黃瓜枯萎病拮抗昆蟲共生菌的篩選及抑菌機(jī)制初步研究

摘要：為篩選新的防治黃瓜枯萎病的生防菌資源。從昆蟲體表及體內(nèi)分離昆蟲共生細(xì)菌，采用對(duì)峙法、生長(zhǎng)速率法和盆栽法對(duì)分離的細(xì)菌進(jìn)行抑菌活性測(cè)定，篩選出具有較強(qiáng)抑菌活性的昆蟲共生菌，并對(duì)其抑菌機(jī)制進(jìn)行初步研究。結(jié)果表明，從蠐螬和蟬幼蟲體表及體內(nèi)共分離得到104株細(xì)菌，獲得2株抑菌活性較好的昆蟲共生細(xì)菌QC02和QC04，其發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.cucumebrium）的抑制率分別為56.03%、51.17%，盆栽防效分別為44.00%、47.00%；經(jīng)過初步鑒定，菌株QC02和QC04分別為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）和多黏類芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa）。2株共生細(xì)菌發(fā)酵濾液可顯著抑制黃瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)，并且可產(chǎn)生纖維素酶、葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶等多種胞外酶，含有表面活性素、伊枯草菌素、豐原素等脂肽類抗生素相關(guān)基因。結(jié)果表明，菌株QC02和QC04在防治植物病害方面具有較好的應(yīng)用潛力。

關(guān)鍵詞：貝萊斯芽孢桿菌；多黏類芽孢桿菌；黃瓜枯萎病；抑菌活性；生防菌

中圖分類號(hào)：S436.421.1₊3" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2024）19-0143-08

收稿日期：2023-11-14

基金項(xiàng)目：天津市科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：21ZYCGSN00520）。

作者簡(jiǎn)介：葉 敏（1996—），男，江蘇常州人，碩士研究生，從事微生物源農(nóng)藥研究與應(yīng)用。E-mail：3080508568@qq.com。

通信作者：田小衛(wèi)，博士，副教授，從事微生物源農(nóng)藥研究與應(yīng)用。E-mail：1267542@qq.com。

尖孢鐮刀菌在十大植物病原真菌中排名第五，可以引起多種植物的土傳病害，而黃瓜枯萎病是其中較為嚴(yán)重的一種，發(fā)病率一般為10%～30%，嚴(yán)重時(shí)可達(dá)70%，可以導(dǎo)致黃瓜幼苗死亡、減產(chǎn)并導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟(jì)損失^［1-2］。防治黃瓜枯萎病的方法多樣，包括培育抗病品種、嫁接、種子和土壤消毒、輪作或休耕、使用化學(xué)農(nóng)藥及利用拮抗微生物進(jìn)行生物防治。其中，常用和有效的方法是使用化學(xué)殺菌劑，但使用不當(dāng)會(huì)造成環(huán)境污染、病原菌抗藥性增強(qiáng)以及農(nóng)藥殘留威脅人類健康等嚴(yán)重問題^［3-4］。生物防治是一種環(huán)境友好型的防治方法，包括使用拮抗微生物、非致病性的病原菌以及其他可以激活寄主植物對(duì)病原體抗性的微生物及其制劑^［5］。

具有良好防效的菌株是生物防治重要的種質(zhì)資源，擴(kuò)展篩選范圍是獲得這些菌株的重要途徑。為了尋找對(duì)黃瓜枯萎病有良好生物防治潛力的微生物，大量有潛力的菌株從植物根際、植物體內(nèi)和海洋中分離和篩選出來^［6-8］。而從動(dòng)物體內(nèi)篩選的案例較少，尤其是從與植物有復(fù)雜相互作用的昆蟲體內(nèi)獲得生防微生物的情況較少^［9］。昆蟲消化道和表皮具有特殊的微生境，其中的微生物多種多樣，可以產(chǎn)生多種功能的生物活性物質(zhì)^［10-13］。研究發(fā)現(xiàn)，昆蟲共生微生物對(duì)植物病害具有生物防治功能。例如，從以色列葡萄黃化病媒介昆蟲Hyalesthes obsoletus中分離得到的1株Dylla樣細(xì)菌可以內(nèi)生定殖葡萄緩解植原體引起的葡萄黃化病^［14］。因此，動(dòng)物源微生物也是生防微生物資源開發(fā)的重要方向之一。

本研究針對(duì)土傳真菌性病害黃瓜枯萎病，首次從地下昆蟲蠐螬和蟬幼蟲體表和腸道內(nèi)分離篩選具有良好生物防治潛力的菌株，并初步探討了其抑菌機(jī)制，為挖掘防治土傳真菌性病害的昆蟲共生細(xì)菌提供一定的思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 共生細(xì)菌分離材料

分離材料為蠐螬和蟬幼蟲。蠐螬于2022年7月采集于安徽省蚌埠市禹會(huì)區(qū)高埂村（32°49″40′N，117°22″15′E）土壤中，而蟬幼蟲于2022年8月采集于天津農(nóng)學(xué)院東校區(qū)欒樹林（39°5″31′N，117°6″2′E）。所有樣品采集與處理過程中均佩戴手套操作。

1.1.2 供試病原菌

抑菌活性供試病原菌有尖孢鐮刀菌黃瓜?；停‵usarium oxysporum f.sp.cucumerinum）、尖孢鐮刀菌西瓜專化型（Fusarium oxysporum f.sp.niveum）、禾谷鐮孢菌（Fusarium graminearum）、草莓疫霉菌（Phytophthora fragariae）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、茄鏈格孢菌（Alternaria solani）、蘿卜鏈格孢菌（Alternaria raphani）、蘋果殼囊孢菌（Cytospora mali），均保存于天津農(nóng)學(xué)院植物病理實(shí)驗(yàn)室。

1.1.3 培養(yǎng)基

牛肉膏蛋白胨固體（NA）培養(yǎng)基用于共生細(xì)菌的分離培養(yǎng)，牛肉膏蛋白胨液體（NB）培養(yǎng)基用于共生細(xì)菌發(fā)酵；常規(guī)和濃縮馬鈴薯葡萄糖固體（PDA）培養(yǎng)基用于病原真菌培養(yǎng)和抑菌活性測(cè)定，濃縮配方如下：去皮馬鈴薯20%、葡萄糖2%和瓊脂1.8%。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 昆蟲共生細(xì)菌的分離

體表附生菌分離：使用無菌蒸餾水（SDW）沖洗昆蟲表面3次，去除表面的瞬時(shí)微生物，然后使用無菌濾紙擦干表皮。使用無菌棉拭子擦拭昆蟲背部、腹部各20次，每個(gè)拭子頭浸泡在10 mL 0.85%氯化鈉溶液中并渦旋。

腸道內(nèi)生細(xì)菌分離：蠐螬和蟬幼蟲腸道解剖后置于研缽中，加入生理鹽水研磨。使用相同的溶液分別將昆蟲拭子浸泡液和腸道研磨液稀釋100、1 000倍，取100 μL稀釋液涂布到NA平板上，37 ℃培養(yǎng)24 h。挑取具有明顯特征的菌落，純化2次后4 ℃保存。

1.2.2 拮抗細(xì)菌的篩選

采用對(duì)峙法篩選對(duì)黃瓜枯萎病菌具有抑菌活性的細(xì)菌。將細(xì)菌接種至NB培養(yǎng)基于37 ℃、220 r/min振蕩培養(yǎng)24 h。從培養(yǎng) 4 d 的黃瓜枯萎病菌上挑取直徑6 mm的菌絲塊放置PDA平板的中心，將20 μL 10₉ CFU/mL細(xì)菌發(fā)酵液劃線涂布于距離菌絲塊2 cm處，28 ℃黑暗培養(yǎng) 4 d。試驗(yàn)重復(fù)3次。菌絲生長(zhǎng)的抑制率（GI）計(jì)算公式為：GI=［（R - r）/R］×100%；其中，R表示細(xì)菌遠(yuǎn)端的真菌菌落徑向距離，r表示細(xì)菌近端的真菌菌落徑向距離。

1.2.3 對(duì)其他植物病菌的抑菌活性測(cè)定

采用生長(zhǎng)速率法，測(cè)定對(duì)黃瓜枯萎病菌具有拮抗作用的細(xì)菌。將具有活性的細(xì)菌發(fā)酵后，發(fā)酵液采用 0.22 μm 濾芯過濾后按1 ∶5（體積比）加入融化降溫的PDA培養(yǎng)基中混勻并倒平板。將培養(yǎng)好的病原菌打成直徑為6 mm的菌餅倒接于平板中，使有菌絲面朝下。28 ℃恒溫培養(yǎng)72 h后檢查結(jié)果，測(cè)定菌落直徑，計(jì)算抑制率。

1.2.4 盆栽試驗(yàn) 對(duì)黃瓜種子表面消毒后，浸入50～60 ℃溫水中5～6 h，然后播種至含有營(yíng)養(yǎng)土的盆缽中，待幼苗生長(zhǎng)至2葉期接種黃瓜枯萎病菌，孢子濃度為10₇ CFU/mL。

預(yù)防處理：將2葉期的黃瓜幼苗從盆缽中取出，使用消毒后的剪刀輕微傷根。使用50 mL 10₈ CFU/mL 拮抗細(xì)菌發(fā)酵液進(jìn)行土壤灌根處理。在用細(xì)菌處理72 h后，灌根接種30 mL黃瓜枯萎病菌孢子懸浮液。

治療處理：對(duì)2葉期黃瓜幼苗傷根后，使用 30 mL 黃瓜枯萎病菌孢子懸浮液灌根。72 h后，使用50 mL 10₈ CFU/mL細(xì)菌發(fā)酵液灌根。使用無菌蒸餾水代替細(xì)菌發(fā)酵液作為對(duì)照。將黃瓜植株置于25 ℃溫室中培養(yǎng)。每個(gè)處理5株黃瓜，重復(fù)4次。

接種處理后14、21 d，參考Cao等的方法評(píng)估每種植物的外部癥狀：0級(jí)，無枯萎或黃化；1級(jí)，子葉黃化；2級(jí)，子葉萎蔫；3級(jí)，第1張真葉枯萎；4級(jí)，第2～3張真葉枯萎；5級(jí)，所有葉片枯萎或死亡^［15］。疾病嚴(yán)重程度指數(shù)（DSI）：DSI =∑ （等級(jí)×該等級(jí)的植物數(shù)量）/（5×評(píng)估植物總數(shù)）×100。相對(duì)防治效果=（對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)×100%。

1.2.5 拮抗細(xì)菌對(duì)病原菌的影響

對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制：如“1.2.3”節(jié)中所述制備細(xì)菌發(fā)酵濾液，與濃縮PDA培養(yǎng)基混合稀釋成2、4、6、8倍并倒平板。在平板中心接種直徑6 mm的黃瓜枯萎病菌菌絲塊，28 ℃黑暗培養(yǎng)。使用馬鈴薯葡萄糖肉湯（PDB）代替發(fā)酵濾液作為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。4 d后觀察并測(cè)量黃瓜枯萎病菌菌落直徑，計(jì)算抑制率。

對(duì)分生孢子萌發(fā)的抑制：如“1.2.3”節(jié)中所述制備細(xì)菌發(fā)酵濾液，使用PDB稀釋2、4、10倍。將100 μL 10₆ CFU/mL黃瓜枯萎病菌孢子懸浮液離心取沉淀，加入100 μL細(xì)菌發(fā)酵濾液，混勻后28 ℃孵育24 h。使用PDB培養(yǎng)基作為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。通過光學(xué)顯微鏡觀察100個(gè)分生孢子的萌發(fā)情況計(jì)算孢子萌發(fā)率。

對(duì)菌絲形態(tài)的影響：觀察細(xì)菌處理后的黃瓜枯萎病菌的菌絲形態(tài)變化，使用稍加修改的載玻片培養(yǎng)技術(shù)^［16］。向裝有載玻片的培養(yǎng)皿中倒入融化的馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基，厚度超過載玻片1 mm。待平板冷卻凝固后，在平板底面標(biāo)記出載玻片中心點(diǎn)作為黃瓜枯萎病菌接種位置，從這一點(diǎn)向兩邊偏移1 cm處標(biāo)記出細(xì)菌接種位置和對(duì)照點(diǎn)。挑取黃瓜枯萎病菌菌絲接種在中心點(diǎn)，在細(xì)菌接種位置接種2 μL 10₉ CFU/mL細(xì)菌發(fā)酵液，干燥后于28 ℃培養(yǎng)。待病原菌菌落邊緣生長(zhǎng)接近對(duì)照點(diǎn)，取出載玻片并使用0.01%臺(tái)盼藍(lán)-乳酸苯酚溶液或0.5%中性紅溶液染色病原真菌，使用光學(xué)顯微鏡觀察病原真菌菌絲形態(tài)變化。

1.2.6 生防相關(guān)基因和胞外酶的檢測(cè)

采用特異性引物（表1），對(duì)拮抗細(xì)菌基因組中編碼伊枯草菌素、桿菌肽、豐原素、多黏菌素、殺鐮孢菌素等脂肽類抗生素和Yndj蛋白、表面活性素、纖維素酶、葡聚糖酶等抑菌代謝物的生物合成基因進(jìn)行檢測(cè)^［17-18］。擴(kuò)增體系（25 μL）：ddH₂O 8.5 μL、上下游引物各1.0 μL、模板2.0 μL、2×Easy Taq MasterMix（+Dye） 12.5 μL。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。使用表1中的前6對(duì)引物分別對(duì)QC02進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為預(yù)變性94 ℃ 4 min；變性94 ℃ 30 s，退火56 ℃ 30 s（引物110F/110R、147F/147R、ITUCF1/ITUCR3、ituD2F/ituD2R、bamC2F/bamC2R）或60 ℃ 30 s（引物ysnEf/ysnEr），72 ℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；再72 ℃延伸10 min。使用表中的后8對(duì)引物分別對(duì)QC04進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為預(yù)變性94 ℃ 4 min；變性 94 ℃ 40 s，退火56 ℃ 40 s，72 ℃延伸90 s，30個(gè)循環(huán)；再72 ℃延伸10 min。

通過胞外酶檢測(cè)平板檢測(cè)拮抗細(xì)菌分泌的生防功能胞外酶^［19-24］。細(xì)菌37 ℃、220 r/min過夜培養(yǎng)，分別取5 μL發(fā)酵液滴加或劃線接種在纖維素酶、葡聚糖酶、蛋白酶、幾丁質(zhì)酶、果膠酶和淀粉酶檢測(cè)平板上，2 d后觀察是否有透明圈產(chǎn)生。

1.2.7 菌株鑒定

使用EasyPure@ Bacteria Genomic DNA Kit（北京全式金生物技術(shù)有限公司），按照說明書提取拮抗細(xì)菌基因組。使用NanoDrop 1 000 UV-VIS超微量紫外分光光度計(jì)測(cè)定基因組DNA的濃度和純度，并將濃度調(diào)整為50.0 ng/μL。利用細(xì)菌通用引物27F和1492R擴(kuò)增拮抗細(xì)菌的16S rDNA，約1 400 bp。擴(kuò)增體系與“1.2.6”節(jié)相同。擴(kuò)增條件為預(yù)變性94 ℃ 4 min；變性94 ℃ 30 s，退火56 ℃ 30 s，72 ℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；再72 ℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)條帶單一后送交生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序。利用BLAST程序與NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）中的序列進(jìn)行比對(duì)分析。選擇合適的比對(duì)序列，通過MEGA 7.0軟件進(jìn)行Clustal W對(duì)齊，利用鄰接樹法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用R 4.1.2進(jìn)行單因素方差分析，應(yīng)用Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行各試驗(yàn)組間差異顯著性檢驗(yàn)（ɑ=0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗細(xì)菌的篩選

從昆蟲樣品中共分離出共生細(xì)菌104株，包括50株蠐螬腸道內(nèi)生細(xì)菌、41株蟬幼蟲腸道內(nèi)生細(xì)菌和13株蟬幼蟲表皮附生細(xì)菌。通過對(duì)峙培養(yǎng)篩選出2株拮抗活性較強(qiáng)的菌株QC02和QC04，均為蠐螬腸道內(nèi)生細(xì)菌，對(duì)黃瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)抑制率分別為56.03%、51.17%（圖1）。

由圖2可知，菌株QC02和QC04具有廣譜的抑菌活性，對(duì)供試的8種植物病原真菌均有不同程度的抑制作用，對(duì)蘋果腐爛病菌的抑菌活性最強(qiáng)，抑制率分別為73.02%、68.94%。

2.3 盆栽試驗(yàn)

菌株QC02和QC04對(duì)黃瓜枯萎病的盆栽防治效果如表2所示。感染黃瓜枯萎病菌的黃瓜植株在接種后14 d發(fā)病嚴(yán)重，呈現(xiàn)泛黃和枯萎癥狀，21 d全部枯萎。菌株QC02治療和預(yù)防處理的黃瓜在接種后21 d的相對(duì)防效分別為35.00%和44.00%，而菌株QC04治療和預(yù)防處理的黃瓜在接種后21 d的相對(duì)防效分別為27.00%和47.00%?？傮w來看，菌株QC02對(duì)黃瓜枯萎病的治療效果最好，菌株QCO4預(yù)防處理后可有效緩解黃瓜枯萎病的發(fā)生。

2.4 拮抗細(xì)菌對(duì)黃瓜枯萎病菌的影響

2.4.1 對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

稀釋2倍的菌株QC02和QC04發(fā)酵濾液可抑制黃瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)，抑制率分別為85.19%、57.20%（圖3）。隨著稀釋倍數(shù)的增加，病原菌菌絲生長(zhǎng)抑制率下降，稀釋8倍的菌株QC02發(fā)酵濾液的抑菌率仍可達(dá)45.76%。

2.4.2 對(duì)孢子萌發(fā)的影響

稀釋2倍的菌株QC02發(fā)酵濾液對(duì)黃瓜枯萎病菌孢子萌發(fā)具有較強(qiáng)的抑制效果，抑制率為70.51%，而菌株QC04發(fā)酵濾液的抑制率僅為27.90%（圖4）。隨著稀釋倍數(shù)的增加，菌株QC02發(fā)酵濾液的抑制率下降，稀釋10倍后與菌株QC04發(fā)酵濾液抑制率無顯著差異。

2.4.3 對(duì)菌絲形態(tài)的影響 菌株QC02（圖5-A、圖5-B）和QC04（圖5-C、圖5-D）對(duì)峙培養(yǎng)的黃瓜枯萎病菌菌絲變細(xì)、縮短和變形。靠菌株QC04一側(cè)的菌絲被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色，中性紅染成微紅色，表明菌株QC04對(duì)黃瓜枯萎病菌具有殺菌活性而不是抑菌活性。

2.5 生物防治相關(guān)基因及酶的檢測(cè)

應(yīng)用特異性引物，對(duì)菌株QC02和QC04基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增結(jié)果表明，菌株QC02具有表面活性素、Yndj蛋白、伊枯草菌素、桿菌肽、豐原素和IAA合成酶基因，菌株QC04具有多黏菌素、殺鐮孢菌素、纖維素酶和β-1，3-葡聚糖酶酶等生防物質(zhì)合成酶基因（圖6）。通過胞外酶檢測(cè)培養(yǎng)基上透明圈的觀察發(fā)現(xiàn)2種細(xì)菌可分泌葡聚糖酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、蛋白酶和淀粉酶等重要的真菌細(xì)胞壁降解酶（圖7）。

2.6 昆蟲拮抗共生細(xì)菌的鑒定

菌株QC02和QC04的16s rDNA序列經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫BLAST比對(duì)，與芽孢桿菌屬物種相似性達(dá)99.7%，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果表明，2株細(xì)菌分別與貝萊斯芽孢桿菌、多黏類芽孢桿菌屬菌株聚在同一分支（圖8）。因此，將菌株QC02和QC04初步鑒定為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）和多黏類芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa）。

3 討論與結(jié)論

本研究從蠐螬腸道中篩選出的細(xì)菌QC02和QC04對(duì)黃瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、小麥根腐病菌、黃瓜灰霉病菌、草莓灰霉病菌、番茄早疫病菌、蘿卜黑斑病菌和蘋果腐爛病菌等8種病原真菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的拮抗活性，抑菌率在50%以上。經(jīng)初步鑒定，菌株QC02和QC04分別屬于貝萊斯芽孢桿菌和多黏類芽孢桿菌。

芽孢桿菌的抑菌活性與其代謝產(chǎn)物具有密切的聯(lián)系，許多芽孢桿菌如枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌等可通過非核糖體途徑產(chǎn)生各種脂肽類抗生素抑制病原真菌^［25-26］。例如，解淀粉芽孢桿菌SQR9產(chǎn)生豐原素和桿菌肽可有效防治黃瓜枯萎病^［27］。通過PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)菌株QC02和QC04具有多種脂肽類抗生素合成相關(guān)基因。除此之外，分泌胞外酶在芽孢桿菌破壞真菌細(xì)胞壁發(fā)揮抑菌作用的過程中起到重要作用。Yang等從油菜根際土壤中篩選得到的多黏類芽孢桿菌HX-140可以產(chǎn)生蛋白酶、纖維素酶、β-1，3-葡聚糖酶和抗真菌揮發(fā)性有機(jī)化合物，有效降低黃瓜枯萎病55.6%的侵染率^［28］。多黏類芽孢桿菌P.SC09-21菌株能產(chǎn)生抑制辣椒疫霉的蛋白酶，且處理后黃瓜的PR蛋白基因cap4和CaChi2的表達(dá)水平也有所提高^［29］。納豆芽孢桿菌tk-1脂肽類生物表面活性劑被證明在抗腫瘤、抗菌、抗凝和降膽固醇方面效果顯著^［30］。本研究篩選的菌株QC02和QC04均可產(chǎn)生纖維素酶、β-1，3-葡聚糖酶和幾丁質(zhì)酶，能夠抑制病原菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)，其作用機(jī)制及代謝產(chǎn)物還需進(jìn)一步分析和研究。

盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明，使用菌株QC02和QC04發(fā)酵液的預(yù)防效果分別為44.00%、47.00%，與已報(bào)道的幾種生防菌株防效相似或者更高。以Streptomyces albospinus CT205菌為例，2011年和2012年的黃瓜枯萎病防治效果分別為8.7%和51.9%^［31］。菌株QC02的治療效果超過QC04，這與其發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病菌的抑制作用相一致。另外，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)多黏類芽孢桿菌WLY78產(chǎn)生的殺鐮刀菌素能夠激活黃瓜的系統(tǒng)抗性^［32］。菌株QC04的預(yù)防效果超過QC02，可以推測(cè)QC04生防效果不僅與發(fā)酵液抑菌活性相關(guān)，而且與其誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗性相關(guān)。因此，菌株QC04對(duì)黃瓜的誘導(dǎo)抗性有待進(jìn)一步研究。

本研究篩選的2株昆蟲共生細(xì)菌對(duì)黃瓜枯萎病的防治均有一定的效果，后期可通過發(fā)酵條件優(yōu)化、作用機(jī)制及制劑研制等方面進(jìn)行深入研究，充分挖掘菌株的深層生防潛力，有望進(jìn)一步研發(fā)生防菌劑應(yīng)用于黃瓜生產(chǎn)中。

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