低溫雞肉腸中蠟樣芽孢桿菌分離鑒定及其毒力基因與藥敏性分析

摘 要：依據GB 4789.14—2014《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 蠟樣芽孢桿菌檢驗》對低溫雞肉腸及其加工環(huán)境樣品中的蠟樣芽孢桿菌進行計數。采用聚合酶鏈式反應法結合生化試驗對8 株分離菌株進行鑒定，并對其毒力基因進行檢測。采用紙片擴散法對分離菌株進行藥敏試驗。結果表明：抽檢的5 種低溫雞肉腸腐敗樣品中蠟樣芽孢桿菌檢出率達100%，結合生化試驗、16S rDNA測序及管家基因gyrB和蘇云金芽孢桿菌特異性基因cry的檢測結果表明，8 株分離菌株均為蠟樣芽孢桿菌，且均至少攜帶5 種以上毒力基因，非溶血性腸毒素基因檢出率最高，有5 株蠟樣芽孢桿菌同時攜帶nheA、nheB和nheC基因；嘔吐毒素基因ces未檢出。菌株A3攜帶除ces外的所有毒力基因，是攜帶毒力基因最多的菌株。在22 種抗生素中，8 株蠟樣芽孢桿菌對頭孢他啶、頭孢唑啉、氨芐西林、鏈霉素、青霉素、卡那霉素、復方新諾明和頭孢呋辛鈉8 種抗生素均有耐藥性。綜上所述，低溫雞肉腸中蠟樣芽孢桿菌污染程度較高，毒力基因攜帶種類多且耐藥性較強，具有引起食源性疾病風險，對食品安全具有威脅。

關鍵詞：蠟樣芽孢桿菌；雞肉腸；分離鑒定；毒力基因；藥敏性

Isolation， Identification， Virulence Genes and Drug Susceptibility of Bacillus cereus from

Low-Temperature Chicken Sausage

DU Long1，2， YANG Yuheng1，2， TANG Wenxiang1，2， XIAO Yapei2， SUN Zhilan1，2， LIU Fang1，2，*， WANG Daoying1，2，*

（1. College of Food and Bioengineering， Jiangsu University， Zhenjiang 212013， China;

2. Institute of Agricultural Products Processing， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Nanjing 210014， China）

Abstract： Bacillus cereus in low-temperature chicken sausage and its processing environment samples was counted following the GB 4789.14-2014 National standards for food safety-microbiological examination of food-test for Bacillus cereus. Polymerase chain reaction （PCR） and biochemical tests were combined to identify eight isolates and determine their virulence genes. The drug susceptibility of the isolates was determined using the disc diffusion method. The results showed that the detection rate of B. cereus in five samples of spoiled low-temperature chicken sausage was 100%. Based on the results of biochemical tests， 16S rDNA sequencing， the house-keeping gene gyrB and the Bacillus thuringiensis specific gene cry， all isolates were identified as B. cereus. Each strain carried at least five virulence genes， among which， the detection rate of the non-hemolytic enterotoxin gene was the highest. Five strains of B. cereus carried the nheA， nheB， and nheC genes simultaneously， but did not carry the vomitoxin gene ces. Strain A3 carried all virulence genes except ces， and was the strain that carried the largest number of virulence genes. Among the 22 antibiotics detected， the 8 strains of B. cereus were resistant to 8 antibiotics， including ampicillin， ceftazidime， cefazolin， streptomycin， penicillin， kanamycin， cotrimoxazole and cefuroxime sodium. In conclusion， the level of contamination of B. cereus in low-temperature chicken sausages was high， and the obtained isolates carried a wide range of virulence genes and were highly resistant to drugs， posing a risk of foodborne diseases and a"threat to food safety.

Keywords： Bacillus cereus; chicken sausage; separation and identification; virulence genes; drug susceptibility

DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20240702-173

中圖分類號：TS251.6" " " " " " " " " " " " " " " " " " " " 文獻標志碼：A 文章編號：1001-8123（2025）02-0025-08

引文格式：

都龍， 楊宇恒， 唐文翔， 等. 低溫雞肉腸中蠟樣芽孢桿菌分離鑒定及其毒力基因與藥敏性分析[J]. 肉類研究， 2025， 39（2）： 25-32. DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20240702-173." " http：//www.rlyj.net.cn

DU Long， YANG Yuheng， TANG Wenxiang， et al. Isolation， identification， virulence genes and drug susceptibility of Bacillus cereus from low-temperature chicken sausage[J]. Meat Research， 2025， 39（2）： 25-32. （in Chinese with English abstract） DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20240702-173." " http：//www.rlyj.net.cn

蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）是一種兼性好氧革蘭氏陽性菌，廣泛存在于土壤、水、空氣及動物腸道中[1-2]。

蠟樣芽孢桿菌是一種條件食源性致病菌，因其可形成耐高溫、耐酸的內生孢子，對環(huán)境適應性較強[3-4]，存活的孢子在營養(yǎng)生長過程中萌發(fā)，能夠合成毒素與胞外酶，導致食物變質，甚至引起食物中毒[5]。此外，蠟樣芽孢桿菌具有形成生物膜能力，使其對化學清潔劑和抗菌處理具有抗性。因此，其可以在加工與貯藏過程中持續(xù)污染食物[6]。蠟樣芽孢桿菌中毒可導致人體局部或全身性感染，導致菌血癥、腦膜炎、壞死性腸炎等，按照其中毒癥狀可以分為嘔吐型和腹瀉型2 種[7-8]。嘔吐由蠟樣芽孢桿菌產生的嘔吐毒素引起，嘔吐毒素的毒力基因（ces和cer）在蠟樣芽孢桿菌中的檢出率相對較低；導致腹瀉的毒素是一種較為復雜的多元化毒素，包括細胞毒素K、溶血素、非溶血性腸毒素、腸毒素T和腸毒素FM[9]。各毒素相關的毒力基因有細胞毒素K基因（cytK）、溶血素基因（hblA、hblC和hblD）、非溶血性腸毒素基因（nheA、nheB、nheC）、腸毒素T基因（bceT）和腸毒素FM基因（entFM），在蠟樣芽孢桿菌中檢出率相對較高。

雞肉腸是以雞肉為原料，輔以淀粉、植物蛋白粉、香辛料、保水劑和護色劑等物質，采用腌制、斬拌和高溫蒸煮等工藝制作而成[10]，其口味獨特、營養(yǎng)豐富，深受廣大消費者喜愛。雞肉在屠宰、分割、加工、包裝、運輸和貯藏等環(huán)節(jié)易受微生物污染，且雞肉制品營養(yǎng)豐富、水分含量高，易發(fā)生腐敗變質[11-12]。目前，蠟樣芽孢桿菌在各國多類食品中均有檢出[13-14]，有研究[15]表明，我國肉制品中蠟樣芽孢桿菌污染率達26.47%，這可能帶來嚴重的食品安全問題。雖然雞肉腸通常采取低溫加工和貯藏，但一些嗜冷蠟樣芽孢桿菌仍能夠生長繁殖并產生毒素[16]，并且蠟樣芽孢桿菌在雞肉制品中的相關研究較少。因此，對低溫雞肉腸中蠟樣芽孢桿菌的污染情況和菌株攜帶毒力基因及耐藥性情況進行分析對低溫肉類食品安全評估具有重要意義。本研究對低溫雞肉腸生產環(huán)節(jié)和腐敗樣品中的蠟樣芽孢桿菌進行分離鑒定，并對其生化特性、毒力基因和藥敏性進行分析，以期為低溫肉制品中蠟樣芽孢桿菌研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

原料雞肉（5 份）、香辛料（以辣椒粉、食用鹽、胡椒粉、味精和白糖等混合制成的料包，5 份）、雞肉腸加工過程環(huán)境樣品（斬拌刀具、解凍車間、斬拌機、解凍臺面、灌腸機）及低溫雞肉腸腐敗樣品（5 份）均取自山東某食品加工廠。

甘露醇卵黃多黏菌素瓊脂基礎（mannitol yolk polymyxin agar base，MYP）培養(yǎng)基（含多黏菌素B（10 000 IU）、50%卵黃乳液） 南京嬌子藤科學器材有限公司；增強革蘭氏染色液 上海源葉生物科技有限公司；細菌基因組DNA提取試劑盒 天根生化科技（北京）有限公司；平板計數瓊脂、LB肉湯基礎 南京翼飛雪生物科技有限公司；HBI蠟樣芽孢桿菌生化鑒定條（VP試劑盒、硝酸鹽還原劑試劑盒、無菌液體石蠟、盧戈氏碘液） 杭州捷程生物科技有限公司；抗生素試紙片"百奧基（北京）生物科技有限公司；2×Es Taq MasterMix、100 bp Ladder 生工生物工程（上海）股份有限公司；DNA Marker DL2000、瓊脂糖 北京擎科生物科技股份有限公司。

1.2 儀器與設備

M124A電子分析天平 意大利BEL公司；TP600梯度升降溫功能聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 日本TaKaRa公司；DYY-6C電泳儀 北京六一生物科技有限公司；Tanon-1600凝膠成像系統(tǒng) 上海天能有限公司；Centrifuge 5424 R離心機 德國Eppendorf公司；A20干式恒溫器 杭州龍揚科學儀器有限公司；SPX-250B-Z生化培養(yǎng)箱 上海博訊實業(yè)有限公司；THZ-C臺式恒溫振蕩器 太倉華美生化儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 蠟樣芽孢桿菌的分離計數

隨機稱取一定量樣品，與無菌生理鹽水按1∶1（g/mL）放入均質袋，振蕩混勻后進行梯度稀釋；用無菌棉球在5 cm×5 cm范圍內擦拭雞肉腸生產過程中直接接觸的表面作為加工環(huán)境樣品，將棉球放入裝有225 mL無菌生理鹽水的均質袋，振蕩混勻后進行梯度稀釋，均得到10－1～10－3稀釋液。

參照GB 4789.14—2014《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 蠟樣芽孢桿菌檢驗》[17]，從各稀釋液中吸取100 μL懸液均勻涂布到MYP平板上，待樣品稀釋液吸收后，將涂布好的平板倒置于（30±1）℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（24±2）h。完成菌落計數后，從不同來源樣品的MYP平板上挑取形態(tài)、大小等不同的至少4 個典型菌落劃線接種到營養(yǎng)瓊脂平板上，（30±1）℃下純培養(yǎng)（24±2）h，所得分離菌株甘油保存于－80 ℃冰箱備用。

1.3.2 分離菌株的形態(tài)學觀察

觀察8 株分離菌株在MYP和LB肉湯固體平板上培養(yǎng)24 h后的菌落形態(tài)，隨后將其接種于無菌載玻片，進行革蘭氏染色鏡檢。

1.3.3 分離菌株的生化鑒定

采用HBI蠟樣芽孢桿菌生化鑒定條對8 株分離菌株進行生化鑒定。將分離菌株分別接種于營養(yǎng)瓊脂平板，（30±1）℃下純培養(yǎng)18～24 h后，進行過氧化氫酶、西蒙氏枸椽酸鹽、動力、V-P、硝酸鹽還原、明膠、葡萄糖、甘露醇產酸、溶菌酶肉湯及淀粉水解試驗。參照GB 4789.14—2014標準判斷結果。

1.3.4 分離菌株的16S rDNA測序鑒定

挑取純培養(yǎng)后的8 株分離菌株接種于LB肉湯培養(yǎng)基中，于臺式恒溫振蕩器中（30±1）℃培養(yǎng)。使用細菌基因組DNA提取試劑盒提取細菌基因組DNA作為后續(xù)PCR擴增模板。采用正向引物27F（5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’）和反向引物1492R（5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’）擴增16S rDNA。PCR擴增結束后將產物回收，經1.5%瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察結果。PCR產物送往生工生物工程（上海）股份有限公司測序，并將測序結果在NCBI GenBank中進行BLAST比對。從數據庫中獲得蠟樣芽孢桿菌相關屬、種的16S rDNA基因序列，使用MEGA-X軟件構建系統(tǒng)發(fā)育進化樹，進行同源性分析鑒定。

1.3.5 分離菌株的gyrB和cry基因檢測

gyrB基因常被用于細菌系統(tǒng)發(fā)育分析和鑒別，cry基因為蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis）的特異基因，結合二者可對分離菌株作進一步鑒定，合成引物相關信息見表1。PCR擴增體系參考盧佳琦等[18]并稍作修改。2×Es Taq MasterMix 10 μL、上游引物0.4 μL（10 μmol/L）、下游引物0.4 μL（10 μmol/L）、分離菌株DNA模板1 μL，ddH2O補至總體系20 μL。PCR擴增程序：95 ℃預變性5 min、95 ℃變性1 min、55 ℃退火50 s、72 ℃延伸1 min，共32 個循環(huán)，72 ℃延伸10 min。PCR擴增產物經2%瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察檢測結果。

1.3.6 分離菌株的毒力基因檢測

參考黃銘珊[19]、盧曉蕓[20]等的方法合成hblA、hblC、hblD、nheA、nheB、nheC、entFM、cytK、bceT、ces和cer共計11 種與蠟樣芽孢桿菌相關的毒力基因引物，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成（表1）。

單重PCR擴增體系參考黃銘珊[19]的方法并稍作修改。2×Es Taq MasterMix 10 μL、上下游引物各0.5 μL（10 μmol/L）、DNA模板1 μL，ddH2O補至總體系20 μL。單重PCR擴增程序：95 ℃預變性5 min、95 ℃變性40 s、55 ℃退火30 s、72 ℃延伸1 min，共35 個循環(huán)，72 ℃延伸10 min。多重PCR擴增體系參考姜菲菲等[21]的方法。2×Es Taq MasterMix 10 μL、上下游引物各0.5 μL（3 對，10 μmol/L）、DNA模板1 μL，ddH2O補至總體系20 μL。多重PCR擴增程序：96 ℃預變性5 min、96 ℃變性30 s、54 ℃退火30 s、72 ℃延伸30 s，30 個循環(huán)，72 ℃延伸10 min。PCR擴增產物經2%瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察檢測結果。

1.3.7 分離菌株的藥敏試驗

采用K-B紙片擴散法對8 株分離菌株進行藥敏試驗。藥敏試驗判定標準參考CLSI M100-S32（https：//clsi.org/）中葡萄球菌屬抑菌圈直徑。蠟樣芽孢桿菌藥敏試驗抑菌圈直徑解釋標準見表2。

使用的抗生素紙片包括多黏菌素B、氨芐西林、米諾環(huán)素、頭孢哌酮、頭孢他啶、頭孢唑啉、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、紅霉素、鏈霉素、氯霉素、四環(huán)素、青霉素、卡那霉素、頭孢曲松、慶大霉素、萬古霉素、阿奇霉素、復方新諾明、頭孢呋辛鈉和克林霉素共計22 種。分別吸取各分離菌株菌懸液均勻涂布在MYP平板上，抗生素紙片間隔放置于MYP平板上，將平板倒置于（30±1）℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。待培養(yǎng)完畢取出平板，用游標卡尺測量各抗生素的抑菌圈直徑，記錄耐藥情況。

1.4 數據處理與分析

所有實驗均重復3 次，結果以平均值±標準差表示。使用Excel 2021軟件對數據進行整理和繪圖；使用SPSS 26.0軟件對數據進行統(tǒng)計和方差分析（P＜0.05）。

2 結果與分析

2.1 蠟樣芽孢桿菌的分離計數結果

蠟樣芽孢桿菌在原料雞肉及香辛料中未檢出。如圖1所示，加工過程中斬拌刀具上的蠟樣芽孢桿菌污染量為1.108 7（lg（CFU/cm2））、解凍車間臺面的蠟樣芽孢桿菌污染量為2.573 5（lg（CFU/cm2））、斬拌過程中的蠟樣芽孢桿菌污染量為0.778 2（lg（CFU/cm2））、解凍臺面的蠟樣芽孢桿菌污染量為4.230 5（lg（CFU/cm2））、灌腸過程中的蠟樣芽孢桿菌污染量為5.376 3（lg（CFU/cm2））。

這表明低溫雞肉腸在生產過程中極易受蠟樣芽孢桿菌污染，在加工環(huán)節(jié)蠟樣芽孢桿菌污染較為嚴重，尤以灌腸過程污染最為嚴重。在5 種腐敗雞肉腸樣品中均檢出蠟樣芽孢桿菌，污染量分別為3.021 1、2.916 3、1.150 6、2.329 5、2.298 9（lg（CFU/g））。雖然其含量均低于我國對蠟樣芽孢桿菌引起食物中毒的判定標準含量5（lg（CFU/g）），但有研究[22]表明，小于判定標準含量的蠟樣芽孢桿菌也可能引起食物中毒，因此該結果也應引起重視。將檢出蠟樣芽孢桿菌樣品編號并挑取菌株A3、A4、A6、B4、C2、D4、D7和E3進行下一步研究。

2.2 分離菌株的形態(tài)學觀察結果

如圖2所示，分離菌株在LB肉湯固體平板上培養(yǎng)24 h后形成的菌落呈乳白色、不透明、表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀、邊緣呈擴展狀；在MYP平板上形成的菌落為微粉紅色，周圍有白色至淡粉色沉淀環(huán)。如圖3所示，革蘭氏染色后分離菌株為紫色的桿菌，菌體兩端比較平整，呈鏈狀排列。以上結果表明分離菌株與蠟樣芽孢桿菌的形態(tài)特征符合，但仍需結合其他方法作進一步鑒定。

2.3 分離菌株的生化鑒定結果

由表3可知，8 株分離菌株的過氧化氫酶、西蒙氏枸椽酸鹽、動力、V-P、硝酸鹽還原、明膠、葡萄糖、溶菌酶肉湯和淀粉水解試驗結果均呈陽性，甘露醇產酸試驗結果為陰性，與蠟樣芽孢桿菌生化特征一致，故可將8 株分離菌株判定為蠟樣芽孢桿菌疑似菌株。

2.4 分離菌株的16S rDNA測序鑒定結果及系統(tǒng)發(fā)育進化樹分析

如圖4所示，8 株分離菌株在1 500 bp處均出現清晰、明亮的條帶。將8 株分離菌株的測序結果在NCBI進行BLAST比對，將相似度最高的序列在MEGA-X軟件進行同源性比對并建立系統(tǒng)發(fā)育進化樹。如圖5所示，分離菌株與蠟樣芽孢桿菌標準菌株的同源性可達95%以上。但是分離菌株與其他芽孢桿菌尤其是蘇云金芽孢桿菌的同源性也較高，這表明蠟樣芽孢桿菌與其他芽孢桿菌較難區(qū)分，僅憑16S rDNA測序結果無法對分離菌株進行準確、可靠的鑒定。

2.5 分離菌株gyrB和cry基因的檢測結果及分析

由于16S rDNA具有高度保守性且分子質量較小，難以區(qū)分相似度極高的近緣親屬種，而gyrB基因進化速率比16S rDNA快，普遍存在于細菌中并且不會發(fā)生頻繁的水平轉移，在不同的蛋白及蛋白的不同位點，其氨基酸替代率也不同，故在區(qū)分鑒定近緣親屬種中具有優(yōu)勢[23-24]。蘇云金芽孢桿菌與蠟樣芽孢桿菌的鑒定存在許多爭議，二者菌落形態(tài)相似、生化性狀相近、全基因組相似性高（達90%以上），較難區(qū)分[25-26]。cry基因作為蘇云金芽孢桿菌的特異性基因，可用于區(qū)分蠟樣芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌。如圖6所示，8 株分離菌株的管家基因gyrB檢出率為100%；蘇云金芽孢桿菌的特異性基因cry檢出率為0%。結合生化鑒定試驗結果、16S rDNA測序結果可將8 株分離菌株判定為蠟樣芽孢桿菌。

2.6 分離菌株毒力基因的檢測結果及分析

由表4和圖7可知，8 株分離菌株均至少攜帶5 種以上的毒力基因。其中，菌株A3攜帶除嘔吐毒素基因ces之外的所有毒力基因，表明其攜帶毒力基因種類眾多，能夠產生多種毒素。非溶血性腸毒素基因中，nheA、nheB和nheC檢出率分別為62.5%、100%和100%，這和其他報道[27-29]中蠟樣芽孢桿菌非溶血性腸毒素基因攜帶率最高較為一致。其中5 株菌株同時攜帶nheA、nheB、nheC基因，表明這5 株菌株有強致腹瀉功能。溶血素基因中，hblA、hblC和hblD檢出率分別為75%、50%和87.5%。林塏等[30]認為當蠟樣芽孢桿菌同時攜帶hblA、hblC和hblD基因時可產生溶血素。其中3 株菌株同時攜帶hblA、hblC、hblD基因，表明這3 株菌株會產生溶血素。嘔吐毒素基因ces檢出率為0%，cer檢出率為62.5%?？怺15]在176 株肉與肉制品源蠟樣芽孢桿菌中僅檢測到5 株（3%）攜帶嘔吐毒素基因ces，這也表明肉制品中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素基因ces攜帶率較低。雖然其檢出率相對較低，但是嘔吐毒素較難滅活，不容忽視。腸毒素T基因bceT和腸毒素FM基因entFM檢出率分別為75%和100%，細胞毒素K基因cytK檢出率為62.5%。白鳳嵐等[31]研究表明，食品中蠟樣芽孢桿菌的非溶血性腸毒素基因、細胞毒素K基因、腸毒素FM基因和腸毒素T基因檢出率較高，這與本研究結果相近。綜上所述，低溫雞肉腸中蠟樣芽孢桿菌攜帶的毒力基因種類較多，以非溶血性腸毒素基因為主，消費者食用后易引起腹瀉、嘔吐等癥狀。

2.7 藥敏性試驗結果與分析

抗菌藥物的使用可導致蠟樣芽孢桿菌耐藥性增強，具有多重耐藥性的蠟樣芽孢桿菌將更難殺滅。通過對蠟樣芽孢桿菌菌株進行藥敏試驗可確定其耐藥性現狀，監(jiān)測其耐藥性變化趨勢，確定抗菌藥物的適用范圍等。

由表5可知，8 株分離菌株對頭孢他啶、頭孢唑啉、氨芐西林、鏈霉素、青霉素、卡那霉素、復方新諾明和頭孢呋辛鈉8 種抗生素均有耐藥性；對諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、多黏菌素B、紅霉素、慶大霉素、萬古霉素、阿奇霉素、氯霉素和克林霉素10 種抗生素敏感，表現出多重耐藥性。其中，A3、A6、C2和E3菌株對米諾環(huán)素中度敏感，B4、D4和D7菌株對米諾環(huán)素敏感，A4菌株對米諾環(huán)素耐藥；A4、A6、B4、C2、D4和D7菌株對頭孢哌酮敏感，A3和E3菌株對頭孢哌酮中度敏感；A3、A4、A6、C2、D4、D7和E3菌株對四環(huán)素中度敏感，B4菌株對四環(huán)素敏感；A6、B4、C2和D4菌株對頭孢曲松中度敏感，A3、A4、D7和E3菌株對頭孢曲松耐藥。

表明從雞肉腸中分離出的蠟樣芽孢桿菌耐藥性較強，對多種抗生素均有不同程度的耐藥性。

3 討 論

雞肉腸作為一種營養(yǎng)豐富、風味獨特的食品備受歡迎，其安全性不容忽視。本研究對低溫雞肉腸中的蠟樣芽孢桿菌進行分離計數，在原料雞肉和香辛料輔料中并未檢出蠟樣芽孢桿菌，在各腐敗樣品和加工環(huán)境樣品中均檢出蠟樣芽孢桿菌，表明雞肉腸在加工過程中易受蠟樣芽孢桿菌污染。這可能是因為蠟樣芽孢桿菌的芽孢耐高溫，常規(guī)熱處理難以滅活，并且蠟樣芽孢桿菌可產生生物膜，其附著在食品加工設備上可帶來持續(xù)污染[32]。蠟樣芽孢桿菌攜帶毒素與其毒力基因相關，毒力基因檢測結果表明，8 株分離菌株均攜帶至少5 種毒力基因，其中從腐敗樣品1中分離得到的A3菌株攜帶10 種毒力基因，是檢出毒力基因最多的1 株蠟樣芽孢桿菌，表明該菌株可產生多種毒素，潛在致病能力較強。因此，在雞肉腸生產過程中應加強衛(wèi)生管理，嚴格執(zhí)行食品安全管理制度、規(guī)范操作；相關部門應加大低溫肉類食品中蠟樣芽孢桿菌污染監(jiān)管力度。

抗生素是治療細菌感染的重要藥物，然而，抗生素的過度使用可能導致細菌產生多重耐藥性[33]。本研究發(fā)現8 株菌株對頭孢他啶、頭孢唑啉、氨芐西林、鏈霉素、青霉素、卡那霉素、復方新諾明和頭孢呋辛鈉8 種抗生素耐藥；對諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、多黏菌素B、紅霉素、慶大霉素、萬古霉素、阿奇霉素、氯霉素和克林霉素10 種抗生素敏感。這與楊高繼等[34]的研究結果相似，但與四環(huán)素等抗生素耐藥性結果存在一定的差異，可能與樣品來源的地區(qū)、食物種類以及菌株基因突變、自身特性等因素有關。

4 結 論

雞肉腸腐敗樣品中蠟樣芽孢桿菌污染程度高，所含毒力基因情況復雜并且對多種抗生素具有耐藥性，具有較高的食源性致病風險。本研究結果可為低溫肉制品中蠟樣芽孢桿菌研究及相關企業(yè)合理制定蠟樣芽孢桿菌污染預防方案提供參考。

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收稿日期：2024-07-02

基金項目：江蘇省農業(yè)自主創(chuàng)新資金項目（CX（22）3063）；國家自然科學基金面上項目（31972140）

第一作者簡介：都龍（1999—）（ORCID： 0009-0005-7493-9656），男，碩士研究生，研究方向為畜禽產品質量安全。

E-mail： 352065121@qq.com

*通信作者簡介：劉芳（1982—）（ORCID： 0000-0002-2302-027X），女，研究員，博士，研究方向為畜禽產品質量安全。

E-mail： fangliu82@163.com

王道營（1979—）（ORCID： 0000-0003-1776-5854），男，研究員，博士，研究方向為肉品加工與質量控制。

E-mail： wdy0373@aliyun.com