fù)性好。分別取同一種對(duì)照品溶液（21.4μg·mL-1），在室溫下放置，分別于0h、2h、4h、6h、8h進(jìn)樣，記錄色譜圖。硝苯地平峰面積的RSD為0.22%，表明溶液的穩(wěn)定性良好。

2.5 回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的供試品細(xì)粉（批號(hào)：120903）適量各9份，置50ml容量瓶中，分別加入硝苯地平對(duì)照品適量，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣。記錄色譜圖與峰面積，考察加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)附表1。

附表1 硝苯地平回收率實(shí)驗(yàn)（n=9）

附表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

附圖 硝苯地平液相色譜圖

2.6 專屬性試驗(yàn)

2.6.1 酸降解溶液的配制 精密量取硝苯地平對(duì)照品溶液（0.218mg·mL-1）1ml，置10ml量瓶中，加5mol·L-1鹽酸溶液100μl，放置30分鐘，加5mol·L-1氫氧化鈉溶液100μl，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.6.2 堿降解溶液的配制 精密量取硝苯地平對(duì)照品溶液（0.218mg·mL-1）1ml，置10 ml量瓶中，加5mol·L-1氫氧化鈉溶液100μl，放置30分鐘，加5mol·L-1鹽酸溶液100μl，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.6.3 光破壞溶液的配制 將硝苯地平對(duì)照品溶液（0.218mg·mL-1），置日光下放置24小時(shí)后，即得。

2.6.4 熱降解溶液的配制 將硝苯地平對(duì)照品溶液（0.218mg·mL-1），置100℃水浴中加熱3小時(shí)后，即得。

按2.1條件進(jìn)樣，記錄圖譜（附圖a-d）。結(jié)果顯示，本品四種破壞條件下，均產(chǎn)生明顯的降解產(chǎn)物（6.5分鐘處為硝苯地平雜質(zhì)Ⅰ，7.7分鐘處為硝苯地平雜質(zhì)Ⅱ）。在堿破壞時(shí)2種雜質(zhì)峰較大，而光照條件下，硝苯地平嚴(yán)重降解為硝苯地平雜質(zhì)Ⅱ，可見(jiàn)硝苯地平對(duì)光敏感，試驗(yàn)過(guò)程要避光操作。在此色譜條件下，硝苯地平與相鄰雜質(zhì)峰的分離度約為3.4，理論塔板數(shù)為4000，表明該方法專屬性良好。

2.7 最低檢測(cè)限 取對(duì)照品溶液（8.56μg·mL-1）用水稀釋若干倍，在上述色譜條件下測(cè)定，以信噪比S/N＝3計(jì)算檢測(cè)限，硝苯地品檢測(cè)限約為0.05μg。

2.8 樣品含量測(cè)定 避光操作。將樣品按照2.2.2項(xiàng)下的方法制成供試品溶液。精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取硝苯地平對(duì)照品，同法操作，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得，結(jié)果見(jiàn)附表2。

2.9 樣品含量均勻度測(cè)定 避光操作。取本品1片，除去包衣后，置50ml量瓶中，加甲醇振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液適量，加甲醇定量稀釋制成每1ml中約含20μg的溶液，作為供試品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定含量，結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

筆者采用HPLC法測(cè)定硝苯地平緩釋片（Ⅰ）中硝苯地平的含量，能有效地控制該藥的質(zhì)量。參考相關(guān)學(xué)者研究[2][3][4]，在檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇上，筆者將20μg·mL-1的硝苯地平對(duì)照品甲醇水溶液在紫外光譜區(qū)掃描，在235nm的波長(zhǎng)有最大吸收，故本文選擇235nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

原有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中要求稱樣于研缽中加氯仿研磨，再轉(zhuǎn)移至容量瓶中，研磨及轉(zhuǎn)移的過(guò)程又增加了測(cè)定誤差的步驟。整過(guò)程繁瑣費(fèi)時(shí)、環(huán)境污染大，易造成誤差。本文直接用甲醇超聲溶解即可。比對(duì)色譜柱Venusil M P C18(250mm×4.6mm，5μm)與Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250mm×4.6mm，5μm)；硝苯地平的峰形和塔板都差不多，選擇較簡(jiǎn)單的甲醇-水（60∶40）作為流動(dòng)相體系，完全可以滿足試驗(yàn)需求。