臨床孤立綜合征病人肥胖抑制素、Npt和TIGAR的表達(dá)及其臨床意義

摘要目的：分析腦脊液和血清中肥胖抑制素、血清新蝶呤（Npt）及TP53誘導(dǎo)的糖酵解調(diào)節(jié)磷酸酶（TIGAR）在臨床孤立綜合征（CIS）病人預(yù)后無創(chuàng)檢測中的意義。方法：選取2018年5月—2020年5月于我院治療的110例CIS病人作為CIS組，其中復(fù)發(fā)病人55例，未復(fù)發(fā)病人55例，選取年齡、性別相匹配的神經(jīng)系統(tǒng)非炎癥疾?。∟IND）的住院病人55例作為NIND組。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測各組病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt及TIGAR表達(dá)水平；分析轉(zhuǎn)歸為多發(fā)性硬化癥（MS）病人與未復(fù)發(fā)CIS病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平；分析轉(zhuǎn)歸為MS病人復(fù)發(fā)前及復(fù)發(fā)后腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平；受試者工作特征（ROC）曲線分析血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR對病人復(fù)發(fā)的預(yù)測價值。結(jié)果：復(fù)發(fā)病人與未復(fù)發(fā)病人年齡、白細(xì)胞計數(shù)、總蛋白升高、寡克隆帶（OB）陽性比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。與NIND組比較，CIS組病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。轉(zhuǎn)歸為MS病人與未復(fù)發(fā)CIS病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與復(fù)發(fā)前比較，復(fù)發(fā)后病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。ROC曲線顯示，血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR水平對病人復(fù)發(fā)均具有診斷價值，曲線下面積（AUC）分別為0.803，0.815，0.809，敏感度分別為91.97%，86.23%，80.83%，特異度分別為80.76%，81.93%，85.14%，3者聯(lián)合診斷價值更高，AUC為0.921，敏感度為93.92%，特異度為87.58%（P＜0.001）。結(jié)論：肥胖抑制素、Npt和TIGAR在CIS病人腦脊液和血清中有異常高表達(dá)，且趨勢一致，血清肥胖抑制素、Npt聯(lián)合TIGAR對CIS病人的復(fù)發(fā)預(yù)測作用顯著，可能是無創(chuàng)檢測開發(fā)的候選分子。

關(guān)鍵詞臨床孤立綜合征；肥胖抑制素；血清新蝶呤；TP53誘導(dǎo)的糖酵解調(diào)節(jié)磷酸酶；無創(chuàng)檢測

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.17.035

臨床孤立綜合征（clinically isolated syndrome，CIS）是特發(fā)性炎性脫髓鞘疾病（IIDDs）的一種，女性患病率是男性的2～3倍，好發(fā)于20～50歲，60%～70%的病人經(jīng)過若干年可轉(zhuǎn)歸為多發(fā)性硬化癥（multiple sclerosis，MS），高達(dá)85%的MS以CIS起?。?-2］。CIS和MS治療策略和預(yù)后差異顯著，早期治療可以延緩CIS向MS的轉(zhuǎn)化，由于腦組織及腦脊液取材困難且對病人有一定創(chuàng)傷，因此，從血清中尋找無創(chuàng)標(biāo)志物，鑒定CIS復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)歸對復(fù)發(fā)風(fēng)險高的CIS病人的早期干預(yù)具有重要的臨床意義［3-4］。CIS伴隨著嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)過程，探究炎癥信號分子的表達(dá)具有重要的意義。肥胖抑制素是一種新型生長激素釋放肽相關(guān)肽，可調(diào)節(jié)代謝細(xì)胞功能、抑制不同細(xì)胞類型的凋亡和炎癥，是一種新型血清生物標(biāo)志物，研究表明，限制性神經(jīng)性厭食者體內(nèi)的肥胖抑制素表達(dá)顯著異常，可能具有中樞神經(jīng)功能預(yù)測作用［5-6］。血清新蝶呤（serum neopterin，Npt）是三磷酸鳥苷代謝、生物蝶呤合成途徑中的一種蝶啶中間代謝產(chǎn)物，在血液、腦脊液中穩(wěn)定存在。研究表明，血清Npt也是細(xì)胞介導(dǎo)免疫激活的象征之一，在中樞神經(jīng)的臨床應(yīng)用中具有重要價值［7-8］。TP53誘導(dǎo)的糖酵解調(diào)節(jié)磷酸酶（TP53-induced glycolytic regulatory phosphatase，TIGAR）是神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化中的重要調(diào)控因子，腦缺血發(fā)生后TIGAR表達(dá)水平顯著增加，其潛在作用和機(jī)制可能會促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療靶標(biāo)［9-10］。基于這3個指標(biāo)均與神經(jīng)系統(tǒng)功能有關(guān)，并且可以調(diào)控炎癥反應(yīng)過程，本研究以腦脊液和血清中TIGAR、Npt、肥胖抑制素的表達(dá)為切入點(diǎn)，探索這3個指標(biāo)血清表達(dá)是否與 ［14］MEMON A B，JAVED A，CAON C，et al.Long-term safety of rituximab induced peripheral B-cell depletion in autoimmune neurological diseases［J］.PLoS One，2018，13（1）：e0190425.

腦脊液表達(dá)趨勢一致，為無創(chuàng)檢測提供理論基礎(chǔ)，從而為臨床病人復(fù)發(fā)提供新型無創(chuàng)預(yù)測分子標(biāo)志物。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2018年5月—2020年5月于我院治療的110例CIS病人作為CIS組，其中復(fù)發(fā)病人55例，未復(fù)發(fā)病人55例，年齡20～66（49.95±8.89）歲；體質(zhì)指數(shù)（BMI）7.85～27.12（22.31±4.35）kg/m2。CIS的診斷及分型：大腦型占45.83%，脊髓型占29.17%，視神經(jīng)炎型占12.50%，腦干型占9.37%，小腦型占3.13%。隨訪中位時間為23.77個月。選取年齡、性別相匹配的神經(jīng)系統(tǒng)非炎癥疾病（non-inflammatory diseases of nervous system，NIND）的住院病人55例作為NIND組，年齡22～67（49.85±9.09）歲；BMI 17.62～27.08（22.61±5.31）kg/m2；緊張型頭痛23例，周期性麻痹32例。本研究已通過本院倫理監(jiān)察委員會審查，所有參加本研究的病人均充分了解研究目的及注意事項(xiàng)，病人本人或其家屬已簽署知情同意書。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：CIS符合McDonald（2017）的診斷標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)CIS復(fù)發(fā)時滿足McDonald（2017）標(biāo)準(zhǔn)［2］和《多發(fā)性硬化診斷和治療中國專家共識（2018版）》［11］，診斷為MS；年齡18～70歲；首發(fā)癥狀急性期1周內(nèi)入院；發(fā)病前3個月內(nèi)未接受任何免疫治療；細(xì)胞間接免疫熒光法檢測血清水通道蛋白4（aquaporin 4，AQP4）抗體和抗髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白免疫球蛋白G抗體（anti-myelinated oligodendrocyte glycoprotein immunoglobulin G antibody，MOG-IgG）陰性。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并顱內(nèi)外感染的急性期者；合并其他免疫相關(guān)疾病者。NIND組排除標(biāo)準(zhǔn)同CIS組，且頭顱CT或磁共振成像（MRI）正常，腦脊液常規(guī)、生化、細(xì)胞學(xué)正常，寡克隆區(qū)帶陰性。

1.3方法

1.3.1治療方案

CIS組病人均給予激素甲潑尼龍（Pfizer Manufacturing Belgium NV，批號H20130301）0.5 g靜脈輸注，每日1次，3日后減量為250 mg靜脈輸注，每日1次，2日后減量為120 mg靜脈輸注，3日后改為強(qiáng)的松片（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：X20160174）口服，1 mg/kg，遞減后1～3個月停服。同時給予抑酸、補(bǔ)鈣、補(bǔ)鉀治療。除急性期激素治療外，隨訪期間未給予免疫藥物治療。

1.3.2病人腦脊液、血清分離方法及隨訪記錄

1）記錄CIS組病人腦和脊髓MRI病灶部位，擴(kuò)展殘疾狀態(tài)量表（Extended Disability Status Scale，EDSS）；2）腰椎穿刺腦脊液檢查腦脊液白細(xì)胞計數(shù)、總蛋白、寡克隆帶（oligoclonalband，OB），血清白細(xì)胞計數(shù)；3）肥胖抑制素、Npt和TIGAR細(xì)胞因子水平：兩組病人均在急性期（入院第2天06：00）采集靜脈血10 mL，立即經(jīng)1 500 r/min離心15 min，分離血清，同時腰椎穿刺抽取腦脊液2 mL，立即經(jīng)3 000 r/min離心10 min，取上清液分裝于EP管內(nèi)，－80 ℃凍存待測。

1.3.3酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測血清肥胖抑制素、Npt表達(dá)水平

采集所有病人外周血5 mL，4 ℃條件下暫存。檢測時，嚴(yán)格按照人肥胖抑制素（貨號：ab264628，美國ABCAM公司），人Npt ELISA（貨號：HY21272-96T，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司），TIGARELISA Kit（Human，OKEH03298，美國avava 公司）ELISA Kit操作，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線后于全波長酶標(biāo)儀下檢測450 nm吸光度，每個樣本重復(fù)3次。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。定性資料以例數(shù)或百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。分析轉(zhuǎn)歸為MS（CIS-MS）病人與未復(fù)發(fā)CIS（CIS-CIS）病人基線腦脊液和血清中肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平；分析轉(zhuǎn)歸為MS病人復(fù)發(fā)前及復(fù)發(fā)后病人腦脊液和血清中肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平。受試者工作特征曲線（ROC）分析確定血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR及3者聯(lián)合對病人復(fù)發(fā)的診斷價值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1復(fù)發(fā)與未復(fù)發(fā)病人基線資料比較

復(fù)發(fā)病人，男28例，女27例；年齡（27.36±4.12）歲；腦脊液白細(xì)胞計數(shù)（34.32±6.12）%，血液白細(xì)胞計數(shù)（31.32±5.12）%；總蛋白升高48例，OB陽性47例；結(jié)局預(yù)測評分量表（PEDSS）評分為（1.52±0.31）分。未復(fù)發(fā)病人，男27例，女28例；年齡（39.86±5.12）歲；腦脊液白細(xì)胞計數(shù)（5.12±1.12）%，血液白細(xì)胞計數(shù)（6.01±1.09）%；總蛋白升高5例，OB陽性6例；PEDSS評分為（1.54±0.29）分。復(fù)發(fā)病人與未復(fù)發(fā)病人年齡、白細(xì)胞計數(shù)、總蛋白升高、OB陽性比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。

2.2CIS組與NIND組腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平比較

與NIND組比較，CIS組病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。詳見圖1。

2.3轉(zhuǎn)歸為MS（CIS-MS，5例）病人與未復(fù)發(fā)CIS（CIS-CIS，5例）病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平比較

轉(zhuǎn)歸為MS病人與未復(fù)發(fā)CIS病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。詳見圖2。

2.4CIS-MS病人復(fù)發(fā)前及復(fù)發(fā)后病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平的比較

與復(fù)發(fā)前比較，復(fù)發(fā)后病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。詳見圖3。

2.5血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR對CIS病人復(fù)發(fā)的診斷價值

ROC曲線顯示，血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR水平對CIS病人復(fù)發(fā)均具有診斷價值，曲線下面積（AUC）分別為0.803，0.815，0.809，敏感度分別為91.97%，86.23%，80.83%，特異度分別為80.76%，81.93%，85.14%，3者聯(lián)合診斷價值更高，AUC為0.921，敏感度為93.92%，特異度為87.58%（P＜0.001）。詳見表1、圖4。

3討論

CIS指病人首次出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘事件，其單相臨床病程類似于MS的1次典型臨床發(fā)作［12-13］。維生素D缺乏、吸煙等被認(rèn)為是CIS向MS轉(zhuǎn)歸的確切危險因素，尋找CIS發(fā)病及預(yù)后的無創(chuàng)標(biāo)志物，降低病人檢測痛苦是CIS臨床研究的重要方向［14-15］。由于腦組織的結(jié)構(gòu)特殊性，無法通過組織采樣進(jìn)行鑒定，腦脊液采樣也會對病人產(chǎn)生一定創(chuàng)傷，因此，是否可以通過血清反映腦脊液情況是CIS無創(chuàng)檢測的一個重要方向。

肥胖抑制素是一個由胃促生長素前原體基因編碼的厭食肽，在神經(jīng)體液調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用［16］，研究表明，肥胖抑制素在外周組織中發(fā)揮局部作用，能激活G蛋白偶聯(lián)受體39，在中樞水平上發(fā)揮遠(yuǎn)距離調(diào)控作用［17］，是一種新型無創(chuàng)血清生物標(biāo)志物。Npt在血液、腦脊液及胸腹水等體液中較穩(wěn)定存在，且不易在體內(nèi)滅活或降解，觀察其變化有助于監(jiān)測機(jī)體細(xì)胞活化及炎癥反應(yīng)狀態(tài)，進(jìn)而了解神經(jīng)系統(tǒng)疾病進(jìn)展及其活動性［18-19］。TIGAR在控制神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）的增殖、分化和靜止中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，研究表明，TIGAR廣泛分布于神經(jīng)元中，并在缺血性腦卒中模型中參與缺血/再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷，同時調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞有氧糖酵解到氧化磷酸化的代謝轉(zhuǎn)變，是重要的神經(jīng)信號調(diào)控分子，但是其是否參與CIS的進(jìn)展尚不明確［20-21］。本研究分析腦脊液和血清中的肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)與NIND組比較，CIS組病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR水平均顯著上調(diào)，并且腦脊液與血清趨勢一致，提示血清可以反映腦脊液的趨勢，這與肥胖抑制素、Npt、TIGAR廣泛分布于神經(jīng)元中并參與神經(jīng)元損傷結(jié)果相一致［7，9，20］。同時，本研究對比了轉(zhuǎn)歸為MS病人與未復(fù)發(fā)CIS病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平，結(jié)果表明兩組病人肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平無顯著差異，提示這種肥胖抑制素、Npt和TIGAR的高表達(dá)是疾病造成的。同時本研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)后病人腦脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)水平顯著升高，提示血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)可能與病人復(fù)發(fā)有關(guān)，并且可以代表腦脊液表達(dá)水平。血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表達(dá)的ROC曲線結(jié)果表明，肥胖抑制素、Npt、TIGAR指標(biāo)對病人均具有診斷價值，且3者聯(lián)合診斷價值更高。

由于肥胖抑制素、Npt、TIGAR在腦脊液和血清中表達(dá)水平變化趨勢一致且血清預(yù)測較高，推測當(dāng)快速神經(jīng)細(xì)胞生長的代謝異常時，需求超過細(xì)胞所能提供的極限，細(xì)胞可能通過促進(jìn)肥胖抑制素、Npt、TIGAR的活化，增加代償性細(xì)胞代謝，從而導(dǎo)致腦脊液肥胖抑制素和Npt以及TIGAR表達(dá)水平上升，同時通過血液循環(huán)進(jìn)入外周發(fā)揮作用，因此，在血清中可以檢測到，從而成為較好的無創(chuàng)分子標(biāo)志物。

綜上所述，血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR在CIS病人組織和血清中異常高表達(dá)，與腦脊液表達(dá)趨勢一致，且與病人復(fù)發(fā)有關(guān)，是無創(chuàng)檢測的良好生物標(biāo)志物，有利于臨床醫(yī)師采取有效治療措施，增加病人診療效果。未來的研究可進(jìn)一步提高樣本量并通過分子機(jī)制方面的研究，為本研究中的指標(biāo)變化情況進(jìn)行進(jìn)一步論證，從而為臨床提供更準(zhǔn)確依據(jù)。

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（收稿日期：2023-02-23）

（本文編輯鄒麗）