磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法與膠體金法檢測(cè)HIV感染與免疫印跡法確證對(duì)照分析

【摘要】 目的：以免疫印跡法（Western blotting，WB）為參照，分析磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法、膠體金法對(duì)人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染篩查的效能。方法：于2023年7月3日—2024年10月31日選取400例在貴陽市第二人民醫(yī)院進(jìn)行HIV聯(lián)合篩查的病例。所有病例均在本院進(jìn)行磁微粒化學(xué)發(fā)光法、膠體金法檢測(cè)，由貴州省臨床檢驗(yàn)中心進(jìn)行WB檢測(cè)。以WB檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析微粒化學(xué)發(fā)光法、膠體金法檢測(cè)結(jié)果及其與WB檢測(cè)的一致性，并比較微?；瘜W(xué)發(fā)光法、膠體金法篩查HIV感染的效能。結(jié)果：WB檢測(cè)結(jié)果顯示，269例HIV感染，131例無HIV感染。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)與WB檢測(cè)的Kappa值為0.927，一致性良好。膠體金法檢測(cè)與WB檢測(cè)的Kappa值為0.875，一致性良好。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法診斷HIV感染的敏感度、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測(cè)值均高于膠體金法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；兩種方法診斷HIV感染的特異度、陽性預(yù)測(cè)值比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)論：微粒化學(xué)發(fā)光法篩查HIV感染與WB具有較高一致性，且診斷敏感度、準(zhǔn)確度均優(yōu)于膠體金法。

【關(guān)鍵詞】 人類免疫缺陷病毒 免疫印跡法 磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法 膠體金法

Comparative Analysis of Magnetic Particle Chemiluminescence Method and Colloidal Gold Method for Detecting HIV Infection and Western Blotting Confirmation/TANG Yaomin， TANG Guiwen. //Medical Innovation of China， 2025， 22（06）： -148

[Abstract] Objective： To analyze the efficacy of magnetic particle chemiluminescence method and colloidal gold method in screening for human immunodeficiency virus （HIV） infection， and the Western blotting （WB） as a reference. Method： A total of 400 cases were selected for HIV joint screening at the Second People's Hospital of Guiyang from July 3， 2023 to October 31， 2024. All cases were detected by magnetic particle chemiluminescence method and colloidal gold method in our hospital， and WB was detected by Guizhou Provincial Center for Clinical Laboratory. Taking WB detection results as the gold standard， the results of magnetic particle chemiluminescence method and colloidal gold method and their consistency with WB detection were analyzed， and the efficacy of magnetic particle chemiluminescence method and colloidal gold method in screening HIV infection was compared. Result： The WB detection results showed that 269 cases were HIV infected and 131 cases were not HIV infected. The Kappa value of magnetic particle chemiluminescence method detection and WB detection was 0.927， and the consistency was good. The Kappa value of colloidal gold method detection and WB detection was 0.875， and the consistency was good. The sensitivity， accuracy and negative predictive value of magnetic particle chemiluminescence method in the diagnosis of HIV infection were higher than those of colloidal gold method， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. There were no significant differences in specificity and positive predictive value in the diagnosis of HIV infection between the two methods （Pgt;0.05）. Conclusion： The magnetic particle chemiluminescence method screening for HIV infection has high consistency with WB， and the diagnostic sensitivity and accuracy are better than those of colloidal gold method.

[Key words] Human immunodeficiency virus Western blotting Magnetic particle chemiluminescence method Colloidal gold method

First-author's address： Department of Clinical Laboratory， the Second People's Hospital of Guiyang， Guiyang 550081， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2025.06.033

人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是一種作用于人類免疫系統(tǒng)細(xì)胞的慢病毒，隸屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒[1]。HIV會(huì)持續(xù)攻擊宿主免疫系統(tǒng)（主要攻擊CD4+ T細(xì)胞）[2]，致使機(jī)體免疫系統(tǒng)失調(diào)，喪失應(yīng)對(duì)各種疾病的免疫功能，導(dǎo)致容易發(fā)生感染、罹患腫瘤，有較高死亡風(fēng)險(xiǎn)[3]。HIV感染已經(jīng)發(fā)展為全球性重大公共衛(wèi)生問題，嚴(yán)重威脅著世界人民的生命健康[4]。探索HIV感染的敏感篩查手段，提升臨床篩查準(zhǔn)確率，盡早明確診斷，不僅有助于患者在疾病尚未惡化前得到及時(shí)治療，而且有助于切斷傳染源、減少病毒傳播風(fēng)險(xiǎn)，降低對(duì)公共衛(wèi)生安全造成的威脅[5]。目前，用于檢測(cè)HIV感染的方法較多，免疫印跡法（Western blotting，WB）作為檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)，在HIV感染診斷中具有重要地位，但其檢測(cè)步驟復(fù)雜，一般需交當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心統(tǒng)一檢測(cè)，耗時(shí)長(zhǎng)，靈活性差，不便于大范圍篩查[6]。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法、膠體金法是臨床常用HIV感染篩查方法[7-8]，明確這兩種檢查方法在HIV感染中的診斷效能，有助于幫助臨床合理選擇檢測(cè)技術(shù)，提升檢測(cè)準(zhǔn)確性。鑒于此，本研究以WB為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比分析磁微粒化學(xué)發(fā)光法、膠體金法檢測(cè)HIV感染的效能，希望為臨床檢查提供一些循證學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究共納入400例研究對(duì)象，為2023年7月3日—2024年10月31日在貴陽市第二人民醫(yī)院進(jìn)行HIV感染聯(lián)合篩查的病例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）疑似HIV感染，或與HIV確診病例有接觸史（血液接觸、性接觸、母乳接觸等）；（2）在本院行磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法、膠體金法檢測(cè)；（3）有正常理解、溝通能力，能夠積極配合研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有心、肝、腎等嚴(yán)重功能障礙；（2）合并惡性腫瘤；（3）有免疫系統(tǒng)疾病；（4）有精神疾??；（5）既往確診HIV感染。篩查病例中，女180例，男220例；年齡：出生1 h～100歲。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過。本人或家屬自愿參與研究，簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法 應(yīng)用邁克i3000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑（聯(lián)合檢測(cè)HIV-1/HIV-2抗體和HIV-1 p24抗原第四代試劑）在本院檢驗(yàn)科免疫室進(jìn)行檢測(cè)。（1）檢測(cè)原理：利用雙抗夾心檢測(cè)原理。第一步，樣品中HIV-1/HIV-2抗體和HIV-1 p24抗原結(jié)合至HIV-1/HIV-2抗原和HIV-1 p24單克隆抗體包被的磁微粒上，形成抗原抗體復(fù)合物；第二步，洗滌后加入吖啶酯標(biāo)記的HIV-1/HIV-2抗原和HIV-1 p24單克隆抗體，形成雙抗原和雙抗體夾心復(fù)合物；第三步，再次洗滌后加入底物液，發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，測(cè)量相對(duì)發(fā)光值（RLU），RLU與樣本中抗體和抗原的含量呈正比例。（2）標(biāo)本采集與處理：按標(biāo)準(zhǔn)人體靜脈血清或血漿（0.1 mg肝素鈉抗凝1 mL血液，1.5～2.2 mg EDTA抗凝1 mL血液）常規(guī)離心處理（3 000 r/min、8 cm離心半徑，持續(xù)離心10 min），立即檢測(cè)，若24 h內(nèi)不能檢測(cè)，樣本須分離后保存血清或血漿，2～8 ℃條件下可保存7 d，-20 ℃條件下可長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融。（3）檢測(cè)步驟：準(zhǔn)備檢測(cè)儀器及試劑，檢查檢測(cè)所需消耗品，根據(jù)說明適當(dāng)裝載消耗品，保證消耗品充足；試劑盒上機(jī)檢測(cè)前用儀器掃描試劑包條碼獲取有效參數(shù)，并在儀器上執(zhí)行磁珠混勻兩次，以免生成氣泡，使其處于懸浮狀態(tài)；在儀器配套樣本架中放置樣本容器，按照說明裝載樣本架，于儀器軟件中輸入基本的樣本信息，點(diǎn)擊“運(yùn)行”，系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)試驗(yàn)和檢測(cè)；檢測(cè)結(jié)果以RLU評(píng)價(jià)，檢測(cè)樣本發(fā)光值（S）與cut-off（CO）比值（S/CO）≥1為陽性，S/COlt;1為陰性。

1.2.2 膠體金法 應(yīng)用英科新創(chuàng)HIV（膠體金）檢測(cè)試劑盒，在本院檢驗(yàn)科免疫室進(jìn)行檢測(cè)。（1）檢測(cè)原理：采用膠體金免疫技術(shù)和層析原理，定性檢測(cè)人全血、血清或血漿樣本中的HIV-1/HIV-2抗體。檢測(cè)陽性樣本時(shí)，樣本中HIV抗體與膠體金標(biāo)記抗原（大腸桿菌中表達(dá)）結(jié)合形成復(fù)合物，由于層析作用，復(fù)合物沿紙條向前移動(dòng)，經(jīng)過檢測(cè)線時(shí)與預(yù)包被的重組HIV-Ag（大腸桿菌表達(dá)）結(jié)合形成“Au-HIV（1+2）-Ag-HIV-Ab-HIV（1+2）-Ag”夾心物而凝聚顯色，游離的膠體金標(biāo)記重組Au-HIV（1+2）-Ag在對(duì)照線處與鼠抗HIV單克隆抗體結(jié)合而富集顯色。陰性樣本則僅在對(duì)照線處顯色，30 min內(nèi)觀察結(jié)果即可。（2）標(biāo)本采集與處理：采集患者3 mL空腹靜脈血，常規(guī)離心處理（3 000 r/min、8 cm離心半徑，持續(xù)離心處理10 min），分離血清，立即檢測(cè)，或?qū)⒀簶?biāo)本保存于4 ℃冰箱中待檢。（3）檢測(cè)步驟：取出檢測(cè)試劑及器材；使用微量加樣器將血液標(biāo)本滴加60 μL到試劑卡加樣處；加樣30 min內(nèi)觀察檢測(cè)結(jié)果；檢測(cè)線、對(duì)照線同時(shí)可見為陽性，只見對(duì)照線為陰性，若沒有對(duì)照線則檢測(cè)無效，需重新檢測(cè)。

1.2.3 WB 按標(biāo)準(zhǔn)采集患者EDTA K2抗凝血5 mL，離心分離后，取血漿，送交貴州省臨床檢驗(yàn)中心，由檢驗(yàn)中心工作人員以WB檢測(cè)HIV 1+2型抗體（當(dāng)檢測(cè)抗體陰性時(shí)，加做病毒核酸RT-PCR熒光探針法檢測(cè)，若WB陰性，但有HIV表現(xiàn)或行為且核酸檢測(cè)為陽性仍判定為陽性），將檢測(cè)結(jié)果傳回本院。本研究中所有檢測(cè)均參照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2020年修訂版）》實(shí)施。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 兩種檢測(cè)方法與WB對(duì)照分析 以WB檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分別統(tǒng)計(jì)磁微粒化學(xué)發(fā)光法與WB對(duì)照分析結(jié)果、膠體金法與WB對(duì)照分析結(jié)果，統(tǒng)計(jì)真陰性、真陽性、假陰性、假陽性情況。

1.3.2 兩種檢測(cè)方法診斷效能對(duì)比 統(tǒng)計(jì)磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法、膠體金法診斷HIV感染效能的各項(xiàng)指標(biāo)，包括敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性陰性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值，進(jìn)行對(duì)比分析。敏感度=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陰性）例數(shù)×100%；特異度=真陰性例數(shù)/（假陽性+真陰性）例數(shù)×100%；準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）例數(shù)/總例數(shù)×100%；陽性預(yù)測(cè)值=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陽性）例數(shù)×100%；陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/（真陰性+假陰性）例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究中所有統(tǒng)計(jì)學(xué)分析在SPSS 26.0系統(tǒng)中進(jìn)行。以Kappa一致性檢驗(yàn)兩種檢測(cè)方法與WB診斷的一致性，Kappa值gt;0.75視為一致性良好，Kappa值0.40～0.75視為一致性一般，Kappa值lt;0.40視為一致性差。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用字2檢驗(yàn)。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 磁微粒化學(xué)發(fā)光法與WB檢測(cè)結(jié)果對(duì)照分析

WB檢測(cè)HIV感染結(jié)果：269例陽性，131例陰性。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果：271例陽性，129例陰性。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)與WB檢測(cè)的Kappa值為0.927，一致性良好。見表1。

2.2 膠體金法與WB檢測(cè)結(jié)果對(duì)照分析

膠體金法檢測(cè)結(jié)果：263例陽性，137例陰性。膠體金法檢測(cè)與WB檢測(cè)的Kappa值為0.875，一致性良好。見表2。

2.3 兩種檢測(cè)方法診斷HIV感染的效能對(duì)比

磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法診斷HIV感染的敏感度、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測(cè)值均高于膠體金法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；兩種方法診斷HIV感染的特異度、陽性預(yù)測(cè)值比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。見表3。

3 討論

HIV于1981年首次發(fā)現(xiàn)于美國(guó)，至2015年人類首次完全確定該病毒毒株的所有源[9]。該病毒一旦侵入人體，會(huì)快速整合進(jìn)入宿主細(xì)胞基因組當(dāng)中，即使予以抗病毒治療也無法清除病毒。HIV是一種能夠攻擊人類免疫系統(tǒng)的病毒，可經(jīng)血液、精液、直腸液、陰道分泌物、母乳等傳播，人體感染后可發(fā)展為艾滋病[10]。艾滋病屬于我國(guó)乙類傳染病，臨床危害巨大，可引發(fā)多種疾病或惡性腫瘤，具有高死亡率[11]。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法、膠體金法是臨床常用HIV感染篩查方法[12]。本研究將這兩種臨床常用HIV感染篩查法與金標(biāo)準(zhǔn)WB進(jìn)行對(duì)照分析，以便客觀評(píng)價(jià)這兩種篩查手段的應(yīng)用效能。

本研究中，與WB的對(duì)照分析結(jié)果顯示，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法與WB有良好一致性，Kappa值為0.927；膠體金法與WB的Kappa值為0.875，盡管也具有良好一致性，但磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)HIV感染與金標(biāo)準(zhǔn)更為接近。進(jìn)一步比較兩種檢測(cè)方法的各項(xiàng)診斷效能參數(shù)，結(jié)果顯示，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法診斷HIV感染的敏感度、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測(cè)值均高于膠體金法，提示磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法篩查HIV感染的效能優(yōu)于膠體金法。分析原因，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法基于磁性顆粒特性及化學(xué)發(fā)光原理進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合了化學(xué)發(fā)光法高敏感度、高特異性優(yōu)點(diǎn)，對(duì)低濃度HIV抗體也有較高識(shí)別度，可以提高診斷效能[13]。另外，磁微粒化學(xué)發(fā)光法能夠精確控制檢測(cè)過程中的反應(yīng)條件、操作步驟，能夠盡量排除非特異性結(jié)合，減少假陽性結(jié)果，降低漏診率[14]。本研究認(rèn)為，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法的高敏感度特性及檢測(cè)過程中的精確控制優(yōu)勢(shì)決定其篩查效能較高，能夠獲得與WB檢測(cè)相近的檢查結(jié)果，提升HIV感染診斷效能。膠體金法基于膠體金顆粒與蛋白質(zhì)分子結(jié)合原理實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，其主要優(yōu)勢(shì)在于簡(jiǎn)便、快速、易于觀察、能在低溫中保存較長(zhǎng)時(shí)間[15]。然而，膠體金法容易受樣本質(zhì)量、試劑性能、操作技術(shù)等諸多因素干擾，容易出現(xiàn)假陰性檢測(cè)結(jié)果。另外，膠體金法對(duì)于HIV抗體的敏感度相對(duì)較低，若患者感染時(shí)間較短，血液中病毒含量較低，往往難以檢測(cè)出HIV抗體。此外，膠體金法檢測(cè)結(jié)果的判定依賴于顏色變化情況，低濃度HIV抗體的反應(yīng)強(qiáng)度較低，顏色淡或暗，會(huì)降低診斷敏感度，影響診斷準(zhǔn)確性[16]。因此，膠體金法的整體篩查效能相對(duì)較低。膠體金法上述不足決定其檢測(cè)結(jié)果與WB檢測(cè)差異較大，容易漏診。綜合分析兩種檢測(cè)方法的相關(guān)診斷效能數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法更具優(yōu)勢(shì)，更有助于準(zhǔn)確識(shí)別HIV感染者，降低HIV傳播風(fēng)險(xiǎn)。需要指出的是，無論是磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法還是膠體金法均存在自身優(yōu)勢(shì)與不足[17-18]。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法在篩查效能方面更具優(yōu)勢(shì)，但對(duì)于檢測(cè)設(shè)備、檢查技術(shù)具有較高依賴性，對(duì)檢測(cè)設(shè)備及檢查技術(shù)的要求較高，檢查所需時(shí)間也相對(duì)較長(zhǎng)，而且檢查存在一定假陽性風(fēng)險(xiǎn)[19]。膠體金法在HIV感染篩查效能方面低于磁微粒化學(xué)發(fā)光法，但檢測(cè)更為快捷簡(jiǎn)便，對(duì)設(shè)備、儀器無要求，只需檢測(cè)試劑盒即可完成檢測(cè)，檢測(cè)成本低，更適合基層機(jī)構(gòu)及現(xiàn)場(chǎng)篩查[20]。

綜上所述，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法篩查HIV感染效能優(yōu)于膠體金法，能夠提升篩查準(zhǔn)確度，篩查結(jié)果與WB檢測(cè)結(jié)果更為相近，宜作為HIV感染篩查的首選手段。盡管如此，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法、膠體金法在HIV感染篩查中各有優(yōu)勢(shì)與不足，臨床中具體篩查方法的選擇仍需結(jié)合醫(yī)療機(jī)構(gòu)實(shí)際檢測(cè)條件、受檢者狀況來決定。

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（收稿日期：2024-12-10） （本文編輯：陳韻）