基于Th1、Th2細(xì)胞因子探討清腸合劑改善術(shù)后腹腔粘連的機(jī)制

摘要：目的 探討清腸合劑改善大鼠術(shù)后腹腔粘連的效果及其可能的作用機(jī)制。方法 75只SD大鼠隨機(jī)分為5組：空白組、假手術(shù)組、模型組、清腸合劑組及透明質(zhì)酸鈉組。除空白組和假手術(shù)組外，其余3組采用盲腸刮擦法建立腹腔粘連大鼠模型；透明質(zhì)酸鈉組用2 mL透明質(zhì)酸鈉凝膠均勻涂抹受損的腹壁及盲腸后關(guān)腹。清腸合劑組造模成功后每日予2 mL清腸合劑（14.58 g/kg）灌胃1次，其余4組予等體積生理鹽水灌胃。每組分別于術(shù)后第3、7、14天處死5只大鼠，采用Nair’s評(píng)分評(píng)估腹腔粘連情況，并收集術(shù)后7 d粘連組織或正常腹膜組織，應(yīng)用熒光定量PCR法檢測(cè)白細(xì)胞介素（IL）-4、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6（STAT-6）及干擾素-γ（IFN-γ）的mRNA表達(dá)水平；Western blot檢測(cè)IL-4、IL-10、STAT-6及IFN-γ的蛋白表達(dá)情況；蘇木精-伊紅染色后光鏡下觀察各組粘連組織病理變化，評(píng)估炎癥和纖維形成情況。結(jié)果 與空白組和假手術(shù)組相比，模型組粘連組織中IL-4、STAT-6的mRNA和蛋白表達(dá)水平以及IL-10的蛋白表達(dá)水平下降，IFN-γ的mRNA和蛋白表達(dá)水平、炎癥評(píng)分及纖維評(píng)分均升高（P＜0.05）。與模型組相比，清腸合劑組和透明質(zhì)酸鈉組的IL-4和STAT-6的mRNA和蛋白表達(dá)水平以及IL-10蛋白表達(dá)水平均升高；Nair’s評(píng)分、炎癥評(píng)分、纖維評(píng)分以及IFN-γ的mRNA和蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05）。結(jié)論 清腸合劑可以抑制術(shù)后腹腔粘連的形成，其機(jī)制可能與調(diào)控輔助性T細(xì)胞1、輔助性T細(xì)胞2相關(guān)的細(xì)胞因子，降低炎癥反應(yīng)水平有關(guān)。

關(guān)鍵詞：Th1細(xì)胞；Th2細(xì)胞；術(shù)后腹腔粘連；清腸合劑；炎癥反應(yīng)

中圖分類號(hào)：R285.5，R656 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20241146

Mechanism study of Qingchang mixture in the treatment of postoperative abdominal adhesions by regulating the expression of Th1 and Th2 cytokines

SHI Jingbo1， LI Changnian1， MENG Yuxuan1， XIE Guangdong2， XU Jie3， RONG Baohai2△

1 First Clinical Medical College， Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Ji’nan 250355， China;

2 Department of Gastrointestinal and Hernia Surgery， 3 Department of Hematology， the Affiliated Hospital of

Shandong University of Traditional Chinese Medicine

△Corresponding Author E-mail： rbh666666@126.com

Abstract： Objective To elucidate the efficacy and possible mechanism of Qingchang mixture in ameliorating postoperative abdominal adhesions in rats. Methods Seventy-five Sprague-Dawley rats were randomly allocated into five experimental groups： the control group， the sham-operated group， the model group， the Qingchang mixture treatment group and the sodium hyaluronate treatment group. Except the control group and the sham-operated group， the other three groups were treated with cecal abrasion method to establish the rat model of abdominal adhesion. In the sodium hyaluronate group， 2 mL sodium hyaluronate gel was meticulously applied to the injured abdominal wall and cecum prior to abdominal closure. Following successful establishment of adhesion model， the Qingchang mixture group received a daily oral gavage of 2 mL Qingchang mixture （14.58 g/kg）， while the other four groups were given equal volume normal saline administration. In each group， five rats were euthanized on postoperative days 3， 7 and 14 to assess abdominal adhesions using Nair’s scoring system. Adhesive tissue or normal peritoneal tissue were harvested on postoperative day 7， and mRNA expression levels of interleukin-4 （IL-4）， signal transducer and activator of transcription 6 （STAT-6） and interferon-γ （IFN-γ） were quantified via fluorescence-based real-time PCR. Concurrently， Western blot analysis was employed to evaluate protein expression levels of IL-4， interleukin-10 （IL-10）， STAT-6 and IFN-γ. Pathological alterations in adhesive tissue were visualized using hematoxylin-eosin （HE） staining under light microscopy， and inflammation and fibrotic changes were assessed accordingly. Results Compared with the blank and sham-operated groups， mRNA and protein expression levels of IL-4 and STAT-6 were significantly downregulated in the model group， protein expression level of IL-10 was also reduced. Conversely， the mRNA and protein expression levels of IFN-γ， as well as the inflammation and fibrosis scores were significantly elevated （P＜0.05）. In comparison to the model group， IL-4 and STAT-6 mRNA and protein expression levels were increased in the Qingchang mixture group and the hyaluronic acid group， along with an increase in IL-10 protein expression. Conversely， these groups exhibited a significant reduction in Nair’s scores， inflammation scores， fibrosis scores， and IFN-γ mRNA and protein expression levels were decreased （P＜0.05）. Conclusion Qingchang mixture appears to suppress the development of postoperative peritoneal adhesions， likely through mechanism that involves modulating the expression of T-helper 1 and T-helper 2 cytokines， thereby attenuating inflammatory response.

Key words： Th1 cells; Th2 cells; postoperative intra-abdominal adhesions; Qingchang mixture; inflammatory response

腹腔粘連是常見的腹部外科手術(shù)并發(fā)癥之一，多發(fā)生于接受開腹手術(shù)的患者中［1］。腹腔粘連的發(fā)生主要與炎癥反應(yīng)［2］和免疫反應(yīng)［3］相關(guān)。輔助性T細(xì)胞（T-helper，Th）1及相關(guān)因子在炎癥和免疫反應(yīng)中作用突出，Th1和Th2是CD4+ T細(xì)胞介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)在炎癥性疾病中的表型［4］。研究表明，粘連組織的形成可能與針對(duì)成纖維細(xì)胞的天然免疫反應(yīng)有關(guān)［5］，Th1刺激干擾素-γ（IFN-γ）的產(chǎn)生，促進(jìn)細(xì)胞免疫應(yīng)答［6］，Th2刺激白細(xì)胞介素（IL）-4與IL-10等抗炎因子的分泌，當(dāng)IL-4與細(xì)胞表面上的受體結(jié)合時(shí)，會(huì)激活受體上的一種酪氨酸激酶，從而磷酸化并激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6（STAT-6）［7-8］，STAT-6進(jìn)入細(xì)胞核從而影響細(xì)胞功能并發(fā)揮抗炎作用［9］。相關(guān)研究表明，IFN-γ、IL-4、IL-10、STAT-6等因子與通路參與腹腔粘連的發(fā)生［10-11］。非甾體類消炎藥、皮質(zhì)激素等藥物在一定程度上能夠減輕腹腔臟器組織反應(yīng)，預(yù)防腹腔粘連，但由于其不良反應(yīng)及不穩(wěn)定性，使得應(yīng)用范圍受到限制［2］。因此，鑒于臨床上對(duì)于良好治療效果和最小毒副作用的綜合需求，中醫(yī)藥在防治術(shù)后腹腔粘連中展現(xiàn)出了良好的應(yīng)用價(jià)值。清腸合劑為我中心自制劑，前期研究證明了其在防治腹腔粘連中的優(yōu)異效果［12-13］。本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探究清腸合劑改善術(shù)后腹腔粘連的機(jī)制，為中醫(yī)藥傳統(tǒng)理論結(jié)合免疫炎癥反應(yīng)治療腹腔粘連提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康雄性SD大鼠75只，6周齡，體質(zhì)量250～270 g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2021-0006。大鼠置于帶蓋鼠籠中，飼養(yǎng)于山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院（山東省中醫(yī)院）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心層流架內(nèi)（符合SPF標(biāo)準(zhǔn)），溫度20～25 ℃，濕度55%～60%，自由攝食飲水。鼠籠、飲用水、標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料、墊料及一切與鼠接觸物品均高壓滅菌處理。更換墊料、水食均在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后進(jìn)行造模。實(shí)驗(yàn)方案已通過山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理批號(hào)：SDSZYYAWE20230728001）。

1.1.2 主要試劑與儀器 清腸合劑：大黃15 g、芒硝30 g、枳實(shí)15 g、厚樸30 g、炒桃仁12 g、赤芍15 g、炒萊菔子30 g、木香15 g，濃縮至82.5 mL（約2 g/mL）。以上藥物由山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥制劑實(shí)驗(yàn)室（國(guó)家三級(jí)中藥制劑實(shí)驗(yàn)室）配制成中藥藥液，灌裝于250 mL輸液瓶中，置于105 ℃流通蒸汽滅菌，無菌試驗(yàn)陰性后加青霉素100 U/mL、鏈霉素100 mg/L，正壓過濾除菌，4 ℃保存，用時(shí)平衡至室溫。透明質(zhì)酸鈉購自索萊寶生物科技有限公司；通用型組織固定液、蘇木精染液、伊紅染液購自塞維爾生物科技有限公司；RT-qPCR引物購自鉑尚生物技術(shù)有限公司；總RNA提取試劑盒和反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自信天翁生物技術(shù)有限公司；BCA蛋白定量濃度測(cè)定試劑盒，無蛋白快速封閉液，Western blot一抗、二抗稀釋液購自美侖生物技術(shù)有限公司；RIPA蛋白裂解液購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；PVDF膜購自Immobilon；PAGE凝膠快速制備試劑盒購自雅酶生物醫(yī)藥科技有限公司；超敏化學(xué)發(fā)光試劑盒購自思科捷生物技術(shù)有限公司；SDS-PAGE快速電泳液、快速轉(zhuǎn)膜液購自積福生命科學(xué)有限公司；β-actin抗體、二抗購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；目的蛋白抗體購自Affinity Biosciences。

1.2 方法

1.2.1 腹腔粘連大鼠模型的建立及分組 將75只大鼠編號(hào)后采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組（非腹腔粘連大鼠，予生理鹽水灌胃）、假手術(shù)組（將大鼠盲腸向外拉出后放回關(guān)腹，然后生理鹽水灌胃）、模型組（腹腔粘連模型大鼠予生理鹽水灌胃）、清腸合劑組（腹腔粘連模型大鼠予清腸合劑灌胃）、透明質(zhì)酸鈉組（每只腹腔粘連模型大鼠造模時(shí)予2 mL透明質(zhì)酸鈉凝膠均勻涂抹于受損的腹壁及盲腸后關(guān)腹，并予生理鹽水灌胃），每組15只。腹腔粘連造模方法如下：術(shù)前12 h禁食不禁水，腹腔注射3%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，用鑷子輕夾大鼠四趾腳趾，判斷大鼠進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)后將其仰臥固定于手術(shù)板進(jìn)行腹部備皮，經(jīng)碘伏消毒皮膚，取前腹正中線開腹，拉出盲腸并置于無菌紗布上5 min使?jié){膜干燥，后用手術(shù)刀反復(fù)刮擦回盲部與腹壁接觸面至漿膜層表面出現(xiàn)明顯針尖狀出血點(diǎn)，再用無齒鑷夾住盲腸系膜動(dòng)脈2 min造成局部缺血，以手術(shù)刀刮擦腹壁接觸面至出血，后將盲腸納入腹腔原位，接觸面緊貼，逐層關(guān)腹，縫合消毒，以上步驟均在無菌條件下進(jìn)行。假手術(shù)組開腹關(guān)腹但不手術(shù)，造模后按組別分籠飼養(yǎng)，術(shù)后12 h予自由飲水，術(shù)后24 h予標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。

1.2.2 給藥方法與處理方案 手術(shù)24 h后每日切口消毒1次，清腸合劑組每日按14.58 g/kg予2 mL的清腸合劑灌胃1次，直至處死；其余4組予等體積生理鹽水灌胃。分別于術(shù)后第3、7、14天麻醉大鼠后取“U”型切口進(jìn)腹，每組每次取5只大鼠，采用Nair’s評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［14］評(píng)估大鼠腹腔粘連情況。粘連程度分級(jí)由2位非實(shí)驗(yàn)參與人員在雙盲情況下評(píng)定。提取粘連組織標(biāo)本于通用型組織固定液中保存，行石蠟包埋，用于HE染色，后采用腹主動(dòng)脈取血法處死大鼠，取術(shù)后7 d的粘連組織或正常組織進(jìn)行熒光定量PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 RT-qPCR檢測(cè)IFN-γ、IL-4、STAT-6 mRNA表達(dá)水平 取術(shù)后粘連組織，Trizol法提取總RNA，檢測(cè)所得RNA純度及濃度后，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒中說明書步驟逆轉(zhuǎn)錄提取cDNA后，qPCR檢測(cè)mRNA的表達(dá)。根據(jù)PCR試劑盒說明書配置反應(yīng)總體系（10 μL）：1 μL cDNA，5 μL PCR試劑，上、下游引物各0.2 μL，3.6 μL無酶水，引物序列見表1。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)。β-actin為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法量化IFN-γ、IL-4和STAT-6的相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.4 Western blot檢測(cè)IFN-γ、IL-4、IL-10及STAT-6蛋白表達(dá) 將收集好的粘連組織加入RIPA裂解液充分研磨制備蛋白裂解液，4 ℃、13 000 r/min離心15 min后收集上清液，BCA法測(cè)定各組蛋白濃度。向總蛋白中加入10×loading buffer，100 ℃煮沸5 min變性，根據(jù)樣本濃度上樣，SDS-PAGE分離蛋白，用電轉(zhuǎn)儀將分離后的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，無蛋白快速封閉液封閉20 min，加入一抗（β-actin：1∶10 000；IL-4：1∶1 000；STAT-6：1∶1 000；IL-10：1∶1 000；IFN-γ：1∶1 000），4 ℃孵育過夜，TBST洗膜5次，加入稀釋后的HRP標(biāo)記的山羊抗兔二抗（1∶5 000），37 ℃室溫孵育1 h，TBST洗膜5次，電化學(xué)發(fā)光法曝光顯影，Image J（Version 1. 53c）軟件進(jìn)行灰度值分析。

1.2.5 HE染色觀察炎癥程度和纖維形成情況 將粘連組織標(biāo)本固定、脫水、透明化、包埋、切片后，將切片放入二甲苯中浸泡以溶解石蠟，脫蠟后的切片在乙醇中浸泡，后將切片放入蘇木精水溶液中充分染色10 min，再用1%的鹽酸乙醇進(jìn)行分化，之后使用乙醇伊紅染色液充分染色3 min，乙醇脫水，將脫水的切片用二甲苯浸泡后風(fēng)干，封片，固定后進(jìn)行HE染色。在光鏡下每張切片隨機(jī)選擇3個(gè)視野取評(píng)分均值，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見文獻(xiàn)［15］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Graphpad Prism 9.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（[x]±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況觀察 實(shí)驗(yàn)過程中各組無死亡，術(shù)后切口愈合情況較好，未見切口感染。術(shù)后24 h各組大鼠一般情況較差，納少，活動(dòng)少；術(shù)后48 h各組情況較前有所緩解，飲食、活動(dòng)增加；術(shù)后72 h各組一般情況尚可，飲食及活動(dòng)恢復(fù)正常，各組均未見術(shù)后并發(fā)癥。

2.2 大鼠腹腔粘連情況及Nair’s評(píng)分比較 透明質(zhì)酸鈉組有14只大鼠發(fā)生腹腔粘連，表現(xiàn)為單個(gè)或兩個(gè)，纖維粘連呈帶狀；清腸合劑組13只大鼠形成腹腔粘連，粘連組織較前者稀松；假手術(shù)組僅6只大鼠發(fā)生粘連，粘連組織稀松，情況明顯減輕；模型組大鼠全部發(fā)生腹腔粘連，粘連組織致密，多呈片狀或切口下粘連。與假手術(shù)組相比，模型組Nair’s評(píng)分升高，與模型組相比較，清腸合劑組與透明質(zhì)酸鈉組Nair’s評(píng)分下降（P＜0.05）；清腸合劑組和透明質(zhì)酸鈉組清腸合劑組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2、圖1。

2.3 各組大鼠粘連組織中IL-4、STAT-6及IFN-γ mRNA表達(dá)水平比較 與空白組和假手術(shù)組相比，模型組粘連組織中IL-4、STAT-6 mRNA表達(dá)下降，IFN-γ mRNA表達(dá)升高（P＜0.05）。與模型組相比，清腸合劑組和透明質(zhì)酸鈉組中IL-4、STAT-6的mRNA表達(dá)水平升高，IFN-γ mRNA表達(dá)水平降低（P＜0.05），清腸合劑組與透明質(zhì)酸鈉組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

2.4 各組大鼠粘連組織中STAT-6、IL-4、IL-10及IFN-γ蛋白水平表達(dá)變化 與空白組和假手術(shù)組比較，模型組粘連組織中STAT-6、IL-4、IL-10的蛋白表達(dá)下降，IFN-γ的蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）。與模型組相比，清腸合劑組和透明質(zhì)酸鈉組粘連組織中STAT-6、IL-4、IL-10的表達(dá)均升高，IFN-γ的蛋白表達(dá)水平下降（P＜0.05），清腸合劑組與透明質(zhì)酸鈉組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4、圖2。

2.5 各組腹腔粘連組織HE染色及炎癥和纖維評(píng)分結(jié)果 炎癥反應(yīng)方面，空白組和假手術(shù)組未見明顯的壞死及纖維細(xì)胞形成等異常；模型組可見較多纖維細(xì)胞形成，伴有較多的淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn); 清腸合劑組與透明質(zhì)酸鈉組炎癥情況較模型組均有不同程度的減輕，見圖3。炎癥評(píng)分與纖維評(píng)分方面，與空白組和假手術(shù)組比較，模型組炎癥評(píng)分與纖維評(píng)分升高（P＜0.05）；與模型組相比，清腸合劑組評(píng)分均顯著降低（P＜0.05），但透明質(zhì)酸鈉組與模型組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表5。

3 討論

腹腔粘連發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前暫無推廣價(jià)值較高的治療方法和預(yù)防措施，也缺乏針對(duì)其發(fā)生機(jī)制的相關(guān)研究。研究表明，透明質(zhì)酸鈉可以有效減少大鼠術(shù)后腹腔粘連的發(fā)生率［16-17］，其在炎癥治療中也起到了關(guān)鍵的作用［18-19］。本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證清腸合劑改善術(shù)后腹腔粘連的效果，并將其療效與透明質(zhì)酸鈉做對(duì)比，認(rèn)為其可能的機(jī)制是通過調(diào)控Th1細(xì)胞因子IFN-γ、Th2細(xì)胞因子IL-4和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白STAT-6的表達(dá)激活抗炎作用，降低炎癥反應(yīng)水平，減少纖維細(xì)胞形成。通常手術(shù)所造成的組織損傷、缺血缺氧、毛細(xì)血管增生會(huì)破壞細(xì)胞外基質(zhì)中纖維蛋白沉積與溶解之間的平衡，隨后的愈合過程會(huì)刺激組織粘連，引起炎癥反應(yīng)。IL-4是一種抗炎因子，可以促進(jìn)抗炎反應(yīng)，降低炎癥細(xì)胞的活性和炎性因子的產(chǎn)生，并可能通過影響成纖維細(xì)胞的活性從而影響粘連形成［11］。STAT-6被認(rèn)為是IL-4信號(hào)傳導(dǎo)的主要介質(zhì)之一，兩者有著密不可分的聯(lián)系，STAT-6的活化可以促進(jìn)抗炎因子產(chǎn)生，進(jìn)而抑制腹腔粘連中的炎癥反應(yīng)［10］。炎癥反應(yīng)發(fā)生時(shí)，腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞也會(huì)被激活而分泌IFN-γ、IL-10等因子來參與炎癥反應(yīng)，發(fā)揮相應(yīng)作用［20］。此外，有研究認(rèn)為纖維蛋白的形成與凝血酶密切相關(guān)，作為血液凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的主要效應(yīng)蛋白酶，腹腔內(nèi)的凝血酶會(huì)觸發(fā)纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，Th1細(xì)胞因子IFN-γ和Th2細(xì)胞因子IL-4也可能通過影響多種免疫炎癥相關(guān)的細(xì)胞和分子通路，對(duì)凝血酶的產(chǎn)生和活性產(chǎn)生影響［21］。

中醫(yī)將腹腔粘連歸結(jié)于腸結(jié)、癥瘕積聚等范疇，本病多由術(shù)后損傷腸絡(luò)，氣血虧虛，推動(dòng)無力，滲液為痰，溢血為瘀，痰瘀內(nèi)閉，滯于腸中，久則腸中氣機(jī)痞塞，糟粕秘結(jié)，終致腸腑閉塞，通降失調(diào)而發(fā)?。?2］。在“六腑以通為用”的理論指導(dǎo)下，治療總原則當(dāng)以“理氣通腑，活血化瘀”為要［23］。清腸合劑以“理氣通腑，活血化瘀”為基本治則，方藥組成以大承氣湯為基礎(chǔ)。楊有勝等［24］研究表明，復(fù)方大承氣湯灌腸可有效改善粘連性腸梗阻的癥狀， 并能降低血清C反應(yīng)蛋白、中性粒細(xì)胞及白細(xì)胞等炎癥因子水平。清腸合劑由大承氣湯加減化裁而來，多用于防治術(shù)后腸粘連，前期本中心應(yīng)用其治療取得了良好的效果［12］，方中大黃、芒硝瀉下攻積，炒桃仁、赤芍活血化瘀，木香行氣止痛，枳實(shí)、厚樸、炒萊菔子共奏降氣消痞除滿之功，諸藥合用，軟堅(jiān)散結(jié)，通降六腑。

本研究顯示經(jīng)清腸合劑處理后，大鼠粘連組織的炎癥水平和纖維化程度顯著降低。在RT-qPCR和Western blot實(shí)驗(yàn)中，清腸合劑組和透明質(zhì)酸鈉組的抗炎因子IL-4、STAT-6 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著提高，而促炎因子IFN-γ mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低；此外，在Western blot實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步證實(shí)了藥物干預(yù)后粘連組織抗炎因子IL-10表達(dá)升高，這提示清腸合劑改善腹腔粘連的機(jī)制可能與通過調(diào)節(jié)Th1、Th2細(xì)胞因子來降低炎癥反應(yīng)水平有關(guān)，可以從Th1、Th2細(xì)胞因子入手來防治術(shù)后腹腔粘連。與此同時(shí)，本研究仍存在一定的局限性，其一，本研究為動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，對(duì)于清腸合劑在人體術(shù)后腹腔粘連治療中的作用效果尚不明確，仍需進(jìn)一步研究；其二，本研究未進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證清腸合劑含藥血清抑制炎癥反應(yīng)的具體作用機(jī)制，可在后續(xù)的研究中進(jìn)一步開展。

綜上所述，清腸合劑可能通過調(diào)控Th1細(xì)胞因子IFN-γ、Th2細(xì)胞因子IL-4和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白STAT-6的表達(dá)來降低炎癥反應(yīng)水平，從而調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞活性，影響纖維組織形成，最終改善術(shù)后腹腔粘連。本研究初步驗(yàn)證了清腸合劑通過調(diào)控Th1、Th2細(xì)胞因子的表達(dá)改善術(shù)后腹腔粘連的效果，預(yù)期進(jìn)一步揭示腹腔粘連的發(fā)病機(jī)制與炎癥以及免疫之間的關(guān)系，可以為預(yù)防術(shù)后腹腔粘連提供新的治療方案，從而降低患者腹部術(shù)后腹腔粘連的發(fā)生率，為臨床治療提供新的思路。

參考文獻(xiàn)

［1］ SIROVY M，KRUPOVA M，HYSPLER R，et al. Lipid emulsions prevent postoperative abdominal adhesions［J］. Asian J Surg，2023，46（1）：465-471. doi：10.1016/j.asjsur.2022.05.119.

［2］ CARMICHAEL S P 2nd，SHIN J，VAUGHAN J W，et al. Regenerative medicine therapies for prevention of abdominal adhesions：a scoping review［J］. J Surg Res，2022，275：252-264. doi：10.1016/j.jss.2022.02.005.

［3］ KOSAKA H，KAIBORI M，CHU D I，et al. Role of substance p-dependent chemotactic signaling in postoperative adhesion formation［J］. J Surg Res，2022，270：49-57. doi：10.1016/j.jss.2021.08.038.

［4］ MATIA-GARCIA I，VADILLO E，PELAYO R，et al. Th1/Th2 balance in young subjects： relationship with cytokine levels and metabolic profile［J］. J Inflamm Res，2021，14：6587-6600. doi：10.2147/JIR.S342545.

［5］ ALPAY Z，OZG?NENEL M S，SAVA?AN S，et al. Possible role of natural immune response against altered fibroblasts in the development of post-operative adhesions［J］. Am J Reprod Immunol，2006，55（6）：420-427. doi：10.1111/j.1600-0897.2006.00378.x.

［6］ CHEN X，HU J，WANG Y，et al. The FoxO4/DKK3 axis represses IFN-γ expression by Th1 cells and limits antimicrobial immunity［J］. J Clin Invest，2022，132（18）：e147566. doi：10.1172/JCI147566.

［7］ WANG X，MAO D，JIA J，et al. Benvitimod inhibits IL-4- and IL-13-induced tight junction impairment by activating AHR/ARNT pathway and inhibiting STAT6 phosphorylation in human keratinocytes［J］. J Invest Dermatol，2024，144（3）：509-519.e7. doi：10.1016/j.jid.2023.07.027.

［8］ JUNG D H，LEE A，HWANG Y H，et al. Therapeutic effects of pulsatilla koreana nakai extract on ovalbumin-induced allergic rhinitis by inhibition of Th2 cell activation and differentiation via the IL-4/STAT6/GATA3 pathway［J］. Biomed Pharmacother，2023，162：114730. doi：10.1016/j.biopha.2023.114730.

［9］ NEPAL S，TIRUPPATHI C，TSUKASAKI Y，et al. STAT6 induces expression of Gas6 in macrophages to clear apoptotic neutrophils and resolve inflammation［J］. Proc Natl Acad Sci U S A，2019，116（33）：16513-16518. doi：10.1073/pnas.1821601116.

［10］ REKHI B，BAPAT P， SHETTY O. A rare case of a vaginal solitary fibrous tumor， presenting as a cystic mass， showing NAB2ex4-STAT6ex2 fusion and STAT6 immunostaining［J］. Int J Gynecol Pathol，2019，38（1）：21-26. doi：10.1097/PGP.0000000000000479.

［11］ JUNGA A，PILMANE M，āBOLA Z，et al. Interleukin（IL）-1，4，6，7，8，10 appearance in congenital intra-abdominal adhesions in children under 1 year of age［J］. Appl Immunohistochem Mol Morphol，2018，26（9）：664-669. doi：10.1097/PAI.0000000000000498.

［12］ 王猛，丁建，榮寶海，等. 清腸合劑灌腸對(duì)粘連性腸梗阻血漿胃動(dòng)素及白細(xì)胞介素6的影響［J］. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2018，24（1）：7-10. WANG M，DING J，RONG B H，et al. Effect of Qingchang mixture enema on plasma motilin and IL-6 in adhesive intestinal obstruction［J］. Chinese Journal of Surgery of Integrated Traditional and Western Medicine，2018，24（1）：7-10. doi：10.3969/j.issn.1007-6948.2018.01.002.

［13］ 朱勇，解廣東，王猛，等. 清腸合劑在胃癌術(shù)后胃腸功能恢復(fù)中的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)［J］. 中醫(yī)臨床研究，2019，11（35）：36-38. ZHU Y，XIE G D，WANG M，et al. Application of the Qingchang mixture in the recovery of gastrointestinal function after gastric cancer operation［J］. Clinical Journal of Chinese Medicine，2019，11（35）：36-38. doi：10.3969/j.issn.1674-7860.2019.35.013.

［14］ NAIR S K，BHAT I K，AURORA A L. Role of proteolytic enzyme in the prevention of postoperative intraperitoneal adhesions［J］. Arch Surg，1974，108（6）：849-853. doi：10.1001/archsurg.1974.01350300081019.

［15］張志星，龍延濱，宋斌，等. 根皮素聯(lián)合透明質(zhì)酸鈉抑制大鼠模型術(shù)后腹腔粘連形成及其機(jī)制研究［J］. 中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2023，30（11）：1323-1328. ZHANG Z X，LONG Y B，SONG B，et al. Phloretin combined with sodium hyaluronate inhibits formation of postoperative abdominal adhesions in a rat model and its mechanism［J］. Chinese Journal of Bases and Clinics in General Surgery，2023，30（11）：1323-1328. doi：10.7507/1007-9424.202307023.

［16］ ALMAMAR A，SCHLACHTA C M，ALKHAMESI N A. The systemic effect and the absorption rate of aerosolized intra-peritoneal heparin with or without hyaluronic acid in the prevention of postoperative abdominal adhesions［J］. Surg Endosc，2019，33（8）：2517-2520. doi：10.1007/s00464-018-6540-2.

［17］ LIU B，KONG Y，ALIMI O A，et al. Multifunctional microgel-based cream hydrogels for postoperative abdominal adhesion prevention［J］. ACS Nano，2023，17（4）：3847-3864. doi：10.1021/acsnano.2c12104.

［18］ MARINHO A，NUNES C，REIS S. Hyaluronic acid： a key ingredient in the therapy of inflammation［J］. Biomolecules，2021，11（10）：1518. doi：10.3390/biom11101518.

［19］ ZHAO J. Hyaluronic acid-modified and TPCA-1-loaded gold nanocages alleviate inflammation［J］. Pharmaceutics，2019，11（3）：143. doi：10.3390/pharmaceutics11030143.

［20］ 胡英山，王晶晶，高紅梅. 膿毒癥相關(guān)腸道功能障礙發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展［J］. 天津醫(yī)藥，2023，51（3）：333-336. HU Y S，WANG J J，GAO H M. Research progress in the pathogenesis of sepsis-related intestinal dysfunction［J］. Tianjin Med J，2023，51（3）：333-336. doi：10.11958/20221492.

［21］ MORIS D，CHAKEDIS J，RAHNEMAI-AZAR A A，et al. Postoperative abdominal adhesions： clinical significance and advances in prevention and management［J］. J Gastrointest Surg，2017，21：1713-1722. doi：10.1007/s11605-017-3488-9.

［22］ 曾莉，顏帥，李文林. 中醫(yī)藥抗腹腔粘連實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］. 南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，30（1）：93-96. ZENG L，YAN S，LI W L. Experimental research progress of traditional Chinese medicine preventing and treating peritoneal adhesion［J］. Journal of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，2014，30（1）：93-96. doi：10.14148/j.issn.1672-0482.2014.01.013.

［23］ 樊玉青，吳蘭蘭，李永彪，等. 中藥防治術(shù)后腹腔粘連機(jī)制研究進(jìn)展［J］. 中國(guó)中藥雜志，2020，45（18）：4358-4363. FAN Y Q，WU L L，LI Y B，et al. Research progress on mechanisms of traditional Chinese medicine in prevention and treatment of postoperative peritoneal adhesion［J］. China Journal of Chinese Materia Medica，2020，45（18）：4358-4363. doi：10.19540/j.cnki.cjcmm.20200609.601.

［24］ 楊有勝. 復(fù)方大承氣湯對(duì)粘連性腸梗阻患者CRP、ESR、NEU的影響［J］. 遼寧中醫(yī)雜志，2023，50（1）：66-69. YANG Y S . Influence of Compound Dachengqi Decoction（復(fù)方大承氣湯）on CRP，ESR and NEU in patients with adhesive intestinal obstruction［J］. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine，2023，50（1）：66-69. doi：10.13192/j.issn.1000-1719.2023.01.019.

（2024-08-19收稿 2024-10-10修回）

（本文編輯 胡小寧）