一種新發(fā)大豆根腐病的病原鑒定及防治藥劑篩選

摘要 為明確在廣東新發(fā)現(xiàn)的一種大豆根腐病的病原菌種類，了解其生物學(xué)特性，篩選防治該病的有效殺菌劑，采用組織分離法對罹病大豆植株的根部和莖基部的病原真菌進(jìn)行分離，并通過形態(tài)學(xué)和3 個基因（rDNA?ITS， TEF?1α， RPB2）的聯(lián)合系統(tǒng)發(fā)育分析對病原真菌進(jìn)行鑒定，再將該病原真菌接種到原發(fā)病大豆品種桂夏2 號的根部和莖基部，測定其致病性和不同培養(yǎng)基、溫度、碳氮源、pH、光照、殺菌劑對菌絲生長的影響以及病原菌分生孢子的致死溫度。結(jié)果顯示，分離到2 株具有不同特征的真菌，分別鑒定為新孢鐮刀菌（Fusarium neocos?mosporiellum）和鐮狀鐮刀菌（F. falciforme），后者是在我國廣東大豆上的首次報道；接種試驗顯示，這2 株真菌單獨或混合接種均可引起與田間自然發(fā)生的大豆根腐病相似的癥狀；新孢鐮刀菌（F. neocosmosporiellum）在28 ℃、pH 7 條件下生長最快，可以有效利用多種碳氮源，乳糖和蛋白胨為最佳碳氮源，分生孢子致死溫度為51 ℃（水浴10 min）；鐮狀鐮刀菌（F. falciforme）在25 ℃、pH 7 條件下生長最快，碳氮源利用能力強(qiáng)，以乳糖、蔗糖和麥芽糖為最佳碳源，最佳氮源為蛋白胨，孢子致死溫度為54 ℃（水浴10 min）；不同光照處理對2 個菌株的菌絲生長無影響；殺菌劑咪鮮胺對2 個菌株的抑制作用最強(qiáng)。綜上，引起廣東新發(fā)大豆根腐病的病原真菌為新孢鐮刀菌（F. neocosmosporiellum）和鐮狀鐮刀菌（F. falciforme），而這2 種真菌適應(yīng)環(huán)境的能力強(qiáng)，對咪鮮胺敏感，該藥劑可作為防治新發(fā)大豆根腐病的首選藥劑。

關(guān)鍵詞 大豆根腐??； 鐮刀菌； 病原鑒定； 生物學(xué)特征； 多基因系統(tǒng)發(fā)育分析； 殺菌劑篩選

中圖分類號 S435.651 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1000-2421（2024）06-0229-11

大豆［ Glycine max（ Linn.） Merr］是植物優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)、食用油和動物飼料的來源，是我國非常重要的作物之一［1-2］，在東北、華南、黃淮海以及長江流域地區(qū)廣泛種植。大豆除了富含油脂和蛋白質(zhì)外，還含有多種獨特生理功能的次生代謝產(chǎn)物，如大豆異黃酮，能夠預(yù)防及治療癌癥、糖尿病、心血管疾病和骨質(zhì)疏松等疾?。?］。

大豆在生產(chǎn)過程中經(jīng)常會遭受到許多病原真菌（或卵菌）的侵害，如平頭炭疽菌（Colletotrichumtruncatum）［4］、大豆疫霉（Phytophthora sojae）［5］、立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）［6］和尖孢鐮刀菌（Fusari?um oxysporum）［7］等，引起大豆多種真菌（卵菌）病害，這些病害通常會導(dǎo)致大豆的品質(zhì)和產(chǎn)量下降［8］。

2020 年9 月，在華南農(nóng)業(yè)大學(xué)增城教學(xué)科研基地（廣州增城寧西）種植的桂夏2 號大豆品種上發(fā)現(xiàn)了一種新發(fā)生的根部病害，病情非常嚴(yán)重，大豆植株發(fā)病后很快就干枯死亡，對大豆生產(chǎn)和種子繁育造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失，但具體病因不明。世界各地報道和研究較多的大豆根部病害的病原菌主要是鐮刀菌屬（Fusarium spp.）的一些種［8］，這些鐮刀菌種類能夠侵染大豆根莖部皮層及維管組織，引起大豆根腐病和枯萎病，導(dǎo)致根莖部腐爛和枯萎癥狀。此次在廣東發(fā)現(xiàn)的大豆新病害的癥狀與美洲大豆猝死綜合癥（sudden death syndrome，簡稱SDS）的癥狀極為相似［9］。據(jù)報道，SDS 主要由逗號鐮刀菌（F. virguli?forme）（北美大豆SDS）和圖庫曼鐮刀菌（F. tucuma?niae）（南美大豆SDS）引起［10］，它們侵染大豆后，造成葉片葉脈間的葉肉焦黃壞死，根部及莖基部變褐腐爛，但我國目前尚無SDS 的報道，SDS 是我國對外植物檢疫對象［9］。因此，有必要確認(rèn)廣東省新發(fā)大豆根腐病的病原種類，篩選出有效的防治藥劑，以便最終能夠更有效地防治該病害。

1 材料與方法

1.1 病樣采集、病原菌的分離純化

2020 年9 月，從華南農(nóng)業(yè)大學(xué)增城教學(xué)科研基地（廣州增城寧西）采集具有典型的大豆新病害癥狀特征的罹病植株，帶回實驗室檢查、拍照并采用常規(guī)組織分離法分離病原菌。首先沖洗干凈大豆莖基部泥土，擦干，在病健交界處切取大小為0.5 cm×0.5 cm的小塊組織，在75% 乙醇中浸泡消毒30 s，然后移入5% 次氯酸鈉溶液消毒2～3 min，再用無菌水漂洗3次，把消毒后的病健組織塊放置于無菌濾紙上吸干和風(fēng)干水分，最后移植于PDA 培養(yǎng)基中，置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，等待菌落長出后，挑取菌落邊緣菌絲進(jìn)行純化培養(yǎng)，2 次純化后置于PDA 斜面培養(yǎng)基保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定

將分離得到的病原菌接種到PDA 培養(yǎng)基平板中培養(yǎng)7 d，記錄菌落顏色和形態(tài)特征并拍照。用無菌水洗下PDA 培養(yǎng)基平板中的分生孢子，制備孢子懸浮液，吸取少量孢子懸浮液于干凈載玻片上，在光學(xué)顯微鏡下觀察病原菌的形態(tài)特征并測量分生孢子大小。參照文獻(xiàn)［11］判定病原菌的種類。

1.3 病原菌的分子生物學(xué)鑒定

用滅菌移液槍頭刮取在PDA 培養(yǎng)基平板中培養(yǎng)7 d 的病原菌菌絲體，使用真菌基因組DNA 提取試劑盒（D3390-01， Bio-tek）從菌絲中提取基因組DNA。對核糖體RNA 內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（internal transcribedspacer，rDNA?ITS）、翻譯延伸因子基因（translationelongation factor 1-alpha，TEF?1α）、RNA 聚合酶Ⅱ第二大亞基基因（RNA polymerase Ⅱ second largestsubunit，RPB2）進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，各序列擴(kuò)增引物信息見表1。

PCR（polymerase chain reaction）反應(yīng)總體系為25 μL［DNA 模板1 μL，正向和反向引物各1 μL，2×M5 Taq HiFi PCR mix（北京聚合美生物科技有限公司）12.5 μL，ddH2O 9.5 μL］。反應(yīng)程序為94 ℃預(yù)變性2 min，94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，35 個循環(huán)；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存、備用。用1% 瓊脂糖凝膠電泳檢測，將得到目的條帶的產(chǎn)物送至上海生工生物工程有限公司進(jìn)行測序。將得到的測序結(jié)果與GenBank 數(shù)據(jù)庫中的已有數(shù)據(jù)進(jìn)行Blast 比對分析，并查找文獻(xiàn)，下載不同病原鐮刀菌的基因序列，見表2。使用 MEGA X 軟件進(jìn)行對齊和剪切，PhyloSuite v1.2.2 將各菌株按照rDNA ? ITSTEF1α-RPB2 的順序首尾串聯(lián)拼接，使用MEGA X軟件中的Maximum likelihood（ML）方法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，Bootstrap 值重復(fù)1 000 次。

1.4 病原菌的致病性測定

病原菌的致病性測定采用傷根浸根法［15］。選用生長一致的兩葉期大豆苗，將大豆苗的根部沖洗后吸干水分，用消毒的剪刀剪去一些須根，用無菌水洗下PDA 培養(yǎng)基平板上的病原菌的分生孢子，制備成孢子懸浮液，將大豆幼苗根部浸泡在濃度為1×106個/mL 的孢子懸浮液中1 h，最后移栽到無菌土壤基質(zhì)，以R1、R2 單菌株接種以及R1 和R2 菌株混合接種為處理組，以無菌水接種作為對照組，每組3 次重復(fù)，接種后的大豆苗放置于人工氣候培養(yǎng)箱內(nèi)30 ℃保濕培養(yǎng)。

1.5 病原菌的生物學(xué)特性測定

1）培養(yǎng)基對病原菌菌絲生長的影響。供試培養(yǎng)基為玉米粉瓊脂（CAM）培養(yǎng)基（海博生物技術(shù)有限公司）、察氏（Czapek）培養(yǎng)基（海博生物技術(shù)有限公司）、燕麥片瓊脂（OA）培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）、馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）、自配番茄瓊脂（TomA）培養(yǎng)基（番茄200 g，瓊脂粉18 g，蒸餾水1 000 mL），山藥汁瓊脂（YA）培養(yǎng)基（山藥200 g，瓊脂粉18 g，蒸餾水1 000 mL）和水瓊脂（WA）培養(yǎng)基（瓊脂粉18 g，蒸餾水1 000 mL）。

用打孔器在PDA 平板上生長7 d 的病原菌菌落邊緣打下直徑為5 mm 的菌餅，分別接種于以上培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，每處理3 次重復(fù)；接菌培養(yǎng)皿在28 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)7 d 后，用十字交叉法測量菌落直徑。

2） 溫度、光照、pH 對病原菌菌絲生長的影響。培養(yǎng)溫度梯度設(shè)置為5、10、15、20、25、28、30 和35 ℃；光照條件設(shè)置為完全光照、完全黑暗和12 h 光暗交替3 種模式；pH 值設(shè)置4～11 共8 個酸堿度處理，用1% HCl 或1% NaOH 溶液調(diào)節(jié)高溫滅菌后冷卻至50 ℃左右的PDA 培養(yǎng)基；接種與測量方法同本文“1.5 1）”，每處理設(shè)3 個重復(fù)。

3） 碳、氮源對病原菌菌絲生長的影響。以察氏（Czapek）培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，參照周而勛等［16］的方法，將培養(yǎng)基中的碳源（蔗糖）以等量碳原子的麥芽糖、甘露醇、葡萄糖、乳糖、山梨醇和肌醇替代；將培養(yǎng)基中的氮源（硝酸鈉）以等量氮原子的甘氨酸、酵母粉、DL-蘇氨酸、硝酸鉀、蛋白胨和氯化銨替代。每處理3 次重復(fù)，接種與測量方法同本文“ 1.5 1）”。

4） 病原菌分生孢子致死溫度的測定。將1×106個/mL 的孢子懸浮液1 mL 加入1.5 mL 的薄壁滅菌離心管中，調(diào)節(jié)水浴鍋溫度分別為40、45、50、55 和60 ℃。以室溫處理為對照，持續(xù)處理10 min，取出各處理的離心管并快速冷卻至室溫，涂布在PDA 培養(yǎng)基平板上，28 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)。每處理3 次重復(fù)，3 d后觀察是否長出菌落，從而判斷孢子是否死亡，得到分生孢子粗略的致死溫度范圍。再以粗略的致死溫度為中心溫度，以1 ℃為間隔，設(shè)置5 個溫度梯度，重復(fù)之前步驟，確定精確的致死溫度。

1.6 殺菌劑的室內(nèi)篩選

采用含藥平板菌絲生長速率法，測定各殺菌劑對病原菌的抑制效果。供試菌劑為吡唑醚菌酯乳油（25%，北京中保綠農(nóng)科技集團(tuán)有限公司）、甲基硫菌靈可濕性粉劑（70%，允發(fā)化工（上海）有限公司）、代森錳鋅可濕性粉劑（80%，四川潤爾科技有限公司）、咪鮮胺水乳劑（450 g/L，山東鑫星農(nóng)藥有限公司）。將各殺菌劑用無菌水配制成使用濃度100 倍的母液（5 個梯度的濃度），取1 mL 各殺菌劑各濃度的母液分別加入到高溫滅菌后冷卻到50 ℃左右的100 mL定量PDA 培養(yǎng)基中，充分混勻，制成含藥平板。以添加無菌水的混合溶液的PDA 培養(yǎng)基為對照。接種方法與本文“1.5 1）”一致，每處理3 次重復(fù)，28 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)7 d，十字交叉測量菌落直徑，按照公式（1）計算抑菌率。

E =A - B／A - 0.5 × 100% （1）

式（1）中，A 為添加無菌水對照組菌落直徑；B 為添加殺菌劑的處理組菌落直徑，E 為菌落生長抑制率。

以殺菌劑濃度的對數(shù)值作為自變量（X），抑制率對應(yīng)的幾率值作為因變量（Y），建立毒力回歸方程，并計算各殺菌劑對病原菌的有效中濃度（median effectconcentration，EC50）。

1.7 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 計算試驗數(shù)據(jù)和構(gòu)建三維柱狀圖，運(yùn)用SPSS17.0 中的Duncan’ s 新復(fù)極差分析法進(jìn)行單因素ANOVA 分析，并以小寫字母為統(tǒng)計學(xué)差異進(jìn)行標(biāo)注。

2 結(jié)果與分析

2.1 大豆新病害癥狀

田間大豆葉片上初期出現(xiàn)圓形或不規(guī)則形的黃色斑點，斑點逐漸擴(kuò)大或愈合形成萎黃斑，葉肉焦黃壞死，僅有葉脈保持一點綠色組織，部分葉片卷曲皺縮，后期從葉柄上脫落；枝條發(fā)育不全，結(jié)莢少、豆粒?。磺o基部和根部變褐腐爛，病斑可沿莖向上擴(kuò)展10～20 cm，髓部明顯變?yōu)樽睾稚▓D1）。

2.2 病原菌的形態(tài)特征觀察

對采集到的大豆新病害的罹病根部和莖基部進(jìn)行病原菌分離純化，共獲得2 種菌落形態(tài)的真菌菌株，分別命名為R1 和R2。

在PDA 培養(yǎng)基，28 ℃黑暗條件下培養(yǎng)，菌株R1菌落初為白色，后為紅棕色，氣生菌絲旺盛，菌落邊緣較整齊，菌落背面為紅棕色（圖2 A，B）；分生孢子無色，卵圓形或腎形，具有0～1 個隔膜，大小為（8.68～11.08） μm×（3.23～4.79） μm（圖2C）；培養(yǎng)后期產(chǎn)生子囊殼，子囊殼深棕色，水滴狀，具有孔口和喙，子囊棒狀叢生，每個子囊內(nèi)含8 個單排子囊孢子（圖2D，E），子囊孢子豆粒狀，大小為（9.92～12.9）μm×（6.28～8.68） μm（圖2F）；在PDA 培養(yǎng)基上未發(fā)現(xiàn)大型分生孢子。

在同樣培養(yǎng)條件下，R2 菌株菌落白色，菌落邊緣不整齊，氣生菌絲旺盛（圖3A，B）；小型分生孢子無色，單胞，長橢圓形或卵形，具有0～1 隔膜，大小為（8.52～11.94） μm×（3.19～5.11） μm（圖3C）；大型分生孢子無色，鐮刀狀，具有3～4 隔膜，大小為（25.17～33.55） μm×（4.34～6.14） μm（圖3D）；暫未發(fā)現(xiàn)有性態(tài)（teleomorph）。

根據(jù)上述的形態(tài)特征，R1 和R2 菌株均符合鐮刀菌屬的特征描述［11］，將它們初步鑒定為鐮刀菌的2個種。

2.3 病原菌的分子生物學(xué)鑒定

利用3 個基因的引物對ITS1/ITS4、EF1Ha/EF2Tb 和RPB2-5F2 /RPB2-7cR，對R1 和R2 菌株的3 個基因rDNA-ITS、TEF-1α 和RPB2 進(jìn)行PCR擴(kuò)增，分別得到約550、750和1 000 bp的條帶（圖4）。

將PCR 產(chǎn)物送至公司測序，測序結(jié)果上傳至NCBI。分別對2 個菌株的3 個基因rDNA ? ITS、TEF1α 和RPB2 在NCBI 進(jìn)行Blast 分析，發(fā)現(xiàn)R1 菌株與新孢鐮刀菌（F. neocosmosporiellum）的相似性在99% 以上，R2 菌株與鐮狀鐮刀菌（F. falciforme）的相似性也在99% 以上?；诙嗷蚵?lián)合系統(tǒng)發(fā)育分析，構(gòu)建了ITS-TEF1α-RPB2 多基因系統(tǒng)發(fā)育樹（圖5）。從圖5 可看出，R1 菌株與新孢鐮刀菌（F. neocos?mosporiellum）聚為一支，而R2 菌株與鐮狀鐮刀菌（F.falciforme）聚為一支。結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的鑒定結(jié)果，確定R1 菌株為新孢鐮刀菌（F. neocosmos?poriellum），而R2菌株為鐮狀鐮刀菌（F. falciforme）。

2.4 致病性測定

R1 和R2 菌株單獨接種及兩者混合接種的結(jié)果顯示，在接種4 周后，3 種接種處理的大豆莖基部都表現(xiàn)出變色、腐爛癥狀，與田間癥狀一致，而對照處理無發(fā)病癥狀（圖6）。通過對比發(fā)現(xiàn)R1 菌株主要影響莖基部，而R2 菌株主要影響根系。而R1 和R2 菌株混合接種同樣出現(xiàn)相似的癥狀，顯示出復(fù)合侵染現(xiàn)象。從發(fā)病植株再次分離純化病原菌可獲得與R1和R2 菌株具有相同菌落和孢子形態(tài)的菌株。因此，根據(jù)科赫氏法則，可以確定新孢鐮刀菌和鐮狀鐮刀菌均為引起大豆新發(fā)根腐病的病原菌，可分別和復(fù)合侵染引起大豆根腐病。

2.5 病原菌的生物學(xué)特性

1）培養(yǎng)基對病原菌菌絲生長的影響。結(jié)果如圖7 所示。R1 菌株在Czapek 培養(yǎng)基上生長最快，菌落直徑達(dá)到6.11 cm；在PDA、YA、CAM 培養(yǎng)基上次之，菌落直徑分別為5.78、5.41 和5.33 cm；在OA 培養(yǎng)基上生長最慢，菌落直徑僅為3.61 cm。R2 菌株在Czapek 培養(yǎng)基上生長最快，菌落直徑達(dá)到7.13 cm；在CAM、PDA 和TomA 培養(yǎng)基上次之，菌落直徑分別為6.92、6.96 和6.87 cm；而在OA 培養(yǎng)基上生長最慢，菌落直徑僅為4.6 cm。

2）溫度、光照、pH 對病原菌菌絲生長的影響。結(jié)果如圖8 所示。R1 和R2 菌株在10～30 ℃范圍內(nèi)均可以生長；在5～28 ℃區(qū)間內(nèi)，菌落直徑隨溫度升高而增大，20～30 ℃生長良好，R1 菌株在28 ℃生長最快，菌落直徑為6.00 cm；R2 菌株在25 ℃生長最快，菌落直徑為7.33 cm；隨后菌落直徑隨溫度升高而減?。▓D8A）。光照對R1和R2菌株生長影響不大，菌落直徑分別為5.662 5～5.737 5 cm 和7.175 0～7.287 5cm，在α=0.05 水平下差異不顯著（圖8B）。在pH4～11，R1 與R2 菌株均能正常生長；在pH 7 時，R1 與R2 菌株生長最好，菌落直徑最大，分別為5.93 cm 和7.26 cm；在pH 4～7，菌落直徑隨pH 增大而增大，隨后隨pH 增大而減?。▓D8C）。

3） 碳、氮源對病原菌菌絲生長的影響。結(jié)果如圖9、圖10 所示。R1 菌株以乳糖為碳源時，菌絲生長最快，菌落直徑達(dá)到6.46 cm，以麥芽糖為碳源次之，菌落直徑為6.07 cm，以山梨醇為碳源時生長最慢，菌落直徑為5.28 cm；以蛋白胨為氮源時，菌絲生長最快，菌落直徑達(dá)到6.55 cm，其次為硝酸鈉和硝酸鉀，菌落直徑分別為6.20、6.13 cm，而以氯化銨為氮源時，菌絲生長最慢，菌落直徑為4.05 cm。R2菌株在以乳糖、麥芽糖、蔗糖為碳源時生長速率最快，菌落直徑為6.43～6.47 cm，三者處理在α=0.05 水平下無顯著差異，以甘露醇、山梨醇、肌醇為碳源時生長速率最慢，菌落直徑為5.91～6.03 cm；以蛋白胨為氮源時，菌絲生長最快，菌落直徑為7.4 cm，其次為硝酸鈉和硝酸鉀，以氯化銨為氮源時，菌絲生長最慢，菌落直徑為4.65 cm。

4）病原菌分生孢子致死溫度的測定。由表3 可知，R1 和R2 菌株的分生孢子對溫度的敏感度不同，R1 菌株的分生孢子在經(jīng)過51 ℃水浴10 min 處理后，分生孢子喪失活力，不能萌發(fā)，不能長出菌落；而R2菌株的分生孢子比R1 菌株的分生孢子對溫度更不敏感，R2 菌株的分生孢子在經(jīng)過54 ℃水浴10 min 處理后，分生孢子才喪失活力。

2.6 室內(nèi)殺菌劑篩選

對R1 和R2 菌株進(jìn)行殺菌劑室內(nèi)毒力測定，結(jié)果顯示（表4），在所選用的4 種殺菌劑中，2 個菌株對咪鮮胺表現(xiàn)最敏感，其次為吡唑醚菌酯，代森錳鋅對兩菌株的抑制作用最差。因而，咪鮮胺可作為防治新發(fā)大豆根腐病的藥劑。

3 討論

本研究報道了在廣東省內(nèi)新發(fā)現(xiàn)的一種大豆根部病害，并將引起該病害的病原菌鑒定為新孢鐮刀菌（F. neocosmosporiellum）和鐮狀鐮刀菌（F. falci?forme）。兩菌株均侵染大豆，即能復(fù)合侵染大豆，造成大豆莖基部和根部變色腐爛。通過對比發(fā)現(xiàn)，新孢鐮刀菌主要侵染大豆莖基部，鐮狀鐮刀菌主要侵染大豆根部。葉片上出現(xiàn)的葉肉細(xì)胞焦黃壞死癥狀，可能是因為鐮刀菌侵染后會分泌一些毒素，這些毒素通過植物的輸導(dǎo)組織運(yùn)輸至植物葉片從而造成這種癥狀的發(fā)生。美洲大豆SDS［17］癥狀與本次所研究的大豆新病害癥狀有許多相似之處［9］，但也存在一些不同之處。首先是病原菌的不同，美洲大豆SDS病原菌為逗號鐮刀菌（F. virguliforme）（北美大豆SDS）和圖庫曼鐮刀菌（F. tucumaniae）（南美大豆SDS），而本研究的大豆新病害病原菌并非SDS 病原菌，而是另外2 種鐮刀菌；其次是在病程后期，SDS 在處于高溫高濕條件下莖基部會產(chǎn)生藍(lán)色的菌絲體，病原菌在PDA 培養(yǎng)基上也會產(chǎn)生藍(lán)色菌落［18］，侵染大豆莖的皮層及維管組織造成褐變腐爛，但髓部不受影響，依然保持白色［9］；而本研究的大豆新病害在莖基部沒有產(chǎn)生藍(lán)色菌絲體，2 個菌株在PDA 培養(yǎng)基上也不產(chǎn)生藍(lán)色菌落，侵染大豆輸導(dǎo)組織并且引起根系和莖干髓部（維管束）褐變甚至黑化。結(jié)合以上特點，確定本研究新發(fā)現(xiàn)的大豆根腐病并非美洲大豆SDS。

此前，蓋云鵬等［19］與潘汝謙等［20］報道了大豆新赤殼菌（Neocosmospora vasinfecta，現(xiàn)改名為新孢鐮刀菌F. neocosmosporiellum），可引起大豆和花生的莖基部腐爛；何彎彎等［21］也在花生果實上分離到可引起花生果實和種子腐爛的新孢鐮刀菌。鐮狀鐮刀菌（F. falciforme）屬于腐皮鐮刀菌復(fù)合種［ Fusariumsolani species complex（ FSSC）］ 中的一員，該病原菌寄主范圍非常廣泛，曾被報道在印度番木瓜上引起根部褐變和腐爛，發(fā)病率高達(dá)40%～50%［22］；在墨西哥，該菌也引起番茄葉片黃化、根莖腐爛［23］；該菌還能侵染西瓜，造成西瓜果實表面呈現(xiàn)黃至棕色的凹陷病斑，果實內(nèi)部腐爛［24］。但在大豆上尚未見到報道。本研究首次發(fā)現(xiàn)大豆是鐮狀鐮刀菌（F. falci?forme）的寄主之一。因此，這是在中國廣東省首次報道鐮狀鐮刀菌（F. falciforme）為害大豆，引起根腐病。此次分離的鐮狀鐮刀菌在自然條件下以無性態(tài)存在，并未觀察到有性態(tài)，其原因可能是該菌的有性生殖需要性親和的菌絲融合。

為了有效地防治該病害，筆者隨后對新孢鐮刀菌與鐮狀鐮刀菌2 個菌株的生物學(xué)特性和殺菌劑室內(nèi)篩選進(jìn)行了探究。結(jié)果表明，2 個菌株的適合生長溫度均為20～30 ℃，適應(yīng)酸堿的能力強(qiáng)，這與何彎彎等［21］的研究結(jié)果一致，碳氮源的適應(yīng)范圍廣，在所選用的7 種碳氮源上均能生長，但在供試氮源試驗中，以氯化銨為氮源時，2 個菌株的菌落生長速率能夠與其他氮源形成顯著差異，這點與韓鳳英等［25］所得出的銨態(tài)氮能夠顯著降低胡蘿卜茄病鐮刀菌菌絲生長的試驗結(jié)果一致。因此，在大豆的生產(chǎn)過程中，在氮肥使用上，推薦以施用銨態(tài)氮肥為主，這樣可以降低大豆根腐病菌的生長，從而減少大豆根腐病的發(fā)生。

華南地區(qū)氣候溫暖濕潤，土壤條件復(fù)雜，而病原菌能適應(yīng)多樣的環(huán)境，有利于病原菌的生長與繁殖，農(nóng)事操作或農(nóng)田管理不當(dāng)有利于病原菌的傳播。藥劑敏感性試驗表明，當(dāng)?shù)鼐陮λx用殺真菌劑已具有一定的抗性，咪鮮胺可用于大豆根腐病的防治。

綜上，本研究對廣東大豆新發(fā)根腐病的病原菌種類進(jìn)行了鑒定，其中一種是未報到過的病原菌—鐮狀鐮刀菌，并且闡明了病原菌的生物學(xué)特征，篩選了大豆新發(fā)根腐病的有效殺菌劑，可為進(jìn)一步研究該病害的發(fā)生和防控提供參考依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：邊書京）

基金項目：廣東省重點領(lǐng)域研發(fā)計劃項目（2020B020220008）