竹蓀不同溶劑浸提液的抑菌及防腐效果研究

摘要" 為進(jìn)一步探究竹蓀的抑菌防腐功效，本研究采用4種溶劑（乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、石油醚和蒸餾水）浸提竹蓀子實(shí)體，采用平板抑菌方法驗(yàn)證不同浸提液對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、霉菌和酵母菌的抑菌作用，并用肉湯、饅頭進(jìn)行防腐效果驗(yàn)證。結(jié)果表明，4種溶劑的竹蓀浸提物對(duì)沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌均有明顯的抑制作用，其中乙酸乙酯竹蓀浸提液對(duì)霉菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、酵母菌和沙門(mén)氏菌的抑菌效果較優(yōu)，且對(duì)霉菌的抑菌效果最明顯。乙酸乙酯竹蓀浸提液的稀釋度試驗(yàn)表明，其稀釋4倍后仍然具有抑菌作用。饅頭和肉湯防腐實(shí)證試驗(yàn)表明，乙酸乙酯竹蓀浸提液對(duì)兩者均有一定的防腐作用，尤其是在肉類防腐方面作用明顯。研究結(jié)果為竹蓀天然抗菌物質(zhì)的開(kāi)發(fā)提供了參考。

關(guān)鍵詞" 竹蓀；浸提物；抑菌活性；食物防腐

中圖分類號(hào)" S646.8" " " "文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼" A" " " "文章編號(hào)" 1007-7731（2024）17-0089-04

DOI號(hào)" 10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2024.17.021

Antibacterial and preservative effects of different solvents in the extract of

Dictyophora indusiata

LIU Chang" " ZHOU Zhou" " ZHOU Feng

（College of Food Science and Engineering， Xinyang Agriculture and Forestry University， Xinyang 464000， China）

Abstract" In order to further explore the antibacterial and preservative effects of Dictyophora indusiata， four different solvents （ethyl acetate， anhydrous ethanol， petroleum ether and distilled water） were used to extract the fruiting body of Dictyophora indusiata. The antibacterial test was carried out by plate antibacterial test， and the antibacterial effect of food was verified by broth and steamed bread. The results showed that the extracts of Dictyophora indusiata with four solvents had obvious inhibitory effect on Salmonella， Staphylococcus aureus and Yeast. Among them， ethyl acetate extract of Dictyophora indusiata had the best antibacterial effect on mold， Staphylococcus aureus， Escherichia coli， Yeast and Salmonella， and had the most obvious antibacterial effect on mold. The dilution test of ethyl acetate extract of Dictyophora indusiata showed that it still had inhibitory effect after being diluted 4 times. The empirical test of anti-corrosion of steamed bread and broth showed that the ethyl acetate extract of Dictyophora indusiata had anti-corrosion effect on both， especially in meat anti-corrosion. It provides a theoretical basis for the development of natural antibacterial substances from Dictyophora indusiata.

Keywords" Dictyophora indusiata; leaching content; antimicrobial activity; food antiseptic

竹蓀（Dictyophora indusiata）屬于擔(dān)子菌亞門(mén)鬼筆科竹蓀屬菌類，是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高的食藥兼用菌[1-2]。大量研究發(fā)現(xiàn)，竹蓀具有抗炎、抗氧化[3]、抑菌[4]和降血脂[5]等多種保健功效。竹蓀除食用和藥用外，還具有一定的防腐功效[4]。在制作菜品時(shí)，置入少許竹蓀，可在一定程度上延長(zhǎng)存放時(shí)間。食品防腐是保障食品安全的重要手段，目前使用的防腐劑以化學(xué)合成防腐劑為主，如苯甲酸及其鈉鹽等。隨著人們生活水平的不斷提高，天然生物防腐劑備受關(guān)注，開(kāi)發(fā)和研究新型的抗菌性強(qiáng)、安全性能高以及使用方便的天然生物防腐劑具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。竹蓀具有較強(qiáng)的抑菌作用，王博陽(yáng)等[6]與張永杰等[7]利用乙酸乙酯對(duì)竹蓀進(jìn)行提取，發(fā)現(xiàn)其分別對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌、胡蘿卜軟腐歐文氏菌及層出鐮刀霉菌具有很好的抑制效果。劉范等[8]研究發(fā)現(xiàn)，竹蓀菌蓋提取物可有效抑制FocTR4的生長(zhǎng)，具有用于香蕉枯萎病防治的潛質(zhì)。劉萌萌等[9]采用Meta分析評(píng)價(jià)竹蓀提取物對(duì)5種微生物的抗感染效果，發(fā)現(xiàn)竹蓀提取物對(duì)革蘭陰性菌的抑制效果較好。竹蓀作為食品防腐劑的研究尚處于探索階段，鑒于竹蓀的防腐效果，本試驗(yàn)分別采用乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、石油醚和蒸餾水4種溶劑來(lái)浸提竹蓀子實(shí)體，研究不同浸提液分別對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、霉菌和酵母菌的抑菌作用，并用肉湯、饅頭對(duì)浸提液實(shí)際防腐效果進(jìn)行驗(yàn)證，為進(jìn)一步開(kāi)展竹蓀防腐研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試材料 竹蓀干品、饅頭購(gòu)自當(dāng)?shù)爻小＝瘘S色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、霉菌和酵母菌均由信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2" 培養(yǎng)基和溶劑 （1）培養(yǎng)基。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化鈉5 g，瓊脂粉20 g，加水定容至1 000 mL。馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉25 g，加水定容至1 000 mL。麥芽汁培養(yǎng)基：麥芽汁150 mL，瓊脂粉3 g。（2）溶劑。乙酸乙酯、石油醚和無(wú)水乙醇購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，均為分析純。

1.1.3 主要儀器 循環(huán)水式多用真空泵（SHB-ⅢS，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司），電熱恒溫水浴鍋（HH-6型，北京中興偉業(yè)儀器有限公司），立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器（LDZX-40Ⅰ型，上海申安醫(yī)療器械廠），雙人雙面凈化工作臺(tái)（SW-CJ-2F型，蘇州凈化設(shè)備有限公司），高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（FW400A型，北京中興偉業(yè)儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（R-201型，上海雅榮生化設(shè)備儀器有限公司），恒溫振蕩器（THZ-82A，國(guó)華企業(yè)集團(tuán)有限公司），電熱恒溫培養(yǎng)箱（JC303型，上海成順儀器儀表有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 竹蓀樣品前處理 將竹蓀干品放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，過(guò)80目篩，備用。

1.2.2 浸提溶劑選取 相關(guān)研究表明[10-11]，竹蓀抑菌物質(zhì)易溶于有機(jī)溶劑，且不同溶劑的浸提效率存在較大差異。竹蓀抑菌物質(zhì)常見(jiàn)浸提溶劑的物理特性如表1所示。

1.2.3 竹蓀浸提液制備 （1）水浴浸提。乙酸乙酯浸提：稱取25 g竹蓀粉末，置于500 mL燒杯中，加入375 mL乙酸乙酯，用玻璃棒攪拌均勻并封口，于72 ℃水浴鍋中水浴5 h，水浴過(guò)程中用玻璃棒攪拌，結(jié)束后于真空泵中進(jìn)行抽濾，棄濾渣得到浸提濾液。無(wú)水乙醇浸提方法同乙酸乙酯浸提方法。石油醚浸提（22 ℃水浴鍋中水浴5 h）和蒸餾水浸提（80 ℃水浴鍋中水浴5 h），除浸提溶劑和水浴溫度外，同乙酸乙酯浸提方法。（2）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將過(guò)濾后得到的濾液分別于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行蒸發(fā)，將濾液濃縮至5 mL左右，并于玻璃瓶中密封，置于冰箱中0～4 ℃保存，防止液體揮發(fā)。4種浸提液分別標(biāo)記為1號(hào)（乙酸乙酯浸提）、2號(hào)（無(wú)水乙醇浸提）、3號(hào)（蒸餾水浸提）和4號(hào)（石油醚浸提）。

1.2.4 微生物抑菌試驗(yàn) （1）供試菌株懸浮液的制備。細(xì)菌類懸浮液的制備：分別挑取一菌環(huán)斜面試管供試菌，接種于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，置于37 ℃搖床中培養(yǎng)24 h。

霉菌、酵母菌懸浮液的制備：從斜面挑取一菌環(huán)霉菌、酵母菌，分別接種于馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基和麥芽汁培養(yǎng)基中，置于28 ℃，80 r/min恒溫?fù)u床中培養(yǎng)48 h。

（2）抑菌試驗(yàn)方法。將活化培養(yǎng)的大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、霉菌和酵母菌分別稀釋10倍，再吸取稀釋10倍的菌液0.1 mL于培養(yǎng)皿中，用涂布棒涂抹，使菌液均勻分布。取若干個(gè)滅菌濾紙，將其置于菌液表面，用移液器吸取0.1 mL不同浸提液，依次滴在不同濾紙片上。然后將測(cè)試細(xì)菌（大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌）的培養(yǎng)皿置于37 ℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 h；將測(cè)試霉菌、酵母菌的培養(yǎng)皿置于28 ℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)4 d。培養(yǎng)結(jié)束后測(cè)量抑菌圈直徑。

1.2.5 不同稀釋度抑菌試驗(yàn) 取抑菌效果最優(yōu)的浸提液，分別對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、霉菌和酵母菌進(jìn)行稀釋度抑菌試驗(yàn)，稀釋度分別為1倍、2倍、4倍和8倍。抑菌試驗(yàn)方法同上。

1.2.6 食物抑菌防腐驗(yàn)證 為了驗(yàn)證竹蓀浸提液的抑菌防腐效果，以肉湯和饅頭作為材料?；谝志囼?yàn)結(jié)果，舍去4號(hào)竹蓀浸提液。（1）肉湯防腐。選取一定量肥瘦相間的豬肉，煮至有肉香味溢出后將肉湯分為4份，每份50 mL，在其中3份肉湯中分別加入0.5 mL 1、2和3號(hào)浸提液，另外一份加入等量的無(wú)菌水，再煮30 s左右，密封容器，置于37 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每隔一段時(shí)間觀察肉湯的狀態(tài)，確定腐敗時(shí)間及不同浸提液的抑菌效果。

（2）饅頭防腐。將1、2和3號(hào)浸提液分別稀釋20倍后置于噴壺中備用。各取饅頭1個(gè)（選取同一批次）于培養(yǎng)皿上，用等量浸提液分別噴灑整個(gè)饅頭，以噴灑等量無(wú)菌水的饅頭作為對(duì)照，封口膜包裹密封后置于28 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，在高溫高濕環(huán)境中人為促變，每隔一段時(shí)間觀察一次饅頭的狀態(tài)，并記錄。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel軟件進(jìn)行處理與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同浸提液對(duì)不同微生物的抑菌效果

從表2可以看出，不同溶劑浸提液對(duì)不同微生物的抑菌效果存在差異。其中，1號(hào)浸提液的抑菌效果較佳，抑菌效果由強(qiáng)到弱為霉菌gt;金黃色葡萄球菌gt;大腸桿菌gt;酵母菌、沙門(mén)氏菌，對(duì)霉菌的抑菌效果最好，抑菌圈直徑1.8 cm；2號(hào)浸提液的抑菌效果由強(qiáng)到弱為沙門(mén)氏菌gt;霉菌gt;大腸桿菌gt;金黃色葡萄球菌gt;酵母菌，對(duì)沙門(mén)氏菌的抑菌效果最好，抑菌圈直徑達(dá)2.1 cm；3號(hào)浸提液的抑菌效果由強(qiáng)到弱為大腸桿菌gt;金黃色葡萄球菌gt;沙門(mén)氏菌gt;酵母菌、霉菌，對(duì)大腸桿菌的抑菌效果最好，抑菌圈直徑1.3 cm；4號(hào)浸提液的抑菌效果由強(qiáng)到弱為酵母菌gt;沙門(mén)氏菌gt;金黃色葡萄球菌gt;霉菌gt;大腸桿菌，對(duì)酵母菌的抑菌效果最好，抑菌圈直徑0.9 cm；4種浸提液對(duì)沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌均有明顯抑菌作用，而4號(hào)浸提液對(duì)大腸桿菌和霉菌均無(wú)明顯抑制作用。依據(jù)抑菌圈直徑大小，不同浸提液的抑菌強(qiáng)度排序?yàn)?號(hào)gt;2號(hào)gt;3號(hào)gt;4號(hào)。

2.2 不同稀釋度的1號(hào)浸提液對(duì)不同微生物的抑菌效果

選取抑菌效果最明顯的乙酸乙酯浸提液做進(jìn)一步稀釋度抑菌試驗(yàn)。從表3可看出，1號(hào)浸提液稀釋2倍時(shí)對(duì)沙門(mén)氏菌、霉菌和酵母菌的抑菌效果無(wú)差異；稀釋4倍時(shí)對(duì)大腸桿菌基本無(wú)抑菌作用（抑菌圈直徑小于0.5 cm）；稀釋8倍時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌有抑菌作用，而對(duì)其他4種菌種基本無(wú)抑菌效果。

2.3 不同浸提液對(duì)食物的抑菌防腐效果

2.3.1 對(duì)肉湯的防腐效果 24 h后加無(wú)菌水的肉湯有輕微異味，其他均良好；40 h后除加1號(hào)浸提液的肉湯外觀良好外，其他均變質(zhì)；4 d后添加1號(hào)浸提液的肉湯發(fā)生變質(zhì)。肉湯變質(zhì)先后順序?yàn)榧訜o(wú)菌水肉湯、加3號(hào)浸提液肉湯、加2號(hào)浸提液肉湯、加1號(hào)浸提液肉湯；添加1號(hào)浸提液的肉湯保存時(shí)間最長(zhǎng)，為4 d，且肉湯在保存8 h后仍有濃郁香味，說(shuō)明竹蓀浸提液可在一定程度上保持肉湯風(fēng)味、防止變質(zhì)。

2.3.2 對(duì)饅頭的防腐效果 保存48 h后，噴灑1、2和3號(hào)浸提液及無(wú)菌水的饅頭均開(kāi)始變質(zhì)，變質(zhì)先后順序?yàn)閲姙o(wú)菌水、3號(hào)浸提液、2號(hào)浸提液、1號(hào)浸提液，且饅頭表面的菌種類和狀態(tài)不同；保存3 d后，噴灑無(wú)菌水的饅頭菌種類最多且分布最廣，異味最重，除了分布有白色菌絲，還有黃色的霉點(diǎn)，菌絲上面有黑色或白色的孢子；噴灑1號(hào)浸提液的饅頭表面有少量菌絲，較其他處理的菌絲短，無(wú)明顯異味；噴灑2號(hào)浸提液的饅頭表面有少許白色菌絲和黃色的霉點(diǎn)；噴灑3號(hào)浸提液的饅頭表面有綠色、灰褐色霉點(diǎn)，且霉點(diǎn)分布較廣。由此得出，對(duì)饅頭的抑菌效果強(qiáng)弱為1號(hào)gt;2號(hào)gt;3號(hào)gt;無(wú)菌水，說(shuō)明竹蓀浸提液對(duì)饅頭有一定的防腐作用，其中1號(hào)浸提液的抑菌作用最強(qiáng)。

3 結(jié)論與討論

本研究采用乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、石油醚和蒸餾水4種溶劑浸提竹蓀子實(shí)體，驗(yàn)證了不同浸提液對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、霉菌和酵母菌的抑菌作用。結(jié)果表明，4種不同溶劑浸提的竹蓀浸提液均有不同程度的抑菌效果，其中乙酸乙酯浸提液的抑菌效果最好，無(wú)水乙醇、蒸餾水浸提液的次之，石油醚浸提液的效果最差；乙酸乙酯浸提液的稀釋度抑菌試驗(yàn)表明，其稀釋4倍后仍具有抑菌作用；4種浸提液對(duì)沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌均有明顯抑菌作用；饅頭和肉湯防腐試驗(yàn)表明，竹蓀乙酸乙酯浸提液對(duì)兩者的抑菌防腐效果較好，即驗(yàn)證了竹蓀具有一定的防腐效果，尤其是在肉類防腐方面。綜上，竹蓀具有較好的抑菌防腐作用，具有一定開(kāi)發(fā)天然食品防腐劑的潛力，相關(guān)研究有待進(jìn)一步深入。

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（責(zé)任編輯：何艷）