基于主動(dòng)脈組織病理和循環(huán)生物標(biāo)志物評(píng)價(jià)高血壓血管內(nèi)皮炎癥表型變化與內(nèi)皮功能關(guān)系的研究

Evaluation of the Relationship Between Changes in Vascular Endothelial Inflammatory Phenotype and Endothelial Function in Hypertension Based on Aortic Histopathology and Circulating Biomarkers

ZHANG Jianning1，XIAN Wanyong2，ZHANG Xiaoyu1，TAO Jun1，XIA Wenhao1 （1.DeparmentofHypertesionandVascularDiseaseheirstAfliated HospitalofSunYat-sen UniersityGuangzhou000， Guangdong，China；2.The Fourth People's Hospital of Foshan Nanhai District，F(xiàn)oshan ，Guangdong，China）

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheasociationsofmacrophageinflammatorymarkersandendothelialfunctioninhypertensive patients.MetosUsingoticsufromhertesivepatintsdertesieouseoelsmufuorescetogsudto detectheexpresiofacopgesdiflamatorctodslarngeperintseredctedtvaatedolistolic function.96patitsdagosdwithhpertesatTeFstAfliatedHospitalofSunYatsnUniversityfroctoerOtDber 2022wereeolldnerlalracteristsecodpresivelsof8torctosiame usingliquid-phasesuspensionchiptechnology，andtheendothelialfuctionofthebrachialarterywasevaluatedusingflo-diated vasodiltio（FTorlaiotnifmaoyakrsdasexplodoSpeaancorelaonoeffcitels ComparedwiththeealthontrolgoupertensivepatintssowdarichmentofD68acrophgesinorticisuedaese in the expression levels of tumor necrosis factor-a（TNF-a）and interleukin-8（IL-8）（ Plt;0.01） .The aortic endothelial relaxation function of hypertensive mice wasimpaired，thenumberof macrophagesincreased，andtheexpressionof TNF-awasupregulated（ Plt;0 . 001）. The bivariatepeancoeottniftoactosiepalblodohypersieptssgedatteas significant correlation between inflammatory factors （ Plt;0. 01 ）.In the uncorrected model，F(xiàn)MD was significantly negatively correlated with TNF- ∝（r=-0.252，P=0.013） and IL-8 （ r=-0.330，Plt;0.01） . After adjusting for age，sex，systolic blood pressure，diabetes and smoking， FMD still had a significant negative correlation with IL-8 r=-0.301，P=0.018） .ConclusionElevated levels of IL-8 expression in plasma and enriched macrophages in the aorta of hypertensive patients are associated with endothelial dysfunction.

在全球范圍內(nèi)，高血壓的流行趨勢(shì)愈發(fā)嚴(yán)峻，給各國(guó)公共衛(wèi)生帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)和巨大挑戰(zhàn)[1-2]。高血壓在中國(guó)的患病率持續(xù)上升[3]，作為動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的主要危險(xiǎn)因素，對(duì)居民健康造成嚴(yán)重威脅，已成為中國(guó)動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病相關(guān)死亡的重要原因。血管內(nèi)皮損傷是高血壓發(fā)生發(fā)展的病理基礎(chǔ)和關(guān)鍵環(huán)節(jié)[4-5]，通過(guò)血管內(nèi)皮功能的臨床檢測(cè)，有助于早期評(píng)估高血壓患者的血管風(fēng)險(xiǎn)和長(zhǎng)期預(yù)后[。目前臨床上，肱動(dòng)脈血流介導(dǎo)的血管內(nèi)皮舒張功能（flow-mediateddilation，F(xiàn)MD）檢查常應(yīng)用于無(wú)創(chuàng)監(jiān)測(cè)血管內(nèi)皮功能[7]。由慢性炎癥反應(yīng)引起的血管穩(wěn)態(tài)失衡是高血壓血管損傷的病理機(jī)制之一[8-10]。研究[]報(bào)道，主動(dòng)脈組織巨噬細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞相互作用，參與調(diào)控血管通透性，維持主動(dòng)脈的完整性。臨床研究[12-I5]發(fā)現(xiàn)，循環(huán)炎癥標(biāo)志物與血管內(nèi)皮功能障礙存在較弱關(guān)聯(lián)，且在不同種族中存在分布差異。然而，目前尚無(wú)統(tǒng)一的研究結(jié)論，需進(jìn)一步探討高血壓患者中炎癥因子分布及其與血管內(nèi)皮功能的關(guān)系。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)高血壓炎癥標(biāo)志物分布，觀察其與血管內(nèi)皮功能的關(guān)聯(lián)，以期發(fā)現(xiàn)高血壓相關(guān)血管病的潛在機(jī)制，在臨床實(shí)踐中提供改善患者預(yù)后的診治靶標(biāo)。

1資料與方法

1.1 主動(dòng)脈組織的獲取

高血壓組主動(dòng)脈組織樣品自高血壓腦出血供體獲取[收縮壓 gt;180mmHg（1mmHg=0.133kPa）] ，對(duì)照組主動(dòng)脈組織樣品自遭受交通事故和頭部創(chuàng)傷的心臟/腎臟/肝臟供體獲取。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）主動(dòng)脈夾層；（2）遺傳性主動(dòng)脈疾病，如馬方綜合征；（3）糖尿病、腫瘤等疾病。根據(jù)中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的人類研究方案（倫審［2021]160號(hào)）進(jìn)行樣品采集，并獲取器官捐獻(xiàn)者法定代理人的書(shū)面知情同意書(shū)。本研究選用從移植手術(shù)中獲取的人降主動(dòng)脈組織，分別使用高血壓組樣品3例和對(duì)照組正常血壓樣品3例。兩組供體性別和年齡（ ±5 歲）匹配。每個(gè)樣品分離一片 1～2cm² 主動(dòng)脈組織后，液氮保存用于后續(xù)炎癥標(biāo)志物的測(cè)定。

1.2高血壓小鼠模型的構(gòu)建

選取 C57BL/6J 雄性小鼠（8～10周齡），隨機(jī)分入生理鹽水組和高血壓組。小鼠麻醉后，利用背部皮膚植入注射生理鹽水或血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngII）（Sigma-Aldrich，每天 0.8mg/kg ）滲透泵（AlzetMINI-OSMOTICPUMP），持續(xù)4周，構(gòu)建高血壓小鼠模型。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫審動(dòng)[2023]098號(hào)）。

1.3研究人群和臨床資料

研究設(shè)計(jì)為橫斷面研究，納入2020年10月—2022年12月在中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診的高血壓患者96例。本研究遵循《赫爾辛基宣言》制定的相關(guān)原則，經(jīng)中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)通過(guò)（倫審[2019]345號(hào)），受試者均對(duì)試驗(yàn)知情并簽署知情同意書(shū)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡 ?18 歲，性別不限；（2）符合《中國(guó)高血壓防治指南（2018年修訂版）》[6診斷標(biāo)準(zhǔn)；（3）接受FMD檢查；（4）血漿樣品分裝保存于-80^°C 冰箱。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并嚴(yán)重感染或風(fēng)濕免疫疾??；（2）合并其他嚴(yán)重心腦血管疾病，如急性心肌梗死、心力衰竭、腦卒中等；（3）繼發(fā)性高血壓，包括腎實(shí)質(zhì)性高血壓、腎血管性高血壓、原發(fā)性醛固酮增多癥、庫(kù)欣綜合征等；（4）正在使用非甾體抗炎藥、類固醇或血管活性藥物；（5）孕婦或預(yù)期懷孕或哺乳期婦女。

記錄入組受試者的臨床資料，包括患者性別、年齡、體重指數(shù)、收縮壓、舒張壓、糖尿病病史、吸煙史。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1主動(dòng)脈組織炎癥因子表達(dá)檢測(cè)

收集人或小鼠主動(dòng)脈組織，制備成冰凍切片，將切片在 4% 多聚甲醛中固定 30min ，用磷酸鹽緩沖液沖洗，然后在經(jīng)緩沖處理的正常山羊血清中室溫孵育1h，以防抗體非特異性結(jié)合。切片分別與抗CD68（稀釋比例 1：100 ，Abcam，英國(guó)）、抗腫瘤壞死因子a（tumornecrosisfactor-a，TNF-a）（稀釋比例 1：5 000 ，Abcam，英國(guó)）抗白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-8（稀釋比例 1：100 ，Abcam，英國(guó)）一抗孵育過(guò)夜，隨后分別與山羊抗兔IgGHamp;L（AlexaFluor@568）（稀釋比例1：1000，Abcam，英國(guó)）、山羊抗兔 IgG Hamp;L（Alexa Fluor？647）（稀釋比例 1：1 000 ，Abcam，英國(guó)）、山羊抗兔IgGHamp;L（Alexa Fluor@488）（稀釋比例 1：1 000 ，Abcam，英國(guó)）標(biāo)記的二抗孵育，并用4’，6二胱基-2-苯基吲哚（4’，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）（Invitrogen，美國(guó)）復(fù)染細(xì)胞核。完成染色后，使用激光共聚焦顯微鏡（CarlZeiss，德國(guó)）成像，由ImageJ軟件進(jìn)行后續(xù)分析。

1.4.2 小鼠尾動(dòng)脈血壓監(jiān)測(cè)

應(yīng)用無(wú)創(chuàng)尾袖體積描記儀（SoftronBP-2010A血壓監(jiān)測(cè)系統(tǒng)）監(jiān)測(cè)小鼠尾動(dòng)脈血壓，具體操作步驟為：維持環(huán)境溫度適宜且恒定，固定小鼠，用乙醇擦拭裸露鼠尾后，將加壓尾套放置鼠尾根部，于安靜狀態(tài)下，監(jiān)測(cè)對(duì)照組和高血壓組小鼠尾動(dòng)脈血壓數(shù)值，每只小鼠取3次測(cè)量的平均值并記錄。

1.4.3 小鼠血管環(huán)實(shí)驗(yàn)

利用Wire Myograph System 620M（DMT620M）進(jìn)行血管環(huán)實(shí)驗(yàn)。完成力校準(zhǔn)后，將小鼠用過(guò)量麻醉劑深度麻醉，迅速打開(kāi)胸腔，小心分離出胸主動(dòng)脈段，切成長(zhǎng)度約為 2mm 的血管環(huán)。小心、迅速地將主動(dòng)脈環(huán)懸掛于兩根不銹鋼掛鉤上，一根掛鉤固定在浴槽底部，另一根掛鉤連接力傳感器，置入 37^°C 恒溫Krebs液的浴槽中。平衡 40min 后，分別加入 1μmol/L 的去氧腎上腺素和 30μmol/L 的乙酰膽堿，觀察并記錄血管環(huán)張力的變化。洗滌并重新平衡 40min 后，通過(guò)增加乙酰膽堿劑量，獲得濃度依賴性血管環(huán)張力變化曲線。數(shù)據(jù)分析由PanLab系統(tǒng)進(jìn)行。

1.4.4高血壓患者血漿炎癥標(biāo)志物檢測(cè)

采用液相懸浮芯片技術(shù)（LuminexX-200，美國(guó)），通過(guò)選擇構(gòu)建TNF- σ?a （可檢測(cè)范圍 0.53～9648pg/ mL）、IL-6（可檢測(cè)范圍 0.30～4669pg/mL ）、IL-8（可檢測(cè)范圍 ）、CXC趨化因子配體10[chemokine（C-X-C motif）ligand10，CXCL10]（可檢測(cè)范圍 0. 13～1 790pg/mL ） ?γ 干擾素（interferon- ?γ ，IFN-γ （可檢測(cè)范圍 2.88～85101pg/mL 、IL-17（可檢測(cè)范圍 ）、細(xì)胞間黏附分子（intercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1）（可檢測(cè)范圍 594.50～5792607pg/mL ）、CXC趨化因子配體11[chemokine（C-X-C motif）ligand11，CXCL11]（可檢測(cè)范圍 4.00～11826pg/mL ）抗體分子編碼微球試劑盒（Ramp;D公司，美國(guó)），檢測(cè)96例高血壓患者血漿樣品中各炎癥因子的表達(dá)情況。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)提供的操作步驟進(jìn)行檢測(cè)，每批實(shí)驗(yàn)設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)孔位，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品重復(fù)檢測(cè)孔位。通過(guò)計(jì)算重復(fù)樣本檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)來(lái)評(píng)估實(shí)驗(yàn)的精密度，保證變異系數(shù) lt;10% 。

1.4.5 高血壓患者血管內(nèi)皮功能檢測(cè)

采用FMD評(píng)價(jià)高血壓患者血管內(nèi)皮舒張功能。

根據(jù)美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)測(cè)量指南[17]，F(xiàn)MD通過(guò)高分辨率血管超聲成像設(shè)備（UNEXEF18G）檢測(cè)，參考既往研究的測(cè)量方法[18]，設(shè)備利用高分辨率的傳感器對(duì)肘窩上 5～10cm 處的肱動(dòng)脈進(jìn)行縱向可視化觀察，通過(guò)關(guān)聯(lián)的智能分析軟件對(duì)血管內(nèi)徑自動(dòng)成像。在獲取基礎(chǔ)圖像 30s 后，利用合適的上臂袖帶，通過(guò)袖帶充氣施加大于收縮壓 50mmHg 的壓力 5min ，以實(shí)現(xiàn)肱動(dòng)脈的局部血流阻斷。此間，肱動(dòng)脈的內(nèi)徑和二維圖像被持續(xù)性記錄，直到阻斷壓力釋放后 1min 。FMD百分比被用于血管功能分析，其具體計(jì)算公式為：FMD（%）= （反應(yīng)性充血后肱動(dòng)脈峰內(nèi)徑-基礎(chǔ)內(nèi)徑）/基礎(chǔ)內(nèi)徑。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

平均值和標(biāo)準(zhǔn)差、中位數(shù)和四分位間距分別用于正態(tài)/非正態(tài)分布的連續(xù)性變量的統(tǒng)計(jì)描述；百分?jǐn)?shù)用以計(jì)算和描述分類資料。根據(jù)資料類型，采用 χ_t 檢驗(yàn)、Wilcoxon秩和檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)方法分別推斷組間差異。由于FMD和炎癥因子分布呈偏態(tài)分布，采用Spearman相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)各炎癥因子和FMD的相關(guān)關(guān)系，同時(shí)評(píng)估校正年齡、性別、收縮壓、糖尿病、目前是否吸煙的Spearman偏相關(guān)系數(shù)。雙側(cè) Plt;0.05 定義為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有的統(tǒng)計(jì)分析由SPSS25.0軟件執(zhí)行，圖表制作由GraphpadPrism9.0軟件執(zhí)行。

2結(jié)果

2.1健康對(duì)照組和高血壓患者組主動(dòng)脈組織炎癥因子表達(dá)

在高血壓患者組和健康對(duì)照組的主動(dòng)脈中，使用巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)志物CD68進(jìn)行了免疫熒光檢測(cè)，數(shù)據(jù)表明，與健康對(duì)照組相比，高血壓狀態(tài)下 CD68⁺ 的巨噬細(xì)胞數(shù)量更為豐富（ t=9.875，Plt;0.001 。同時(shí)，與健康對(duì)照組相比，高血壓患者主動(dòng)脈組織TNF-a（ t= 10.35， Plt;0.001 ）、IL-8（ t=7.352 Plt;0.01 ）表達(dá)水平升高。見(jiàn)圖1。

圖1健康對(duì)照組和高血壓患者主動(dòng)脈組織炎癥標(biāo)志物的比較

注：免疫熒光檢測(cè)TNF- ??a 、IL-8和CD68表達(dá)水平。比例尺為 200μm 1 ^** 表示與對(duì)照組相比， Plt;0. 01，n=3 ?=??? 表示與對(duì)照組相比， Plt;0.001，n=3

2.2高血壓小鼠血壓、血管內(nèi)皮功能和炎癥因子表達(dá)

如圖2A、2B所示，高血壓小鼠血壓顯著高于生理鹽水對(duì)照組 （n=10，t_?garge=41.56，t_?garge=29.33，Plt; 0.001）。血管環(huán)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高血壓小鼠內(nèi)皮舒張功能明顯低于對(duì)照組 （n=10，Plt;0.001） ），見(jiàn)圖2C。免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)高血壓小鼠主動(dòng)脈 CD68⁺ 巨噬細(xì)胞富集 Ω_{n=4，t=13.68，Plt;0.001} 及TNF- σ?a 表達(dá)水平升高 ，見(jiàn)圖 2D 。

注：A和B為各組收縮壓、舒張壓水平；C為血管環(huán)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的各組內(nèi)皮舒張功能結(jié)果;D為免疫熒光檢測(cè)的TNF- σ_?a 和CD68表達(dá)水平。Saline為生理鹽水組， Ang Ⅱ?yàn)楦哐獕盒∈蠼M。比例尺為 50μm_? 。***表示與生理鹽水組相比， Plt;0.001 。

圖2AngI誘導(dǎo)的高血壓小鼠血壓、血管內(nèi)皮功能和炎癥因子表達(dá)

2.3高血壓患者臨床資料、血漿炎癥因子水平和血管內(nèi)皮功能

本研究共納入接受FMD 測(cè)量的96例高血壓患者，年齡為（ 48.60±13.19. 歲， 42.71% 為女性。女性的FMD中位數(shù)（四分位間距）為 4.7%（2.8%） ，男性為 4.9%（2.7%） 。血漿炎癥因子和血管內(nèi)皮功能的統(tǒng)計(jì)資料見(jiàn)表1。對(duì)FMD和受試者臨床特征行雙變量間Spearman相關(guān)分析，未發(fā)現(xiàn)FMD與年齡、體重指數(shù)、收縮壓間具有顯著相關(guān)關(guān)系（ Pgt;0.05 ）。8項(xiàng)炎癥因子間雙變量Spearman相關(guān)系數(shù)結(jié)果顯示，變量間普遍存在顯著相關(guān)（ Plt;0.01 ），其中TNF-a 與IL-6、IL-8、IFN- γ，IL-17 ICAM-1、CXCL11均呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)r 分別為0.355、0.304、0.655、0.420、0.683、0.282）。

表1血漿炎癥因子和血管內(nèi)皮功能特征

2.4高血壓患者炎癥因子與血管內(nèi)皮功能的相關(guān)性分析

上述炎癥因子分別與FMD 行雙變量間Spearman相關(guān)分析（表2），發(fā)現(xiàn)FMD與TNF- a（r=-0.252，P= 0.013）IL-8（ r=-0. 330 ， Plt;0. 01 ）、CXCL10（ r= -0.219，P=0. 0 32）呈顯著負(fù)相關(guān);而FMD與IL-6、IFN- ?γ IL-17、ICAM-1、CXCL11間相關(guān)系數(shù)無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Pgt;0.05 ）。同時(shí)，在校正年齡、性別的多因素分析中，F(xiàn)MD與TNF a（r=-0.242，P=0.019 ）、IL-8中 r=-0.326，Plt;0.01 ）、CXCL10 ）（r=-0.217，P=0.036 ）存在顯著負(fù)相關(guān)。當(dāng)校正年齡、性別、收縮壓、糖尿病、目前是否吸煙后，F(xiàn)MD與IL-8（ r=-0. 301 ， P= 0.018）的負(fù)相關(guān)關(guān)系，仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2血漿炎癥因子與血管內(nèi)皮功能的相關(guān)性分析

注：多因素模型1校正了年齡、性別;多因素模型2校正了年齡、性別、收縮壓、糖尿病、目前是否吸煙。

3討論

高血壓是發(fā)病機(jī)制復(fù)雜的常見(jiàn)疾病，由多種因素造成血壓升高并累及靶器官功能，其中血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能的完整性喪失是高血壓及其相關(guān)心血管疾病發(fā)生發(fā)展的共同通路和關(guān)鍵環(huán)節(jié)[19-20]。免疫炎癥反應(yīng)參與調(diào)控高血壓血管損傷[2I-22]，由慢性炎癥導(dǎo)致促炎/抗炎穩(wěn)態(tài)失衡是高血壓血管損傷的主要病理生理機(jī)制之一。

巨噬細(xì)胞由造血干細(xì)胞衍生的單核細(xì)胞在血液循環(huán)中遷移及分化而來(lái)，是一種重要的固有免疫系統(tǒng)效應(yīng)細(xì)胞，并對(duì)適應(yīng)性免疫起著重要的調(diào)節(jié)作用。巨噬細(xì)胞在特定的組織中定居并長(zhǎng)期存在，具有組織特異性，通常處于相對(duì)靜止但持續(xù)監(jiān)視的狀態(tài)，對(duì)維持組織穩(wěn)態(tài)發(fā)揮關(guān)鍵作用[23]。在炎癥干擾下，單核細(xì)胞分化會(huì)趨于促炎、促修復(fù)表型，稱為炎癥相關(guān)的巨噬細(xì)胞。本研究觀察到高血壓腦出血患者主動(dòng)脈組織中炎癥相關(guān)的巨噬細(xì)胞富集，且TNF-a和IL-8炎癥因子表達(dá)增加；高血壓小鼠內(nèi)皮舒張功能減低，炎癥相關(guān)的巨噬細(xì)胞數(shù)量增多。這些結(jié)果提示巨噬細(xì)胞在參與高血壓血管損傷過(guò)程中發(fā)揮重要作用。既往研究[24-25]發(fā)現(xiàn)，促炎細(xì)胞因子TNF- ??a_λIL-8 趨化和募集巨噬細(xì)胞，并激活巨噬細(xì)胞吞噬、分泌功能，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向具有促炎作用的M1型極化。同時(shí)，巨噬細(xì)胞釋放炎癥因子（如TNF-a、IL-8），可能通過(guò)顯著調(diào)控PI3K/Akt和核因子 κB 信號(hào)通路的激活，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性和黏附分子、趨化因子表達(dá)，促進(jìn)炎癥細(xì)胞聚集和活化，進(jìn)一步放大炎癥信號(hào)，加重血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷[26-27]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[28]證實(shí)，抑制巨噬細(xì)胞M1型極化可改善小鼠下肢缺血模型血管新生現(xiàn)象。

通過(guò)檢測(cè)高血壓患者外周血循環(huán)中炎癥標(biāo)志物，本研究觀察到血漿中IL-8炎癥因子水平與肽動(dòng)脈FMD呈顯著負(fù)相關(guān)，表明IL-8在高血壓血管內(nèi)皮損傷中具有重要作用。同時(shí)，血漿中TNF- ?a，CXCL10 炎癥因子水平也與FMD存在較弱關(guān)聯(lián)。然而，在本研究人群中，其他炎癥標(biāo)志物，包括IL-6、 IFN-γ 、IL-17、ICAM-1、CXCL11，均未發(fā)現(xiàn)其與FMD的關(guān)聯(lián)。外周血循環(huán)中炎癥因子與FMD間的較弱或不顯著的關(guān)聯(lián)，與既往相關(guān)研究結(jié)果一致[12-13]。最近的研究[29]表明，高血壓血管內(nèi)皮功能正常者與血管內(nèi)皮功能障礙者相比較，其組間血漿炎癥因子 TNF-a，IL-6，IFN-γ 表達(dá)水平存在差異。因此，如何統(tǒng)一炎癥因子的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)方法，并應(yīng)用于疾病臨床實(shí)踐，有待進(jìn)一步探討。既往研究報(bào)道與FMD水平相關(guān)的臨床特征，可能包括低密度脂蛋白膽固醇、腰圍、降壓藥物治療等，但需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量以排除這些混雜因素對(duì)研究結(jié)果的影響。

在臨床實(shí)踐中，靶向或影響炎癥因子表達(dá)的治療方法，可能使高血壓血管內(nèi)皮功能障礙者獲益。有文獻(xiàn)[29]報(bào)道，經(jīng)阿托伐他汀藥物治療后，炎癥因子IL-6水平下降，而血管內(nèi)皮舒張功能得以改善，歸因于他汀類藥物除降低血脂外的多效性作用。另有研究[30]報(bào)道，經(jīng)過(guò)8周和12周喹那普利治療的心肌梗死后合并左心室收縮功能障礙患者，其血漿TNF- ??a，C 反應(yīng)蛋白水平顯著下降，F(xiàn)MD 水平顯著升高。近期研究[31]發(fā)現(xiàn)，服用富含多酚類物質(zhì)的食物刺檗8周后，高血壓患者的血漿ICAM-1水平下降，F(xiàn)MD改善。CANTOS研究[32]提示，既往患有心肌梗死且高敏C反應(yīng)蛋白≥2mg/L 的受試者，使用IL- 1β 單克隆抗體卡那單抗治療，經(jīng)過(guò)中位隨訪時(shí)間（3.7年）后，患者高敏C反應(yīng)蛋白水平下降，并顯著減少心血管事件的發(fā)生。

本研究的主要局限性：（1）患者主動(dòng)脈組織取自高血壓腦出血患者，盡管這些患者與常規(guī)高血壓患者在血管病理特征上可能存在一定差異，但二者均以高血壓為基礎(chǔ)病理過(guò)程，本研究結(jié)果在一定程度上反映了高血壓疾病進(jìn)展的演變規(guī)律。未來(lái)將進(jìn)一步分析不同階段高血壓患者的血管病理變化與炎癥標(biāo)志物的關(guān)系，以便更全面地揭示高血壓及其并發(fā)癥的病理機(jī)制。（2）尚未深入探討高血壓患者血管壁巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和炎癥因子釋放的下游分子機(jī)制。該研究為橫斷面研究，無(wú)法推斷炎癥標(biāo)志物與血管內(nèi)皮功能間的因果聯(lián)系。（3）炎癥對(duì)高血壓血管內(nèi)皮損傷的預(yù)后影響仍需通過(guò)長(zhǎng)期大樣本人群觀察驗(yàn)證，進(jìn)一步多中心隊(duì)列驗(yàn)證研究是必要的。

綜上所述，巨噬細(xì)胞富集與高血壓血管損傷相關(guān)，炎癥因子IL-8與高血壓血管內(nèi)皮舒張功能損傷相關(guān)，可能通過(guò)巨噬細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞相互作用在高血壓疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。本研究在分層研究和隨訪監(jiān)測(cè)心腦血管事件“硬終點(diǎn)”方面存在不足，有待進(jìn)一步擴(kuò)大研究，針對(duì)高血壓患者的患病時(shí)程、血壓達(dá)標(biāo)情況、抗高血壓藥使用等進(jìn)行分層、分類精準(zhǔn)評(píng)估，并闡明其分子機(jī)制，以期改進(jìn)高血壓相關(guān)血管病臨床診治策略。

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