紫花苜蓿MsTIFY77基因克隆及表達(dá)分析

摘要：TIFY家族蛋白是一類在植物中廣泛存在的轉(zhuǎn)錄因子，該家族蛋白含有一個(gè)高度保守的TIFY結(jié)構(gòu)域，通過參與植物內(nèi)部的多種信號(hào)途徑，對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育、逆境響應(yīng)以及防御機(jī)制進(jìn)行調(diào)節(jié)。本研究從‘草原4號(hào)’紫花苜蓿（Medicago sativa"L.）中克隆得到MsTIFY77基因并對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)信息分析以及表達(dá)模式分析，探究MsTIFY77基因在脅迫應(yīng)答中的功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該基因全長(zhǎng)1101 bp，開放閱讀框（Open reading frame，ORF）編碼367個(gè)氨基酸，含有TIFY和CCT-2結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列分析表明MsTIFY77蛋白為不穩(wěn)定蛋白，通過系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明紫花苜蓿MsTIFY77蛋白與蒺藜苜蓿（Medicago truncatula），豌豆（Pisum sativum），紅三葉（Trifolium pratense），毛苕子（Vicia villosa），鷹嘴豆（Cicer arietinum）和白車軸草（Trifolium repens）的TIFY蛋白親緣關(guān)系較近。亞細(xì)胞預(yù)測(cè)MsTIFY77蛋白定位于細(xì)胞核。qRT-PCR結(jié)果顯示，低溫和干旱脅迫誘導(dǎo)該基因的表達(dá)，而脫落酸脅迫對(duì)該基因表達(dá)有抑制作用。研究結(jié)果為MsTIFY77基因的功能提供參考。

關(guān)鍵詞：紫花苜蓿；TIFY77基因；基因克隆；表達(dá)分析

中圖分類號(hào)：S541.9 """""""文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A """""""文章編號(hào)：1007-0435（2025）03-0719-09

Cloning and Expression Analysis of MsTIFY77"Gene in Alfalfa

ZHANG Yan¹，"CHEN Qi¹，"DAI Rui¹，"LI Jian-wei¹，"BIAN Lin¹，"ZHANG Zhi-qiang^1，2*

（1.Colleg of Grassland Science，Inner Mongolia Agricultural University，Inner Mongolia Autonomous Region，"Hohhot，"Inner Mongolia 010000，China；"2.Technology Engineering Center of Drought and Cold-resistant Grass Breeding in North of the National Forestry and Grassland Administration，"Colleg of Grassland Science，"Inner Mongolia Agricultural University，"Hohhot，"Inner Mongolia 010000，China）

Abstract：The TIFY family proteins are a class of transcription factors that widely presented in plants，"which contain a highly conserved TIFY domain. They regulate plants growth and development，"stress responses，"and defense mechanisms by participating in numerous internal signaling pathways of plants. In this study，"MsTIFY77"gene was cloned from Medicago sativa. L. ‘Caoyuan No.4’"and its expression pattern and biological information were preliminarily elucidated. The results showed that the gene is 1101 bp in length，"with an open reading frame （ORF）"encoding 367 amino acids，"containing TIFY and CCT-2 domains. Amino acid sequence analysis showed that MsTIFY77 protein is an unstable protein. Phylogenetic tree analysis showed that MsTIFY77 protein is closely related to the TIFY proteins of Medicago truncatula，"Pisum sativum，"Trifolium pratense，"Vicia villosa，"Cicer arietinum and Trifolium repens. Subcellular localization indicated that the MsTIFY77 protein is located in the nucleus. The qRT-PCR results showed that low temperature and drought stress induced the expression of MsTIFY77"gene，"while abscisic acid treatment inhibited its expression. The results provided a reference for the function study of MsTIFY77"gene.

Key words：Alfalfa；MsTIFY77；Gene cloning；Expression analysis

紫花苜蓿（Medicago sativa"L.）作為一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的牧草，在全球范圍內(nèi)具有廣泛種植"^［1-2］。它不僅因其高產(chǎn)量、優(yōu)良品種和豐富的營(yíng)養(yǎng)成分（如高蛋白、維生素和微量元素）而受到青睞^［3-4］，還因其在土壤保護(hù)和改善方面的積極作用而被譽(yù)為“牧草之王”^［5］。然而，紫花苜蓿在我國(guó)北方地區(qū)的生長(zhǎng)面臨著低溫和干旱脅迫的挑戰(zhàn)^［6］，尤其是在寒冷的氣候條件下，凍害成為影響苜蓿安全越冬和穩(wěn)定高產(chǎn)的關(guān)鍵因素^［7］。低溫導(dǎo)致的凍害和干旱對(duì)紫花苜蓿生產(chǎn)造成了重大損失，因此，提高苜蓿的抗寒性和耐旱性成為品種改良和種植管理的重要目標(biāo)^［8］。

TIFY家族蛋白在植物激素信號(hào)通路的交互作用中扮演著核心角色^［9］。這些轉(zhuǎn)錄因子不僅參與茉莉酸（Jasmonic acid，"JA）的信號(hào)傳遞，還與其他關(guān)鍵植物激素如赤霉素、水楊酸、脫落酸（Abscisic acid，"ABA）、生長(zhǎng)素和乙烯的信號(hào)途徑相互作用，形成了一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。在不利環(huán)境條件下^［10］，植物通過激素信號(hào)網(wǎng)絡(luò)來調(diào)節(jié)生長(zhǎng)和脅迫反應(yīng)^［11］。ABA作為其中一種抑制生長(zhǎng)的激素^［12］，對(duì)于植物在逆境中維持水分平衡和增強(qiáng)抗寒性具有重要作用。它能促進(jìn)根部水分的吸收和運(yùn)輸，增加細(xì)胞膜的透性，幫助植物在寒冷環(huán)境中保持水分，減少冰晶對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損害^［13-16］。在小麥（Triticum aestivum）中，TIFY轉(zhuǎn)錄因子顯示出對(duì)生物和非生物脅迫的敏感性。特別是在植物激素誘導(dǎo)的應(yīng)激條件下，TIFY基因在最初的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)表達(dá)顯著上調(diào)，包括對(duì)ABA的響應(yīng)。這種響應(yīng)可能涉及對(duì)ABA信號(hào)的正向或負(fù)向調(diào)控，進(jìn)而影響植物的逆境適應(yīng)性^［17］。ABA的增加可以誘導(dǎo)TIFY基因的表達(dá)，激活或抑制特定基因的表達(dá)，從而增強(qiáng)植物對(duì)逆境的耐受性。TIFY轉(zhuǎn)錄因子通過與其他植物激素信號(hào)通路的交互作用，參與調(diào)控植物對(duì)逆境的響應(yīng)^［18］，其中包括與ABA信號(hào)通路的相互作用，這對(duì)于植物適應(yīng)和抵抗環(huán)境脅迫具有至關(guān)重要的意義。因此，TIFY轉(zhuǎn)錄因子與ABA之間的相互作用構(gòu)成了植物逆境響應(yīng)機(jī)制的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，有助于提高作物的抗逆性和生產(chǎn)力。

TIFY基因家族在植物生長(zhǎng)、發(fā)育、防御和應(yīng)激反應(yīng)中的作用已經(jīng)得到了廣泛關(guān)注。在柑桔（Citrus reticulata Blanco）中的研究發(fā)現(xiàn)，Cs1g17210，Cs1g17220和Cs4g07130這三個(gè)TIFY基因在低溫脅迫下表達(dá)量顯著上調(diào)，且脅迫程度越大，表達(dá)量上調(diào)越高，這表明這些TIFY基因可能在柑桔對(duì)低溫脅迫的響應(yīng)中起到了重要的調(diào)節(jié)作用^［19］；在雙穗短柄草（Brachypodium distachyon）中的研究也發(fā)現(xiàn)，21個(gè)BdTIFY基因中，有12個(gè)受到JA的誘導(dǎo)，4個(gè)受到ABA的誘導(dǎo)，且大多數(shù)BdTIFY基因?qū)Ω珊?、鹽堿、低溫和高溫等非生物脅迫有反應(yīng)。這一發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)了TIFY基因家族在植物逆境應(yīng)答中的廣泛作用，并且揭示了它們可能通過不同的激素信號(hào)途徑來實(shí)現(xiàn)對(duì)逆境的響應(yīng)^［20］。MsTIFY77作為TIFY家族的一員，其功能探索對(duì)于理解植物如何精細(xì)調(diào)控其生命活動(dòng)具有重要意義，本研究以‘草原4號(hào)’紫花苜蓿為研究材料，從中克隆得到MsTIFY77基因，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，表達(dá)模式分析，為苜?？鼓嫘曰虻墓δ芡诰蚝屠锰峁┯辛σ罁?jù)。

1 材料與方法

1.1 植物材料及處理

本研究以‘草原4號(hào)’紫花苜蓿為試驗(yàn)材料。選取顆粒飽滿的種子，將種子置于2%的次氯酸鈉溶液中浸泡10 min，其間不停攪拌，蒸餾水反復(fù)沖洗5～8次后，置于蒸餾水中浸泡12 h，將消毒過的種子種植于盛有營(yíng)養(yǎng)土和蛭石（2∶1）的花盆中，放置在內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)草原與資源環(huán)境學(xué)院人工氣候室中進(jìn)行培養(yǎng)，栽培時(shí)間為長(zhǎng)日照條件（16 h光照/8 h黑暗），定期澆水。

將紫花苜蓿幼苗置于4℃低溫培養(yǎng)箱中，分別于0 h，2 h，6 h，12 h，24 h，48 h采集樣品；ABA激素處理，在植株上噴灑10 μmol·L^-1"ABA，為減少誤差，每株噴5次，并用透明塑料袋罩住，防止激素?fù)]發(fā)，在0 h，1 h，3 h，6 h和12 h取樣；將紫花苜蓿幼苗進(jìn)行空氣干旱處理，分別于0 h，2 h，4 h，8 h，12 h和24 h取樣；在紫花苜蓿結(jié)莢期，分別對(duì)植物根、莖、老葉、嫩葉、花、莢和種子進(jìn)行取樣，用于組織特異性分析。所有樣品一式三份。取樣后，立即將樣品快速冷凍在液氮中，并在-80°C保存以供后續(xù)分析。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄合成cDNA 使用TRIzon Rragent（康為世紀(jì)生物科技有限公司）試劑從‘草原4號(hào)’苜蓿葉片中提取總RNA，利用Nano Drop檢測(cè)RNA質(zhì)量，將RNA儲(chǔ)存在-80℃。利用Easy Script First-Strand cDNA Synthesis試劑盒（康為世紀(jì)生物科技有限公司）獲得cDNA，保存在-20 ℃供后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 目的基因克隆 以‘草原4號(hào)’紫花苜蓿cDNA為模板，利用Primer 3.0軟件設(shè)計(jì)引物（表1），進(jìn)行PCR擴(kuò)增目的基因，PCR體系為50 μL，包含cDNA模板5 μL（10 ng·μ^-1），2×Es Taq Master Mix（Dye）"25 μL，上下游引物各2 μL（10 ng·μ^-1），ddH₂O 16 μL。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性2 min；98℃變性30 s，55℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸2 min，4℃保存。用凝膠回收試劑盒（天根生化科技有限公司，中國(guó)）回收產(chǎn)物，利用熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)Trans1-T1，挑取陽性單菌落，經(jīng)過菌落以及菌液PCR檢測(cè)后，將陽性的單克隆菌落送至北京擎科生物科技股份有限公司測(cè)序。

1.2.3 生物學(xué)信息分析 利用NCBI Blast（BLAST："Basic Local Alignment Search Tool （nih.gov））在線網(wǎng)站進(jìn)行序列比對(duì)，使用DNAMAN軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹制作，采用最大似然法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹；SOPMA（https：//npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/secpred_sopma.pl）在線網(wǎng)站預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)；利用SWISS-MODEL（https：//swissmodel.expasy.org/）在線軟件預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)；NCBI protein BLAST在線工具分析保守結(jié)構(gòu)域；運(yùn)用Expasy Prot Param tool（https：//web.expasy.org/protscale/）分析蛋白理化性質(zhì)。

1.2.4 qRT-PCR分析 利用Primer 3.0在線軟件設(shè)計(jì)qRT-PCR引物（表1）。不同組織部位的cDNA模板取4 μL，上下引物各0.4 μL，ddH₂O 5 μL，ROX Reference Dye（50×）0.2 μL，SYBR qPCR Master Mix 10 μL（康為世紀(jì)生物科技有限公司）。反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃ 30 s；95℃ 5 s；60℃ 30 s；95℃ 15 s；40個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參基因，每樣品3次重復(fù)，用2^-??Ct方法計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量。

1.2.5 亞細(xì)胞位置預(yù)測(cè) 利用PSORT軟件對(duì)MsTIFY11蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析與處理 使用"Excel 2010統(tǒng)計(jì)計(jì)算相關(guān)數(shù)據(jù)，使用IBM SPSS Statistics 27軟件進(jìn)行方差分析，使用t檢驗(yàn)比較5%顯著性水平下的平均值。使用Origin 2021軟件制作條形圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 MsTIFY77基因克隆

采用TRIzon法提取‘草原4號(hào)’紫花苜蓿葉片總RNA反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA，設(shè)計(jì)特異性引物，經(jīng)過PCR擴(kuò)增、切膠回收、連接、轉(zhuǎn)大腸桿菌以及測(cè)序，最終獲得MsTIFY77基因。測(cè)序后發(fā)現(xiàn)該基因cDNA全長(zhǎng)為1～101 bp（圖1），ORF框編碼含367個(gè)氨基酸（圖2），NCBI基因登錄號(hào)為OR936160。

2.2 MsTIFY77基因生物信息學(xué)分析

經(jīng)NCBI protein BLAST分析，可獲得MsTIFY77蛋白的結(jié)構(gòu)域，表明MsTIFY77屬于TIFY家族成員，該蛋白含有TIFY結(jié)構(gòu)域和CCT-2結(jié)構(gòu)域，屬于JAZ亞家族蛋白（圖3A）。分子量為：38 617.66 kDa，理論等電子點(diǎn)為：9.18。紫花苜蓿MsTIFY77蛋白分子式為C₁₆₈₅H₂₆₈₂N₄₇₆O₅₃₁S₁₆，該基因編碼的氨基酸序列中絲氨酸（Ser13.4%）含量最高，其次是丙氨酸（Ala8.7%），脯氨酸（Pro 8.5%），天冬酰胺（Asn 7.1%），甘氨酸（Gly 7.1%）和纈氨酸（Val 7.1%）。脂肪指數(shù)為：69.84，平均親水指數(shù)為-0.308，不穩(wěn)定指數(shù)為：44.56，這將MsTIFY77蛋白歸類為不穩(wěn)定親水性蛋白（圖3C）。接下來利用SOPMA在線網(wǎng)站預(yù)測(cè)蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)（圖3D），其中α-螺旋（藍(lán)色）占11.20%，β-折疊（紅色）占3.28%，不規(guī)則卷曲（紫色）占70.49%，延伸鏈（綠色）占15.03%。蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)由SWISS-MODEL完成，其結(jié)果與預(yù)測(cè)的二級(jí)結(jié)構(gòu)基本吻合（圖3B）。PSORT軟件預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，MsTIFY77蛋白定位于細(xì)胞核（圖4）。

利用DNAMAN軟件及NCBI-Blast（www.ncbi.nlm.nih.gov）分析后發(fā)現(xiàn)，MsTIFY77蛋白與蒺藜苜蓿（Medicago truncatula），豌豆（Pisum sativum），紅三葉（Trifolium pratense），毛苕子（Vicia villosa），鷹嘴豆（Cicer arietinum）和白車軸草（Trifolium repens）中相關(guān)氨基酸的相似度分別為97.14%，86.08%，85.84%，85.48%，83.22%和78.57%（圖5A）。系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明，紫花苜蓿MsTIFY77蛋白與其他豆科植物如蒺藜苜蓿、豌豆、紅三葉、毛苕子、鷹嘴豆和白車軸草親緣關(guān)系較近，與蒺藜苜蓿親緣關(guān)系最近（圖5B）。

2.3 MsTIFY77的表達(dá)模式分析

利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，對(duì)MsTIFY77基因在紫花苜蓿根、莖、老葉、嫩葉、花、莢和種子中的表達(dá)量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該基因在所有組織中均表達(dá)，其中在莖中表達(dá)量最高，約為種子的10倍，老葉和嫩葉、花和莢的表達(dá)量相近（圖6A）；在低溫處理下，其表達(dá)量除2 h外較對(duì)照組均顯著上調(diào)（Plt;0.05），且在低溫脅迫48 h時(shí)，其表達(dá)量最高，約為0 h的表達(dá)量的9倍，在低溫脅迫2 h時(shí)表達(dá)量最低，在這之后隨著時(shí)間的增加，表達(dá)量均不同程度地顯著增加（Plt;0.05）（圖6B）；在不同干旱時(shí)間處理下，MsTIFY77基因在8 h，12 h和24 h被顯著誘導(dǎo)（圖6C）；以不同的小時(shí)數(shù)脫落酸脅迫后，在脅迫6 h時(shí)的表達(dá)量最低，24 h時(shí)相對(duì)表達(dá)量較其他時(shí)間高，但仍低于對(duì)照水平（圖6D）。

3 討論

TIFY轉(zhuǎn)錄因子家族在植物生物學(xué)中的重要性日益凸顯，它們?cè)谥参锏纳L(zhǎng)發(fā)育、脅迫應(yīng)答和激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用^［22］。TIFY家族蛋白因其獨(dú)特的TIFY結(jié)構(gòu)域而得名，該結(jié)構(gòu)域參與了DNA的結(jié)合過程，從而調(diào)控目標(biāo)基因的表達(dá)。在多種植物中對(duì)TIFY基因家族的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展。在辣椒（Capsicum annuum）中，CaTIFY7和CaTIFY10b兩種基因在非生物脅迫尤其是冷脅迫下表達(dá)量顯著增加，參與調(diào)控植物的逆境響應(yīng)^［21］；LrJAZ2基因在枸杞（Lycium barbarum）和擬南芥（Arabidopsis thaliana）中的過表達(dá)顯示了對(duì)氣孔發(fā)育的負(fù)向調(diào)控作用^［22］；在菊花中，TIFY家族蛋白CmJAZ1-like與bHLH轉(zhuǎn)錄因子CmBPE2的相互作用對(duì)于花瓣大小的調(diào)控起著關(guān)鍵作用^［23］；高叢藍(lán)莓（Vaccinium corymbosum）基因組中鑒定出34個(gè)TIFY基因，它們?cè)诨ê凸麑?shí)發(fā)育過程中具有特定的表達(dá)模式，并對(duì)外部茉莉酸（JA）處理有反應(yīng)^［24］；在花生（Arachis hypogaea）中，JAZ1基因和TIFY8基因在根瘤共生的早期和晚期階段分別顯示出增強(qiáng)的表達(dá)^［25］；甘藍(lán)型油菜中，通過對(duì)TIFY基因家族的全面全基因組分析，發(fā)現(xiàn)TIFY基因成員在植物結(jié)構(gòu)中的作用，特別是在芽分枝調(diào)控上，研究發(fā)現(xiàn)，TIFY家族基因在莖、花芽和長(zhǎng)角果中表達(dá)量較高，而且多數(shù)TIFY基因在芽激活時(shí)顯著下調(diào)表達(dá)^［26］。這些研究揭示了TIFY轉(zhuǎn)錄因子在不同植物種類中的多樣性和保守性，以及它們?cè)谥参锷磉^程中的潛在作用。本研究從‘草原4號(hào)’紫花苜蓿中克隆到的MsTIFY77基因，全長(zhǎng)1101 bp，含367個(gè)氨基酸的蛋白。將MsTIFY77基因與鷹嘴豆、毛苕子、紅三葉、豌豆和蒺藜苜蓿的序列進(jìn)行同源比對(duì)，發(fā)現(xiàn)在系統(tǒng)進(jìn)化上MsTIFY77基因與以上基因具有較近的親緣關(guān)系，由此推測(cè)，MsTIFY77在功能上可能與這幾個(gè)物種具有高度相似性。

TIFY轉(zhuǎn)錄因子家族在植物對(duì)逆境脅迫的響應(yīng)中起著重要作用，尤其是在非生物脅迫如低溫和干旱條件下。這些轉(zhuǎn)錄因子通過調(diào)節(jié)特定基因的表達(dá)，幫助植物適應(yīng)和抵御低溫帶來的不利影響。在油菜（Brassica napus）中，TIFY3和TIFY6基因在低溫脅迫下被誘導(dǎo)表達(dá)，這表明它們可能參與了植物對(duì)冷害或凍害的防御反應(yīng)^［27］。而TIFY7基因在冷休克條件下表達(dá)受到抑制，這可能反映了不同TIFY基因在植物對(duì)低溫脅迫響應(yīng)中的多樣性和復(fù)雜性。黃獼猴桃（Actinidia chinensis）中的TIFY轉(zhuǎn)錄因子也顯示出在低溫脅迫下的顯著誘導(dǎo)表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)了TIFY家族在植物對(duì)低溫脅迫響應(yīng)中的普遍作用^［28］。在低溫脅迫下，TIFY轉(zhuǎn)錄因子不僅可以直接調(diào)節(jié)下游功能基因的表達(dá)，還可以通過調(diào)控其他轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)來影響低溫相關(guān)基因的表達(dá)。這種多層次的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)使得植物能夠有效地應(yīng)對(duì)低溫。在干旱脅迫方面，TIFY基因家族的成員已被證明在不同植物中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，在玉米（Zea mays）中，干旱脅迫誘導(dǎo)了特定ZmTIFY基因的表達(dá)，如ZmTIFY4，5，8，26和28，而其他一些基因如ZmTIFY16，13，24，27，18和30的表達(dá)受到了干旱的抑制。這表明ZmTIFY家族在應(yīng)對(duì)干旱脅迫方面可能起著至關(guān)重要的作用^［29］。本研究發(fā)現(xiàn)在低溫脅迫下其表達(dá)量顯著上調(diào)；在干旱脅迫下，在8 h、12 h和24 h被顯著誘導(dǎo)，說明MsTIFY77基因可能參與低溫和干旱的防御反應(yīng)。

此外，植物對(duì)低溫脅迫的響應(yīng)機(jī)制受到脫落酸（ABA）的調(diào)控^［30］。在月季（Rosa chinensis）研究中ABA可能是有效地提高月季TIFY家族成員參與月季的脅迫響應(yīng)重要因素^［31］；蘋果（Malus pumila）在外源ABA處理下，大部分MdTIFY基因被誘導(dǎo)表達(dá)^［32］。本研究通過qRT-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)，在ABA脅迫下MsTIFY77表達(dá)量下降，說明MsTIFY77基因可能參與ABA脅迫的防御反應(yīng)。

4 結(jié)論

本研究成功克隆到‘草原4號(hào)’紫花苜蓿MsTIFY77基因，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，MsTIFY77基因全長(zhǎng)1101 bp，開放閱讀框編碼367個(gè)氨基酸，含有TIFY和CCT-2結(jié)構(gòu)域，屬于TIFY家族成員。亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)顯示該蛋白位于細(xì)胞核。表達(dá)分析結(jié)果表明低溫和干旱脅迫誘導(dǎo)MsTIFY77基因的表達(dá)，而脫落酸脅迫對(duì)MsTIFY77基因表達(dá)有抑制作用。

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（責(zé)任編輯""劉婷婷）

引用格式：張巖， 陳崎， 代蕊，"等.紫花苜蓿MsTIFY77基因克隆及表達(dá)分析[J].草地學(xué)報(bào)，2025，33（3）：719-727

Citation：ZHANG Yan， CHEN Qi， DAI Rui， et al.Cloning and Expression Analysis of"MsTIFY77"Gene in Alfalfa[J].Acta Agrestia Sinica，2025，33（3）：719-727

基金項(xiàng)目：內(nèi)蒙古自治區(qū)高等學(xué)?！扒嗄昕萍加⒉胖С猪?xiàng)目”（NJYT23009）；苜蓿分子育種體系構(gòu)建及種質(zhì)創(chuàng)制（BR22-11-12）；內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)草學(xué)學(xué)科青年基金（IMAUCXQJ2023004）資助

作者簡(jiǎn)介：張巖（1999-），女，漢族，內(nèi)蒙古赤峰人，碩士研究生，主要從事草育種方面研究，E-mail：18247628125@163.com；*通信作者Author for correspondence，E-mail："zhangzq19890102@126.com