蘆薈大黃素抑制人黑素瘤細(xì)胞A375增殖和侵襲的作用及機(jī)制初探

[摘要]目的：探討蘆薈大黃素經(jīng)AKT/mTOR途徑抑制人黑素瘤細(xì)胞（A375）增殖和侵襲的機(jī)制。方法：設(shè)A375細(xì)胞組、紫杉醇組（500 μmol·ml-1）、蘆薈大黃素低劑量組（500 μmol·ml-1）、高劑量組（1 000 μmol·ml-1），每組設(shè)6個(gè)平行樣，培養(yǎng)72 h。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法測(cè)定各組細(xì)胞增殖水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期，Transwell法測(cè)定細(xì)胞侵襲水平，劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移水平，RT-qPCR及Western blot法檢測(cè)細(xì)胞AKT、P-AKT、mTOR mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：與A375細(xì)胞組比較，紫杉醇組、蘆薈大黃素低、高劑量組OD值、存活率、穿膜數(shù)、遷移距離、AKT、P-AKT、mTOR mRNA和蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05），凋亡率、G2/M升高（P＜0.05）；與紫杉醇組比較，蘆薈大黃素低劑量組OD值、存活率、穿膜數(shù)、遷移距離、AKT、P-AKT、mTOR mRNA和蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05），凋亡率、G2/M降低（P＜0.05），而蘆薈大黃素高劑量組OD值、存活率、穿膜數(shù)、遷移距離、凋亡率、G2/M、AKT、P-AKT、mTOR mRNA和蛋白表達(dá)水平無明顯變化（P＞0.05）；與蘆薈大黃素低劑量組比較，蘆薈大黃素高劑量組OD值、存活率、穿膜數(shù)、遷移距離、AKT、P-AKT、mTOR mRNA和蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05），凋亡率、G2/M降低（P＜0.05）。結(jié)論：蘆薈大黃素對(duì)黑素瘤細(xì)胞增殖和侵襲具有明顯抑制作用，其機(jī)制可能與蘆薈大黃素抑制AKT/mTOR通路的激活有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]蘆薈大黃素；AKT/mTOR途徑；人黑素瘤；細(xì)胞增殖；細(xì)胞侵襲

[中圖分類號(hào)]R739.5" " [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A" " [文章編號(hào)]1008-6455（2025）03-0013-05

Inhibitory Effect of Aloe-emodin on Proliferation and Invasion of Human Melanoma Cells A375 Via AKT/mTOR Pathway

LI Yanxin1， ZHAO Aolin1， RUAN Ying2

（ 1.Department of Dermatovenereology， Xianning Central Hospital， the First Affiliated Hospital of Hubei University of Science and Technology， Xianning 437100， Hubei， China; 2.Hubei University of Science and Technology General Practice National Experimental Teaching Demonstration Center， Xianning 437100， Hubei， China ）

Abstract： Objective" To explore the mechanism of aloe emodin inhibiting proliferation and invasion of human melanoma cells （A375） via AKT/mTOR pathway. Methods" A375 cell group， paclitaxel group （500 μmol·ml-1）， aloe emodin low-dose group （500 μmol·ml-1） and high-dose group （1 000 μmol·ml-1） were set up， and 6 parallel samples were cultured for 72h in each group. After the experiment， the cell proliferation level of each group was measured by tetramethylazolium blue （MTT） method， cell apoptosis rate and cell cycle detected by flow cytometry， cell invasion level determined by Transwell method， and cell migration level was detected by scar assay. The mRNA and protein expression levels of AKT and mTOR were detected by RT-qPCR and Western blot. Results" Compared with A375 cell group， the OD value， survival rate， membrane penetration number， migration distance， mRNA and protein expression levels of AKT and mTOR in paclitaxel group， aloe emodin low-dose and high-dose groups were decreased（P＜0.05）， while apoptosis rate and G2/M were increased（P＜0.05）. Compared with paclitaxel group， the OD value， survival rate， membrane penetration number， migration distance， mRNA and protein expression levels of AKT and mTOR were increased in aloe emodin low-dose group（P＜0.05）， while apoptosis rate and G2/M were decreased（P＜0.05）. There were no significant changes in OD value， survival rate， membrane penetration number， migration distance， apoptosis rate， G2/M， AKT and mTOR mRNA and protein expression levels in aloe emodin high-dose group（P＞0.05）. Compared with aloe emodin low-dose group， the OD value， survival rate， membrane penetration number， migration distance， mRNA and protein expression levels of AKT and mTOR were decreased in aloe emodin high-dose group （P＜0.05）， and apoptosis rate and G2/M were decreased（P＜0.05）. Conclusion" Aloe emodin can significantly inhibit the proliferation and invasion of melanoma cells， and the mechanism may be related to the inhibitory effect of aloe emodin on the activation of AKT/mTOR pathway.

Key words： aloe emodin; AKT/mTOR pathway; human melanoma; cell proliferation; cell invasion

惡性黑素瘤是發(fā)病率較高的癌癥，黑素瘤患者的主要死亡原因?yàn)榱馨拖到y(tǒng)和其他器官的轉(zhuǎn)移。在接受傳統(tǒng)治療后轉(zhuǎn)移性黑素瘤患者的平均生存時(shí)間僅為6～12個(gè)月，5年生存率始終低于10%[1]。因此迫切需要開發(fā)可用于黑素瘤治療的有效藥物。蘆薈大黃素為蒽醌類化合物，化學(xué)式為C15H10O5，主要來源于蓼科植物掌葉大黃的干燥根和根莖。蘆薈大黃素已被證明具有顯著的抗炎、抗氧化和抗癌特性[2]。研究證明[3-4]，蘆薈大黃素對(duì)多種癌細(xì)胞具有抗增殖作用，例如膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌和前列腺癌。細(xì)胞增殖和侵襲對(duì)于預(yù)防癌癥進(jìn)展和腫瘤發(fā)生至關(guān)重要。細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）是調(diào)節(jié)細(xì)胞存活、增殖、侵襲的重要信號(hào)分子[5]。ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路控制各種決定細(xì)胞活力的促凋亡和抗凋亡機(jī)制。AKT作為抗細(xì)胞凋亡信號(hào)分子并通過線粒體途徑抑制細(xì)胞凋亡[6]。截止目前為止尚未見蘆薈大黃素對(duì)人黑素瘤細(xì)胞生物學(xué)行為及其機(jī)制的相關(guān)研究。因此，本研究擬探討蘆薈大黃素對(duì)人黑素瘤細(xì)胞活力、遷移和侵襲潛能、細(xì)胞凋亡、ERK表達(dá)和AKT/mTOR信號(hào)通路的影響，以期為人黑素瘤的治療提供理論依據(jù)。

1" 材料和方法

1.1 主要試劑及儀器：Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基（DMEM）（美國賽默飛世生物科技有限公司，批號(hào)52659）；胎牛血清（FBS，中國碧云天生物科技有限公司，批號(hào)：2021568）；蘆薈大黃素（大閩生物科技公司，批號(hào)320214）；紫杉醇（美國MerckKGaA生物科技有限公司，批號(hào)DF-51329）；MTT試劑盒（美國Merck Millipore，批號(hào)：635987）；MultiskanMK3酶標(biāo)儀（美國賽默飛世生物科技有限公司）；Matrigel、Transwell腔室系統(tǒng)（澳大利亞BD Biosciences，批號(hào)53652、52146）；結(jié)晶紫（中國碧云天生物科技，批號(hào)：2036695）；DE-8596光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯公司）；TRIzol?試劑盒（美國Invitrogen，批號(hào)：30219）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（中國Trans Gen Biotech Co Ltd，批號(hào)：03268）；AceQqPCR SYBR-Green Master Mix試劑盒（美國Bio-Rad Laboratories Inc，批號(hào)：54987）；RIPA裂解緩沖液（德國CWBio生物科技，批號(hào)：BG-30214）；BCA試劑盒（Beyotime Institute of Biotechnology，批號(hào)：418954）；10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠、聚偏二氟乙烯膜（美國Amersham Bciences Corp，批號(hào)：20159、63257）；抗AKT（ab92536；稀釋度，1∶1 000，英國acam）、mTOR（ab76003；稀釋度，1∶1 000，英國Acam）、GAPDH（ab208938；稀釋度，1∶5 000，英國acam）；辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（#7074；1∶1 000；Cell Signaling Technology，Inc）；ECL試劑（Research-bio，批號(hào)：DF-74859662）；Image-Pro Plus軟件（6.0版；Media Cybernetics，Inc）。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及分組：購自American Type Culture Collection的人黑素瘤細(xì)胞A375在Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基（DMEM）中培養(yǎng)，在5% CO2培養(yǎng)箱中補(bǔ)充10%胎牛血清（FBS）常規(guī)培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境為：37℃、5%CO2、2%O2、93%N2。分組設(shè)計(jì)具體如下。A375細(xì)胞組：細(xì)胞濃度為5×106/ml的人黑素瘤細(xì)胞A375液在10%胎牛血清的DMEM中培養(yǎng)；紫杉醇組：人黑素瘤細(xì)胞A375培養(yǎng)方法同A375細(xì)胞組，加入紫杉醇，使紫杉醇濃度為500 μmol·ml-1；蘆薈大黃素低、高劑量組的人黑素瘤細(xì)胞A375培養(yǎng)方法同A375細(xì)胞組，各組分別加入蘆薈大黃素（分子式為C15H10O5），使蘆薈大黃素濃度分別為500μmol·ml-1、1 000 μmol·ml-1。以上各組每孔設(shè)6個(gè)平行樣，培養(yǎng)72 h。

1.3 細(xì)胞增殖測(cè)定：細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，將人黑素瘤細(xì)胞以1×104個(gè)細(xì)胞/孔的200 μl培養(yǎng)基接種到96孔板中。孵育指定72 h后，將20 μl MTT溶液[磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中的5 mg/ml]添加到每個(gè)孔中并再孵育4 h。將每個(gè)孔中的培養(yǎng)基替換為200 μl DMSO，以溶解MTT分析中形成的甲臜晶體。在酶標(biāo)儀上以490 nm的波長讀取溶液的吸光度。存活率=（實(shí)驗(yàn)組OD-A375細(xì)胞組OD）/（實(shí)驗(yàn)組OD-蒸餾水空白調(diào)零組OD）×100%。

1.4 細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期的測(cè)定：根據(jù)制造商的說明，使用流式細(xì)胞術(shù)分析AnnexinV和碘化丙啶（PI）細(xì)胞凋亡試劑盒測(cè)定細(xì)胞凋亡。將收獲的細(xì)胞（1×104個(gè)/毫升）重懸于結(jié)合緩沖液中，與5 ml膜聯(lián)蛋白-V孵育，然后與10 ml PI孵育。細(xì)胞在室溫下在黑暗中保持15 min，并使用BD FACSCanto流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡率。將細(xì)胞接種在60 mm培養(yǎng)皿中。附著后用100 μM芹菜素或DMSO處理細(xì)胞24 h。然后收獲細(xì)胞并用冰冷的75%乙醇固定。將細(xì)胞沉淀重懸于由480 μl PBS、5 μl PI（5 mg/ml）、5 μl RNase（10 mg/ml）和10 μl Triton X-100（10%）組成的結(jié)合緩沖液中。在黑暗中室溫孵育30 min后，使用流式細(xì)胞儀檢查細(xì)胞周期相分布。

1.5 細(xì)胞侵襲遷移水平測(cè)定：使用帶有8 μm孔聚碳酸酯濾芯的Transwell小室進(jìn)行細(xì)胞侵襲試驗(yàn)。每個(gè)插入物的上側(cè)涂有10 μl基質(zhì)膠（3 mg/ml）。培養(yǎng)結(jié)束的細(xì)胞（1×106/ml）在基質(zhì)膠包被的Transwell插入物上培養(yǎng)，下室包含DMEM培養(yǎng)基，附加有10% FBS作為趨化劑，孵育72 h后，將膜下表面的侵入細(xì)胞用冷凍的3.7%甲醇固定15 min，并用0.5%結(jié)晶紫染色15 min。使用倒置光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞，并通過在200倍放大倍率下計(jì)算五個(gè)隨機(jī)、非重疊視野中出現(xiàn)在聚碳酸酯膜下表面的細(xì)胞數(shù)量來確定侵襲性。培養(yǎng)結(jié)束的人黑素瘤細(xì)胞，重懸于無血清培養(yǎng)基中，在6孔板（5×104）中孵育24 h（孵育后的細(xì)胞第2天用一層培養(yǎng)板覆蓋）。在室溫下孵育24 h后，用200 μl無菌移液器吸頭刮擦細(xì)胞并用PBS洗滌三次。觀察細(xì)胞的遷移，并使用光學(xué)顯微鏡（放大倍數(shù)，100×；奧林巴斯公司）在24 h拍攝圖像。

1.6 細(xì)胞AKT、P-AKT、mTOR mRNA水平測(cè)定：使用TRIzol?試劑盒從人黑素瘤細(xì)胞中提取總RNA，并使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。AceQqPCRSYBR-GreenMasterMix用于qPCR反應(yīng)。熱循環(huán)條件如下：96℃初始變性4 min；然后是95℃變性20 s、60℃退火30 s和72℃延伸30 s的40個(gè)循環(huán)。使用2-ΔΔCt方法計(jì)算AKT、mTOR mRNA的表達(dá)水平。

1.7 細(xì)胞AKT、P-AKT、mTOR蛋白水平測(cè)定：細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，收獲細(xì)胞并在冰上裂解緩沖液中孵育30 min，然后在4℃下以12 000 g離心10 min澄清裂解物以獲得上清液（總細(xì)胞裂解物）。使用考馬斯亮藍(lán)（CBB）方法測(cè)定總蛋白質(zhì)濃度。對(duì)于蛋白質(zhì)印跡，25 μg總蛋白通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離并轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。在室溫下用5%脫脂奶粉封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)2 h后，將膜與適當(dāng)濃度的相應(yīng)AKT、P-AKT、mTOR一抗在4℃下孵育過夜，清洗膜以去除未結(jié)合的一抗后，將它們與辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗兔或抗小鼠二抗（1∶5 000）在室溫下孵育1 h。最后用PBS洗滌膜，并使用ECL試劑盒（APG BIO，中國上海）顯影1 min，通過圖像掃描使蛋白質(zhì)條帶可視化，并在將數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化為GAPDH蛋白作為內(nèi)部對(duì)照后，使用Image Lab軟件（4.0版；Bio-Rad，美國）測(cè)量每個(gè)條帶的光密度。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：以上試驗(yàn)均重復(fù)3次，應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)均表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s），使用單因素方差分析及LSD-t事后檢驗(yàn)比較，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2" 結(jié)果

2.1 各組人黑素瘤細(xì)胞A375 OD值、存活率的比較：與A375細(xì)胞組比較，紫杉醇組、蘆薈大黃素低、高劑量組OD值、存活率降低（P＜0.05）；與紫杉醇組比較，蘆薈大黃素低劑量組OD值、存活率升高（P＜0.05），高劑量組OD值、存活率無明顯變化（P＞0.05）；與蘆薈大黃素低劑量組比較，蘆薈大黃素高劑量組OD值、存活率降低（P＜0.05）。見表1。

2.2 各組人黑素瘤細(xì)胞A375侵襲能力比較：與A375細(xì)胞組比較，紫杉醇組、蘆薈大黃素低、高劑量組穿膜數(shù)降低（P＜0.05）；與紫杉醇組比較，蘆薈大黃素低劑量組穿膜數(shù)升高（P＜0.05），高劑量組穿膜數(shù)無明顯變化（P＞0.05）；與蘆薈大黃素低劑量組比較，蘆薈大黃素高劑量組穿膜數(shù)降低（P＜0.05）。見表2、圖1。

2.3 各組人黑素瘤細(xì)胞A375遷移距離的比較：與A375細(xì)胞組比較，紫杉醇組、蘆薈大黃素低、高劑量組遷移距離降低（P＜0.05）；與紫杉醇組比較，蘆薈大黃素低劑量組遷移距離升高（P＜0.05），高劑量組遷移距離無明顯變化（P＞0.05）；與蘆薈大黃素低劑量組比較，蘆薈大黃素高劑量組遷移距離降低（P＜0.05）。見表3、圖2。

2.4 各組人黑素瘤細(xì)胞A375凋亡率、G2/M比較：與A375細(xì)胞組比較，紫杉醇組、蘆薈大黃素低、高劑量組凋亡率、G2/M升高（P＜0.05）；與紫杉醇組比較，蘆薈大黃素低劑量組凋亡率、G2/M降低（P＜0.05），高劑量組凋亡率、G2/M無明顯變化（P＞0.05）；與蘆薈大黃素低劑量組比較，蘆薈大黃素高劑量組凋亡率、G2/M升高（P＜0.05）。見表4、圖3。

2.5 各組人黑素瘤細(xì)胞A375 AKT、P-AKT、mTOR mRNA表達(dá)水平比較：與A375細(xì)胞組比較，紫杉醇組、蘆薈大黃素低、高劑量組AKT、P-AKT、mTOR mRNA表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與紫杉醇組比較，蘆薈大黃素低劑量組AKT、P-AKT、mTOR mRNA表達(dá)水平升高（P＜0.05），高劑量組AKT、P-AKT、mTOR mRNA表達(dá)水平無明顯變化（P＞0.05）；與蘆薈大黃素低劑量組比較，蘆薈大黃素高劑量組AKT、P-AKT、mTOR mRNA表達(dá)水平降低（P＜0.05）。見表5。

2.6 各組人黑素瘤細(xì)胞A375 P-AKT、AKT、mTOR蛋白表達(dá)比較：與A375細(xì)胞組比較，紫杉醇組、蘆薈大黃素低、高劑量組P-AKT、AKT、mTOR蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）；與紫杉醇組比較，蘆薈大黃素低劑量組P-AKT、AKT、mTOR蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），高劑量組P-AKT、AKT、mTOR蛋白表達(dá)無明顯變化（P＞0.05）；與蘆薈大黃素低劑量組比較，蘆薈大黃素高劑量組P-AKT、AKT、mTOR蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）。

3" 討論

黑素瘤是惡性腫瘤，具有轉(zhuǎn)移傾向。黑素瘤的治療方法包括冷凍療法、手術(shù)和化學(xué)療法以及一些非手術(shù)療法（輔助療法），但患者總體預(yù)后較差。因此，越來越多的研究集中于尋找對(duì)黑素瘤安全有效的天然植物化學(xué)物質(zhì)。眾所周知，來自天然植物的化合物對(duì)包括黑素瘤在內(nèi)的人類癌癥具有預(yù)防和治療功效。蘆薈大黃素是蒽醌類化合物，存在于各種蔬菜、草藥、水果和中藥中，并已被證明可抑制腫瘤生長[7]。

本研究探討蘆薈大黃素對(duì)人類黑素瘤細(xì)胞的化療能力，結(jié)果顯示蘆薈大黃素顯著抑制癌細(xì)胞的生長。這些數(shù)據(jù)表明蘆薈大黃素具有抗人類黑素瘤的化療潛力。細(xì)胞凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡，是正常組織發(fā)育所必需的生理過程。在哺乳動(dòng)物中，有兩種主要的細(xì)胞凋亡途徑：外在途徑（死亡受體介導(dǎo)的途徑）和內(nèi)在途徑（線粒體介導(dǎo)的途徑）。Caspase-3是一個(gè)關(guān)鍵的執(zhí)行者半胱天冬酶，它的激活導(dǎo)致細(xì)胞死亡期間PARP的裂解。PARP的裂解被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的核心指標(biāo)。AKT-mTOR信號(hào)通路與細(xì)胞生物學(xué)功能和癌癥惡性腫瘤相關(guān)，也在癌癥的增殖和凋亡中發(fā)揮重要作用。本研究證實(shí)蘆薈大黃素處理導(dǎo)致細(xì)胞的更高凋亡率，以劑量依賴性方式顯著增加裂解的caspase-3和裂解的PARP的表達(dá)，同時(shí)降低AKT、mTOR的表達(dá)。蘆薈大黃素處理的A375細(xì)胞發(fā)生的細(xì)胞死亡可能是由細(xì)胞凋亡引起的，細(xì)胞凋亡可能與AKT、mTOR磷酸化有關(guān)。用AKT、mTOR抑制劑預(yù)處理A375細(xì)胞對(duì)于揭示蘆薈大黃素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是否依賴于AKT、mTOR活性是必要的，筆者團(tuán)隊(duì)將在未來的研究中研究相關(guān)機(jī)制。研究證明，蘆薈大黃素通過外在途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，增加p53并抑制HER2過表達(dá)乳腺癌細(xì)胞中的STAT3和NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[8-9]：蘆薈大黃素通過靶向前列腺癌中細(xì)胞凋亡蛋白抑制劑和Ku70-Bax相互作用來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[10]：蘆薈大黃素通過選擇性作用和線粒體功能障礙誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡[11]，表明蘆薈大黃素能促進(jìn)A375細(xì)胞內(nèi)在凋亡途徑的激活。但是，本研究并未確定蘆薈大黃素是通過內(nèi)在途徑還是外在途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，這將在未來進(jìn)行相關(guān)研究。此外，蛋白質(zhì)印跡分析表明，蘆薈大黃素處理后AKT、mTOR的表達(dá)降低。這表明AKT/mTOR通路在A375細(xì)胞中觀察到的蘆薈大黃素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中起著至關(guān)重要的作用。既往研究證明蘆薈大黃素通過PI3K/AKT通路、Bcl-2家族的調(diào)節(jié)以及caspase-3和PARP的激活誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[12]。這與本研究結(jié)果一致。

細(xì)胞周期失調(diào)是腫瘤發(fā)生的標(biāo)志。細(xì)胞周期在多個(gè)檢查點(diǎn)進(jìn)行控制。當(dāng)DNA受損時(shí)，G2/M檢查點(diǎn)會(huì)抑制細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞修復(fù)。當(dāng)損傷無法修復(fù)時(shí)，可能會(huì)激活導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的途徑。G2/M檢查點(diǎn)受Cdc2/細(xì)胞周期蛋白B及其負(fù)調(diào)節(jié)因子（包括p21Cip1和p27）控制。調(diào)節(jié)這些G2/M檢查點(diǎn)蛋白可能會(huì)增強(qiáng)癌細(xì)胞對(duì)放療和化療的敏感性。因此，G2/M檢查點(diǎn)是癌癥治療的潛在靶點(diǎn)。據(jù)報(bào)道[12-13]，蘆薈大黃素使人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞停滯在G2/M期；它還能抑制細(xì)胞周期蛋白B1及其激活伙伴Cdc2和Cdc25c的表達(dá)[14-15]。此外，蘆薈大黃素處理通過下調(diào)人乳頭狀甲狀腺癌BCPAP細(xì)胞中的Cdc25c表達(dá)，導(dǎo)致G2/M期細(xì)胞大量積累[16-17]。本研究發(fā)現(xiàn)蘆薈大黃素通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期的G2/M期停滯來抑制人黑素瘤A375細(xì)胞的生長。此外，蘆薈大黃素處理降低了mTOR的表達(dá)。先前研究表明[18]，AKT/mTOR通路可能通過調(diào)節(jié)G2/M相關(guān)蛋白的表達(dá)來影響G2向有絲分裂期的進(jìn)展。AKT活性形式的表達(dá)在蛋白質(zhì)和mRNA水平上增加了Cdk1，而其主要的負(fù)突變通過誘導(dǎo)G2/M停滯抑制細(xì)胞增殖。因此，蘆薈大黃素可能通過AKT/mTOR通路阻止細(xì)胞周期中的G2/M轉(zhuǎn)換，從而抑制A375細(xì)胞的增殖。

調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞侵襲的關(guān)鍵信號(hào)通路是PI3K/AKT通路。該途徑促進(jìn)多種癌癥（包括黑素瘤）對(duì)化療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡產(chǎn)生抗性。AKT具有調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的潛力。mTOR和AKT對(duì)遷移的影響可能與細(xì)胞骨架重組所需的蛋白質(zhì)合成相關(guān)。本研究結(jié)果表明，蘆薈大黃素對(duì)A375細(xì)胞具有抗侵襲作用，這可能是通過下調(diào)AKT、mTOR的表達(dá)。

綜上所述，蘆薈大黃素對(duì)黑素瘤細(xì)胞增殖和侵襲具有明顯抑制作用，其機(jī)制可能與蘆薈大黃素抑制AKT/mTOR通路的激活有關(guān)。

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[收稿日期]2023-10-07

本文引用格式：李妍芯，趙奧林，阮英.蘆薈大黃素抑制人黑素瘤細(xì)胞A375增殖和侵襲的作用及機(jī)制初探[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2025，34（3）：13-18.