半夏細(xì)菌性病害拮抗菌篩選、鑒定及防治效果測(cè)定

DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2025.01.022

摘要：【目的】挖掘半夏細(xì)菌性病害拮抗菌，為生防菌資源開(kāi)發(fā)利用和半夏細(xì)菌性病害的高效綠色防控提供理論依據(jù)?！痉椒ā恳?株半夏病原菌為靶標(biāo)菌，從感病半夏根際土壤中分離篩選拮抗菌，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性測(cè)定和分子生物學(xué)鑒定明確拮抗菌種類。測(cè)定拮抗菌對(duì)菊迪基氏菌（Dickeya chrysanthemi）、極端東方假單胞菌（Pseu-domonas extremorientalis）和胡蘿卜果膠桿菌（Pectobacterium carotovorum）引起的半夏、胡蘿卜、馬鈴薯及白菜細(xì)菌性病害離體防效，通過(guò)盆栽試驗(yàn)測(cè)定拮抗菌對(duì)3種病原菌引起的半夏細(xì)菌性病害活體防效；采用平板對(duì)峙法測(cè)定拮抗菌對(duì)13株中藥材病原真菌的抑制效果，明確其抑菌譜?！窘Y(jié)果】從半夏根際土壤中分離獲得106株細(xì)菌，篩選出菌株WBT16對(duì)6株半夏細(xì)菌性病害病原菌的拮抗效果最佳，鑒定為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）。離體防效測(cè)定結(jié)果表明，拮抗菌WBT16對(duì)菊迪基氏菌、極端東方假單胞菌和胡蘿卜果膠桿菌菌株引起的半夏及胡蘿卜細(xì)菌性病害防治效果均為100%?；铙w防效測(cè)定結(jié)果表明，拮抗菌WBT16對(duì)菊迪基氏菌引起的半夏細(xì)菌性病害防治效果最好，為76.92%，對(duì)胡蘿卜果膠桿菌引起的病害防治效果為69.23%，對(duì)極端東方假單胞菌引起的病害防治效果為62.50%，均超過(guò)60.00%。抑菌譜測(cè)定結(jié)果表明，拮抗菌WBT16對(duì)多種病原真菌有較好抑制效果，對(duì)湖北貝母灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）的抑制效果最佳，抑制率為86.02%，對(duì)半夏齊整小核菌（Sclerotium rolfsii）和半夏核盤菌（Sclero-tinia sclerotiorum）的抑制率較高，分別為80.51%和79.89%?！窘Y(jié)論】從半夏根際土壤中分離篩選出的拮抗菌WBT16對(duì)半夏細(xì)菌性病害防效較好，且抑菌譜較廣，在半夏細(xì)菌性病害的生物防治中具有一定開(kāi)發(fā)價(jià)值和應(yīng)用潛力。

關(guān)鍵詞：半夏；細(xì)菌性病害；拮抗菌；防治效果；抑菌譜

中圖分類號(hào)：S435.67文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：2095-1191（2025）01-0250-11

Screening and identification of antagonistic bacteria against bacterial disease in Pinellia ternata，and determination of its biocontrol efficacy

WANG Fan-fan1，TANG Tao1，SUN Guang-zhong2，DUAN Yuan-yuan1，KUANG Hui2，WANG Xiao-yue1，YUAN Wei-jun3，GUO Xiao-liang1，YOU Jing-mao1*

（1Institute of Chinese Herbel Medicines，Hubei Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory for Biology and Culti- vation of Chinese Medicinal Materials of Ministry of Agriculture and Rural Affairs/Hubei Standardized Production of Tra- ditional Chinese Medicine（GAP）Engineering Research Center，Enshi，Hubei 445000，China；2Plant Conservation Sta-tion of Hubei，Wuhan，Hubei 43000，China；3Luotian County Agricultural Characteristic Industry Development Center，Huanggang，Hubei 435300，China）

Abstract：【Objective】The aim was to explore antagonisitic bacteria against bacterial diseases in Pinellia ternata，which could provide theoretical basis for development and utilization of biocontrol bacterial resources as well as the effi-cient and green control of bacterial disease in P.ternata.【Method】Using 6 strains of pathogenic bacteria of Pinellia ter-nata as target strains，antagonistic bacteria were isolated and screened from the rhizosphere soil of infected Pinellia ter-nata.The strain was identified based on morphological，physiological and biochemical characteristics determination，mo-lecular biology analysis.The in vitro efficacy of the antagonistic bacteria against bacterial diseases caused by Dickeya chrysanthemi，Pseudomonas extremorientalis and Pectobacterium carotovorum in Pinellia ternata，carrots，potatoes and cabbages was determined.The in vivo efficacy of the antagonistic bacteria against bacterial diseases in Pinellia ternata caused by the 3 pathogens was determined by pot experiments.The inhibitory effects of the antagonistic bacteria on 13 pathogenic fungi from traditional Chinese medicinal plants were assessed using the plate confrontation method，clarifying its inhibitory spectrum.【Result】Atotal of 106 bacterial strains were isolated from the rhizosphere soil of Pinellia ternata，among which strain WBT16 exhibited the best antagonistic effect against 6 pathogenic bacteria causing bacterial diseases in Pinellia ternata.It was identified as Bacillus velezensis.In vitro efficacy tests showed that the strain WBT16 achieved 100%control efficacy against bacterial diseases in Pinellia ternata and carrots caused by Dickeya chrysanthemi，Pseudo-monas extremorientalis and Pectobacterium carotovorum.In vivo efficacy tests demonstrated that strain WBT16 had the highest control efficacy of 76.92%against bacterial diseases in Pinellia ternata caused by Dickeya chrysanthemi，fol-lowed by 69.23%against diseases caused by Pectobacterium carotovorum and 62.50%against those caused by Pseudomo-nas extremorientalis，all exceeding 60.00%.The inhibitory spectrum analysis revealed that antagonistic bacteria WBT16 exhibited fine inhibitory effects against various pathogenic fungi.It showed the best inhibitory effect against Botrytis cine-rea from Fritillaria hupehensis，with an inhibition rate of 86.02%，and relatively high inhibition rates of 80.51%and 79.89%against Sclerotium rolfsii and Sclerotinia sclerotiorum from Pinellia ternata respectively.【Conclusion】The an-tagonistic bacteria WBT16，isolated and screened from the rhizosphere soil of Pinellia ternata，demonstrates effective control against bacterial diseases in Pinellia ternata and exhibits a broad inhibitory spectrum.It holds great development value and application potential for the biological control of bacterial diseases in Pinellia ternata.

Key words：Pinellia ternata；bacterial disease；antagonistic bacteria；prevention and control effect；inhibition spec-trum

Foundation items：China Agriculture Research System（CARS-21）；Hubei Rural Revitalization Science and Tech-nology Demonstration Project（2024BBB110）；Science and Technology Fund for Young Scholar of Hubei Academy of Agricultural Sciences（2023NKYJJ30）

0引言

【研究意義】半夏（Pinellia ternata）為天南星科半夏屬草本植物，以干燥塊莖入藥，有燥濕化痰、降逆止嘔的功效（國(guó)家藥典委員會(huì)，2020）。湖北省是半夏重要的種源地之一，但隨著全球氣候變暖，江漢平原的半夏連作障礙問(wèn)題日漸突顯，病害頻發(fā)，嚴(yán)重影響半夏產(chǎn)量和品質(zhì)。目前已報(bào)道的半夏病害包括軟腐病、白絹病和菌核病等，以軟腐病為主的細(xì)菌性病害嚴(yán)重威脅半夏生產(chǎn)（Wang et al.，2021；王帆帆等，2022；周佳等，2022；伍曉露等，2023）。在高溫多雨條件下，半夏細(xì)菌性病害蔓延速度快，嚴(yán)重時(shí)發(fā)病率高達(dá)70%（張欣悅等，2024）。目前，化學(xué)防治仍是半夏細(xì)菌性病害的主要防控手段，但各類化學(xué)農(nóng)藥亂施濫用現(xiàn)象嚴(yán)重（楊昌貴等，2023）。隨著《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（中藥材GAP）的實(shí)施推進(jìn)，栽培過(guò)程中病蟲(chóng)害的綠色防控成為高質(zhì)量中藥材生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)（趙中華等，2020）。因此，開(kāi)展半夏細(xì)菌性病害生物防治研究，對(duì)半夏產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展有重大意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】已有研究表明，使用生防菌是一種較好的細(xì)菌性病害防治策略，芽孢桿菌等生防菌對(duì)不同植物細(xì)菌性軟腐病有較好的防治效果。Gerayeli等（2018）從馬鈴薯根際分離出對(duì)馬鈴薯軟腐病病原菌胡蘿卜果膠桿菌胡蘿卜亞種（Pectobac-terium carotovorum subsp.carotovorum）有生防潛力的短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）和解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）。耿妍等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）對(duì)娃娃菜細(xì)菌性軟腐病有較好防治作用。程凱凱等（2024）以白菜軟腐病病原菌胡蘿卜果膠桿菌胡蘿卜亞種為靶標(biāo)菌，篩選出防治效果達(dá)60.20%的生防菌，為地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）XW02菌株。鐘宇等（2024）分離獲得貝萊斯芽孢桿菌菌株GZA12，其對(duì)魔芋細(xì)菌性軟腐病的防效達(dá)53.31%。Zhang等（2024）研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌對(duì)番茄采后軟腐病有防治效果，能增強(qiáng)番茄的活性氧（ROS）清除能力，從而提高番茄對(duì)病原菌的抵抗力。半夏細(xì)菌性病害病原菌種類多樣，包括胡蘿卜果膠桿菌（Pecto-bacterium carotovorum）、海芋果膠桿菌（Pectobacte-rium aroidearum）、菊迪基氏菌（Dickeya chrysan-themi）和方中達(dá)迪基氏菌（Dickeya fangzhongdai）等。You等（2019）調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2017—2018年夏季，湖北省天門市苗圃半夏軟腐病發(fā)病率約為70%，且病害發(fā)展迅速，植株在1周內(nèi)腐爛并死亡，經(jīng)鑒定病原菌為菊迪基氏菌。Wang等（2021）調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2020年湖北省荊門市發(fā)生的半夏細(xì)菌性莖枯病病原菌為極端東方假單胞菌（Pseudomonas extremorientalis）。桂穎等（2022）針對(duì)胡蘿卜果膠桿菌引起的半夏軟腐病開(kāi)發(fā)了微生物菌肥“寧盾”。唐晨等（2023）篩選獲得2株對(duì)半夏軟腐病病原菌胡蘿卜果膠桿菌具有較強(qiáng)拮抗力的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。張欣悅等（2024）篩選出3株芽孢桿菌，可有效防治胡蘿卜果膠桿菌引起的半夏軟腐病?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】近年來(lái)，利用生防菌防治蔬菜細(xì)菌性病害的相關(guān)研究較多，但針對(duì)半夏細(xì)菌性病害的生物防治研究中，主要研究對(duì)象多為半夏軟腐病，且靶標(biāo)病原菌較單一。目前，以多種半夏細(xì)菌性病害病原菌為靶標(biāo)菌，從半夏根際土壤中篩選拮抗菌進(jìn)行防治的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以6株半夏細(xì)菌性病害病原菌為靶標(biāo)菌，從感病半夏根際土壤中分離篩選拮抗菌，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性測(cè)定和分子生物學(xué)鑒定明確拮抗菌種類。測(cè)定拮抗菌對(duì)菊迪基氏菌、極端東方假單胞菌和胡蘿卜果膠桿菌引起的細(xì)菌性病害離體防效及活體防效；采用平板對(duì)峙法測(cè)定拮抗菌對(duì)多種中藥材病原真菌的抑制效果，明確其抑菌譜。為生防菌資源開(kāi)發(fā)利用和半夏細(xì)菌性病害的高效綠色防控提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試病原菌半夏細(xì)菌性病害病原菌信息如表1所示，其中菌株BX3致病力較強(qiáng)，為首次報(bào)道引起半夏軟腐病的菊迪基氏菌（You et al.，2019）。半夏及其他中藥材真菌性病害病原菌信息如表2所示。上述病原菌均由湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所藥用植物病原菌菌種保藏庫(kù)保存提供。

1.1.2培養(yǎng)基配方PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉16 g，蒸餾水定容至1 L。NA培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉浸粉3 g，氯化鈉5 g，瓊脂粉15 g，蒸餾水定容至1 L。

1.2拮抗菌的篩選

1.2.1初步篩選于2021年3月，在湖北省潛江市竹根灘鎮(zhèn)半夏大棚種植基地（30°50′N，112°91′E）采集感病半夏根際土壤。采用五點(diǎn)取樣法，選取15株感病半夏植株，整株挖出后，抖落多余土壤，然后使用無(wú)菌毛刷將根部組織上的根際土壤收集到自封袋中，混合均勻，即為根際土壤樣品，-80℃保存?zhèn)溆?。采用稀釋涂布法分離細(xì)菌，稱取10 g土樣置于裝有玻璃珠和90 mL無(wú)菌水的錐形瓶中，120 r/min充分振蕩20min，獲得稀釋度為10-1的土壤稀釋液，通過(guò)梯度稀釋配制稀釋度分別為10-2、10-3、10-4、10-5、10-6和10-7的土壤懸浮液。分別吸取20μL稀釋度為10-5、10-6和10-7的土壤懸浮液，涂布于NA培養(yǎng)基上。每個(gè)稀釋度設(shè)3次重復(fù)，將培養(yǎng)皿倒置，于28℃恒溫培養(yǎng)48 h。篩選出有形態(tài)差異的單菌落，采用三區(qū)劃線法在NA培養(yǎng)基上劃線，置于28℃恒溫培養(yǎng)24 h，挑取單菌落純化、培養(yǎng)。采用抑菌圈法篩選對(duì)強(qiáng)致病力菌株BX3有拮抗效果的菌株。用菌株BX3制備含菌培養(yǎng)基，將從半夏根際土樣中分離獲得的菌株菌液添加到含菌培養(yǎng)基中的無(wú)菌濾紙片上，以無(wú)菌水為對(duì)照（CK），每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。28℃恒溫培養(yǎng)72h后，篩選出具有透明抑菌圈的菌株。

1.2.2反向拮抗試驗(yàn)采用抑菌圈法分別測(cè)定6株半夏細(xì)菌性病害病原菌（表1）對(duì)初篩菌株的反向拮抗效果。用初篩獲得的菌株制備含菌培養(yǎng)基，將6種病原菌菌液分別添加到含菌培養(yǎng)基中的無(wú)菌濾紙片上，以無(wú)菌水為對(duì)照（CK），每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。28℃恒溫培養(yǎng)72h后，篩選出無(wú)透明抑菌圈的菌株，即為半夏細(xì)菌性病害拮抗菌。

1.3拮抗菌的鑒定

1.3.1形態(tài)學(xué)觀察和生理生化特性測(cè)定采用三區(qū)劃線法用NA培養(yǎng)基活化拮抗菌，28℃恒溫培養(yǎng)24 h，記錄菌落生長(zhǎng)情況，進(jìn)行革蘭氏染色，使用顯微鏡觀察產(chǎn)孢情況。采用API 50CH系統(tǒng)對(duì)拮抗菌進(jìn)行鑒定，明確其生理生化特性。

1.3.2分子生物學(xué)鑒定采用DNA提取試劑盒（北京擎科生物科技股份有限公司）提取拮抗菌基因組DNA，使用引物27F（5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）和1492R（5'-TACGACTTAACCCCAATC GC-3'）擴(kuò)增16S rDNA序列。PCR反應(yīng)體系50μL：2×T5 Super PCR Mix（北京擎科生物科技股份有限公司）25μL，DNA模板2μL，上、下游引物各2μL，ddH2O 19μL。擴(kuò)增程序：98℃預(yù)變性3 min；98℃10 s，57℃10 s，72℃30 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min。使用引物UP1F（5'-GAAGTCATCATGACCG TTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA-3'）和UP2R（5'-AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACR TCNGCRTCNGTCAT-3'）擴(kuò)增gyrB基因片段。PCR反應(yīng)體系50μL：2×T5 Super PCR Mix 25μL，DNA模板2μL，上、下游引物各2μL，ddH2O 19μL。擴(kuò)增程序：98℃預(yù)變性3 min；98℃10 s，68℃10 s，72℃30 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳檢測(cè)合格后，送至北京擎科生物科技股份有限公司武漢分公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果進(jìn)行BLAST比對(duì)，使用MEGA 6.0的鄰接法（Neighbor-joining，NJ）構(gòu)建菌株系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，確定拮抗菌種類。

1.4拮抗菌的離體防效測(cè)定

測(cè)定拮抗菌對(duì)半夏、胡蘿卜、馬鈴薯和白菜細(xì)菌性病害的離體防效，采集半夏葉片和白菜葉片，將胡蘿卜和馬鈴薯切成片狀，分別置于鋪有無(wú)菌濾紙片的滅菌玻璃皿中，加2 mL無(wú)菌水保濕。制備終濃度為1×108 CFU/mL的病原菌（菌株BX3、TWH5和J1）和拮抗菌發(fā)酵液，分別吸取10μL病原菌發(fā)酵液接種至葉片刺傷處或片狀塊根、塊莖中央，28℃恒溫培養(yǎng)24 h，待輕度發(fā)病時(shí)，分別噴灑500μL拮抗菌發(fā)酵液至發(fā)病處，以等量無(wú)菌水為對(duì)照。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，28℃恒溫培養(yǎng)48h后調(diào)查病情，采用十字交叉法測(cè)量病斑直徑（R）。參考王彪等（2019）的病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)并稍加改動(dòng)，4種植物的細(xì)菌性病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如表3所示，根據(jù)病情分級(jí)計(jì)算病情指數(shù)和防治效果，計(jì)算公式如下：

1.5拮抗菌的活體防效測(cè)定

選擇長(zhǎng)至2葉1心的半夏幼苗進(jìn)行盆栽試驗(yàn)，分別在根部淋灌3 mL病原菌發(fā)酵液，于接種后第3、6、9和15 d淋灌6 mL拮抗菌發(fā)酵液，以等量無(wú)菌水為對(duì)照；每個(gè)處理設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10株半夏幼苗。20 d后，調(diào)查半夏發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)發(fā)病率并計(jì)算防治效果。

防治效果（%）=（對(duì)照發(fā)病率?處理發(fā)病率）/對(duì)照發(fā)病率×100

1.6拮抗菌的抑菌譜測(cè)定

采用平板對(duì)峙法測(cè)定拮抗菌對(duì)5株半夏真菌性病害病原菌和8株其他中藥材真菌性病害病原菌（表2）的抑制效果。用打孔器打取直徑5 mm的病原菌菌餅，對(duì)稱接種于PDA培養(yǎng)基邊緣。接種環(huán)蘸取拮抗菌發(fā)酵液，于PDA培養(yǎng)基中央與2個(gè)菌餅垂直劃線。以不接種拮抗菌為對(duì)照（CK），每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，28℃恒溫培養(yǎng)至對(duì)照2個(gè)菌餅菌絲即將重合時(shí)，測(cè)量菌落半徑，計(jì)算抑菌率，計(jì)算公式如下：

抑菌率（%）=（對(duì)照菌落半徑?處理菌落半徑）/對(duì)照菌落半徑×100

2結(jié)果與分析

2.1拮抗菌的篩選結(jié)果

從半夏根際土壤中分離純化出106株細(xì)菌，初步篩選結(jié)果（圖1）表明，菌株T-2、WBT16和T-54對(duì)半夏細(xì)菌性病害病原菌菌株BX3有拮抗效果，菌株T-2和WBT16有明顯抑菌圈，抑菌圈直徑分別為0.20和0.15 cm，而菌株T-54的抑菌圈邊緣較模糊。

6株半夏細(xì)菌性病害病原菌對(duì)菌株T-2、WBT16和T-54的反向拮抗試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，病原菌菌株BX3、J1和TWH5在含菌株T-2的培養(yǎng)基中均可生長(zhǎng)，病原菌菌株TWH5在含菌株T-54的培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)，但6株病原菌在含菌株WBT16的培養(yǎng)基中均無(wú)法生長(zhǎng)。說(shuō)明菌株WBT16對(duì)半夏細(xì)菌性病害病原菌有較好抑制作用，且病原菌無(wú)法抑制菌株WBT16生長(zhǎng)。因此，選取菌株WBT16作為拮抗菌進(jìn)行后續(xù)分析。

2.2拮抗菌的鑒定結(jié)果

如圖3所示，拮抗菌WBT16菌落呈乳白色，圓形至橢圓形，表面光滑、微凸，質(zhì)地黏稠。拮抗菌WBT16革蘭氏染色結(jié)果如圖4所示，其菌體為桿狀、芽孢為卵圓形。如表4所示，拮抗菌WBT16生理生化鑒定結(jié)果與貝萊斯芽孢桿菌一致，初步將其鑒定為貝萊斯芽孢桿菌。

以拮抗菌WBT16基因組DNA為模板，分別擴(kuò)增獲得1444、1110 bp的16S rDNA序列和gyrB基因片段（GenBank登錄號(hào)：PQ288756、PQ285404）。分別基于16S rDNA和gyrB基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果如圖5所示，拮抗菌WBT16與貝萊斯芽孢桿菌聚為一個(gè)分支。結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性測(cè)定和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果，確定拮抗菌WBT16為貝萊斯芽孢桿菌。

2.3拮抗菌的離體防效測(cè)定結(jié)果

測(cè)定拮抗菌WBT16對(duì)菊迪基氏菌菌株BX3、極端東方假單胞菌菌株TWH5和胡蘿卜果膠桿菌菌株J1引起的半夏、胡蘿卜、馬鈴薯及白菜細(xì)菌性病害的離體防效，結(jié)果如圖6所示。拮抗菌WBT16對(duì)3種病原菌引起的半夏和胡蘿卜細(xì)菌性病害防治效果均為100%，對(duì)病原菌BX3引起的馬鈴薯細(xì)菌性病害防治效果為100%，對(duì)病原菌TWH5引起的馬鈴薯細(xì)菌性病害防治效果為50%，但對(duì)3種病原菌引起的白菜細(xì)菌性病害的防治效果均未達(dá)50%。推測(cè)拮抗菌WBT16不僅可防治半夏細(xì)菌性病害，同時(shí)還可防治胡蘿卜細(xì)菌性病害。

2.4拮抗菌的活體防效測(cè)定結(jié)果

拮抗菌WBT16對(duì)3種病原菌引起的半夏細(xì)菌性病害的活體防效測(cè)定結(jié)果如表5所示，拮抗菌WBT16對(duì)菊迪基氏菌菌株BX3引起的病害防治效果最好，為76.92%，對(duì)胡蘿卜果膠桿菌菌株J1引起的病害防治效果為69.23%，對(duì)極端東方假單胞菌菌株TWH5引起的病害防治效果較差，為62.50%，但對(duì)3種病原菌的病害防治效果均超過(guò)60.00%，表明拮抗菌WBT16具有應(yīng)用于半夏細(xì)菌性病害防控的潛力。

2.5拮抗菌的抑菌譜測(cè)定結(jié)果

拮抗菌WBT16對(duì)13株中藥材病原真菌的抑制效果如表6和圖7所示。拮抗菌WBT16對(duì)湖北貝母灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）菌株BMXTX2的抑制效果最佳，抑制率為86.02%，對(duì)半夏齊整小核菌（Sclerotium rolfsii）菌株QJ3和半夏核盤菌（Sclero-tinia sclerotiorum）菌株BXHP-2的抑制率較高，分別為80.51%和79.89%，三者均顯著高于其他病原真菌菌株（Plt;0.05）。拮抗菌WBT16對(duì)半夏灰葡萄孢菌菌株BXHM的抑制率最低，為49.49%，但是對(duì)半夏瓜笄霉（Choanephora cucurbitarum）菌株QJFY-2、半夏尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）菌株CP和其他病原真菌菌株的抑制率均大于50.00%。

3討論

細(xì)菌性軟腐病可由多種病原菌引起，迪基氏菌屬和果膠桿菌屬細(xì)菌是研究較多的軟腐病病原菌（Curland et al.，2021）。玉米迪基氏菌（Dickeya zeae）可引起香蕉軟腐病，造成葉片萎蔫、假莖塌陷和異味（蒲小明等，2024）。方中達(dá)迪基氏菌可入侵金線蓮葉片，導(dǎo)致軟腐病暴發(fā)（劉建峰等，2023）。胡蘿卜果膠桿菌可造成大白菜、魔芋軟腐病（Li etal.，2020；張靜等，2021）。細(xì)菌性軟腐病在作物的種植、生長(zhǎng)、采收和儲(chǔ)藏過(guò)程中均有發(fā)生，日常管理難度較大，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失（Zhang et al.，2022）。生防菌作為有益微生物，可殺滅病原菌，降低其數(shù)量，從而控制病害的發(fā)生。目前主要生防菌種類有枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和貝萊斯芽孢桿菌等，土壤微生物、根際微生物、植物內(nèi)生菌等都是生防菌資源的主要來(lái)源（李雨欣等，2023）。本研究從半夏根際土壤中獲得1株對(duì)半夏多種細(xì)菌性病害病原菌具有抑制效果的貝萊斯芽孢桿菌菌株WBT16。

貝萊斯芽孢桿菌作為生防芽孢桿菌中的重要代表，已被廣泛用于作物病害防治。目前，眾多學(xué)者陸續(xù)開(kāi)展貝萊斯芽孢桿菌對(duì)多種植物真菌性和細(xì)菌性病害的防治效果研究。王曉楠等（2023）獲得1株來(lái)自番茄內(nèi)生菌的貝萊斯芽孢桿菌菌株ZN-S10，其對(duì)5種果蔬細(xì)菌性病害病原菌均有不同程度的抑菌活性，且對(duì)番茄青枯病的防治效果達(dá)57.14%。崔文艷等（2024）從生姜根際土壤中篩選獲得了高效拮抗生姜青枯病菌（Ralstonia solanacearum）的貝萊芽孢桿菌菌株HC-5，優(yōu)化拮抗菌發(fā)酵條件后，抑菌圈增大62.9%～76.2%，表明該菌株具有生防潛力。王玉鵬等（2024）從枸杞內(nèi)生菌中分離獲得對(duì)腐皮鐮刀菌（Fusarium solani）具有明顯抑制作用的貝萊斯芽孢桿菌G18，盆栽防效可達(dá)62.3%，但并未測(cè)定拮抗菌的抑菌譜。袁惠君等（2024）從枸杞果實(shí)中分離獲得貝萊斯芽孢桿菌菌株lut-Y1，研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)3種病原真菌具有拮抗效果。本研究分離獲得的拮抗菌WBT16對(duì)6株半夏細(xì)菌性病害病原菌具有抑制作用，其中對(duì)菊迪基氏菌菌株BX3、胡蘿卜果膠桿菌菌株J1和極端東方假單胞菌菌株TWH5的活體防效超過(guò)60.00%，且對(duì)多種半夏和其他中藥材病原真菌具有抑制效果，對(duì)湖北貝母灰葡萄孢菌菌株BMXTX2的抑菌率高達(dá)86.02%，表明拮抗菌WBT16防效好、抑菌譜廣，在半夏等中藥材病害綠色防控中有較高的應(yīng)用價(jià)值。

貝萊斯芽孢桿菌的抑菌作用機(jī)制包括產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物、改善宿主微生物群落及刺激宿主防御系統(tǒng)等，其中以產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)抑制病原菌為主（曹艷子等，2024）。鄧安玲等（2024）研究發(fā)現(xiàn)，貝萊斯芽孢桿菌菌株C11可通過(guò)產(chǎn)生具有抑菌活性的揮發(fā)性有機(jī)化合物發(fā)揮生防作用，其產(chǎn)生的揮發(fā)性有機(jī)化合物對(duì)番茄灰葡萄孢菌的抑制率達(dá)78.35%。楊然迪等（2024）研究了貝萊斯芽孢桿菌菌株TSC001產(chǎn)生的脂肽類物質(zhì)對(duì)17種植物病原菌的抑制作用，結(jié)果表明其抑制率為56.45%～97.15%。本研究中，拮抗菌WBT16發(fā)酵液對(duì)半夏細(xì)菌性病害病原菌有明顯抑制作用，推測(cè)該菌株可產(chǎn)生抗菌物質(zhì)抑制病原菌生長(zhǎng)，但其具體的抗菌物質(zhì)種類、抑菌機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

長(zhǎng)期以來(lái)，中藥材病害農(nóng)藥研發(fā)的基礎(chǔ)薄弱，獲得認(rèn)證的農(nóng)藥有限，中藥材栽培過(guò)程中亂施濫用化學(xué)農(nóng)藥的情況嚴(yán)重，影響藥材產(chǎn)量和品質(zhì)（肖歐麗等，2022）。近年來(lái)，較多學(xué)者陸續(xù)開(kāi)展中藥材病害生防菌研究。李超楠等（2022）從健康藥用植物根際土壤中分離篩選出2株對(duì)北蒼術(shù)根腐病有明顯防治效果的生防菌。鄭夢(mèng)琦等（2023）研究發(fā)現(xiàn)，3株生防菌對(duì)多花黃精根腐病病原菌有抑制作用。何貴祥等（2024）從人參根際土壤中分離篩選出3株芽孢桿菌，對(duì)人參銹腐病具有良好的防治效果。生物防治具有作用持久、環(huán)境污染小、易協(xié)調(diào)配合等優(yōu)勢(shì)，有利于中藥材產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。后續(xù)將針對(duì)拮抗菌WBT16的生防機(jī)制開(kāi)展研究，充分發(fā)揮其對(duì)中藥材病害的生防潛力。

4結(jié)論

從半夏根際土壤中分離篩選出的拮抗菌WBT16對(duì)半夏細(xì)菌性病害防效較好，且抑菌譜較廣，在半夏細(xì)菌性病害的生物防治中具有一定開(kāi)發(fā)價(jià)值和應(yīng)用潛力。

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（責(zé)任編輯：麻小燕，劉可丹）