無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本行核酸檢測(cè)對(duì)降低經(jīng)血傳播HIV的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

霍寶鋒?張?zhí)戾?劉智敏?溫芳丹

[摘要] 目的 探討無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本行核酸檢測(cè)對(duì)降低經(jīng)血傳播HIV（人類(lèi)免疫缺陷病毒）風(fēng)險(xiǎn)的影響。 方法 選取2016年1月～2017年1月無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本24317份，所有獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前均接受完整健康征詢(xún)及全面健康體檢，所有血液標(biāo)本均經(jīng)血液快速檢測(cè)，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）與核酸檢測(cè)。分析ELISA檢測(cè)與核酸檢測(cè)結(jié)果。 結(jié)果 24317份血液標(biāo)本經(jīng)血清學(xué)兩次檢測(cè)，24107份合格，210份不合格，不合格標(biāo)本中12份ELISA三項(xiàng)檢測(cè)均不合格；24107份ELISA檢測(cè)合格標(biāo)本經(jīng)核酸檢測(cè)出1份HIV-RNA呈陽(yáng)性，并經(jīng)生物公司實(shí)驗(yàn)證實(shí)；ELISA檢測(cè)不合格標(biāo)本中，核酸檢測(cè)57份呈陰性。 結(jié)論 核酸檢測(cè)有助于提高無(wú)償獻(xiàn)血者的血液質(zhì)量，減低經(jīng)血傳播HIV等病毒的風(fēng)險(xiǎn)，保障臨床安全用血；同時(shí)，臨床應(yīng)加強(qiáng)兩種檢測(cè)方式的聯(lián)合應(yīng)用，最大限度的避免病毒感染漏檢現(xiàn)象。

[關(guān)鍵詞] 核酸檢測(cè)；人類(lèi)免疫缺陷病毒；血液標(biāo)本；風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

[中圖分類(lèi)號(hào)] R392 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）10-229-03

Risk evaluation of blood samples from volunteer donors undergoing nucleic acid detection in reducing blood transmission of HIV

HUO Baofeng ZHANG Tianbi LIU Zhimin WEN Fangdan

Shaoguan Central Blood Station，Shaoguan 512026，China

[Abstract] Objective To explore the effect of blood samples from volunteer donors undergoing nucleic acid detection on reducing risk of blood transmission of HIV （human immunodeficiency virus）. Methods 24317 blood samples from volunteer donors from January 2016 to January 2017 were selected.All volunteer donors were given complete health consultation and comprehensive physical examination.And all blood samples were all given rapid detection by blood transmission such as enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and nucleic acid detection. Results Of ELISA and nucleic acid detection were analyzed. Results In 24317 blood samples detected by serology，there were 24107 qualified samples and 210 unqualified samples.In unqualified samples，three detections of ELISA in 12 samples were unqualified.In 24107 qualified samples whose ELISA were qualified，1 sample was with positive HIV-RNA after nucleic acid detection and it was experimentally proved by biological company.In unqualified samples detected by ELISA，nucleic acid detection of 57 samples were negative. Conclusion Nucleic acid detection is helpful to improve blood quality of volunteer donors，reduce risk of blood transmission of HIV and guarantee clinical safety of blood.In addition，combined application of two detections in clinic should be enhanced to maximumly avoid missed detection of virus infection

[Key words] Nucleic acid detection；Human immunodeficiency virus；Blood samples；Risk evaluation

輸血是一種通過(guò)靜脈經(jīng)血液輸注給患者的治療方法，目前已廣泛應(yīng)用于臨床，且具有無(wú)可替代的地位。但受血液安全性影響，輸血治療存在著較大風(fēng)險(xiǎn)，血液質(zhì)量對(duì)治療效果亦具有顯著影響。因此血站工作人員一直將確保血液安全、減小血液傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)，尤其是HIV感染作為工作質(zhì)量持續(xù)改進(jìn)的目標(biāo)[1-2]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，病毒隱匿性、變異性、病毒感染“窗口期”及試劑靈敏度等均在很大程度上影響檢測(cè)結(jié)果[3]。核酸檢測(cè)技術(shù)能夠有效檢測(cè)窗

口期病毒感染、隱匿性與變異性病毒，降低漏檢率，從而提高血液安全性。根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生部門(mén)要求，核酸檢測(cè)已作為無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本常規(guī)檢測(cè)方法進(jìn)行病毒感染篩查[4]。本研究在傳統(tǒng)血清抗體酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）基礎(chǔ)上加用核酸檢測(cè)，深入分析核酸檢測(cè)在減低經(jīng)血傳播HIV風(fēng)險(xiǎn)中的應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2017年1月無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本24317份，所有獻(xiàn)血者體檢健康，符合獻(xiàn)血要求，血液標(biāo)本均經(jīng)乙肝金標(biāo)試紙條篩查與干式生化分析儀篩查谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）合格。各獻(xiàn)血者均留取2管血液，分別5mL。1管采用EDTA-K2抗凝，以備ALT、酶免及血型檢測(cè)，1管采用無(wú)菌、無(wú)RNA酶與DNA酶帶分離膠的EDTA-K2抗凝，以備核酸檢測(cè)。將標(biāo)本置于2℃～8℃保存，其中用于核酸檢測(cè)標(biāo)本于4h內(nèi)進(jìn)行離心處理，將血漿與細(xì)胞分離，運(yùn)輸時(shí)保持2℃～10℃。檢測(cè)需于72h內(nèi)完成。

1.2 儀器與試劑

儀器：全自動(dòng)加樣酶免一體機(jī)、離心機(jī)、全自動(dòng)生化分析儀、熒光定量PCR儀、匯集與核酸提取儀、核酸檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)。試劑：ALT、ELISA、乙肝表面抗原（HBsAg）、抗-丙型肝病毒（抗-HCV）、抗HIV等檢測(cè)試劑，質(zhì)控物。

1.3 方法

ELISA檢測(cè)：采用加樣酶免一體機(jī)檢測(cè)抗-HIV、抗-HCV、抗HBsAg，所有標(biāo)本均由不同人員與廠家試劑進(jìn)行兩次檢測(cè)，試劑分別由（北京萬(wàn)泰，試劑批號(hào)：H20160909）和（B10-RAD，試劑批號(hào)：6J0373）提供，嚴(yán)格遵照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。ALT高于40U/L視為不合格，ELISA檢測(cè)S/CO值0.7～1.0，灰區(qū)；S/CO≥1.0，有反應(yīng)性，進(jìn)行雙孔復(fù)試，雙孔中有1孔存在灰區(qū)或反應(yīng)性判定不合格。分別記錄單試劑陽(yáng)性率和雙試劑陽(yáng)性率。核酸檢測(cè)：次日對(duì)血清學(xué)檢測(cè)合格及待測(cè)標(biāo)本予以核酸檢測(cè)，試齊由（達(dá)安基因，試劑批號(hào)：2016003）提供，將核酸標(biāo)本置于離心機(jī)上離心上20min、離心速度為3000r/min。取血清學(xué)檢測(cè)合格的8份混樣標(biāo)本進(jìn)行三聯(lián)檢測(cè)（HIV-RNA、HCV-RNA、HBV-DNA），設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、陽(yáng)性質(zhì)控各1個(gè)，采用加樣器將8個(gè)標(biāo)本全自動(dòng)匯集至一個(gè)pool內(nèi)，各pool內(nèi)均含有對(duì)照組，隨后提取、加至中轉(zhuǎn)板、反應(yīng)板。對(duì)pool檢測(cè)混樣標(biāo)本拆分至單人份檢測(cè)，若拆分試驗(yàn)有反應(yīng)，判定核酸檢測(cè)為陽(yáng)性，拆分試驗(yàn)呈陰性者判定核酸檢測(cè)為陰性。對(duì)于血清學(xué)檢測(cè)不合格標(biāo)本同樣進(jìn)行上述檢測(cè)。將核酸檢測(cè)呈陽(yáng)性標(biāo)本遞送至生物科技公司進(jìn)行確診。

2 結(jié)果

2.1 ELISA檢測(cè)結(jié)果分析

24317份標(biāo)本中，有210份ELISA檢測(cè)不合格，24107份合格，其中12份ELISA三項(xiàng)檢測(cè)不合格。見(jiàn)表1。

2.2 核酸檢測(cè)結(jié)果分析

ELISA檢測(cè)合格標(biāo)本中，核酸檢出1份HIV-RNA呈陽(yáng)性，而在ELISA檢測(cè)不合格標(biāo)本中，核酸檢測(cè)57份呈陰性。見(jiàn)表2～3。

3 討論

無(wú)償獻(xiàn)血是輸血治療的主要血液來(lái)源，減低經(jīng)血傳播風(fēng)險(xiǎn)，尤其是HIV感染，是醫(yī)療部門(mén)關(guān)注的重要話(huà)題，同時(shí)也是采血站持續(xù)改進(jìn)工作質(zhì)量的首要目標(biāo)[5-6]。隨著血液檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，HIV、HCV感染“窗口期”明顯縮短，而窗口期是指病原感染開(kāi)始至可采用檢測(cè)方法檢測(cè)出病原時(shí)間[7-8]，臨床研究顯示，采用ELISA檢測(cè)抗HIV、抗HCV、HBsAg的“窗口期”平均為22d、56d、82d，應(yīng)用核酸檢測(cè)則可進(jìn)一步縮短平均窗口期，提高經(jīng)血病毒檢出率[6]。

據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，我國(guó)部分地區(qū)HIV漏檢率仍有0.0044%，由于HIV對(duì)人類(lèi)健康危害性極大，一旦感染，無(wú)法治愈，給患者自身、家庭及社會(huì)均可造成經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[9-10]，因此加強(qiáng)血液檢測(cè)技術(shù)持續(xù)改進(jìn)，避免HIV漏檢現(xiàn)象具有重大意義。目前，血站對(duì)血液的采取的檢測(cè)策略是：血液采集前應(yīng)用金標(biāo)快速法對(duì)HBsAg與ALT進(jìn)行檢測(cè)，血液回站后，由不同醫(yī)務(wù)人員采用不同廠家的試劑進(jìn)行ELISA檢測(cè)，隨后予以核酸檢測(cè)[11]。本研究中，24317份標(biāo)本中，有210份ELISA檢測(cè)不合格，24107份合格，其中12份抗HIV、抗HCV及HBsAg經(jīng)ELISA檢測(cè)均為不合格，ALT快速檢測(cè)不合格129份。血液ELISA檢測(cè)報(bào)廢率較以往調(diào)查研究有所下降。提示對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行健康詢(xún)問(wèn)、常規(guī)體檢及ALT檢測(cè)是確保血液安全的首要環(huán)節(jié)。在24107份ELISA檢測(cè)合格血液標(biāo)本中，由核酸檢測(cè)出HIV-RNA呈陽(yáng)性1份，占0.001%，血液篩查結(jié)果與襄陽(yáng)地區(qū)相似，與南寧地區(qū)相比有所降低。至于210份ELISA三項(xiàng)檢測(cè)不合格血液標(biāo)本中，核酸檢測(cè)陽(yáng)性45份、陰性57份，表明ELISA檢測(cè)與核酸檢測(cè)兩種方式具有相互補(bǔ)充作用，臨床實(shí)際檢測(cè)中可充分發(fā)揮各自檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，提高HIV等病毒感染檢出率。另外，1份ELISA檢測(cè)合格但核酸檢測(cè)HIV呈陽(yáng)性標(biāo)本，經(jīng)生物公司再次檢測(cè)證實(shí)為HIV感染，表明核酸在檢測(cè)HIV感染的隱匿性、變異性、“窗口期”中具較高的靈敏度，可有效提高HIV感染檢出率，避免HIV感染造成不良事件，從而有效預(yù)防醫(yī)療事故，減少醫(yī)療糾紛[12-13]。同時(shí)有助于維護(hù)社會(huì)公共衛(wèi)生安全。但核酸檢測(cè)技術(shù)對(duì)整個(gè)檢測(cè)操作流程及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境等要求較高，臨床應(yīng)用務(wù)必嚴(yán)格管理實(shí)驗(yàn)標(biāo)與耗材，科學(xué)規(guī)劃與設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室，預(yù)防交叉感染，降低假陰性率，為檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性提供有力保障[14-15]。同樣，ELISA檢測(cè)亦需加強(qiáng)質(zhì)量管理，方可保證準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。

綜上所述，核酸檢測(cè)可有效降低經(jīng)血傳播HIV風(fēng)險(xiǎn)，保障臨床輸血安全性，減少醫(yī)療事故的發(fā)生，為無(wú)償獻(xiàn)血工作的順利開(kāi)展提供重要支持；同時(shí)，采血與供血機(jī)構(gòu)應(yīng)遵循對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行健康咨詢(xún)、常規(guī)體檢、快速檢測(cè)、合理處理標(biāo)本、血清學(xué)聯(lián)合核酸檢測(cè)的原則，盡可能的提高血液質(zhì)量，控制經(jīng)血傳播HIV等疾病風(fēng)險(xiǎn)。

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（收稿日期：2017-04-05）