六味糖克湯干預(yù)糖尿病腎病大鼠炎癥因子的研究

中圖分類(lèi)號(hào)：R587.2；R692 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2025.14.011

文章編號(hào)：1006-1959（2025）14-0067-04

Abstract：ObectiveTvestgatethtsofLueangeeoctioolodcoseifaatoactodalfuctioatsi diabeticnepropathyethosFortyeanatsedolyividedintoopscudingatsinoalopdthaats werefed with high-fatsugardiet for4weeksand thenfasted for ^12h .The diabetic kidney disease （DKD） rat model was established by streptozotocin （STZ）.The rats were divided into DKD model group，DKD + AICAR group，DKD +low -concentration Chinese medicine group，and |DKD+high- concentrationCinesemedicinegoup.TheoalgroupndteDKDmodelgouperegivenitrapeioealijectioofoalsalinetheKD + （20號(hào) AICARgroupwasgivenintraperitonealinjectionofadenosine-phosphate-activatedkinase（AMPK）activatorAICAR3Omg/kg，the DKD+low- concentrationChineseedicingroupasivenlowoncentrationChineseedicinendteD+igoncetrtionCineseedicinegoua givenhighoraieedatscdelsiod）etid urea nitrogen （BUN） were analyzed by automatic analyzer.The expresson of inflammatory factors TNF- ??α∝ and IL-6 was detected.Results Compared with the DKD model group，the FBG level inthe DKD+high-concentration Chinese medicine group was decreased（ Plt;0.01 ），but compared with the DKD + AICARgroup，therewasno significant difference（ Pgt;0 0.05）.Compared with theDKD model group，the Scrand BUNof theChinesemedicine group and the DKD + AICAR group were significantly decreased（ Plt;0.01 ），but there was no significant difference between DKD+high concentration Chinese medicine group and DKD + AICARgroup Pgt; 0.05）.Compared with theDKD model group，thelevelsof TNF- α_α∝α and IL-6 in the kidney tissues of the Chinese medicine group and the DKD + AICAR group were significantly down-regulated（P 0.05）.ConclusionLiuweiTangkedcoctioncanimprovethelevelsofblodgucosenalfunctionandinflammatoryactorsinDats. Kevwords：Diabetic nephroDathv： Inflammatorv factors：Liuwei Tangke decoction

據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)盟估計(jì)，2045年糖尿病患者人數(shù)將增至6.3億。糖尿病腎?。―KD）作為糖尿病的微血管并發(fā)癥之一，已經(jīng)是許多國(guó)家終末期腎臟病的主要原因。DKD發(fā)病機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，但近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明炎癥反應(yīng)在DKD的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[2-5]，其主要與腺苷-磷酸激活激酶（AMPK） ??PGC-1α 的激活有關(guān)。炎癥因子在AMPK信號(hào)傳導(dǎo)通路上的作用越來(lái)越被重視，尤其是IL-6、TNF- σ?α∝ 等炎癥因子通過(guò)調(diào)節(jié)AMPK信號(hào)通路而減輕炎癥反應(yīng)可能成為治療DKD的新方法。傳統(tǒng)中醫(yī)藥在治療DKD，延緩腎功能進(jìn)展，減少尿蛋白方面有明顯療效。本研究通過(guò)該動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察研究六味糖克湯臨床經(jīng)驗(yàn)方對(duì)AMPK信號(hào)傳導(dǎo)通路中IL-6、TNF-α 等炎癥因子的影響作用，旨在為尋找治療DKD更加實(shí)用、有效、經(jīng)濟(jì)的方法提供初步的理論基礎(chǔ)。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料動(dòng)物：選擇40只大鼠（45～50d），體重為 （200±10）_g 的雄性健康SD清潔級(jí)大鼠（購(gòu)自中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）。試劑：AMPK激活劑AICAR（中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供）；雙抗體夾心ELISA盒（欣博盛，ERC001/R210602-001b）;中藥湯劑（知母 6g. 牛膝 10g. 黃芪 12g 山藥 15g 葛根 12g 麥冬 6g ），飲片購(gòu)于市臨安區(qū)中醫(yī)院，由制劑室統(tǒng)一制成煎劑，置于 4^qC 保存?zhèn)溆?。設(shè)備：AU2700型全自動(dòng)生化分析儀（貝克曼公司，美國(guó)）。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵守《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查指南》。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物造模大鼠先予普通飼料喂養(yǎng)1周，根據(jù)隨機(jī)對(duì)照表分為正常對(duì)照組（8只），糖尿病腎臟病組（DKD組，32只），正常對(duì)照組以普通飼料喂養(yǎng)，DKD組使用高脂，高糖飼料喂養(yǎng)（脂高糖飼料配方：60% 普通大鼠飼料 .8% 蛋黃粉 ，10% 煉豬油 ，20% 蔗糖 .2% 膽固醇）喂養(yǎng)4周。4周后禁食 ^12h ，并使用鏈脲佐菌素（STZ）（以 0.1mmol/L，pH=4.4 檸檬酸緩沖液溶解新鮮配置）按劑量 40mg/kg 體重腹腔注射1次，于注射 ^72h 后取大鼠尾靜脈血測(cè)血糖，血糖 ?16.7mmol/L ，且尿量和飲水量明顯增多；代謝籠收集 24h 尿，測(cè)尿微量白蛋白，微量白蛋白/肌酐 為DKD大鼠造模成功。

1.2.2實(shí)驗(yàn)分組正常組8只，DKD組分為4組，每組8只。DKD大鼠組分為：DKD模型組、 DKD+ AICAR（AMPK激活劑）組、 .DKD+ 低濃度中藥組、DKD+ 高濃度中藥組，正常組、DKD模型組分別給與腹腔注射生理鹽水， DKD+AICAR 組予AMPK激活劑AICAR 30mg/kg 腹腔注射， DKD+ 低濃度中藥組給予低濃度中藥喂養(yǎng)， DKD+ 高濃度中藥組給予高濃度中藥喂養(yǎng)。大鼠中藥給藥劑量依據(jù)人和動(dòng)物間按體表面積折算的等效劑量比值進(jìn)行換算（1：6.25），并按臨床成人用藥量的4倍、1倍劑量給藥，分為中藥高 [5.69mg/（kg?d）] 、低 [1.49mg/（kg?d）] 劑量組，早晚各1次，連續(xù)灌胃4次。給藥 36h 后處死大鼠。檢測(cè)血清生化指標(biāo)空腹血糖（FBG）、血肌酐（ （Scr） 1，尿素氮（BUN）]，ELISA法檢測(cè)大鼠腎組織勻漿上清液TNF- σ?α?α?α?α 、IL-6水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以 表示，兩組間比較采用 t 檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析， Plt;0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， Plt;0.01 視為統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著。

2結(jié)果

2.1各組大鼠FBG比較DKD模型組大鼠FBG與正常組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著 （Plt;0.01）;DKD+ 高濃度中藥組與DKD模型組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著（ Plt; 0.01），見(jiàn)表1。

2.2各組大鼠 Scr 和BUN比較與DKD模型組比較，中藥組和 DKD+AICAR 組大鼠的 Scr 和BUN均下降（ Plt;0.01 ）， DKD+ 高濃度中藥組與 DKD+ AICAR組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ P50.05 ，見(jiàn)表2。

表1各組大鼠FBG 比較（x+S，mmol/L）

注：與模型組比較， ?_Plt;0.01 。

表2各組大鼠Scr和BUN比較

注：與正常組比較， ^ΔPlt;0.01 ；與DKD模型組比較， ^*Plt;0.01，

2.3各組大鼠腎組織 TNF-α、IL-6 水平比較與DKD模型組比較，中藥組和 DKD+AICAR 組大鼠腎組織TNF- σ?α?α?α?α IL-6水平均較低（ Plt;0.01 ）； DKD+ 高濃度中藥組與 DKD+ AICAR組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ Pgt; 0.05），見(jiàn)表3。

表3各組大鼠腎組織TNF- ?∝ IL-6的表達(dá) （20

注：與正常組比較， ^ΔPlt;0.01 ；與DKD模型組比較， ^*Plt;0.01 。

3討論

DKD是由多種因素引起的，包括機(jī)械應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、TGF- _?β1 誘導(dǎo)、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）激活和AGEs積累。并且有許多信號(hào)通路參與了自噬介導(dǎo)的mTOR信號(hào)通路、AMPK信號(hào)通路、 Wnt/β- 連環(huán)蛋白信號(hào)通路等的調(diào)控。六味糖克湯是在清代著名醫(yī)家張錫純玉液湯的基礎(chǔ)上加減而成，由知母、牛膝、黃芪、山藥、葛根、麥冬組成。

本研究 DKD+ 高濃度中藥組FBG低于DKD模型組，這說(shuō)明六味糖克湯有明顯降低血糖的作用，這是由于中藥中含有多種有效成分。如山藥多糖對(duì) α- 淀粉酶活力有抑制作用，山藥皂昔、黃酮類(lèi)成分可以抑制agd酶 ?_?α- 淀粉酶和二肽基肽酶 IV（DPP-4） ，具有降血糖活性。山藥能顯著降低腸道微生物群的多樣性，促進(jìn)T2DM大鼠益生菌（尤其是產(chǎn)SCFA的細(xì)菌）的生長(zhǎng)，并增強(qiáng)結(jié)腸組織中GPR43受體的表達(dá)，從而增加血清中GLP-1和PYY的含量，并發(fā)揮降血糖作用8。葛根素可通過(guò)激活A(yù)MPK通路調(diào)節(jié)自噬，拮抗鎘引起的rPT細(xì)胞凋亡，并可修復(fù)受損的胰腺 β 細(xì)胞。黃酮與多糖等化學(xué)物質(zhì)可大量釋放，避免胰島素 β 細(xì)胞受到免疫性損害，避免出現(xiàn)胰島素抵抗[9，10]

高宏宇等研究顯示，降低腎病綜合征小鼠血清中炎癥因子水平可減輕腎臟損傷，而黃芪可通過(guò)抑制炎癥因子的分泌減輕腎病綜合征小鼠機(jī)體內(nèi)的炎癥反應(yīng)。知母的主要活性成分肉豆蔻素（Sar）對(duì)糖尿病大鼠足細(xì)胞損傷有預(yù)防作用1，知母中含有的木質(zhì)素類(lèi)成分，可以有效抑制炎癥，具有較好的抗炎作用；麥冬皂苷可能通過(guò)活化AMPK，抑制 Akt/mTOR 通路，促進(jìn)心肌組織自噬[13]。葛根素可以保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激[4，可通過(guò)減少葡萄糖和脂質(zhì)代謝紊亂來(lái)降低妊娠糖尿病大鼠TNF- σ?α∝ 的表達(dá)并改善胰島素抵抗[15]。葛根還能夠抑制信號(hào)通路相關(guān)蛋白的活化和炎癥介質(zhì)的釋放，進(jìn)而發(fā)揮抗炎作用[。本研究中 DKD+ 高濃度中藥組的 Scr 和BUN均下降，并且與DKD ⁺ AICAR組相當(dāng)水平，這說(shuō)明六味糖克湯可延緩腎功能進(jìn)展?？赡苁峭ㄟ^(guò)上述作用機(jī)理改善腎功能、抑制炎癥反應(yīng)。

在糖尿病腎病發(fā)病過(guò)程中炎癥因子參與多個(gè)信號(hào)通路的傳導(dǎo)[]TNF- σ?α∝ 是炎癥中樞信號(hào)通路，通常被多種應(yīng)激刺激激活，包括糖尿病、肥胖和氧化應(yīng)激[8]TNF- σ?α∝ 的激活可以誘導(dǎo)許多細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄，如MCP-1和白細(xì)胞介素系統(tǒng)[19]。巨噬細(xì)胞的激活也在DN炎癥損傷中起著關(guān)鍵作用2。M1巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量促炎細(xì)胞因子 iNOS，TNF-α，MCP-1 和其他促炎介質(zhì)，從而放大炎癥，導(dǎo)致DN發(fā)病過(guò)程中進(jìn)一步損傷2。本研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病腎臟大鼠腎組織上清液中的腎臟促炎細(xì)胞因子IL-6和TNF- σ?α∝ 隨著STZ誘導(dǎo)而增加，而六味糖克湯干預(yù)后則降低，這些發(fā)現(xiàn)表明六味糖克湯可能通過(guò)負(fù)向調(diào)節(jié)作用來(lái)減少I(mǎi)L-6和TNF- σ?α?α?α?α 的表達(dá)，并且高濃度六味糖克湯干預(yù)后更加明顯。

綜上所述，六味糖克湯可以有效降低血糖、改善腎功能，抑制炎癥反應(yīng)，防止DN的進(jìn)展。這些發(fā)現(xiàn)為臨床使用六味糖克湯治療DN提供了基礎(chǔ)。但仍需要進(jìn)一步的研究來(lái)闡明六味糖克湯在改善DN的發(fā)生和發(fā)展中的抗炎和抗纖維化作用的精確機(jī)制。

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收稿日期：2024-04-29；修回日期：2024-06-03

編輯/肖婷婷