熱區(qū)橡膠林下適栽紅托竹蓀的菌株篩選和生物學(xué)特性研究

摘""要：為推動熱區(qū)紅托竹蓀產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，本研究對收集的11株竹蓀菌株進行ITS分子條形碼鑒定和菌絲體拮抗試驗，并基于種質(zhì)資源評價開展熱區(qū)適栽菌株的篩選和生物學(xué)特性研究。試驗結(jié)果表明：（1）收集的11株竹蓀菌株均為紅托竹蓀，其中有2株菌株為同一菌株，即共獲得10株不同的紅托竹蓀菌株；（2）室內(nèi)菌絲評價中，147、160、H29和L70菌株的菌絲體在紅糖培養(yǎng)基和橡膠木屑培養(yǎng)基上均長勢較好、吃料較快，且菌絲體在10"℃和35"℃脅迫后均能恢復(fù)生長，適合熱區(qū)的反季節(jié)栽培；（3）在橡膠林下進行出菇試驗，4株紅托竹蓀菌株均能出菇，其中H29出菇整齊、朵型好、耐儲存、產(chǎn)量較高（750"kg/667"m2），適合就地出花；L70菌株出蛋多、生育期短、產(chǎn)量高（800"kg/667"m2），適合竹蛋集中出花；（4）單因素試驗中，H29和L70菌絲體的營養(yǎng)需求基本一致，最適碳源為海藻糖和淀粉，最適氮源為麥芽浸粉，最適溫度為25～28"℃，最適pH為4～5；（5）正交試驗中，2株菌株的菌絲體均在配方4（可溶性淀粉、麥芽浸粉、25"℃、pH=4）中長勢最好，論證了單因素試驗結(jié)果，但在配方6中2株菌株的菌絲體更潔白濃密，適合用于紅托竹蓀的菌種保藏；SPSS分析顯示，各因素對菌絲生長的影響程度分別為：氮源gt;pHgt;碳源gt;溫度（H29），氮源gt;pHgt;溫度gt;碳源（L70），氮源和pH影響較大。本研究結(jié)果可為紅托竹蓀菌株育種、熱區(qū)規(guī)?；耘嗉t托竹蓀，以及熱區(qū)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供參考。

關(guān)鍵詞：紅托竹蓀；熱帶地區(qū)；營養(yǎng)需求；生長條件；橡膠產(chǎn)業(yè)中圖分類號：S432.1""""""文獻標志碼：A

Strains"Screening"and"Biological"Characteristics"of"Phallus"rubrovolvatus"Suitable"for"Cultivation"in"Rubber"Forests"of"Tropical"Regions

ZHANG"Kaipeng1，2，3，"CHENG"Hanting1，2，"LUO"Zhenquan4，"XU"Lin1，2，"BU"Lianyan1，2，"DING"Ye1，2，"YAN"Tingliang1，2，"LI"Qinfen1，2*，"YANG"Yang1，2*

1."Environment"and"Plant"Protection"Institute，"Chinese"Academy"of"Tropical"Agricultural"Sciences"/"Hainan"Key"Laboratory"of"Tropical"Eco-Circular"Agriculture，"Haikou，"Hainan"571101，"China;"2."Key"Laboratory"of"Green"and"Low"Carbon"Green"Agriculture"in"Tropical"of"China，"Ministry"of"Agriculture"and"Rural"Affairs，"Haikou，"Hainan"571101，"China;"3."Institute"of"Applied"Mycology，"College"of"Plant"Science"Technology，"Huazhong"Agricultural"University，"Wuhan，"Hubei"430070，"China;"4."School"of"Tropical"Medicine，"Hainan"Medical"University，"Haikou，"Hainan"571101，"China

Abstract："ITS"molecular"identification"and"mycelial"antagonism"experiments"on"11"strains"collected"in"the"early"stage，"then"screened"and"studied"the"biological"characteristics"of"suitable"strains"for"cultivation"in"tropical"regions"based"onnbsp;germplasm"evaluation"to"promote"the"rapid"development"of"Phallus"rubrovolvatus"industry"in"tropical"regions."The"strains"collected"were"all"P."rubrovolvatus，"of"which"two"strains"were"synonyms，"resulting"in"a"total"of"10"different"P."rubrovolvatus"strains."In"mycelial"evaluation"experience，"the"mycelia"of"strains"147，"160，"H29"and"L70"showed"good"growth"and"high"degradability"on"brown"sugar"medium"and"rubber"sawdust"medium，"and"the"mycelia"were"able"to"recover"growth"after"stress"at"10"℃"and"35"℃，"making"them"suitable"for"off-season"cultivation"in"tropical"regions."In"rubber"forests，"four"strains"were"able"to"produce"mushrooms，"and"H29"produced"mushrooms"neatly，"good"shape，"storage"resistance"and"high"yield"（750"kg/667"m2），"making"it"suitable"for"on-site"growing"indusium."L70"strain"produced"more"mushroom-eggs，"short"growth"period"and"high"yield"（800"kg/667"m2），"making"it"suitable"for"concentrated"growing"indusium"of"mushroom-eggs"after"harvesting."In"the"single"factor"experiment，"the"nutritional"requirements"of"H29"and"L70"mycelia"were"basically"the"same，"the"most"suitable"carbon"sources"were"trehalose"and"starch，"the"most"suitable"nitrogen"source"was"malt"extract，"the"most"suitable"temperature"was"25-28"℃，"and"the"most"suitable"pH"was"4-5."In"the"orthogonal"experiment，"both"strains"showed"the"best"growth"in"formula"4"（soluble"starch，"malt"extract，"25"℃，"pH=4），"demonstrating"the"results"of"the"single"factor"experiment."Especially，"in"formula"6，"the"mycelia"of"both"strains"were"whiter"and"denser，"making"it"suitable"for"the"preservation"of"P."rubrovolvatus."SPSS"analysis"showed"that"the"influence"degree"of"various"factors"on"mycelial"growth"was"as"follows："nitrogen"sourcegt;pHgt;carbon"sourcegt;temperature"（H29），"nitrogen"sourcegt;pHgt;temperaturegt;carbon"source"（L70），"with"nitrogen"source"and"pH"having"a"greater"impact."The"study"could"provide"reference"for"breeding，"large-scale"cultivation"of"P."rubrovolvatus，"and"the"development"of"mushroom"industry"in"tropical"regions.

Keywords："Phallus"rubrovolvatus;"tropical"regions;"nutrition"demand;"growth"conditions;"rubber"industry

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2025.05.012

紅托竹蓀[Phallus"rubrovolvatus"（M."Zang，"D.G."Ji"amp;"X.X."Liu）"Kreisel]，又名織金竹蓀，素有“菌中皇后”、“山珍之王”的美譽[1-2]。其味道鮮美、營養(yǎng)豐富[3]，具有抗氧化[4]、抗衰老[5]、抗腫瘤[6]、護肝[7]等多種藥用功能，深受消費者喜愛。目前，紅托竹蓀被公認為是我國廣泛種植的四大竹蓀中品質(zhì)最優(yōu)的中溫型食用菌，是一種理想栽培的珍稀食藥用菌，市場前景廣闊[8]。熱區(qū)反季節(jié)栽培紅托竹蓀，有助于解決食用菌生產(chǎn)淡季的市場供應(yīng)問題，對熱區(qū)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義[9]。橡膠是熱區(qū)重要的經(jīng)濟作物，其林下復(fù)合結(jié)構(gòu)明顯，具有天然氧吧、水分涵養(yǎng)和環(huán)境穩(wěn)定等優(yōu)勢，為發(fā)展林下食用菌提供了優(yōu)越的自然條件[10]。在橡膠林下栽培紅托竹蓀，既可以充分利用橡膠林條件降低栽培成本，還能通過土壤改良促進橡膠樹生長，有助于橡膠林下復(fù)合經(jīng)濟的綠色可持續(xù)發(fā)展[11]。同時，林下食用菌栽培還可為當?shù)鼐用裉峁﹦?wù)工崗位，解決部分農(nóng)民的就業(yè)問題，具有一定的社會效益[12]。

目前，紅托竹蓀主要在貴州、云南、廣西、福建、廣東等地栽培，其中以福建三明市、南平市以及云南昭通市、貴州畢節(jié)市、四川宜賓市最為有名[13]。在海南，紅托竹蓀的栽培起步較晚，且主要集中在白沙和?？趦傻氐南鹉z林下栽培。據(jù)不完全統(tǒng)計，紅托竹蓀在海南的栽培規(guī)模從2020年到2024年累計約33.3萬m2，年產(chǎn)值突破1500萬元。突出的經(jīng)濟效益極大地提高了農(nóng)戶對紅托竹蓀栽培的積極性，其栽培面積也隨之增加，成為熱區(qū)食用菌產(chǎn)業(yè)中期望較高的栽培物種。

種質(zhì)資源是食用菌研究的基礎(chǔ)，對食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展至關(guān)重要[14]。研究人員發(fā)現(xiàn)，我國紅托竹蓀菌株的遺傳多樣性豐富[15]，在生育期、產(chǎn)量、子實體大小和形態(tài)等多種農(nóng)藝性狀上存在顯著差異[16]，為紅托竹蓀菌株的遺傳育種和定向培育奠定了基礎(chǔ)。然而，紅托竹蓀在熱區(qū)的栽培剛剛起步，適栽菌株的篩選工作尚未開展。目前，熱區(qū)栽培的紅托竹蓀菌棒多采購自貴州、四川等地，存在菌種不適宜、栽培基質(zhì)不明確、運輸成本高等諸多問題。并且，我國熱區(qū)的食用菌栽培主要以橡膠木屑為主，紅托竹蓀對橡膠木屑的降解利用也尚不明確。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，以橡膠木屑為主料的紅托竹蓀菌棒，在菌絲體生長后期會出現(xiàn)菌棒變軟、后勁不足等問題，對紅托竹蓀的本地化制種存在困擾。另一方面，在食用菌生長發(fā)育過程中，不同物種甚至同一物種的不同菌株所需要的營養(yǎng)和環(huán)境是不同的[17]。唐玲等[18]通過將不同竹蓀菌株接種在相同培養(yǎng)基中，觀察到菌株間菌絲生長差異明顯，有的菌株長勢較好，但有的幾乎不生長。進一步比較發(fā)現(xiàn)，不同菌株的生長溫度和pH也存在一定差異[19]。因此，探究各菌株的生物學(xué)特性在菌株的擴大培養(yǎng)中十分必要。

本研究以前期在國內(nèi)收集的11株紅托竹蓀菌株為材料，通過比較菌絲長勢、橡膠木屑吃料能力、溫度適應(yīng)性和出菇性狀等，綜合篩選熱區(qū)適栽的紅托竹蓀菌株。并基于單因素和正交試驗，針對性開展適栽菌株的生物學(xué)特性研究，以明確其菌絲體生長的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件。該研究結(jié)果，對熱區(qū)紅托竹蓀的規(guī)模化栽培，以及熱區(qū)林下復(fù)合經(jīng)濟的可持續(xù)發(fā)展具有推動作用。

1""材料與方法

1.1""材料

1.1.1""供試菌株""實驗室前期在國內(nèi)收集的11株竹蓀菌株，具體信息見表1。所有菌株現(xiàn)保存于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護研究所菌種保藏中心。

1.1.2""供試培養(yǎng)基""（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20"g、麥芽浸粉10"g、紅糖10"g、瓊脂20"g，加水定容至1"L；（2）紅糖培養(yǎng)基：蔗糖8.75"g、可溶性淀粉3.125"g、麩皮2.5"g、豆粉1.25"g、酵母浸粉0.5"g、紅糖8.75"g、VB1"1片、磷酸二氫鉀1.25"g、硫酸鎂1"g、瓊脂20"g，加水定容至1"L；橡膠木屑培養(yǎng)基：（3）橡膠木屑60%、麥麩15%、白糖1%、KH2PO4"0.2%、MgSO4"0.3%、石膏1.5%、三十烷醇1"mg/L，培養(yǎng)料濕度65%。

1.2""方法

1.2.1""ITS條形碼鑒定""使用新型植物基因組DNA提取試劑盒，提取11株竹蓀菌株的DNA，并用1%的瓊脂糖凝膠電泳評估DNA質(zhì)量。采用通用引物ITS1/ITS4進行PCR擴增，擴增體系和擴增程序參考陸珠等[20]的方法。將PCR產(chǎn)物送到深圳華大基因有限公司進行測序，測序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行BLAST比對。

1.2.2""拮抗試驗""將鑒定為紅托竹蓀的菌株活化后，用直徑7"mm的無菌槍頭打孔，采用“兩兩對峙”的方法接種在平板上。25"℃恒溫暗培養(yǎng)至2株菌株的菌絲體接觸后，繼續(xù)培養(yǎng)3～5"d觀察是否有拮抗線。

1.2.3""種質(zhì)資源評價""（1）菌絲體生長速度和吃料能力評價。用直徑8"mm的無菌槍頭在活化好的竹蓀平板上打孔，分別轉(zhuǎn)移到紅糖培養(yǎng)基和橡膠木屑培養(yǎng)基正中央，25"℃恒溫暗培養(yǎng)。采用“十”字交叉法計算菌絲生長速度，并觀察菌絲長勢，＋表示菌絲較稀疏；＋＋表示菌絲濃密；＋＋＋表示菌絲很濃密。每個處理設(shè)3個生物學(xué)重復(fù)，試驗數(shù)據(jù)在SPSS軟件中分析[21]。

（2）菌絲體溫度適應(yīng)性評價。結(jié)合熱區(qū)冬季溫度變化特點，將活化好的竹蓀菌絲體，轉(zhuǎn)移到新的紅糖培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)1周后，分別進行10"℃和35"℃的溫度脅迫24"h，之后重新放回25"℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，觀察各菌株的菌絲體能否恢復(fù)生長，并記錄菌絲恢復(fù)生長速度。

（3）紅托竹蓀的室外出菇試驗?；诰z體評價結(jié)果，將初篩菌株的菌棒在橡膠林下進行反季節(jié)栽培。觀察并統(tǒng)計各菌株的出菇產(chǎn)量、生育期、子實體形態(tài)等農(nóng)藝性狀，綜合篩選膠林下適栽的紅托竹蓀菌株。

1.2.4""生物學(xué)特性分析""（1）碳源試驗。分別用果糖、可溶性淀粉、海藻糖、蔗糖為碳源，替代基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖。用直徑7"mm的無菌槍頭打孔，將圓形菌塊接種在培養(yǎng)基中央，25"℃恒溫暗培養(yǎng)至菌絲長滿。接種、測量和分析方法同1.2.3（1）。

（2）氮源試驗。分別以酵母浸粉、蛋白胨、尿素、硫酸銨為氮源，替代基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的酵母浸粉。接種、測量和分析方法同1.2.3（1）。

（3）溫度試驗。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上接種后，分別置于19、22、25、28、31"℃培養(yǎng)箱中恒溫暗培養(yǎng)。接種、測量和分析方法同1.2.3（1）。

（4）pH試驗。以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為供試培養(yǎng)基，滅菌后在超凈臺內(nèi)用1"mol/L的HCL和NaOH調(diào)節(jié)pH，分別調(diào)至pH為4、5、6、7、8。接種、測量和分析方法同1.2.3（1）。

（5）正交試驗?；趩我蛩卦囼灲Y(jié)果，分別從各因素中選取3個長勢最好的條件，組成4因素3水平的正交試驗，對培養(yǎng)條件進行驗證和優(yōu)化。接種、測量和分析方法同1.2.3（1）。

1.3""數(shù)據(jù)處理

利用SPSS"26"軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，使用GraphPad"Prism"9.5軟件進行作圖[20-21]。

2""結(jié)果與分析

2.1""菌株鑒定

經(jīng)基因組提取和ITS1/ITS4擴增，獲得了11個竹蓀菌株的rDNA-ITS序列，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示條帶大小均在600"bp左右（圖1A）。在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行BLAST同源性對比，所有菌株的ITS序列與已公布的紅托竹蓀ITS序列的相似性均在99%以上。因此，鑒定11個竹蓀菌株均為紅托竹蓀。

2.2""拮抗試驗

將11株紅托竹蓀菌株進行兩兩對峙培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)菌株199和菌株M83間無明顯拮抗線，且菌絲形態(tài)一致，2株菌株應(yīng)為同一菌株。其他10個菌株間，均存在顯著的拮抗線，為不同菌株（圖1B）。

2.3""種質(zhì)資源評價

2.3.1""菌絲體生長速度評價""如圖2A所示，各菌株在紅糖培養(yǎng)基上的生長速度差異明顯，菌落形態(tài)也有所不同。菌株147、160、207、H29和L70的菌絲體生長速度最快，為0.44～0.67"cm/d，其中菌株207和H29的菌絲更濃密。菌株200和201生長速度較快，分別為0.37、0.36"cm/d，菌絲較濃密。菌株202、208和M83生長速度最慢，為0.23～0.28"cm/d，并出現(xiàn)了菌絲體不規(guī)則加厚。

2.3.2""菌絲體吃料能力評價""基于前期配方篩選，選取橡膠木屑添加比例分別為0和45%的木屑配方進行吃料能力評價。結(jié)果顯示（圖2B），各菌株在橡膠木屑培養(yǎng)基上均能生長。其中，菌株200、208和M83的菌絲體在橡膠木屑上長勢最好，生長速度為0.14～0.15"cm/d。其次是菌株147、160、201、H29和L70，生長速度為0.13～0.14"cm/d。菌株202和207的吃料能力一般。除菌株202、207和L70外，橡膠木屑培養(yǎng)基上的菌絲長勢總體優(yōu)于雜屑培養(yǎng)基。

2.3.3""菌絲體溫度適應(yīng)性評價""如圖2C所示，各菌株對溫度脅迫的響應(yīng)存在一定差異。遭受10"℃低溫脅迫后，各菌株的菌絲體均能恢復(fù)生長，但生長速度差異較大。其中，147、160的恢復(fù)生長速度最快為0.39和0.41"cm/d；200和L70的恢復(fù)生長速度較快，為0.23"cm/d；208的恢復(fù)生長速度最慢，僅為0.02"cm/d。在35"℃高溫脅迫下，各菌株菌絲體的恢復(fù)生長情況也存在較大差異。其中，147、200、H29和L70的恢復(fù)生長速度較快，為0.11～0.14"cm/d；菌株201、208、M83的菌絲體幾乎不能生長，恢復(fù)生長速度僅為0.02～0.04"cm/d。

2.3.4""出菇評價""基于菌絲評價結(jié)果，對菌株147、160、H29和L70菌株進行熱區(qū)橡膠林下的出菇試驗。結(jié)果表明（表2、圖3），各菌株均能正常出菇，但在生育期、產(chǎn)量、子實體形態(tài)等方面表現(xiàn)出差異。其中，菌株H29出菇整齊、朵型好、產(chǎn)量較高（750"kg/667"m2），竹花較軟且耐儲存，適合就地出花后售賣。L70菌株出蛋多、生育期短、產(chǎn)量高（800"kg/667"m2），但竹花較脆耐存儲，適合竹蛋期采摘后統(tǒng)一出花。

綜上，菌株H29和L70的菌絲體和出菇性狀綜合表現(xiàn)最優(yōu)，可作為熱區(qū)橡膠林下適栽菌株。

2.4""生物學(xué)特性分析

2.4.1""最適碳源篩選""由圖4A可知，H29和L70的菌絲體在5種供試碳源上均可生長，但菌絲生長速度和長勢存在差異。以海藻糖為碳源時，2株菌株的菌絲生長速度最快，分別為0.40、0.41"cm/d，且菌絲濃密，菌落形狀整齊；以可溶性淀粉為碳源時，2株菌株的菌絲濃密且菌落規(guī)則，菌絲生長速度與海棠糖差異不顯著；以蔗糖為碳源時，L70的菌絲生長速度與海棠糖和淀粉差異不顯著，但菌落邊緣菌絲稀疏且不規(guī)則，H29的菌絲濃密，但生長速度較慢；以葡萄糖和果糖為碳源時，2株菌株生長速度較慢，與其他碳源差異顯著。綜上，2株紅托竹蓀的最適碳源均為海藻糖和淀粉。

2.4.2""最適氮源篩選""由圖4B可知，H29和L70的菌絲體在5種供試氮源上，生長速度和長勢均存在顯著差異，且在尿素培養(yǎng)基上均不能生長。以硫酸銨為氮源時，菌絲生長速度最快，分別為0.25"cm/d和0.32"cm/d，但菌絲非常稀?。灰喳溠拷蹫榈磿r，菌落形狀不規(guī)則，但菌絲生長速度較快且菌絲較濃密，其中H29的菌絲生長速度與硫酸銨上差異不顯著；以蛋白胨為氮源時，菌絲濃密且菌落形狀較規(guī)則，但生長速度較慢，分別為0.14"cm/d和0.15nbsp;cm/d；以酵母浸粉為氮源時，菌落規(guī)則，但菌絲萌發(fā)后生長速度過慢，其中H29的菌絲幾乎不再生長。綜合菌絲長勢，2株紅托竹蓀在本研究中的最適氮源均為麥芽浸粉。

2.4.3""生長溫度篩選""由圖5A可知，H29和L70的菌絲體在19～31"℃范圍內(nèi)均能生長，且菌絲生長速度隨溫度升高呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢。H29菌株在25"℃和28"℃生長速度最快，分別為0.31"cm/d和0.32"cm/d，菌絲濃密且菌落規(guī)則；在22"℃條件下，菌絲生長速度顯著下降，并且菌落邊緣出現(xiàn)不規(guī)則加厚。L70菌株在28"℃生長速度最快，為0.39"cm/d，菌絲濃密且菌落形狀規(guī)則；在22"℃和25"℃時菌絲生長速度較快，但與28"℃存在顯著差異。2株菌株在19"℃和31"℃條件下，菌絲生長均受到抑制，后期幾乎不生長。綜上，H29的最適溫度為25～28"℃，L70的最適溫度為28"℃。

2.4.4""適宜pH篩選""由圖5B可知，2株菌株的菌絲體在pH"4～8范圍內(nèi)的生長速度和長勢均存在顯著差異。H29菌株在pH"4和pH"5條件下生長速度最快，分別為0.22"cm/d和0.21"cm/d，菌絲較濃密且菌落形狀規(guī)則；在pH"6和pH"7條件下菌絲生長速度較快，但均出現(xiàn)同心圓式脅迫生長圈，菌落邊緣菌絲稀疏；在pH"8條件下停止生長。L70菌株在pH"4～6范圍內(nèi)菌絲生長較快菌落形狀規(guī)則，在pH"5時菌絲生長速度最快（0.39"cm/d）且菌絲最濃密；在pH超過6后菌絲生長速度顯著下降且菌絲變稀疏，與H29一樣出現(xiàn)同心圓式脅迫生長圈。綜上，2株紅托竹蓀的菌絲均喜酸性生長，在pH"4～5條件下長勢最好。

2.4.5""正交試驗""基于單因素試驗結(jié)果進一步開展正交試驗（表3），以驗證和優(yōu)化2株菌株菌絲體生長的最優(yōu)條件。結(jié)果表明（表4、表5），H29和L70在9種配方下均可生長，但菌絲體的生長速度和長勢存在顯著差異。H29菌株在配方1、2和4條件下菌絲生長速度最快，但在配方1和2條件下菌絲稀疏，生物量較低，在配方4（淀粉、麥芽浸粉、25"℃和pH"4）條件下菌絲濃密且菌落形狀規(guī)則。L70菌株在配方4條件下生長速度最快，為0.48"cm/d，菌絲濃密且性狀規(guī)則。進一步比較發(fā)現(xiàn)，2株菌株在配方6（海藻糖，麥芽浸粉、28"℃和pH=6）條件下菌絲生長速度雖與配方4具有顯著差異，但菌絲最濃密且性狀規(guī)則。

SPSS分析結(jié)果（表6、表7）顯示，各因素對H29菌絲生長的影響程度依次為：氮源gt;pHgt;碳源gt;溫度，對L70菌絲生長的影響程度依次為：氮源gt;pHgt;溫度gt;碳源。結(jié)果表明，氮源和pH對紅托竹蓀菌絲生長的影響程度較大，碳源和溫度的影響程度較小。

3""討論

由于我國熱帶地區(qū)長夏短冬，夏季高溫多雨，食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展一直相對滯后。據(jù)統(tǒng)計，海南省食用菌栽培起源于20世紀80年代，截止目前，規(guī)?；a(chǎn)企業(yè)僅有12家，年產(chǎn)菌棒4000萬棒，與多數(shù)食用菌大省相差甚遠[22]。目前，在我國熱區(qū)栽培的食用菌多為高溫型菌株，種類僅10種左右，已規(guī)?；耘嗟母乔缚蓴?shù)[23]。近年來，團隊成員發(fā)現(xiàn)在熱區(qū)反季節(jié)栽培紅托竹蓀具有較高的經(jīng)濟效益。同時，熱區(qū)橡膠林資源豐富，發(fā)展橡膠林下食用菌產(chǎn)業(yè)，對穩(wěn)定膠農(nóng)增收、膠企增效也具有重要意義。

近年來，隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，市場上菇農(nóng)自行引種、制種、繼代培養(yǎng)等問題加劇，菌種單一、退化、同物異名的問題愈加突出[24]。本研究對收集的竹蓀菌株進行拮抗試驗發(fā)現(xiàn)，菌株199和M83菌株間無明顯拮抗線，可能為同一菌株，為后續(xù)的菌株篩選提供了參考。通過菌絲體吃料能力評價發(fā)現(xiàn)，多數(shù)菌株在橡膠木屑上的吃料能力較差，生長較慢。并且，在遭受擬合熱區(qū)冬季溫度變化的低溫（10"℃）和高溫脅迫（35"℃）后，菌絲體恢復(fù)生長速度較慢。推測可能由于紅托竹蓀長期在貴州、四川等地栽培，菌株本身形成了環(huán)境和基質(zhì)適應(yīng)性，導(dǎo)致其對新環(huán)境和新基質(zhì)的適應(yīng)性較差[25]。可見，在食用菌引種過程中，菌株的本地化篩選和評價具有其必要性。

據(jù)統(tǒng)計，目前食用菌的生物學(xué)特性研究大多只針對一株菌株開展，由于菌株間的遺傳多樣性，導(dǎo)致試驗結(jié)果的通用性較差[26]。因此，本研究以篩選的2株農(nóng)藝性狀不同的菌株H29和L70為材料，通過單因素和正交試驗探究菌絲生長的最適碳源、碳源、溫度和pH，為后續(xù)紅托竹蓀在熱區(qū)的擴大栽培奠定基礎(chǔ)。結(jié)果表明，2株菌株在多糖和雙糖上的菌絲長勢優(yōu)于單糖培養(yǎng)基，與多數(shù)食用菌優(yōu)先利用單糖或雙糖的結(jié)果有一定差異[27]。推測可能是由于紅托竹蓀菌絲生長較慢，多糖和雙糖可以提供更多、更豐富的能量供其生長，因此長勢更好[28]。在氮源篩選試驗中，菌絲體在硫酸銨培養(yǎng)基上生長最快，與龔光祿等[29]研究相符，但菌絲體較稀?。辉邴溠拷叟囵B(yǎng)基上，菌絲生長速度較快且菌絲較濃密。可見紅托竹蓀菌株和大多數(shù)食用菌一樣，在有機氮上長勢更好[30-32]。在溫度篩選試驗中，2株菌株在25～28"℃范圍內(nèi)長勢更好，在19"℃和31"℃條件下形成脅迫生長圈，可能與其長期的溫度適應(yīng)性相關(guān)[33]。在pH篩選試驗中，發(fā)現(xiàn)2株菌株均喜酸性生長，在pH"4～5范圍內(nèi)長勢最好，與前人研究相符[34]。這一現(xiàn)象可能與野生紅托竹蓀菌株的竹林生境相關(guān)[35]。正交試驗發(fā)現(xiàn)，2株菌株雖然在9個配方中均可以生長，但菌絲濃密度存在顯著差異。特別是在硫酸銨培養(yǎng)基上，菌絲較薄，與單因素試驗結(jié)果一致。但在配方6上菌絲生長速度雖與配方4有顯著差異，但菌絲更加潔白濃密，可能與各因素間的相互作用有關(guān)[36]。

綜上，紅托竹蓀菌株H29和L70適合在熱區(qū)橡膠林下進行反季節(jié)栽培，且2株菌株的生物學(xué)特性基本一致。本研究結(jié)果可為熱區(qū)紅托竹蓀的規(guī)?；耘嗟於ɑA(chǔ)，對紅托竹蓀菌株的雜交育種、定向培育等也具有一定的參考價值。

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