基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接探討桂枝茯苓丸對(duì)血小板活化的作用機(jī)制

摘要：目的通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接方法預(yù)測(cè)桂枝茯苓丸對(duì)血小板活化的主要活性成分、靶點(diǎn)及信號(hào)通路，探究其潛在作用機(jī)制，以期開(kāi)發(fā)新的抗血小板藥物。方法從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取桂枝茯苓丸活性成分并在Uniport數(shù)據(jù)庫(kù)中規(guī)范，從Genecard、OMIM、TTD等數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取并整合血小板活化的相關(guān)靶點(diǎn)，使用venny平臺(tái)篩選共同靶點(diǎn)，借助Cytoscape3.7.2構(gòu)建基因蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)、藥物-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因本體（GO）生物功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析，利用Autodock vina軟件對(duì)核心活性成分及核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。結(jié)果篩選得到桂枝茯苓丸活性成分相關(guān)靶點(diǎn)214個(gè)，血小板活化相關(guān)基因2695個(gè)，其中共同靶點(diǎn)124個(gè)，GO功能富集得到生物過(guò)程（BP）條目588個(gè)，細(xì)胞組分（CC）條目63個(gè)，分子功能（MF）條目109個(gè)，KEGG通路富集得到156條信號(hào)通路（Plt;0.05）。利用PPI及KEGG通路過(guò)程分析得到核心靶點(diǎn)AKT1、PTGS2、NOS3、COL1A1、F3、RAF1、PTGS1；分子對(duì)接結(jié)果顯示，桂枝茯苓丸中槲皮素與核心靶點(diǎn)結(jié)合能較強(qiáng)，均lt;-7.0KJ/mol。結(jié)論桂枝茯苓丸通過(guò)槲皮素等成分抑制血小板活化與NOS3、PTGS1、PTGS2、RAF1等靶點(diǎn)調(diào)控有關(guān)，并作用于一氧化氮生物合成過(guò)程、VEGF信號(hào)通路、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)與cGMP PKG信號(hào)通路等。

關(guān)鍵詞：網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；桂枝茯苓丸；血小板活化；作用機(jī)制；分子對(duì)接

中圖分類(lèi)號(hào)：R289文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2025）03-0060-09

血小板是一種無(wú)核血細(xì)胞，主要來(lái)源于骨髓巨核細(xì)胞，不僅是參與止血的主要細(xì)胞，也是重要的免疫細(xì)胞，在維持血管完整性、炎癥、調(diào)節(jié)免疫過(guò)程和腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用［1］。血小板活化是血小板發(fā)揮作用的關(guān)鍵功能，分為血小板粘附、聚集、變形、釋放等多個(gè)過(guò)程。血小板活化的驅(qū)動(dòng)過(guò)程呈梯度變化，即血小板活化不是一個(gè)二元過(guò)程，而是一個(gè)分級(jí)的事件序列［2］。當(dāng)血管損傷后，血小板粘附在細(xì)胞外基質(zhì)上，不同受體間相互協(xié)調(diào)，導(dǎo)致血小板在受損血管壁上形成血栓并開(kāi)始滾動(dòng)，最終粘附牢固。血小板粘附觸發(fā)由酪氨酸激酶和G蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引導(dǎo)血小板完全激活并伴隨顆粒釋放，進(jìn)而導(dǎo)致其他血小板的募集和激活。血小板粘附和活化導(dǎo)致血小板聚集和促凝血表面的出現(xiàn)，促進(jìn)在受傷部位形成富含纖維蛋白的止血栓。此外，血小板活化還會(huì)觸發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞合成和分泌分子，如前列環(huán)素和一氧化氮，從而嚴(yán)格控制和限制血栓形成［3］。血小板不僅在動(dòng)脈粥樣硬化、心衰、高血壓等心血管疾病中發(fā)揮重要作用［4-5］，還參與癌癥轉(zhuǎn)移過(guò)程，血小板-腫瘤細(xì)胞相互作用與整合素和糖蛋白等多種粘附分子以及P-選擇素等有關(guān)［6］。

即使過(guò)去幾十年間已經(jīng)開(kāi)發(fā)了如環(huán)氧化酶-1抑制劑阿司匹林、P2Y12抑制劑氯吡格雷等藥物［7］，然而更新型、高效、可降低不良事件發(fā)生和出血率的血小板活化抑制劑仍然是目前研究的熱點(diǎn)［8］。中醫(yī)藥是中華民族幾千年來(lái)在疾病防治中臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)與理論的融合，具有“多成分、多靶點(diǎn)、系統(tǒng)調(diào)控”的顯著特點(diǎn)［9］。目前，中藥聯(lián)合抗血小板藥物的應(yīng)用研究進(jìn)展迅速，中藥在一定程度上有助于防止現(xiàn)代抗血小板藥物單一靶向的弊端、增強(qiáng)其抗血小板活性、降低血栓事件的發(fā)生率、降低藥物不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)［10］。在輸血醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尋找能夠抑制血小板活化的中藥活性成分對(duì)于血小板保存以及抑制血小板相關(guān)免疫調(diào)節(jié)等的研究具有重要意義。

桂枝茯苓丸起源于中國(guó)古代名醫(yī)張仲景1800年前撰寫(xiě)的《金匱要略》一書(shū)，方中桂枝溫通血脈，以行瘀滯，是為君藥；桃仁活血祛瘀，化瘀消癥，用之為臣；丹皮、芍藥既活血散瘀，又涼血以清瘀久所化之熱，芍藥并能緩急止痛；茯苓滲濕祛痰，助消癥之功，健脾益胃，以扶正氣，均為佐藥［11］，是中醫(yī)活血化瘀經(jīng)典方劑。研究表明，桂枝茯苓丸除治療婦科相關(guān)疾病，還與抑制血小板活化過(guò)程有關(guān)［12-13］。桂枝茯苓丸可以靶向參與調(diào)節(jié)血液循環(huán)、炎癥和免疫因子、增殖、細(xì)胞凋亡等的多種信號(hào)通路，其下調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中COX-1和COX-2 mRNAs的mRNA表達(dá)［14］，并抑制了小鼠子宮組織中COX-2的活性［15］，其機(jī)制與血小板活化過(guò)程有關(guān)。然而。桂枝茯苓丸抑制血小板活化的具體機(jī)制尚不明確。

近年來(lái)，隨著先進(jìn)智能技術(shù)的出現(xiàn)，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)得到了完善和深入實(shí)施，為揭示和可視化中藥對(duì)抗多因素疾病的潛在相互作用網(wǎng)絡(luò)提供了方法。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用促進(jìn)了中藥的安全性、有效性和機(jī)制研究，從而增強(qiáng)了中藥的可信度和普及性［16］。本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接的方法，預(yù)測(cè)桂枝茯苓丸抑制血小板活化的有效成分、作用靶點(diǎn)及可能通路，為后續(xù)研究提供參考。

1材料與方法

1.1桂枝茯苓丸活性成分篩選及有效成分靶點(diǎn)獲取通過(guò)檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)，以口服利用度（oral bioavailability，OB）≥30%及類(lèi)藥性（drug likeness，DL）≥0.18作為篩選參數(shù)，檢索桂枝茯苓丸藥物活性成分及作用的蛋白質(zhì)靶點(diǎn)，并將所有的靶點(diǎn)在Uniport數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行規(guī)范，將物種設(shè)置為人，獲得靶點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)的Uniport名稱。

1.2血小板活化靶點(diǎn)的篩選以“platelet activation”、“platelet aggregation”、“thrombus”等與血小板活化過(guò)程有關(guān)的名稱為關(guān)鍵詞，挖掘Genecards、OMIM、TTD 數(shù)據(jù)庫(kù)中血小板活化的潛在靶點(diǎn)。如Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)中靶點(diǎn)過(guò)多時(shí)，查閱文獻(xiàn)并根據(jù)相關(guān)經(jīng)驗(yàn)，取Score值大于等于中位數(shù)的目標(biāo)靶點(diǎn)作為血小板活化潛在靶點(diǎn)。合并并刪除重復(fù)值得到血小板活化相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3桂枝茯苓丸-血小板活化共同靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建使用Venny2.1.0在線平臺(tái)將桂枝茯苓丸藥物靶點(diǎn)與血小板活化靶點(diǎn)進(jìn)行映射取交。利用String平臺(tái)分析其相互作用，構(gòu)建蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)模型，將生物種類(lèi)設(shè)定為“Homo sapiens”，最小互相作用閾值設(shè)定為“medium confidence”（gt;0.4），得到PPI網(wǎng)絡(luò)，并用 CytoScape3.7.2進(jìn)一步分析。

1.4桂枝茯苓丸藥物-活性成分-血小板活化靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建運(yùn)用CytoScape3.7.2構(gòu)建桂枝茯苓丸藥物-活性成分-血小板活化靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，分析有效成分及靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，包括連接度（Degree）、介數(shù)中心性（Betweenness Centrality）及中心接近度（Closeness Centrality）等，并根據(jù)其參數(shù)判斷核心靶點(diǎn)及成分。

1.5GO功能與KEGG通路富集分析將桂枝茯苓丸與血小板活化共同靶點(diǎn)錄入DAVID平臺(tái)，進(jìn)行基因本體論（gene ontology，GO）功能注釋和京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析，篩選條件Plt;0.05。將數(shù)據(jù)結(jié)果通過(guò)微生信在線平臺(tái)對(duì)數(shù)據(jù)可視化處理。

1.6分子對(duì)接驗(yàn)證在KEGG通路圖中尋找血小板活化有關(guān)靶點(diǎn)，將相關(guān)靶點(diǎn)與PPI網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果進(jìn)行整合，選取degree靠前的7個(gè)中藥靶點(diǎn)作為大分子蛋白受體，通過(guò)PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.rcsb.org/）下載核心靶點(diǎn)蛋白結(jié)構(gòu)。選擇1.4參數(shù)中排名前3的成分為小分子配體，通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲得核心成分蛋白3D結(jié)構(gòu)。使用Autodock vina進(jìn)行分子對(duì)接，根據(jù)Docking Score值評(píng)價(jià)靶點(diǎn)與活性化合物的結(jié)合強(qiáng)度與活性。

2結(jié)果

2.1桂枝茯苓丸活性成分及靶點(diǎn)獲取桂枝、茯苓、赤芍、桃仁、牡丹皮分別提取化學(xué)成分6、6、13、18、6種，包括槲皮素，山柰酚，黃芩苷等。桂枝、茯苓、赤芍、桃仁、牡丹皮成分的作用靶點(diǎn)分為有29、16、102、54、173個(gè)，合并去重得到靶點(diǎn)214個(gè)。

2.2血小板活化靶點(diǎn)獲取從Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得血小板活化、粘附、變形、聚集、釋放、血栓靶點(diǎn)分別為12704、8264、5023、8204、8708、1114個(gè)。設(shè)定Relevance score大于中位數(shù)的目標(biāo)靶點(diǎn)為血小板活化的潛在靶點(diǎn)，可多次取中位數(shù)篩選相關(guān)靶點(diǎn)。結(jié)合OMIM、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)補(bǔ)充相關(guān)靶點(diǎn)，合并去重，最終得到血小板活化相關(guān)靶點(diǎn)2695個(gè)。

2.3桂枝茯苓丸-血小板活化共同靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將篩選的桂枝茯苓丸活性成分靶點(diǎn)與血小板活化靶點(diǎn)取交，通過(guò)Venny圖在線平臺(tái)繪制韋恩圖，得到桂枝茯苓丸成分-血小板活化共同靶點(diǎn)124個(gè)，見(jiàn)圖1。將靶點(diǎn)提交至STRING11.0平臺(tái)后，得到其共同靶點(diǎn)蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)，使用cytoscape3.7.2對(duì)相互作用關(guān)系進(jìn)行分析，得到圖2。

2.4桂枝茯苓丸藥物-活性成分-血小板活化靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建使用cytoscape3.7.2構(gòu)建桂枝茯苓丸藥物-活性成分-血小板活化靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖3，通過(guò) cytoscape3.7.2內(nèi)置的Network Analyzer分析桂枝茯苓丸對(duì)血小板活化作用網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)，得到核心成分。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)分析數(shù)據(jù)，見(jiàn)表1，預(yù)測(cè)槲皮素為桂枝茯苓丸對(duì)血小板活化產(chǎn)生作用的主要成分，其次為β-谷甾醇、山柰酚。

2.5GO功能與KEGG通路富集分析應(yīng)用DAVID數(shù)據(jù)平臺(tái)對(duì)共同靶點(diǎn)進(jìn)行富集分析，借助微生信在線平臺(tái)對(duì)結(jié)果可視化。由結(jié)果可見(jiàn)多個(gè)靶點(diǎn)的功能與血小板活化過(guò)程密不可分。桂枝茯苓丸參與的部分生物學(xué)過(guò)程見(jiàn)圖4A、B、C，參與的通路見(jiàn)圖4D，靶點(diǎn)通路部分結(jié)果見(jiàn)圖5。查找KEGG通路過(guò)程圖，得到與血小板活化作用相關(guān)的具體靶點(diǎn)，與PPI網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果整合，根據(jù)P值排序，得到表2。

2.6分子對(duì)接驗(yàn)證將活性成分槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚與核心靶點(diǎn)分子AKT1、PTGS2、NOS3、COL1A1、F3、RAF1、PTGS1進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，結(jié)果見(jiàn)表3。文獻(xiàn)研究認(rèn)為，結(jié)合能lt;0配體和受體能自發(fā)結(jié)合；若結(jié)合能lt;-4.25KJ/mol表明配體與受體有一定的結(jié)合活性；lt;-5.0KJ/mol表明配體與受體有一定的結(jié)合活性，lt;-7.0KJ/mol表明配體與受體有強(qiáng)烈的結(jié)合活性［17］。分子對(duì)接結(jié)果示結(jié)合能lt;0的有21種，介于-5和-7的之間有2種，lt;-7.0 KJ/mol的有19種，占所有結(jié)果的90.5%，即大部分靶點(diǎn)與成分有強(qiáng)烈的結(jié)合活性，其中，槲皮素與4個(gè)靶點(diǎn)的結(jié)合活性極強(qiáng)，見(jiàn)圖6（A、B、C、D）。

3討論

桂枝茯苓丸藥物-活性成分-血小板活化靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖顯示，活性成分槲皮素連接度、介數(shù)中心性及中心接近度遠(yuǎn)高于β-谷甾醇及山柰酚。分子對(duì)接結(jié)果顯示，槲皮素與核心靶點(diǎn)具有強(qiáng)烈的結(jié)合活性。并結(jié)合國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究推測(cè)，槲皮素可能是桂枝茯苓丸抑制血小板活化的核心成分。

槲皮素是一種廣泛存在于植物中的類(lèi)黃酮化合物，具有抗氧化性、抗菌能力、抗腫瘤作用、抗炎和免疫抑制作用以及保護(hù)心血管、治療肥胖和2型糖尿病等能力［18］。它可以抑制產(chǎn)生炎癥的酶（環(huán)氧合酶COX和脂氧合酶LOX）來(lái)發(fā)揮抗炎和免疫抑制作用，可以通過(guò)抑制氮氧化物（NO）和內(nèi)皮功能，以及預(yù)防神經(jīng)元的氧化性炎癥損傷和血小板的抗聚集作用保護(hù)心血管，還可以抑制凝血酶活性來(lái)保護(hù)大鼠免受導(dǎo)管相關(guān)性金黃色葡萄球菌感染［19］。此外，槲皮素還可通過(guò)減少脂質(zhì)過(guò)氧化、毛細(xì)血管通透性和血小板聚集等方面治療肥胖和2型糖尿?。?0］。

依據(jù)PPI網(wǎng)絡(luò)及KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)，核心靶點(diǎn)分別為AKT1、PTGS2、NOS3、COL1A1、F3、RAF1、PTGS1、PIK3CG等。分子對(duì)接結(jié)果顯示，PTGS2、NOS3、RAF1、PTGS1結(jié)合活性更強(qiáng)。絲氨酸/蘇氨酸激酶Akt是許多細(xì)胞（包括血小板）中PI3K產(chǎn)物的一個(gè)靶標(biāo)，Akt與不同細(xì)胞中的多種功能有關(guān)，包括抑制細(xì)胞凋亡、葡萄糖代謝和細(xì)胞增殖，且在體外穩(wěn)定血小板聚集和體內(nèi)血小板栓形成方面具有決定性作用。有研究表明，Akt缺陷型血小板似乎具有分泌缺陷，導(dǎo)致纖維蛋白原結(jié)合減少，從而發(fā)生聚集受損［21］。Woulfe等［22］推測(cè)除了影響血小板分泌功能外，Akt調(diào)節(jié)血小板聚集和血栓形成中的作用可能是通過(guò)磷酸化eNOS以外的血小板底物或除eNOS之外的血小板底物產(chǎn)生的。此外，Akt還可能調(diào)節(jié)整合素αIIbβ3的功能。PTGS2也稱為環(huán)氧化酶2（COX-2），它可以與G蛋白耦合，從而激活G蛋白，升高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平，激活蛋白激酶A，達(dá)到抑制血小板聚集的效果［23］。此外Buerkle等［24］研究發(fā)現(xiàn)選擇性抑制COX-2可減少倉(cāng)鼠小動(dòng)脈中 6-酮-PGF（1alpha）內(nèi)皮釋放，增加瞬時(shí)血小板-血管壁相互作用，并牢固血小板的粘附。此外，它還可以更快地閉塞受損的微血管。近些年研究表明，COX-2與血小板活化在子宮內(nèi)膜異位癥和COVID-19等疾病中同樣發(fā)揮作用［25-26］。NOS3是調(diào)節(jié)血管張力、內(nèi)皮功能和血小板聚集的關(guān)鍵酶［27］。Freedman等［28］通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明受刺激的血小板會(huì)活化并產(chǎn)生NO從而適度抑制血小板活化，并顯著抑制額外的血小板募集，即血小板產(chǎn)生的NO可能控制血小板形成血栓。還有研究表明某些藥物可以激活大鼠主動(dòng)脈組織中的 eNOS減弱血小板聚集［29］。F3，即血小板因子 3（PF3），是活化血小板細(xì)胞膜上表達(dá)的磷脂部分，在凝血機(jī)制的激活中起著重要作用。在血栓形成過(guò)程中參與血小板聚集，每當(dāng)發(fā)生血小板活化時(shí)，PF3就會(huì)釋放并參與凝血酶形成［30-31］。血小板因子3不會(huì)被血小板活化因子（PAF）刺激所產(chǎn)生，而主要是由于膠原蛋白在洗滌的血小板中誘導(dǎo)聚集、分泌和 PF3 活化［32］，也有研究表明，膠原刺激的PF1和PF3釋放與血小板聚集或PF4釋放無(wú)關(guān)，而可能是釋放反應(yīng)的一個(gè)單獨(dú)階段［33］。PF3還被發(fā)現(xiàn)可能與血淚和血汗癥有關(guān)［34］。在血小板中，Raf-1的活性受細(xì)胞內(nèi)鈣和蛋白激酶C（PKC）的調(diào)節(jié)。當(dāng)用2-甲基硫代二磷酸腺苷（2MeSADP）刺激血小板時(shí)，磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1（PDK1）在絲裂原活化蛋白激酶MAPK通路中磷酸化并激活上游激酶Raf-1來(lái)控制血小板中的血栓生成和血栓形成［35］。還有研究表明，血小板受體糖蛋白Ib-IX 介導(dǎo)的血小板整合素 αIIbβ3激活被Raf-1的顯性陰性突變體抑制［36］。PTGS1，即前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合酶 1（COX-1），可以通過(guò)氧化反應(yīng)將花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素（PG）G2，然后通過(guò)過(guò)氧化物酶反應(yīng)轉(zhuǎn)化為PGH2，在血小板中，PGH2又通過(guò)血栓素合成酶轉(zhuǎn)化為促聚集的 TXA2［37］。

GO富集分析結(jié)果顯示這些共同靶點(diǎn)參與傷口愈合、細(xì)胞內(nèi)外各方面、蛋白質(zhì)結(jié)合等過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)，血小板在傷口愈合中不止有止血的作用，血小板會(huì)改變形狀并釋放儲(chǔ)存在顆粒中的各種生物活性分子，包括生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和趨化因子，這些生物活性分子有助于募集和激活參與傷口愈合級(jí)聯(lián)反應(yīng)的各種細(xì)胞類(lèi)型。血小板通過(guò)這些機(jī)制充當(dāng)復(fù)雜傷口愈合過(guò)程的關(guān)鍵協(xié)調(diào)者，引發(fā)導(dǎo)致炎癥、細(xì)胞增殖和組織重塑的級(jí)聯(lián)事件。它們?cè)卺尫派锘钚苑肿又械淖饔眉捌鋵?duì)調(diào)節(jié)傷口愈合微環(huán)境的貢獻(xiàn)突出了它們?cè)谟现械闹匾裕?8］。

KEGG通路分析結(jié)果中，桂枝茯苓丸抑制血小板活化的信號(hào)通路有11條（Plt;0.05）。首先，桂枝茯苓丸直接參與血小板活化，還通過(guò)VEGF信號(hào)通路、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)、cGMP PKG信號(hào)通路等參與血小板活化過(guò)程。活化的血小板釋放血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），該因子向血管內(nèi)皮細(xì)胞（EC）發(fā)出信號(hào)，并在傷口愈合早期啟動(dòng)血管生成的萌芽［39］。補(bǔ)體系統(tǒng)和凝血級(jí)聯(lián)是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，它們以炎癥因子為橋梁相互調(diào)節(jié)和影響。例如，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，循環(huán)免疫復(fù)合物激活補(bǔ)體，導(dǎo)致補(bǔ)體片段的形成。血小板結(jié)合補(bǔ)體裂變產(chǎn)物可能誘導(dǎo)下游免疫介導(dǎo)的血小板活化，導(dǎo)致刺激后血小板聚集增強(qiáng)［40］。為了防止在正常情況下不必要的血小板活化并限制血管損傷部位的止血反應(yīng)，從內(nèi)皮細(xì)胞釋放的一氧化氮（NO）通過(guò)激活可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶（sGC）抑制血小板聚集，從而上調(diào) cGMP 和激活蛋白激酶 G（PKG），導(dǎo)致下游蛋白質(zhì)磷酸化，Ca2+ 水平減少，抑制整合素活化和顆粒分泌［41］。

綜上所述，桂枝茯苓丸抑制血小板活化的主要活性成分可能為槲皮素，通過(guò)作用于PTGS2、NOS3、RAF1、PTGS1等靶點(diǎn)，參與NO生物合成、蛋白質(zhì)結(jié)合等生物過(guò)程，以及VEGF信號(hào)通路、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)、cGMP PKG等信號(hào)通路。本研究體現(xiàn)了中醫(yī)藥治療疾病的整體觀念，也為篩選抑制血小板活化藥物及相關(guān)作用機(jī)制提供參考，但網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的預(yù)測(cè)存在一定局限性，有待后期臨床與動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

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