基于多維指標(biāo)對(duì)不同來源蜂蜜的比較分析

摘要：蜂蜜是一種成分復(fù)雜的天然食品，其成分組成和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值因蜜源植物、產(chǎn)地、蜂種等不同而異。為實(shí)現(xiàn)對(duì)不同來源蜂蜜的評(píng)價(jià)和區(qū)別，采用常規(guī)理化指標(biāo)檢測(cè)和高效液相色譜?四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（highperformance liquid chromatography-quadrupole-time of flight/mass spectrometer，HPLC-Q-TOF/MS）分析等多維指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明，不同蜂蜜樣品的淀粉酶值、果糖、葡萄糖、總酚酸和總黃酮含量等有明顯差異；其中，油菜蜜淀粉酶值最低，為（3.42±0.70）mL·g-1·h-1；洋槐蜜（沁水）淀粉酶值最高，為（12.66±2.44） mL·g-1·h-1；中蜂蜜的總酚酸和總黃酮含量均高于其他蜂蜜樣品。脯氨酸?組氨酸?半胱氨酸和羥基酪醇1-O-葡萄糖苷可能有助于區(qū)分蜂蜜的蜜源植物種類，倍半萜化合物在洋槐蜜的產(chǎn)地區(qū)分中起到重要作用。研究結(jié)果為蜂蜜的特征性評(píng)價(jià)提供了一定的方法性指導(dǎo)，即借助多維指標(biāo)可實(shí)現(xiàn)不同來源蜂蜜的區(qū)分與鑒別。

關(guān)鍵詞：蜂蜜；多維指標(biāo)；HPLC-Q-TOF/MS；特征性鑒別doi：10.13304/j.nykjdb.2023.0522

中圖分類號(hào)：TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008‐0864（2025）02‐0170‐10

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜或蜜露，并輔以自身的分泌物，經(jīng)充分轉(zhuǎn)化、釀造而成的天然甜味物質(zhì)[1]。蜂蜜具有極高的營(yíng)養(yǎng)和保健價(jià)值，除糖分之外，蜂蜜含有的微量物質(zhì)大多是維持人體健康的必需成分，在能量代謝、免疫調(diào)節(jié)等生理過程中發(fā)揮重要作用[2]。植物的花蜜是這些微量物質(zhì)的重要來源，不同植物來源、不同產(chǎn)地的蜂蜜中微量物質(zhì)種類和含量存在較大差異[3]。因此，開展各類蜂蜜中微量物質(zhì)的特征分析，可以為蜂蜜營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的評(píng)價(jià)提供依據(jù)，對(duì)地方特色蜂蜜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要意義。

蜂蜜的成分相當(dāng)復(fù)雜，含有80%～85% 的糖分、15%～17% 的水、0.3% 的蛋白質(zhì)及少量氨基酸、酚類、色素和維生素等[4‐5]。某些特定蜜源蜂蜜中的典型特征成分，即特征標(biāo)記物質(zhì)被廣泛鑒別出來，進(jìn)而被應(yīng)用于鑒別特定產(chǎn)地、蜜源、加工方式的蜂蜜樣品中，如1-戊烯-3-醇可作為英國(guó)地區(qū)蜂蜜的特征揮發(fā)性成分[6]。一般情況下，極致追求利用某種單一成分區(qū)別不同來源的蜂蜜不太現(xiàn)實(shí)，大多需要借助某類或某組特征成分。例如，糠硫醇、苯甲醇、δ-辛醇內(nèi)酯、γ-癸內(nèi)酯、丁香油酚、苯甲酸、異戊酸、苯乙醇和4-甲氧基苯酚均對(duì)巴西的腰果（Anacardium occidentale）蜂蜜風(fēng)味具有重要影響[7]。Qiao等[8]報(bào)道了丁香酸甲酯、相思酸、椴樹素[4- （2-hydroxypropan-2-yl） cyclohexa-1，3-diene-1-carboxylic acid]可分別作為油菜、洋槐、椴樹蜂蜜中特殊或獨(dú)特的植物化學(xué)成分，其中丁香酸甲酯和椴樹素是油菜和椴樹蜂蜜中含量最高的成分，此外，還建立了以上3種單花蜂蜜的高效液相（high performance liquid chromatography，HPLC）指紋圖譜，并提供了評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，將特征成分與標(biāo)準(zhǔn)指紋相結(jié)合，可實(shí)現(xiàn)商品油菜、洋槐和椴樹蜂蜜真實(shí)性的評(píng)價(jià)。研究報(bào)道，Zantaz蜂蜜是單花蜂蜜品種，是蜜蜂采自摩洛哥阿特拉斯山脈的灌木Bupleurum spinosum（Apiaceae），多酚成分測(cè)定顯示，丁香酸甲酯占多酚總量的50%以上，代表了該單花蜜特征的非常有價(jià)值的參數(shù)[9]。

液相色譜-質(zhì)譜法適配性廣泛、靈敏度高，因而成為檢測(cè)手段的首選。但三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜多采用多反應(yīng)檢測(cè)掃描模式（multiple reactionmonitoring， MRM），其分辨率和掃描速率受到限制，在樣品分析時(shí)會(huì)受到基質(zhì)干擾成分的影響，易出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果[10‐11]。近些年，高分辨質(zhì)譜技術(shù)在蔬菜、水果、茶葉、酒等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[12‐13]，而在蜂蜜基質(zhì)的報(bào)道中，利用高分辨質(zhì)譜的分析檢測(cè)報(bào)道相對(duì)較少。高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（high performanceliquid chromatography-quadrupole-time of flight/mass spectrometer，HPLC-Q-TOF/MS）是一種常用的分析方法，其基本原理是在高效液相層析儀和四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜之間進(jìn)行聯(lián)用，以獲得更準(zhǔn)確和可靠的化合物分析結(jié)果。該技術(shù)被廣泛應(yīng)用于藥物分析、天然產(chǎn)物分析、蛋白質(zhì)分析和環(huán)境分析等領(lǐng)域。HPLC-Q-TOF/MS 聯(lián)用技術(shù)在食品成分分析和品質(zhì)評(píng)價(jià)，包括食品中營(yíng)養(yǎng)成分和香味成分的分析等方面大有用途[14-16]。但HPLC-QTOF/MS聯(lián)用技術(shù)仍然存在一些挑戰(zhàn)和局限性，例如，分離HPLC和四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜之間的界面和2種技術(shù)之間的校準(zhǔn)問題。此外，在操作和數(shù)據(jù)處理方面也需要掌握一定的技巧和經(jīng)驗(yàn)，以確保準(zhǔn)確性和精度。飛行時(shí)間質(zhì)譜（time of flight/mass spectrometer，TOF/MS）鑒定過程中，根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜得到化合物精確的分子式，然后再根據(jù)其二級(jí)質(zhì)譜結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)和相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行定性，精確質(zhì)量數(shù)與理論質(zhì)量數(shù)相差不超過±2×10-6 [17‐18]。

本研究擬借助多維指標(biāo)對(duì)我國(guó)主要的大宗蜜源蜂蜜樣品進(jìn)行評(píng)價(jià)，并加以區(qū)分鑒別。首先，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)樣品的常規(guī)指標(biāo)和成分進(jìn)行分析，然后采用當(dāng)前精確性較高的HPLC-Q-TOF/MS方法對(duì)樣品的蜜源種類、產(chǎn)地等進(jìn)行區(qū)分和鑒別，以期探索多技術(shù)角度評(píng)價(jià)不同來源蜂蜜的可行性，為蜂蜜的特征性和真實(shí)性評(píng)價(jià)提供一定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 蜂蜜樣品及蜜源信息

本研究中的蜂蜜樣品采自我國(guó)各蜜源主產(chǎn)區(qū)的意大利蜜蜂（Apis mellifera）和中華蜜蜂（Apiscerana cerana）蜂場(chǎng)，包括5個(gè)?。ㄖ陛犑校┑?種蜜源蜂蜜（表1）。所有樣品均是在蜜源植物的開花流蜜季節(jié)采集，采樣時(shí)間為2022年3—8月。每個(gè)采樣地點(diǎn)一般聚集有10個(gè)以上的養(yǎng)蜂戶，且各采樣點(diǎn)之間的距離超過5 km，養(yǎng)殖規(guī)模一般為100群左右。每種蜂蜜樣品平行采集5～10次，共計(jì)37個(gè)樣品，各樣品采樣量為500 g，密封保存于6～8 ℃。蜂蜜樣品蜜源信息的確認(rèn)，主要依靠采訪養(yǎng)蜂戶、調(diào)查采樣點(diǎn)蜜源植物種類及專業(yè)人員的感官鑒別等。

1.2 常規(guī)理化指標(biāo)分析

參照GB 5009.8—2016[19]采用高效液相色譜法檢測(cè)果糖和葡萄糖含量；參照GB/T 18932.16—2003[20]采用分光光度法檢測(cè)淀粉酶活性。

1.3 總酚酸和總黃酮含量的測(cè)定

蜂蜜中總多酚含量的測(cè)定采用Folinol-Ciocalteu 法[21]。2.5 g 蜂蜜樣品加蒸餾水定容到10 mL 容量瓶中，取1 mL 蜂蜜水溶液與1 mL 的Folinol-Ciocalteu 混勻，再加入5 mL 的1 mol·L-1Na2CO3 溶液，用蒸餾水定容至10 mL，充分混勻。于黑暗環(huán)境孵化1 h，8 000 r·min-1離心5 min后取上清液于比色皿中，在760 nm處測(cè)定其吸光度值。用沒食子酸來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，多酚含量以每千克蜂蜜提取的沒食子酸當(dāng)量（gallic acid equivalents，GAEs）的毫克數(shù)表示。

總黃酮含量測(cè)定[21]：將5 g 蜂蜜樣品加入10 mL 的去離子水中，在60 kHz 超聲下處理10 min，在8 000 r·min-1 下離心5 min。收集上清液并將其加入到5 mL 甲醇和5 mL 水預(yù)處理的SPE濾芯中。上清液樣品以1 mL·min-1的流速通過色譜柱，然后用8 mL甲醇洗脫被分析物。所得的洗脫液用氮?dú)饬鬟M(jìn)行干燥，得到蜂蜜提取物。加入1 mL 的甲醇復(fù)溶，并于-20 ℃保存。取500 μL溶液進(jìn)行總黃酮測(cè)定，取500 μL溶液進(jìn)行后續(xù)HPLC-Q-TOF/MS分析。

500 μL蜂蜜提取物與3 mL無水乙醇、1 mL硝酸鋁溶液（100 g·L-1）和1 mL醋酸鉀溶液（9.8 g·L-1）混合后加水定容到10 mL容量瓶。于黑暗環(huán)境孵化1 h，在415 nm處測(cè)定混合物的吸光度值。用槲皮素來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以每kg蜂蜜提取的槲皮素當(dāng)量（quercetin equivalents，QEs）的毫克數(shù)表示。

1.4 蜂蜜HPLC-Q-TOF/MS 分析

用0.22 μm的尼龍膜對(duì)500 μL蜂蜜提取物溶液進(jìn)行過濾，并將其放入棕色小瓶中。采用高效液相色譜結(jié)合四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（HPLC-QTOF/MS，6545）系統(tǒng)，在負(fù)/正電離模式下進(jìn)行色譜分析。使用安捷倫Zorbax Poroshell EC-C18柱（2.1 mm×100 mm，2.7 μm）分離提取的化合物，用含有0.1%甲酸（體積比）的超純水（A）和甲醇（B）以0.3 mL·min?1 的流速進(jìn)行線性梯度洗脫，分離分析物。線性梯度洗脫程序?yàn)椋?～1 min，5% B；1～6 min，55% B；6～20 min，95% B；20～26 min，95% B；26～27 min，5% B；柱溫設(shè)定為30 ℃，進(jìn)樣量為2 μL。ESI 源的參數(shù)如下：霧化器壓力為40 psi，毛細(xì)管電壓為3 500 V，碎裂器電壓為120 V，干燥氣體（N2）流速為8 L·min?1，干燥氣體溫度為320 °C，m/z范圍為 100～1 700[21]。

1.5 數(shù)據(jù)分析

1.5.1 一般分析 數(shù)據(jù)來自5～10個(gè)獨(dú)立樣品的重復(fù)試驗(yàn)，并以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差顯示。統(tǒng)計(jì)學(xué)差異采用單因素方差分析（one-way ANOVA）檢驗(yàn)，然后進(jìn)行Bonferroni post hoc analysis 和Student’sunpaired t-test，Plt;0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.5.2 HPLC-Q-TOF/MS 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 對(duì)HPLC-Q-TOF/MS 系統(tǒng)獲得的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理，以適當(dāng)?shù)母袷教峁┙Y(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)，供后續(xù)數(shù)據(jù)分析使用。所得數(shù)據(jù)由MassHunter 定性分析軟件（Agilent Technologies）中的Profinder 軟件工具提取，并轉(zhuǎn)換為CEF 文件。用Mass ProfinderProfessional（MPP）（Agilent Technologies）軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)篩選，只有頻率大于70% 的物質(zhì)被選作進(jìn)一步分析，最后用ID Browser（AgilentTechnologies）對(duì)未知物進(jìn)行鑒定。采用單因素方差分析法對(duì)樣品的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，然后進(jìn)行Bonferroni post hoc analysis 和Student’sunpaired t-test，Plt;0.05 表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。利用偏最小二乘回歸分析（partial least squaresdiscriminant analysis， PLS-DA）分析樣品之間的差異，并繪制得分圖[21]。

2 結(jié)果與分析

2.1 蜂蜜淀粉酶值比較分析

蜂蜜的淀粉酶活性是檢驗(yàn)其新鮮度的重要指標(biāo)，在生產(chǎn)、加工和貯存過程中，溫度過高可導(dǎo)致蜂蜜的淀粉酶活性下降。本研究中，所有樣品中80%的蜂蜜淀粉酶活性高于國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（不低于4 mL·g?1·h?1）[22]，淀粉酶活性均值為6.65 mL·g?1·h?1。由圖1可知，油菜蜜的淀粉酶活性顯著低于荊條蜜和洋槐蜜（沁水和宜川）（Plt;0.05），平均值為（3.42±0.70 ）mL·g?1·h?1；洋槐蜜（沁水）的淀粉酶活性顯著高于其他蜂蜜樣品（Plt;0.05），平均值為（12.66±2.44） mL·g?1·h?1。

2.2 蜂蜜中主要成分分析

由圖2可知，所有蜂蜜樣品的葡萄糖和果糖含量均高于國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（二者總含量不低于60%）[23]，最高的為荊條蜜，約是國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的1.27倍，6組蜂蜜樣品平均葡萄糖和果糖含量為國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的1.18倍。蜂蜜中還原糖（葡萄糖和果糖）含量較高，易被人體吸收利用。棗花蜜的葡萄糖含量顯著高于油菜蜜、中蜂蜜和洋槐蜜（宜川）（Plt;0.05），中蜂蜜的葡萄糖含量顯著低于荊條蜜、棗花蜜和洋槐蜜（沁水和宜川）（Plt;0.05）。荊條蜜的果糖含量顯著高于油菜蜜、棗花蜜和中蜂蜜（Plt;0.05），中蜂蜜的果糖含量顯著低于荊條蜜、棗花蜜和洋槐蜜（沁水和宜川）（Plt;0.05）。沁水洋槐蜜（62.33±5.37）mg GAEs·kg?1 和宜川洋槐蜜（60.21±12.49）mg GAEs·kg?1的總酚酸含量顯著低于油菜蜜、棗花蜜和中蜂蜜（Plt;0.05）。中蜂蜜的總酚酸含量為（369.68±130.57） mg GAEs·kg?1，顯著高于其他蜂蜜（Plt;0.05）。油菜蜜、棗花蜜和荊條蜜的總酚酸含量分別為（153.53±5.61）（149.67±21.88）和（125.34±12.15） mg GAEs·kg?1。此外，洋槐蜜（沁水）的總黃酮含量為（11.7±0.32） mg QEs·kg?1，顯著低于油菜蜜、棗花蜜和中蜂蜜（Plt;0.05）。中蜂蜜的總黃酮含量為（39.17±13.75） mg QEs·kg?1，顯著高于其他蜂蜜（Plt;0.05）。油菜蜜、棗花蜜、荊條蜜和洋槐蜜（宜川）的總黃酮含量分別為（24.23±0.71）（21.97±2.17）（18.76±3.43）和（15.12±2.62）mg QEs·kg?1。與Truchado等[24]測(cè)定的意大利和斯洛伐克洋槐蜜的結(jié)果基本一致，2個(gè)產(chǎn)地洋槐蜜樣品中的總酚酸和總黃酮含量均較低。本研究中棗花蜜中酚酸類化合物含量較高，與楊二林等[25]研究結(jié)果類似。但不同研究中，相同蜜源蜂蜜中酚酸和黃酮類化合物含量之間存在一定差異，說明蜂蜜中酚酸和黃酮的含量也受地區(qū)、地理?xiàng)l件的影響。

2.3 基于HPLC-Q-TOF/MS 的樣品蜜源鑒別

通過富集各蜂蜜樣品提取物中的活性成分，并利用安捷倫MPP軟件分析其在各樣品中的差異。為評(píng)估6組蜂蜜樣品之間活性成分的變化并簡(jiǎn)化數(shù)據(jù)管理，在MPP軟件中對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行偏最小二乘回歸分析（PLS-DA）算法。圖3 顯示的二維PLS-DA代表了53%的總變異，其中第1主成分（principal component 1，PC1）占總數(shù)據(jù)變異的35%，第2 主成分（principal component 2，PC2）占總數(shù)據(jù)變異18%。除2種洋槐蜂蜜高度重合外，其余4 種蜂蜜樣品分布區(qū)域均具有明顯的分離度。

圖4顯示的是隨機(jī)森林預(yù)測(cè)分析，以期尋找區(qū)分蜂蜜樣品的特征標(biāo)志物。隨著平均下降精度（mean decrease accuracy）的變大，目標(biāo)化合物作為生物標(biāo)志物在圖中右側(cè)顯示的排名越好。例如，脯氨酸（Pro）、組氨酸（His）、半胱氨酸（Cys）在中蜂蜜樣品中具有較高的相對(duì)豐度，而在洋槐蜜（沁水）樣品中具有較低的豐度，顯然是這些樣品組很好的預(yù)測(cè)者。同樣，羥基酪醇 1-O-葡萄糖苷（hydroxytyrosol 1-O-glucoside）在中蜂蜜樣品中具有較高的相對(duì)豐度，而在荊條蜜樣品中具有較低的豐度，說明其對(duì)于區(qū)分2 種蜂蜜具有較高價(jià)值。另外，洋槐蜜（沁水）和洋槐蜜（宜川）在隨機(jī)森林預(yù)測(cè)分析中，區(qū)分度較小，無法明顯區(qū)別開。

2.4 基于HPLC-Q-TOF/MS 的樣品產(chǎn)地鑒別

通過以上PLS-DA 分析、蜜源鑒別結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，洋槐蜜（沁水）和洋槐蜜（宜川）放在所有樣品中進(jìn)行分析，區(qū)分度很小，無法做到明確區(qū)分。因此，進(jìn)一步將2種洋槐蜜取出進(jìn)行PLS-DA分析和隨機(jī)森林預(yù)測(cè)分析。圖5顯示的二維PLS-DA代表了60.7%的總變異，其中第1主成分（PC1）占總數(shù)據(jù)變異的41.2%，第2主成分（PC2）占19.5%，說明對(duì)2種洋槐蜂蜜進(jìn)行單獨(dú)分析，依然可以區(qū)分開，即不同產(chǎn)地洋槐蜂蜜之間存在一定差異。

進(jìn)一步對(duì)洋槐蜜（沁水）和洋槐蜜（宜川）進(jìn)行隨機(jī)森林預(yù)測(cè)分析（圖6），以尋找區(qū)分蜂蜜樣品的特征標(biāo)志物。隨著平均下降精度的變大，目標(biāo)化合物作為生物標(biāo)志物在圖中右側(cè)顯示的排名越好。倍半萜化合物（palustrine）在沁水洋槐蜜樣品中具有較高的相對(duì)豐度，而在洋槐蜜（宜川）樣品中具有較低的豐度，顯然倍半萜化合物是2種蜂蜜樣品的很好的特征標(biāo)志物。因洋槐蜜（沁水）和洋槐蜜（宜川）只是產(chǎn)地不同，說明倍半萜化合物在不同產(chǎn)地洋槐蜂蜜的區(qū)分中，可能具有重要應(yīng)用價(jià)值。

3 討論

蜂蜜的各項(xiàng)理化指標(biāo)是表征蜂蜜品質(zhì)最簡(jiǎn)單、最基本的指標(biāo)。由于蜜源、氣候、產(chǎn)地、貯藏條件等的不同，蜂蜜中的理化指標(biāo)存在一定差異，但都保持在一定范圍內(nèi)[3]。糖是蜂蜜中含量最高的物質(zhì)，含量高達(dá)70%～80%，因收獲時(shí)間、蜜源、產(chǎn)地的不同，蜂蜜中的糖含量也不同[26‐27]。蜂蜜中主要的糖類是葡萄糖和果糖，其含量分別為15.5%～49.3% 和18.2%～48.0%[28]，其中果糖是表征蜂蜜營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的糖，本研究中荊條蜜和洋槐蜜中果糖含量相對(duì)較高，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。淀粉酶是表征蜂蜜釀造程度及新鮮程度的指標(biāo)，其一部分來源于花蜜，另一部分來源于蜜蜂分泌物，且蜜源植物對(duì)淀粉酶含量有一定影響。蜂蜜中的淀粉酶隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)和溫度的升高而降解[29]。本研究樣品沒有經(jīng)過高溫加熱，檢測(cè)前儲(chǔ)存于冰箱內(nèi)，蜂蜜的成分未受到降解。本研究揭示了蜜源對(duì)蜂蜜淀粉酶活性影響較大，洋槐蜜和荊條蜜中淀粉酶值較高。淀粉酶可促進(jìn)人體消化吸收，具有一定的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，是表征蜂蜜品質(zhì)的常見指標(biāo)[30‐31]。

酚酸和黃酮類物質(zhì)是蜂蜜中重要的生物活性成分，其中的對(duì)羥基苯甲酸、咖啡酸苯乙酯、木犀草素、槲皮素、山奈酚、芹菜素和柯因等已被證實(shí)具有抗氧化、抗炎和抗腫瘤等功效[32]。蜂蜜中已發(fā)現(xiàn)的酚酸和黃酮類物質(zhì)達(dá)幾十種，且在不同蜜源蜂蜜中含量差異較大，可作為鑒別蜂蜜蜜源的生物標(biāo)記物[33]。本研究中，6組蜂蜜樣品的總酚酸和總黃酮含量結(jié)果類似，均表現(xiàn)為中蜂蜜的含量最高，而洋槐蜜含量較低。6組蜂蜜樣品中總酚酸含量一般維持在60.21～396.68 mg·kg-1，含量較高，該結(jié)果與Bertoncel等[34]的研究相近，其發(fā)現(xiàn)斯洛文尼亞7種最常見蜂蜜樣品的總酚含量范圍為44.8～241.4 μg·g-1，且蜂蜜中總酚含量的高低與其抗氧化能力的強(qiáng)弱有很大聯(lián)系。

經(jīng)HPLC-Q-TOF/MS 對(duì)蜂蜜活性富集物進(jìn)行非靶標(biāo)代謝物質(zhì)分析，所有進(jìn)入色譜柱被采集到的物質(zhì)都被保留下來，經(jīng)MPP軟件分析不同組蜂蜜間的物質(zhì)差異，并通過PLS-DA 分析對(duì)不同組蜂蜜進(jìn)行判別分析，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)不同蜜源蜂蜜樣品的明顯區(qū)分，而同一蜜源的蜂蜜樣品不能被分離。當(dāng)單獨(dú)分析不同產(chǎn)地的同一蜜源蜂蜜時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)地的區(qū)分，其中倍半萜化合物（palustrine）發(fā)揮了重要作用，可作為洋槐蜂蜜產(chǎn)地區(qū)分的標(biāo)志物質(zhì)。倍半萜化合物主要來源為多年生草本植物犬問荊（Equisetum palustre L.），可用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、動(dòng)脈粥樣硬化等[35]。山西沁水產(chǎn)的洋槐蜂蜜中Palustrine 含量較高，說明當(dāng)?shù)匮蠡被ㄆ?，犬問荊植物生長(zhǎng)面積大，蜜蜂在采集洋槐花蜜的過程中，混入了倍半萜化合物成分，增加了其特殊性。另一方面，本研究利用HPLC-Q-TOF/MS分析了來自5個(gè)蜜源的6組蜂蜜樣品，對(duì)采集到的化合物進(jìn)行全局性分析，并實(shí)施多變量統(tǒng)計(jì)分析以進(jìn)行分類和預(yù)測(cè)，結(jié)果表明，6組蜂蜜樣品分布存在明顯差異，通過PLS-DA判別分析可以明顯區(qū)分蜂蜜的蜜源和產(chǎn)地信息，說明不同來源蜂蜜中化學(xué)成分差異明顯，預(yù)示著通過HPLC-Q-TOF/MS區(qū)分不同來源蜂蜜的方法切實(shí)可行。

參 考 文 獻(xiàn)

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